Кардиопротекторные свойства структурных аналогов ГАМК (Гамма-аминомасляной кислоты)

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

Кардиопротекторные свойства структурных аналогов ГАМК

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

доктора биологических наук

Перфилова Валентина Николаевна

Волгоград 2009

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» и ГУ «Волгоградский научный центр Российской академии медицинских наук и Администрации Волгоградской области»

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Тюренков Иван Николаевич

Официальные оппоненты:

1.Доктор медицинских наук, профессор Мирзоян Рубен Симонович

2.Доктор биологических наук, Бугаева Любовь Ивановна

3.Доктор биологических наук, профессор Пиотровский Левон Борисович

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская академия им.И.И.Мечникова Росздрава»

Защита состоится «27» февраля_ 2009 г. в _____ ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» (400131, г.Волгоград, пл.Павших борцов, 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»

Автореферат разослан «___»___________________2008 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета,

доктор медицинских наук,

профессор А.Р.Бабаева

кардиопротекторный аминомасляный ишемия лекарственный

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Сердце является органом-мишенью, испытывающим негативное воздействие различных повреждающих факторов (ишемия, стресс, алкогольная интоксикация и мн. др.), которые могут привести к существенным нарушениям метаболизма, структуры и функции сердечной мышцы. В основе патофизиологических механизмов повреждения миокарда лежат многие процессы: гиперсимпатикотония, активация перекисного окисления липидов и повреждение мембран кардиомиоцитов свободными радикалами и гидроперекисями, нарушения окислительного метаболизма (Меерсон Ф.З., 1984; Голиков А.П. и др., 1989; Ланкин В.З. и др., 2000; Голиков А.П. и др., 2005). Повреждение мембран ведет к митохондриальной дисфункции, уменьшению синтеза АТФ и, как следствие этого, снижению насосной функции, сократимости и функциональных резервов сердца (Меерсон Ф.З., 1984; Бизунок Н.А. и др., 2008; Баранов В.Л. и др., 2008; Молотков О.В. и др., 2008). Снижение насосной функции и уменьшение минутного объема крови (МОК), компенсаторно, ведет к увеличению общего периферического сопротивления (ОПС), нарушению гемоперфузии тканей. Неблагоприятные метаболические и кардио- и гемодинамические сдвиги вызывают негативные изменения микроциркуляции (Халепо О.В. и др., 2007; Белостокая Г.Б. и др., 2008; Гошовская Ю.В. и др., 2008; Шиманская Т.В. и др., 2008).

Учитывая многофакторный характер патогенеза поражений сердца, можно считать целесообразным поиск препаратов-кардиопротекторов с политропными фармакологическими свойствами для устранения дисфункции миокарда и предупреждения необратимых изменений в кардиомиоцитах.

Одним из перспективных путей создания новых лекарственных препаратов остается принцип модификации структуры эндогенных физиологически активных соединений, в том числе и гамма-аминомасляной кислоты. Фармакологи Волгоградского Государственного медицинского университета: Морозов И.С., Петров В.И., Тюренков И.Н., Косицина А.Ф., Годовалова Л.А. и др. под руководством проф. Ковалева Г.В. совместно с химиками Российского Государственного педагогического университета (г.Санкт-Петербург) с 1973 г. изучают симпатикотропные свойства нейроактивных аминокислот, ведут активный поиск веществ с кардиоваскулярной и кардиопротекторной активностью. Накопленные к настоящему времени в ВолГМУ экспериментальные и клинические данные, а также результаты исследований отечественных и зарубежных авторов, позволяют считать перспективным поиск среди структурных аналогов ГАМК веществ с кардиопротекторным действием. Это предположение основано на том, что производные ГАМК могут ограничивать симпатические влияния на сердце и сосуды (Петров В.И., 1977; Петров В.И. и соавт., 1979; Cohen P.B. et al., 1980; Przyklenk K. et al ., 2000), обладают антистрессорным действием (Меерсон Ф.З., 1984), оказывают нормализующее влияние на показатели кардио- и гемодинамики при острой ишемии миокарда (Тюренков И.Н. и соавт., 1981; 1999; 2002), а также коронаролитическое (Цорин И.Б. и соавт., 1983;1986; Чичканов Г.Г. и соавт., 1991; Покровский М.В. и соавт., 1995; Гречко О.Ю., 2000) антигипоксическое (Кресюн В.И. и соавт., 1990; Воронков А.В., 2003), антиоксидантное (Хан В.В., 1990; Higo K. et al., 1993; Гречко О.Ю., 2000; Harrison P., 2000), антиагрегантное действие (Ледяев М.Я., 1986; Едигарова Л.В. и др., 2000; Воронков А.В., 2003).

В связи с вышеизложенным, целью исследования является:

Цель исследования. Комплексное изучение кардиопротекторных свойств и возможных механизмов действия структурных аналогов ГАМК в условиях ишемии миокарда, длительного стресса, хронической алкогольной интоксикации и обоснование перспективности создания на их основе новых лекарственных препаратов.

Задачи исследования. В соответствии с поставленной целью планировалось решение следующих задач.

1.Обосновать возможность разработки новых кардиопротекторных средств на основе аналогов ГАМК.

2. Используя данные скрининга и компьютерного прогноза, выявить среди новых структурных аналогов ГАМК соединения, оказывающие выраженное антиангинальное действие, провести анализ зависимости между их химической структурой и противоишемическим действием.

3.Исследовать действие наиболее активного соединения на зону некроза экспериментального инфаркта миокарда, вызванного окклюзией нисходящей ветви левой коронарной артерии и оценить инотропные резервы сердца.

3. Провести морфофункциональную оценку кардиопротекторного действия исследуемых соединений в условиях длительного стрессорного и алкогольного поражения миокарда.

4. Изучить возможные механизмы кардиопротекторного действия исследуемых соединений: влияние на центральные и периферические симпатические структуры, гемодинамику и метаболизм кардиомиоцитов в условиях ишемии, длительного стрессорного воздействия и хронической алкогольной интоксикации.

5.Изучить нейрохимические основы кародиопротекторного действия ГАМК.

6.Определить фармакокинетические характеристики наиболее перспективного вещества с кардиопротекторным действием.

7. Изучить дозо - зависимое кардиотоксическое действие соединения - лидера в условиях 6-ти месячного введения.

Новизна исследования:

Впервые проведен целенаправленный поиск веществ с кардиопротекторным действием среди 89 новых структурных аналогов ГАМК, в том числе и органических солей и композиций на основе фенибута, карфедона, мефебута, толибута и фепирона, позволивший выявить соединения с выраженной противоишемической активностью. Проанализирована зависимость между химической структурой производных ГАМК и их антиангинальным действием, выделены дескрипторы, определяющие специфическую активность соединений.

Выполнено полное доклиническое исследование кардиопротекторных свойств соединений РГПУ-147 и РГПУ-195 при ишемическом, стрессорном и алкогольном поражении сердца и изучены возможные механизмы их действия, включающие:

1.тормозное действие на центральные симпатические структуры,

2.влияние на системные показатели кардио- и гемодинамики, коллатеральное кровообращение, микроциркуляцию и факторы, ее определяющие,

3.влияние на метаболизм миокарда: течение кислороддефицитных состояний, процессы ПОЛ, активность ферментов антиоксидантной системы, процессы дыхания и окислительного фосфорилирования.

Изучены нейрохимические основы кардиопротекторного действия соединения РГПУ-147. Впервые выполнено доклиническое изучение фармакокинетических свойств соединения РГПУ-147, а также проведено исследование кардиотоксического действия соединения РГПУ-147 при 6-ти месячном введении крысам в дозах 50 мг/кг (терапевтическая), 250 мг/кг (доза в 5 раз превышающая терапевтическую), 700 мг/кг (токсическая).

Практическая значимость: На основе выявленных закономерностей зависимости между структурой и кардиопротекторной активностью исследуемых соединений даны рекомендации по направленному синтезу и дальнейшему поиску высокоактивных и малотоксичных веществ с отмеченным действием в ряду производных ГАМК.

Результаты доклинического изучения соединений под лабораторным шифром РГПУ-147 и РГПУ-195, проявляющих выраженные кардиопротекторные свойства при ишемическом, стрессорном и алкогольном поражении миокарда, свидетельствуют о перспективности создания на их основе новых препаратов для клинического применения в кардиологии, клинике внутренних болезней

Положения, выносимые на защиту:

1.Поиск веществ с кардиопротекторным действием среди структурных аналогов ГАМК является перспективным направлением в разработке и создании лекарственных препаратов для лечения ишемической болезни сердца, предупреждения стрессорного и алкогольного поражения миокарда.

2.Выявленная зависимость между химической структурой производных ГАМК и их противоишемическим действием открывает возможности для целенаправленного синтеза и поиска новых низкотоксичных и высокоактивных веществ в этих химических рядах.

3. Наиболее продуктивным путем поиска веществ с кардиопротекторным действием является модификация структуры активных аналогов ГАМК (фенибута, карфедона, толибута, мефебута и фепирона) путем химического связывания с органическими кислотами (лимонной, янтарной, яблочной, глутаминовой, никотиновой, феруловой) для формирования новых солей и композиций. Соли и композиции оказывают значительно более выраженное кардиопротекторное действие, чем их основания.

4. Среди солей и композиций со структурными аналогами ГАМК большими кардиопротекторными свойствами в условиях ишемии миокарда, длительного стресса и хронической алкогольной интоксикации обладает соединение РГПУ-147 (цитрат фенибута).

5. Кардиопротекторная активность вещества обусловлена его симпатоингибирующим и антистрессорным действием, которое реализуется через активацию ГАМК_а- и, в меньшей степени, ГАМК_в- рецепторов. Тормозное действие соединения на центральные симпатические структуры способствует благоприятным изменениям гемодинамики, что существенно влияет на метаболизм кардиомиоцитов.

Реализация результатов исследования.

Рекомендации, разработанные на основе выявленных закономерностей между химической структурой и антиангинальной активностью производных ГАМК используются при синтезе новых веществ на кафедре органической химии Российского Государственного педагогического университета им.А.И.Герцена (г.Санкт-Петербург).

Система методических подходов к изучению кардиопротекторной активности новых веществ применяется при проведении исследований в лаборатории фармакологии сердечно-сосудистых средств НИИ фарамкологии при ВолГМУ, на кафедре фармакологии, кафедре фармакологии и биофармации ФУВ.

Результаты работы включены в лекционный материал для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтического факультетов, слушателей факультета усовершенствования врачей и провизоров на кафедрах фармакологии, фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ, фармакологии Пятогорской фармацевтической академии, органической химии Российского государственного педагогического университета им.А.И.Герцена г.Санкт-Петербурга.

Данные о кардиопротекторном действии указанных веществ вошли в комплект документов, переданных в ОАО «Валента Фармацевтика» для представления в ФК МЗ и СР на получение разрешения к проведению клинических испытаний.

Апробация работы.

Материалы диссертации докладывались на Республиканской научно-практической конференции «Проблемы диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний» (Саратов, 1997), Всероссийской научной конференции "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии" (Санкт-Петербург, 1999), VI, VII, VIII, IX Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1999, 2000, 2001, 2002), 56-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 2001), научной конференции: Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии (Тунис, 2005), научной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции (Пятигорск, 2005), международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию кафедры фармакологии ДГМА (Дагестан, Махачкала. ИПЦ. ДГМА 2006), 4-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам», д/о «Подмосковье» (Москва, 2006), III Съезде научного общества фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007). По теме диссертации опубликовано 51 печатная работа, получено 3 патента.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на …348 страницах машинописного текста, иллюстрирована 38…таблицами и …98.рисунками, состоит из введения, обзора литературы (глава I), методов исследования (глава II), экспериментальной части (главы 3-9), обсуждения результатов (глава 10) и выводов. Список литературы включает 248 отечественных и 350 иностранных источника.

Материалы и методы

Эксперименты выполнены на 564 белых мышах и 931 нелинейных крысах, 520 кошках, 15 кроликах и 16 собаках обоего пола.

Животные содержались в условиях вивария ВолГМУ с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТ Р50258-92) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997), а также правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ З 51000.3-96 и 51000.4-96). Животные получены из питомника «Рапполово».

В работе изучено 89 новых производных линейной и циклической форм ГАМК, а также соли и композиции, полученные путем химического связывания наиболее активных аналогов ГАМК (фенибута, карфедона, толибута, мефебута и фепирона) с органическими кислотами (лимонной, янтарной, яблочной, щавелевой, глутаминовой, никотиновой, феруловой). Все исследуемые соединения синтезированы на кафедре органической химии Российского государственного педагогического университета им.А.И.Герцена (г.Санкт-Петербург) под руководством профессора Перекалина В.В. и профессора Берестовицкой В.М.^*

Для скрининга аналоги ГАМК, замещенные по углероду (n=14), по карбоксильной группе (n=11), по аминогруппе (n=6), полифункциональнозамещенные (n=6), циклические (n=22), соли и композиции (n=30) исследовались в дозах 1/50 - 1/10 от ЛД₅₀ или молекулярной массы. Углубленное изучение кардиопротекторной

активности соединения РГПУ-147 выполнено в дозе 1/30 от ЛД₅₀ (50 мг/кг), соединение РГПУ-195 - 1/100 от ЛД₅₀ (25 мг/кг). В качестве препаратов сравнения при исследовании противоишемической активности, влияния на зону некроза, на функциональные резервы сердца при окклюзии нисходящей ветви левой коронарной артерии использовались обзидан (Isis Pharma, Германия) в дозе 0,25 мг/кг (Каверина Н.В. и др., 1972) и верапамил (ОАО «Биосинтез», Россия) в дозе 0,25 мг/кг.

*Выражаем искреннюю благодарность зав.кафедрой органической химии РГПУ им.А.И..Герцена , д.х.н., проф. Берестовицкой В.М., к.х.н., доц. Васильевой О.С. и всем сотрудникам кафедры за предоставленные для исследования вещества

Кардиопротекторная активность и возможные механизмы действия соединений РГПУ-147 и РГПУ-195 после длительного стрессорного воздействия сравнивались с фенибутом (50 мг/кг), после хронической алкогольной интоксикации - с пирацетамом (200 мг/кг) (Капитоненко Т.А., 1991) (ОАО «Органика», Россия), антиагрегантное действие - с ацетилсалициловой кислотой (концентрация 10^-4; 10^-5; 10^-6 моль/л) и пентоксифиллином (Трентал, Авентис Фарма Лтд., Мумбай, Индия) (концентрация 10^-3; 10^-4; 10^-5; 10^-6 моль/л), прямое миотропное действие - с папаверином (ФГУП Мосхимфармпрепараты, Россия) (концентрация 10^-5 моль/л), прямое кардиотропное действие - с изадрином (Sigma, Германия), допамином (Ферейн, Россия) и гистамином (концентрация 10^-5 моль/л).

Скрининг веществ с антиангинальной активностью среди 89 структурных аналогов ГАМК проведен по методу Голдштейне Г.Х. (1984). Влияние соединений на зону некроза изучено на модели 7-ми дневного экспериментального инфаркта миокарда (Гацура С.В., 1984).

Для исследования антистрессорного действия соединений использовалась модель двухнедельного неизбегаемого стресса, включавшего иммобилизацию и электроболевое раздражение (Petty F. et al.,1992).

Кардиопротекторное действие соединений при алкогольном повреждении миокарда изучено на моделях острой (32% раствор этанола в дозе 4 г/кг однократно внутрибрюшинно) (Беляева Н.Ю. и др., 1982) и хронической (50% р-р этанола 8 г/кг 1 раз в день в течение 30-ти дней) (Любимов Б.И. и др., 1983) интоксикации этанолом.

Морфологическая оценка кардиопротекторных свойств соединений проведена с использованием серийных фронтальных срезов миокарда, окрашенных гематоксилином и эозином, cуданом III и IV. Микрофотосъемку с микропрепаратов производили фотокамерой CONTEX на увеличении 100, 400. Морфометрическое исследование проведено в соответствии со сложившимися принципами системного количественного анализа (Автандилов Г.Г., 1990).

Изучение действия исследуемых веществ на функциональные резервы сердца в условиях ишемии миокарда, длительного стрессорного воздействия и хронической алкогольной интоксикации осуществлялось с использованием функциональных проб: нагрузка объемом, дозированная стимуляция адренорецепторов сердца, максимальная изометрическая нагрузка (Меерсон Ф.З., 1984). Кардиодинамические параметры регистрировались с помощью компьютерного гемодинамического анализатора на базе программы ВЕАТ (Москва, Россия).

Для выявления влияния соединений РГПУ-147 и РГПУ-195 на толерантность к физической нагрузке алкоголизированных и стрессированных животных был использован тест «принудительного плавания» (Роrsolt R.D. et al., 1977).

Моделью для изучения антиноцицептивной активности соединений служил тест электрического раздражения кожи (Гузеватых Л.С. и др., 2005).

Скрининг веществ с противоаритмической активностью среди структурных аналогов ГАМК проводили на аконитиновой (40 мг/кг, в/в) модели (Каверина Н.В. и др., 1985) и хлоридкальциевой (200 мг/кг в/в) моделях аритмий (Бердяев С.Ю., 1992). Реперфузионные желудочковые нарушения ритма сердца изучали по методу Генденштейн Э.И. и др., (1990).

Центральное симпатотропное действие структурных аналогов ГАМК исследовали в условиях стимуляции седалищного нерва и регистрации изменений артериального давлениия (Хаютин В.М., 1964).

Для изучения периферической компоненты симпатотропного действия соединениий регистрировалось, вызванное стимуляцией поясничной симпатической цепочки ниже уровня L₄, изменение кровотока в мышце бедра. Пресинаптическое и альфа-адреноблокирующее действие оценивалось по изменению кровотока в той же области на введение тирамина и норадреналина. Кровоток регистрировался с помощью высокочастотного допплерографа (Минимакс - Допплер- К, Санкт-Петербург).

Анализ нейрохимического механизма кардиопротекторного действия соединений проводился по изменению АД в ответ на введение норадреналина, с предварительным введением соединения и с использованием блокаторов ГАМК_А - и ГАМК_В-рецепторов бикукулина и саклофена. Изучение участия различных медиаторных систем в реализации кардиопротекторного действия проводилось с применением активаторов этих систем: дофамина (Ферейн, Россия), 5-гидрокситрип-тофана, ацетилхолина (Sigma, США), глутамата.

Влияние на основные показатели кардиогемодинамики нормотензивных животных исследовали методом электромагнитной флуометрии (Зарецкий В.В.и соавт., 1974) и с помощью реографа 4РГ-2М системы Power Lab/4SP с ML135 Dual Bio и MLA0112 ECG Lead Swich Box.

Изучение влияния соединений на коронарное кровообращение изучали по методике, описанной Сурменковым А.А. (1975) и Гацурой В.В. (1981).

Для исследования действия соединений на систему микроциркуляции использовался метод высокочастотной ультразвуковой допплерографии (прибор Минимакс - Допплер- К, Санкт-Петербург).

Оценка антиагрегантной активности соединений проведена на модели агрегации эритроцитов, вызванной алциановым голубым (SIGMA, США) и АДФ («Реанал», Венгрия)-индуцированной агрегации тромбоцитов на анализаторе марки 230 LA производства НПФ «Биола» (Россия).

Мембранопротекторные свойства исследуемых соединений изучены на модели механического гемолиза эритроцитов (Chan P. C., 1982)

Действие соединений на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивалось по содержанию продуктов ПОЛ в гомогенате кардиомиоцитов. Содержание диеновых коньюгатов (ДК) и кротонового альдегида (КА) оценивали по поглощению УФ-излучения при 232-220 нм (спектрофотометр SP-Ultra («Олвекс», Россия)),) (Умалова В.Н. и др., 1993 г.). МДА определяли по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) (Андреева Л.И. и др., 1988). Активность ферментов антиоксидантной системы: супероксидисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы а также восстановленного глутатиона измеряли спектрофотометрически при 406 и 412 нм соответственно (спектрофотометр SP-Ultra («Олвекс», Россия)) (Костюк В.А. и др., 1984; Моин В.М., 1986; Королюк М. А., 1988).

Окислительную и фосфорилирующую функции митохондрий исследовали полярографическим методом (полярограф РА-2, Чехословакия).

Изучение экспериментальной фармакокинетики соединения РГПУ-147 осуществляли согласно «Методическим рекомендациям по доклиническому изучению фармакокинетики лекарственных средств» (Фирсов А.А. и др., 2005) методом ВЭЖХ. Использовался жидкостной хроматограф Shumadzu (Япония) с диодноматричным детектором. Для приготовления мобильной фазы использовали ацетонитрил (УФ210) (Россия) и буферную систему, состоящую из однозамещенного фосфата калия 50 mМоль, pH 2.7 (Россия) и натриевой соли гептансульфоновой кислоты (0,12%) (Россия).

Методы статистической обработки

Статистическую обработку результатов исследований проводили в пакете прикладных программ «Statistika 6.0», используя стандартные параметрические и непараметрические методы, с учетом предварительной проверки выборок на нормальность распределения. При сравнении 2-х групп применялся парный критерий Стьюдента для независимых выборок; для множественных сравнений - критерий Стьюдента с поправкой Бонферони и тест Ньюмана-Кейлса. При сравнении результатов опытов с альтернативной формой реакции использовался точный критерий Фишера для четырехпольных таблиц. Обработка данных компьютерного прогноза проводилась с применением кластерного анализа - методами гистограмм и расстояний. Фармакокинетические параметры рассчитывали модельно, независимым методом статистических моментов (Агафонов А.А. и др., 1991; Гланц С., 1999; Реброва О.Ю., 2006)

Результаты исследования и их обсуждение

Скрининг веществ с противоишемическим действием среди 89 структурных аналогов линейной и циклической форм ГАМК, замещенных по углероду, амино- и карбоксильной группе, полифункциональнозамещенных, а также среди солей и композиций, полученных на основе производных ГАМК первоначально проводился на модели ишемии миокарда, вызванной окклюзией нисходящей ветви левой коронарной артерии (ОНВЛКА) на 5 и 30 минут. Затем кардиопротекторное действие веществ, проявивших высокую противоишемическую активность, изучалось на моделях повреждения сердца острой и хронической алкоголизацией, длительным стрессорным воздействием.

Анализ зависимости «химическая структура- фармакологический эффект» позволил выявить вещества с высокой кардиопротекторной активностью при острой ишемии миокарда: среди них, бета-фенил-ГАМК (фенибут), бета-толил-ГАМК (толибут), метиловый эфир фенибута (мефебут), которые превосходили по силе действия препараты сравнения верапамил и обзидан. Ранее у отмеченных веществ были выявлены выраженные психотропные свойства.

Среди аналогов ГАМК, замещенных по амино-, одновременно по амино- и карбоксильной группам, а также полифункциональнозамещенных производных не выявлены вещества с выраженной антиангинальной активностью. Как не найдены были вещества с заданным видом активности и среди структурных аналогов циклической формы ГАМК (альфа-пирролидона). За исключением, как и в случае с линейной формой, фенильных аналогов. Среди них был выявлен 4-фенил-пирролидон - фепирон и 4-фенил-2-оксопирролидонацетамид (карфедон) - соединения, обладающие антиангинальным действием.

В результате проведенных исследований противоишемического действия среди солей и композиций фенибута, карфедона, мефебута, фепирона и толибута с органическими кислотами - лимонной, янтарной, яблочной, глутаминовой, никотиновой, феруловой было выявлено соединение под лабораторным шифром РГПУ-147 (соль лимонной кислоты и фенибута), обладающее высокой активностью и низкой токсичностью: ЕД₂₀ - 13,5 мг/кг, ЕД₅₀ - 41 мг/кг, ЛД₅₀-1750 мг/кг, ТИ - 128,7 и 42,6, соответственно. Данное вещество было отобрано для дальнейшего углубленного изучения.

С использованием информационной технологии прогноза биологической активности химических соединений «Микрокосм»*, было выявлено несколько веществ с предполагаемым антиангинальным действием, некоторые из них синтезированы химиками Российского Государственного педагогического университета им.А.И.Герцена. В ходе экспериментальной проверки компьютерного прогноза для дальнейшего изучения отобрано соединение РГПУ-195, оказывающее выраженное кардиопротекторное действие в условиях ишемии миокарда. ЕД₂₀ его равняется 17,4 мг/кг, ЕД₅₀ - 107 мг/кг, ЛД₅₀- 2300, ТИ - 131,7 и 21,4, соответственно.

Фармакофорный анализ производных ГАМК, проявивших в скрининге антиангинальную активность, позволил выявить некоторые характерные для исследованных типов веществ QSAR-зависимости и показал наличие одинаковых фармакофоров в молекулах известных лекарственных препаратов, обладающих противоишемической активностью и исследуемых производных ГАМК, что может также служить основанием для объяснения их действия. Однако, для наиболее активного из испытанных веществ РГПУ-147 высокий уровень противоишемическоой активнсти определяется прежде всего специфическими именно для этого соединения структурными особенностями. Некоторые из них представлены на рис.1

Рис.1 Специфические для соединения РГПУ-147 структурные компоненты, определяющие его выраженную противоишемическую активность.

*Выражаем искреннюю благодарность к.б.н ВасильевуП.М.. за помощь в проведении исследований.

При изучении зависимости антиангинальной активности от дозы, было выявлено, что максимальный эффект соединение РГПУ-147 и РГПУ-195 проявляют в дозах 50 и 25 мг/кг, соответственно.

Интегрированным показателем, свидетельствующим о благоприятном или негативном действии исследуемого вещества на течение ишемии сердца являются данные о влиянии его на размеры зоны некроза при инфаркте миокарда. В этой связи, было изучено противоишемическое действие соединения РГПУ-147 в условиях 7-ми дневного экспериментального инфаркта миокарда, вызванного перевязкой нисходящей ветви левой коронарной артерии, и выявлено, что соединение в дозе 50 мг/кг в/в существенно (на 51,6%) ограничивает зону некроза, тогда как препараты сравнения верапамил и обзидан в дозе 0,25 мг/кг - на 36,3 и 22,2%, соответственно (Рис.2)

Таким образом, на первом этапе исследования были выявлены вещества, обладающие выраженной противоишемической активностью - соединения РГПУ-147 и РГПУ-195.



Рис.2 Влияние соединения РГПУ-147 на размеры зоны некроза через 7 суток после экспериментального инфаркта миокарда у кошек

На втором этапе была изучена их кардиопротекторная активность в условиях ишемии миокарда, длительного стрессорного воздействия, острой и хронической алкогольной интоксикации. Для этого исследовалось влияние соединений РГПУ-147 и РГПУ-195 на функциональные резервы сердца при проведении нагрузочных проб: нагрузки объемом, дозированной адреностимуляции рецепторов сердца, максимальной изометрической нагрузки (Рис.3).



Рис. 3 Влияние соединения РГПУ-147, верапамила и обзидана на функциональные резервы ишемизированного миокарда в условиях нагрузки объемом.

* данные статистически достоверны по t-критерию Стьюдента при р<0,05 по сравнению с контрольной группой ишемизированных животных

Соединения РГПУ-147 и РГПУ-195 уменьшали степень повреждения миокарда, вызванного действием названных факторов, о чем свидетельствуют более высокие функциональные резервы сердца при проведении нагрузочных тестов. Например, при ОНВЛКА у контрольной группы животных в условиях нагрузки объемом отмечался прирост ЛЖД и УО на 11 % и 13%, соответственно, тогда как у животных, получавших перед ОНВЛКА соединение РГПУ-147 внутривенно, в дозе 50 мг/кг наблюдалось увеличение ЛЖД и УО на 27% и 33,9%, соответственно, по сравнению с исходными данными (Рис. 3). Индекс сокращения и индекс расслабления возрастали на 13,4 и 8% в контрольной группе животных и на 31,8 и 29,2%, соответственно, у животных, которым предварительно вводилось соединение РГПУ-147. У животных, получавших до ОНВЛКА верапамил и обзидан, отмечено повышение ЛЖД - на 16 и 11,4%, УО - 13,2 и 11,8%, ИС - на 18,2 и 11,7%, ИР - на 13 и 7,6%, соответственно, по сравнению с исходными данными при нагрузке объемом (Рис.3). Увеличение показателей было значительно меньше, чем у животных, которым вводилось соединение РГПУ-147, что свидетельствует о более высоких инотропных резервах сердца животных, получавших исследуемое соединение.

Сходная кардио- и гемодинамика наблюдается у ишемизированных животных при проведении пробы с адреналином и максимальной изометрической нагрузке, а также и у алкоголизированных и стрессированных животных в условиях всех используемых тестов, что свидетельствует о сохранении функциональных резервов сердца под влиянием соединений РГПУ-147 и РГПУ-195, т.е. об их отчетливом кардиопротекторном действии.

Хроническая алкогольная интоксикация приводит к выраженным морфологическим повреждениям миокарда. Эти данные согласуются с литературными (Беляева Н.Ю. и др., 1982; Цыпленкова В.Г. и др., 1985; Вихерт А.М., 1987). Морфометрическое исследование миокарда алкоголизированных животных, получавших соединения РГПУ-147 и РГПУ-195, позволило выявить статистически достоверное по основной массе критериев защитное действие, превосходящее таковое препарата сравнения пирацетама (Таб.1)*.

У стрессированных животных наблюдаются сходные с алкоголизированными морфологические изменения в миокарде, менее выраженные в группах животных, получавших соединение РГПУ-147 и препарат сравнения фенибут.

*Выражаем искреннюю благодарность д.м.н.Смирнову А.В., асс. Толокольникову В.А., асс .Горячеву А.Н. за помощь в проведении исследований.

Таблица. 1 Показатели морфометрии миокарда у крыс с алкогольной интоксикацией (M+m)

Показатель	интактные животные (физ. р-р)	алкоголь+ физ.р-р	алкоголь+ пирацетам	алкоголь+ РГПУ-147	алкоголь+ РГПУ-195
Объемная доля КМЦ, %	74,8+3,6	66,0+2,4*	68,6+1,7	75,8+2,6**	71,0+3,2**
Объемная доля сосудов, %	2,2+0,2	5,5+0,2*	4,8+0,3**	2,8+0,2**	3,4+0,2**
Объемные доли соединительной ткани, %	14,6+1,3	25,7+1,8*	22,4+2,1	16,2+1,4**	18,5+0,9**
Толщина КМЦ, мкм	40,0+1,6	58,9+1,8*	50,4+2,3**	46,5+2,8**	48,6+1,5**
Поперечное сечение КМЦ, мкм2	152,5+10,1	290,5+6,9*	211,5+6,9**	161,8+7,9**	196,3+13,8**
Поперечное сечение ядер КМЦ, мкм2	26,8+1,8	27,4+1,6	27,9+0,9	24,0+1,3**	27,3+1,5

* - различия статистически достоверны в сравнении с группой интактных животных (р?0,05).

** - различия статистически достоверны в сравнении с группой алкоголизированных животных (р?0,05).

Морфофункциональные изменения в миокарде алкоголизированных и стрессированных животных приводят к снижению толерантности к физической нагрузке, вызывая статистически значимое сокращение длительности плавания на 46,1 % (р? 0,05) и 54,6 % (р? 0,05), соответственно, по сравнению с интактной группой животных. Исследуемые соединения РГПУ-147, РГПУ-195, а также препараты сравнения фенибут и пирацетам повышают толерантность к физической нагрузке у алкоголизированных животных, что проявляется в увеличении продолжительности плавания по сравнению с группами негативного контроля на 69,7% (р? 0,05), 33,9%, 58,2% (р? 0,05) и 46,8%, соответственно. Эффект соединения РГПУ-147 сопоставим с препаратом сравнения фенибутом и превосходит пирацетам, соединение РГПУ-195 незначительно им уступает. В группе стрессированных животных, получавших соединения РГПУ-147 (50 мг/кг) и РГПУ-195 (25 мг/кг), длительность плавания по сравнению с группой негативного контроля была на 90,7% (р? 0,05) и 83,9%, соответственно, выше. Предварительное введение фенибута также способствовало повышению толерантности к физической нагрузке на 80,4%.

Ишемия, стресс и алкоголизация могут повышать чувствительность сердца к действию аритмогенных факторов. В этой связи была изучена противоаритмическая активность производных ГАМК, проявивших наиболее выраженную противоишемическую активность - солей и композиций на основе фенибута и карфедона. Антиаритмическая активность изучалась на различных моделях нарушений сердечного ритма (НРС) у животных. Выявлено, что исследуемые соединения ограничивают развитие НРС и снижают процент случаев летального исхода животных при реперфузии. Наиболее выраженной противоишемической активностью обладает соединение РГПУ-147, которое предотвращает возникновение реперфузионных аритмий в 66,7%; фибрилляций - в 70,8%; гибели животных - в 76,4% случаев по сравнению с контрольной группой животных, превосходя по активности препараты сравнения верапамил и обзидан.

Меньше выражено противоаритмическое действие соединений на аконитиновой и хлоридкальциевой моделях аритмий, но и в этих случаях наиболее эффективным оказалось соединение РГПУ-147, активность его была сопоставима с верапамилом и обзиданом.

Таким образом, наиболее выраженной противоаритмической активностью обладает соединение РГПУ-147. Можно считать целесообразным поиск веществ с данным видом активности среди структурных аналогов ГАМК.

Рассматривая в совокупности представленные данные, можно сделать вывод, что соединения РГПУ-147 и РГПУ-195 оказывают выраженное кардиопротекторное действие при ишемии, стрессе и алкогольной интоксикации и являются перспективными для дальнейшей разработки в качестве лекарственного средства.

Для понимания природы кардиопротекторного действия изучаемых веществ были проанализированы его возможные механизмы.

Известно, что ГАМК и ее аналоги оказывают тормозное влияние на центральные симпатические структуры (Ковалев Г.В. и соавт., 1976; Kovalev G.V. et al., 1978; Морозов И.С., 1977; Петров В.И., 1977). В этой связи, с целью изучения симпатикотропного действия соединения РГПУ-147 были выполнены эксперименты с раздражением седалищного нерва и регистрацией АД.

Рис.4 Влияние соединения РГПУ-147 на прессорные реакции, вызванные раздражением седалищного нерва (А) и сино-каротидные прессорные (В) и депрессорные (С) рефлексы

Соединение РГПУ-147 выраженно, дозозависимо подавляло прессорные реакции АД, вызванные раздражением седалищного нерва (Рис.4А), значительно меньше - прессорные сино-каротидные рефлексы (Рис. 4В) и практически не влияло на депрессорные сино-каротидные рефлексы (Рис. 4С).

Для изучения периферической компоненты симпатоингибирующего действия соединения выполнялись эксперименты с раздражением поясничной симпатической цепочки, что вызывало высвобождение норадреналина из окончаний постганглионарных волокон и отчетливое сужение сосудов, следствием чего отмечалось уменьшение кровотока в мышце бедра, регистрируемое с помощью допплерографа.



Рис.5 Изменение кровотока в мышце бедра, вызванное раздражением поясничной симпатической цепочки (А), введением норадреналина (В) и тирамина (С)

Отмечалось практически одинаковое уменьшение кровотока в контрольной и в опытной группе животных (Рис 5А). Соединение также не влияло на сосудистые реакции, возникающие на введение норадреналина и тирамина (Рис. 5В, С).

В совокупности, полученные данные позволяют считать, что соединение РГПУ-147 оказывает выраженное центральное симпатоингибирующее действие, не влияет на ганглионарную передачу и не обладает симпатолитическим и альфа-адреноблокирующим действием.

Далее был проведен анализ нейрохимического механизма кардиопротекторного действия соединения РГПУ-147. Структурное сходство вещества с фенибутом позволило предположить, что действие его обусловлено активацией ГАМК-рецепторов. В этой связи, было изучено влияние соединения РГПУ-147 на сомато-симпатические реакции (по изменению АД), вызванные раздражением седалищного нерва, в условиях блокады, поочередно, ГАМК_А-рецепторов бикукулином (1 мг/кг) и ГАМК_В-рецепторов саклофеном (1 мг/кг). Выявлено, что предварительное (до соединения - РГПУ147) введение бикукулина в большей степени, а саклофена, в меньшей, снижает депремирующие эффекты исследуемого вещества.

Кроме того, было изучено возможное взаимодействие соединения с дофамин-ергической, серотонинергической, холинергической, ВАК-ергической медиаторными системами. Соединение РГПУ-147 не влияло на изменения АД, вызванные введением активаторов названных систем: дофамина, 5-гидрокситриптофана, ацетилхолина, глутамата.

Вероятно, симпатоингибирующее действие соединения РГПУ-147 обусловливает влияние его на кардио- и гемодинамику в условиях ишемии, экспериментального инфаркта миокарда и хронической алкогольной интоксикации. Положительные гемодинамические сдвиги, в свою очередь, могут оказывать благоприятное влияние на микроциркуляцию и коллатеральное кровообращение, что в совокупности с метаболическими изменениями, вероятно, составляет основу кардиопротекторного действия соединений.

При ишемии и инфаркте миокарда, как правило, отмечаются нарушения гемодинамики, а именно: снижается МОК, растет ОПСС и ЧСС, что создает неблагоприятные условия для кровоснабжения и функционирования сердца, что приводит к увеличению потребности миокарда в кислороде. В контрольной серии экспериментов через 7 суток после окклюзии венечной артерии наблюдалось снижение уровня АД, МОК, соответственно, на 11,5% и 66,5%, по сравнению с исходными значениями, сосудистое сопротивление повышалось (на 54,2%) (Рис. 6А,В,С).



Рис. Влияние соединения РГПУ-147, верапамила и обзидана на АД, ЧСС (А), МОК (В), ОПСС (С) в условиях 7-ми суточного ЭИМ у кошек. р<0,05 по сравнению с контрольной группой животных по t-критерию Стьюдента

У инфарцированных животных, получавших верапамил в дозе 0,25 мг/кг в/в в течение 7 суток минутный объем кровообращения и общее периферическое сопротивление уменьшались, соответственно, на 18,6% и 8,6%, что приводило к выраженному падению АД (на 24%). В группе животных, получавших обзидан в дозе 0,25 мг/кг в/в в условиях экспериментального инфаркта миокарда, АД и МОК снижались, соответственно, на 14% и 35%, а ОПСС повышалось на 45% по сравнению с исходными значениями. Уровень АД и МОК у животных, получавших соединение РГПУ-147 в дозе 50 мг/кг в/в, уменьшались соответственно, на 10% и 15% на фоне практически не изменившегося (увеличение на 5%) сосудистого сопротивления (Рис.6 А, В, С). Таким образом, соединение РГПУ-147 предотвращает негативные изменения гемодинамики в условиях 30-ти минутной ОНВЛКА.

Исследуемые соединения РГПУ-147, РГПУ-195 и препараты сравнения фенибут и пирацетам уменьшают токсическое действие этанола на сердце, облегчая атриовентрикулярную и внутрижелудочковую проводимость: а именно, в группе животных, получавших РГПУ-147 наблюдалось уменьшение длительности интервалов PQ и QRST на 13 и 10%, соответственно, под влиянием соединения РГПУ-195 снижалась продолжительность QRS и QRST на 10 и 8%, соответственно. У животных, получавших препарат сравнения фенибут, выявлено незначительное снижение амплитуды зубца S, продолжительность зубца Р и интервалов PQ, QRS и QRST уменьшилась на 17,8 (р<0,05); 15,6; 11,5 и 17,5% (р<0,05), соответственно, по сравнению с контрольной группой алкоголизированных животных. Длительность зубца Р и интервалов QRS и QRST укоротилась на 11,9 (р<0,05); 8,9; 14,1 (р<0,05)%, соответственно, в группе животных, получавших препарат сравнения пирацетам.

У контрольной группы алкоголизированных животных УО, МОК снижались, а ОПСС возрастала. В группе алкоголизированных животных, получавших соединение РГПУ-147, УО и МОК были выше на 34,6% (p<0,05); 24,5% (p<0,05), соответственно, по сравнению с контрольной группой, получавшей этанол, ОПСС - ниже на 23,7%. Соединение РГПУ-195 и препараты сравнения фенибут и пирацетам также поддерживали кардио- и гемодинамические показатели на более высоком, а ОПСС на более низком уровнях, по сравнению с контрольной группой алкоголизированных животных.

Многочисленными исследованиями показано, что течение ишемии миокарда при окклюзии коронарной артерии зависит от коллатерального кровотока и в острый период ишемии ОСКК постепенно снижается параллельно с падением перфузионного АД, что усугубляет течение ишемического процесса, ведет к снижению сократимости сердца и его насосной функции. В контрольной серии экспериментов на 120 минуте коронароокклюзии регистрировалось снижение уровня ретроградного (коллатерального) коронарного кровотока и ретроградного перфузионного давления на 34,2% и 43,6% по сравнению с исходными данными, значительно (на 36%) снижалось системное артериальное давление и увеличивалось ЧСС на 20% (Рис.7).

Рис. 7 Влияние соединения РГПУ-147 на коронарное кровообращение в очаге ишемии миокарда через 120 мин. после окклюзии коронарной артерии. *р<0,05 по t-критерию Стьюдента

Обозначения: ОСКК- объемная скорость коронарного кровотока; РД -ретроград-ное давление; АД - артериальное давление; ЧСС-частота сердечных сокращений

В группе животных, получавших соединение РГПУ-147 в дозе 50 мг/кг в/в через 120 мин после окклюзии нисходящей ветви левой коронарной артерии ретроградное давление снизилось на 17,2%, объемная скорость ретроградного кровотока возросла на 21,9% по сравнению с исходными данными, системное АД снизилось на 21,8% и практически не изменилась ЧСС (Рис.7). Таким образом, улучшение коллатерального кровотока в условиях ОНВЛКА и предупреждение увеличения ЧСС под влиянием соединения РГПУ-147 может частично объяснять его кардиопротекторное действие при ишемии миокарда.

Наблюдающиеся неблагоприятные изменения гемодинамики при ишемии миокарда, стрессе и алкогольной интоксикации могут повлечь за собой существенные нарушения в системе микроциркуляции (Вихерт А.М., 1987; Пшенникова М.Г., 2000). Исходя из этого, было изучено влияние соединений РГПУ-147 и РГПУ-195 на микроциркуляцию в брыжейке животных, подвергшихся хронической алкогольной интоксикации и длительному стрессорному воздействию. Соединения РГПУ-147 и РГПУ-195 уменьшали редукцию линейных и объемных скоростей кровотока: при алкогольной интоксикации у животных контрольной группы максимальная систолическая линейная скорость (Vas) была ниже на 30,8% (Р?0,05) по сравнению с интактной группой животных, максимальная объемная скорость кровотока (Qas) также была замедлена на 30,9% (Р?0,05). В группе животных, получавших соединение РГПУ-147, показатели скоростей кровотока Vas и Qas были выше на 35,6% (Р?0,05), 35,4 (Р?0,05) по сравнению с алкоголизированными животными (Рис. 8 А,В).

Рис.8 Изменения максимальной систолической линейной (А) и максимальной систолической объемной (В) скоростей кровотока в сосудах брыжейки животных при хронической алкогольной интоксикации.

* изменения статистически достоверны при р<0,05 по t-критерию Стьюдента по сравнению с группой интактных животных. # изменения статистически достоверны при р<0,05 по t-критерию Стьюдента по сравнению с группой алкоголизированных животных

Соединение РГПУ-195 в дозе 25 мг/кг приводило к повышению Vas- на 34%, Qas - на 41,6% (Рис.8 А, В).Исследуемые соединения по выраженности действия превосходили препараты сравнения фенибут и верапамил.

Рис.9 Изменения максимальной систолической (А) линейной и (В) объемной скоростей кровотока в сосудах брыжейки животных при хроническом стрессорном воздействии

* данные статистически достоверны по q-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,05 в сравнении с группой интактных животных

# данные статистически достоверны по q-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,05 в сравнении с группой стрессированных животных

Аналогичные изменения микроциркуляции под влиянием соединений РГПУ-147 и РГПУ-195 наблюдаются и при длительном стрессорном воздействии (Рис. 9 А, В).

Улучшение микроциркуляции под влиянием соединения РГПУ-147 может быть обусловлено не только изменениями системных показателей кардио- и гемодинамики, но и влиянием на вязкость крови, деформабельность эритроцитов, агрегацию форменных элементов крови. Нами в экспериментах «in vitro» выявлено, что соединение дозо-зависимо ингибирует агрегацию эритроцитов кролика, вызванную алциановым голубым, превосходя по эффективности препараты сравнения ацетилсалициловую кислоту и пентоксифиллин в концентрациях 10^-4М, 10^-5М и 10^-6М (Рис. 10). Наиболее выраженную антиагрегантную активность на модели АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов соединение РГПУ-147 проявляет в дозе 10^-3 моль/л (-50,5% по сравнению с контрольными данными). Фенибут в той же дозе ингибирует агрегацию тромбоцитов на 49,1%. Антиагрегантное действие соединения РГПУ-147 и фенибута сопоставимо с препаратом сравнения пентоксифиллином.

Рис. 10 Влияние соединения РГПУ-147 на агрегацию эритроцитов кроликов, ин дуцированную введением алцианового голубого (0,2 мг/кг) "in vitro" * Р<0,05 по отношению к ацетилсалициловой кислоте; # Р<0,05 по отношению к пентоксифиллину

Соединения оказывают мембранопротекторное действие о чем свидетельствует повышение резистентности эритроцитов стрессированных и алкоголизированных животных к механическому воздействию. Выявлено, что степень гемолиза эритроцитов в результате механического воздействия у группы интактных животных составила 4,2%, у алкоголизированных животных - 11,6%. В группах алкоголизированных животных, получавших соединения РГПУ-147, РГПУ-195 и эталонные препараты фенибут и пирацетам отмечено снижение степени гемолиза на 41,4 (р<0,05); 36,6 (р<0,05); 23,3; 27,6 %, соответственно. У стрессированных животных степень гемолиза эритроцитов превышала таковую интактных животных на 65,1% (р<0,05), у стрессированных животных, получавших соединения РГПУ-147, РГПУ-195 и препарат сравнения фенибут - на 38,7% (р<0,05), 39,9%; 37,5% по сравнению с контрольной группой животных. Мембранопротекторное действие тоже может играть значительную роль в улучшении микроциркуляции.

В патогенезе повреждающего действия ишемии, стресса и др. существенную роль играет гипоксия. Многие производные ГАМК обладают противогипоксическим действием, что явилось основанием для исследования антигипоксического действия соединения РГПУ-147. Показано, что названое вещество и препарат сравнения фенибут выражено и в равной степени увеличивают продолжительность жизни животных в условиях гипобарической и гиперкапнической гипоксии, в сравнении с животными контрольной группы (Таб.2).

Таблица.2 Влияние аналогов ГАМК на продолжительность жизни мышей в условиях гипоксии.

Показатель	контроль	фенибут	РГПУ-147
Гипобарическая гипоксия	44,1±2,57	71,5 ±3,27***	66,5 ±3,89**
Гиперкапническая гипоксия	1621,8 ±67,68	2149,5 ±59,78**	1832,6 ±53,79*

Важную роль в патогенезе повреждающего воздействия ишемии, стресса и этанола на миокард играет активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и снижение мощности системы антиоксидантной защиты, поэтому нами было изучено влияние соединения РГПУ-147 на процессы ПОЛ и активность антиоксидантной системы (АОС).

В контрольной серии экспериментов острая коронароокклюзия приводила к увеличению концентрации диеновых коньюгатов (ДК), кротонового альдегида (КА) и малонового диальдегида (МДА) в цитоплазме ишемизированных участков сердца, которая была существенно выше показателей неповрежденных областей, соответственно, на 341,6; 118 и 61,9%. Наряду с этим наблюдалось снижение активности основных ферментов АОС - супероксиддисмутазы (СОД) - на 35,2% и глутатионпероксидазы (ГП) - 29,7%, а также истощение пула восстановленого глутатиона - на 52,3% (Рис. 11 А, В, С). В группе животных, получавших соединение РГПУ-147 в дозе 50 мг/кг в/в, концентрация ДК, КА и МДА в поврежденных кардиомиоцитах по сравнению со здоровыми тканями сердца, была больше, соответственно, на 116,6; 40 и 40,8%.

Рис.11 Влияние соединения РГПУ-147 на активность супероксиддисмутазы (А), глутатионпероксидазы (В) и изменение концентрации восстановленного глутатиона (С) в цитоплазме кардиомиоцитов после 120 мин ОНВЛКА.

*р<0,05 по t-критерию Стьюдента по сравнению с показателями интактной зоны миокарда

...