Эндотелиальная дисфункция и пути ее фармакологической коррекции

Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации

на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Эндотелиальная дисфункция и пути ее фармакологической коррекции

14.03.06. фармакология, клиническая фармакология

Воронков Андрей Владиславович

ВОЛГОГРАД 2011



Работа выполнена в Государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации»

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Тюренков Иван Николаевич

Официальные оппоненты: ЗДН РФ, доктор медицинских наук, профессор Р.С. Мирзоян

ЗДН РФ, доктор медицинских наук, профессор К.М. Резников

доктор медицинских наук, профессор В.А. Косолапов

Ведущая организация: «НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН» г.Санкт- Петербург

Защита состоится «6» октября 2011 г. в 11⁰⁰ часов на заседании Диссертационного совета Д 208.008.02 при ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития Российской федерации» (Россия, 400131, Волгоградская область, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития Российской федерации» (400131, Волгоградская область, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, 1).

Автореферат разослан «_____»_______________2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук А.Р. Бабаева



ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время считается общепризнанным, что в основе развития сердечно-сосудистой патологии различного генеза важную роль играет дисфункция эндотелия (ЭД) (Петрищев Н.Н., 2003; Ярек-Мартынова И.Р., Шестакова М.В., 2011; Ding H., 2010; Potenza M.A., 2010; Maltais S., et all., 2011). Эндотелий рассматривается как самостоятельная мишень терапевтического воздействия для коррекции различных сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ). Исходя из этого, актуальной проблемой экспериментальной и клинической фармакологии является поиск веществ с эндотелиопротекторным действием (ЭПД) как среди известных препаратов, так и новых соединений (Карпов Ю.А. 2010).

К настоящему времени установлено ЭПД препаратов, уменьшающих влияние РААС и СНС на сердечно-сосудистую систему (иАПФ, b-блокаторы и т.д.); снижающих уровень ХС_общ, ХС_ЛПНП, ХС_ЛПОНП (особенно статины); регулирующих работу Ca²⁺ каналов (блокаторы Ca каналов), что очевидно связано, как с прямыми эндотелий зависимыми механизмами действия так и их опосредованным комплексным фармакологическим влиянием (Luscher T.F., Noll G., 1995; Aikawa M., 2010; Egashira K., 2010; Jorge P.A., 2010). Многие из проведенных экспериментальных и клинических исследований по изучению ЭПД сердечно-сосудистых средств достаточно противоречивы и не дают однозначного ответа по направленности и выраженности действия препаратов из этих фармакологических групп. Это обусловлено тем, что многие как экспериментальные, так и клинические исследования выполнены с использованием различных методов оценки функционального состояния эндотелия (биохимических, функциональных, инвазивных, неинвазивных и т.д.), клинические же работы, кроме этого, отличаются выбором больных, различных по возрасту, тяжести заболевания, сопутствующим патологиям, протоколам исследований.

Можно предполагать, что вещества с ГАМК-ергической активностью ограничивающие симпатические влияния на сердце и сосуды, уменьшающие активность РААС, обладающие при этом антиоксидантной и антигипоксантной активностью (Перфилова В.Н., 2009; Тюренков И.Н., 2008; Narahashi T., 1999; Harrison 2000), могут улучшать функцию эндотелия (Недвицкий П.И., 2000; Ishide T., 2005). Однако изучение влияния ГАМК-ергических средств на эндотелий практически не выполнялось.

Учитывая важную роль в развитии ЭД оксидативного стресса, можно предположить, что и антиоксиданты также могут воздействовать на различные звенья развития ЭД: на систему синтеза и биодоступности NO, гемореологические параметры крови, липидный и углеводный обмен, воспаление, пролиферацию (Насибуллин Р.С.,2010; Yamamoto, M.2008; Schiffrin E. L., 2010; Wallace T. C., 2011). Поэтому поиск высоко активных эндотелиопротекторов среди антиоксидантов, в том числе и флавоноидов, вполне оправдан.

На основании изложенного представилось целесообразным провести комплексное сравнительное изучение ЭПД ряда сердечно-сосудистых средств, производных ГАМК, лекарственных средств, обладающих антиоксидантной активностью в том числе и флавоноидов в условиях ЭД различного генеза.

Целью исследования является разработка методологии поиска веществ с эндотелиопротекторным действием и проведение сравнительного изучения эндотелиотропных свойств, сердечно-сосудистых средств и веществ с различными механизмами действия.

Задачи исследования

1. Провести тестирование эндотелия различных сосудистых регионов в условиях нормы и экспериментальной патологии (при недостаточности половых гормонов, экспериментальном сахарном диабете, хирургической травме).

2. Изучить влияние сердечно-сосудистых средств, производных ГАМК, флавоноидов и препаратов, обладающих антиоксидантной активностью на вазодилатирующую функцию эндотелия в условиях ЭСД и НПГ.

3. Изучить влияние сердечно-сосудистых средств, производных ГАМК, препаратов, обладающих антиоксидантной активностью, в том числе и флавоноидов на антитромботическую функцию эндотелия, гемореологию и основные параметры гемостаза в условиях ЭСД и НПГ.

4. Изучить влияние сердечно-сосудистых средств, производных ГАМК, и препаратов, обладающих антиоксидантной активностью, в том числе и флавоноидов на углеводный, липидный и гормональный статус животных с ЭСД и НПГ.

5. Изучить влияние наиболее активных веществ из вновь синтезированныхпроизводных ГАМК, флавоноидов и препаратов сравнения на противовоспалительную функцию эндотелия при ЭСД и НПГ.

6. Дать морфологическую оценку состояния эндотелия при ЭСД и НПГ и изучить влияние наиболее активных веществ из вновь синтезированных и препаратов сравнения на морфологическую структуру эндотелия.

7. Изучить механизм эндотелиопротективного действия наиболее активных веществ из вновь синтезированных и препаратов сравнения у животных с ЭСД и НПГ с помощью иммуногистохимического исследования, с оценкой уровня экспрессии e-NOS, эндотелина-1, каспазы -3, nF-kB, рецепторов TREIL.

8. На основании сравнительного изучения влияния на эндотелиальную функцию средств из различных фармакологических групп в условиях нормы и экспериментальной патологии, дать оценку методологии к подходам оценки эндотелиальной функции/дисфункции и эндотелиопротективного действия фармакологически активных соединений.

Новизна исследования

Впервые разработан комплексный подход изучения эндотелиотропных эффектов биологически активных веществ, обоснована возможность моделирования эндотелиальной дисфункции с помощью стрептозотоцин индуцированного сахарного диабета и экспериментально вызванной недостаточности половых гормонов.

Впервые выполнено сравнительное комплексное изучение влияния представителей различных фармакологических групп, среди сердечно-сосудистых средств, в сопоставимых условиях,: в-адреноблокаторов (небиволол, бисопролол), ингибиторов АПФ (лизиноприл), антагонистов кальциевых каналов (нифедипин), статинов (симвастатин), гипариноида сулодексида, ряда производных ГАМК (фенибут, пикамилон, РГПУ-189, РГПУ-147), веществ, обладающих антиоксидантной активностью (мексидол, предуктал, дибикор), а также флавоноидов (гесперидин, диосмин, кверцетин и флавицин), на вазодилатирующую, антитромботическую функции, на углеводный, липидный обмен и гормональный статус при ЭСД и НПГ. Показано их неоднозначное эндотелиопротекторное действие.

Впервые выявлена высокая эндотелиопротективная активность и комплексно изучено влияние нового производного ГАМК - соединения РГПУ-189 и флавоноида - флавицина на вазодилатирующую, антитромботическую, противовоспалительную и пролиферативную функции эндотелия при ЭСД и НПГ. гормон диабет аминомасляный эндотелий

По выраженности эндотелиопротекторного действия РГПУ-189 и флавицин превосходят небилет, конкор, мексидол, предуктал, дибикор, нифедипин, фенибут, пикамилон, производное ГАМК - РГПУ-147 и флавоноиды, приближаясь по выраженности действия к Сулодексиду.

Впервые установлено усиление активности е-NOS, снижение эндотелина-1, а так же снижение экспрессии основных генетических маркеров запускающих апоптоз (каспаза-3, «доменов смерти», NF-kB) у животных с ЭСД и НПГ, под влиянием соединения РГПУ-189и флавоноида флавицина, что очевидно лежит в основе их эндотелиопротекторного действия.

Научно-практическая ценность работы

Используемый комплексный морфо-функциональный подход может применяться для оценки степени ЭД (вазодилатирующей, антитромботической, противовоспалительной, антипролиферативной функций эндотелия), мощности функционирования NO системы, дает возможность оценить эндотелиотропные свойства исследуемых веществ.

Сравнительный анализ полученных данных о влиянии известных сердечно-сосудистых средств, позволит более дифференцированно их использовать при лечении больных с различной кардиологической патологией, а на основе флавоноидов и производных ГАМК - разработать лекарственные средства для лечения ЭД различного генеза.

Полученные данные об эндотелиопротективном действии производных ГАМК и флавоноидов свидетельствуют о перспективности дальнейшей разработки на основе соединения РГПУ-189 и флавицина эндотелиопротекторов для применения в качестве средств профилактики и лечения сосудистых осложнений различного генеза, обусловленных ЭД.

Реализация результатов.

На основании данных диссертационного исследования разработана дальнейшая программа целенаправленного поиска веществ с сердечно-сосудистыми и эндотелиотропными свойствами среди структурных аналогов ГАМК (кафедра органической химии Российского Государственного Педагогического Университета им. А.И.Герцена (г. Санкт-Петербург)), предложен план поиска веществ флавоновой природы для профилактики и лечения сосудистых осложнений, обусловленных СД и НПГ (Пятигорская фармацевтическая академия).

Разработанная комплексная морфофункциональная система поиска и доклинического фармакологического изучения веществ с эндотелиопртективной активностью используется в научно-исследовательской работе кафедры фармакологии и биофармации ФУВ Волгоградского государственного медицинского университета (ВолгГМУ), НИИ фармакологии ВолгГМУ, кафедрах фармакологии ВолгГМУ и Пятигорской государственной фармацевтической академии. Полученные в ходе исследования результаты оформлены в виде методического пособия «Новая медицинская технология: Использование высокочастотной ультразвуковой допплерографии для изучения влияния фармакологических веществ на региональное кровообращение и эндотелиальную функцию (подписано в печать 04.2010)

Полученные результаты о эндотелиопротекторных свойствах новых производных гамма-аминомасляной кислоты и флавоноидов, а так же сравнительная эндотелиопротекторная активность сердечно-сосудистых средств и веществ, обладающих антиоксидантной активностью, включены в раздел учебных программ курса фармакологии на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ, фармакологии, клинической фармакологии и интенсивной терапии Волгоградского государственного медицинского университета, кафедре биохимии и микробиологии, кафедре органической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии, кафедрах фармакологии Воронежской медицинской академии, Ростовского государственного медицинского университета, Белгородского государственного университета. Материалы работы оформлены в виде информационных писем “Изучение эндотелиопротекторных свойств флавоноидов при экспериментальном сахарном диабете”, «Эндотелиопротективные свойства производных ГАМК при недостаточности половых гормонов» которые используются в учебном процессе и научной работе кафедры фармакологии ВолгГМУ (акты о внедрении от 09.2010; 12.2010), фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ (акты о внедрении от 09.2010; 12.2010), лаборатории фармакологии сердечно-сосудистых средств НИИ фармакологии ВолгГМУ (акты о внедрении от 09.2010; 12.2010). По материалам настоящей работы получен 1 патент Российской Федерации на изобретение.

Положения, выносимые на защиту:

1. Стрептозотоцин-индуцированный сахарный диабет в большей степени, а экспериментально вызванная недостаточность половых гормонов, в меньшей степени, приводят к выраженным нарушениям всех функций эндотелия. Операционная травма так же приводит к эндотелиальным нарушениям, однако они носят кратковременный и обратимый характер. Полученные результаты позволяют рекомендовать данные патологические модели для моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте.

2. Используемый в работе комплексный морфо-функциональный подход к изучению вазодилатирующей, антитромботической, противовоспалительной, антипролиферативной функций эндотелия, позволяет оценить стабильность и мощность функционирования NO системы и выраженность ЭД, а также может использоваться для изучения эндотелиотропных эффектов исследуемых веществ и различных патологических воздействий на эндотелий.

3. Сердечно-сосудистые средства, гепариноид - сулодексид, производные ГАМК, флавоноиды и вещества, обладающие антиоксидантными свойствами, в разной степени выраженности проявляют эндотелиопротективную активность, что проявляется в улучшении вазодилатирующей, антитромботической функций эндотелия. По степени улучшения вазодилатирующей функции эндотелия все исследуемые соединения можно расположить следующим образом: Вессел Дуэ Ф (сулодексид) > Диротон ? Симвагексал ? Небилет > РГПУ-189 > Флавицин ? РГПУ-147 > Кверцетин ? Мексидол > Конкор > Гесперидин > Диосмин > Предуктал > Пикамилон > Нифедипин ? Фенибут ? Дибикор, а по степени влияния на антитромботическую функцию эндотелия изучаемые соединения можно расставить в следующем порядке: Вессел Дуэ Ф (сулодексид) ? Симвагексал ? РГПУ-189 > Диротон > Небилет > РГПУ-147? Флавицин > Кверцетин ? Конкор > Нифедипин > Мексидол > Фенибут ? Гесперидин ? Дибикор > Диосмин ? Предуктал > Пикамилон.

4. РГПУ-189 и флавицин выражено улучшают противовоспалительную, антипролиферативную функции эндотелия, уменьшают метаболические нарушения у животных с ЭСД и НПГ (снижают гипергликемию, гиперхолестеринемию, индекс атерогенности), в большей степени эти эффекты выражены у флавицина. Эндотелиопротективное действие отмеченных веществ очевидно обусловлено угнетением экспрессии маркеров апоптоза (TRАIL, каспаза-3, nF-kB), снижением эндотелина-1 и усилением активности е-NOS.

5. Вессел Дуэ Ф по совокупности всех проведенных исследований оказал наиболее выраженное эндотелиопротекторное действие по сравнению со всеми исследуемыми веществами. Полученные результаты позволяют рекомендовать Вессел Дуэ Ф в качестве эталонного препарата сравнения при сопоставлении эндотелиотропных эффектов изучаемых лекарственных препаратов.

6. Сравнительный анализ полученных данных о влиянии известных сердечно-сосудистых средств, флавоноидов, веществ, обладающих антиоксидантной активностью, и производных ГАМК на эндотелиальную дисфункцию в условиях гормональных нарушений различного генеза, свидетельствуют о целесообразности применения Весел Дуэ Ф, диротона, симваГЕКСАЛА, небилета, мексидола, для комплексной терапии сердечно-сосудистых заболеваний, профилактики и лечения сосудистых осложнений, связанных с СД и НПГ. Результаты исследований позволяют рекомендовать проведение дальнейшего изучения соединения РГПУ-189 и флавицина, для создания на их основе новых препаратов с эндотелиопротекторной активностью.

7. Проведенное тестирование вазодилатирующей функции эндотелия различных сосудистых регионов (мозг, печень, почка и кожно мышечная область) позволяет говорить о том, что направленность эндотелиального ответа одинакова во всех областях, но выраженность разная. Результаты исследования дают возможность экстраполировать полученные в ходе эксперимента данные по изменению функции эндотелия в одной сосудистой области и на другие регионы с разным типом эндотелия.

Апробация работы

Материалы работы докладывались и обсуждались на 5-ой научно-практической конференции «Методы исследования регионального кровообращения и микроциркуляции в клинике» (Санкт-Петербург, 2005); на II международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, Казахстан, 2007); на 13 Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва, 2007); Научно-практической конференции «Диагностика и коррекция нарушений регионального кровообращения и микроциркуляции в клинической практики» (Саратов, 2008); на 14 Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва, 2008); на VIII съезде кардиологов южного федерального округа «Совершенствование оказания медицинской помощи больным с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Новые подходы и перспективы» (Ростов-на-Дону, 2009); 56-ой региональной научно-практической конференции Волгоградского государственного медицинского университета «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранении волгоградской области» (Волгоград 2009); Научно практической конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии» (Волгоград, 2010); II Всероссийском научно-практическом семинаре “Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии” (Волгоград, 2010). По материалам диссертации опубликовано 60 печатных работ, в том числе 21 работ в журналах, рекомендуемых ВАК, получен 1 патент на изобретение №2374699 от 27 ноября 2009 года.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 6 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 493 источника, из них 189 отечественных и 304 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 296 страницах машинописного текста, содержит таблиц -27, рисунков -55, схем - 1.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование выполнено на 1090 крысах самках и самцах, которые содержались в условиях вивария с естественным световым режимом, на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТР 50258-92), с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях, а также правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ З 51000.3-96 и 51000.4-96) и Приказу МЗ РФ №267 от 19.06.2003г. «Об утверждении правил лабораторной практики» (GLP). Животные были получены из питомников «Столбовая», «Рапполово». Эксперименты были одобрены комитетом по этической экспертизе доклинических исследований ВолгГМУ (протокол № 54-2007 от 28.04.2007).

Исследование было проведено с помощью комплексного морфо-функционального подхода, используемого для оценки эндотелиальной дисфункции (ЭД) и эндотелиотропного действия (ЭПД) веществ. Комплексный морфо-функциональный подход включал в себя определение вазодилатирующей, антитромботической, противовоспалительной и антипролиферативной функций эндотелия. При изучении эндотелиопротекторного действия на животных с ЭСД дополнительно оценивались нарушения в углеводном и липидном обмене, с целью оценки влияния соединений на развитие ЭД. Кроме этого, у всех групп животных с экспериментально-вызванной недостаточностью половых гормонов определялся уровень половых гормонов в плазме крови.

ЭД на всех этапах исследования моделировалась двумя патологиями стрептозотоцин-индуцированным СД и недостаточностью половых гормонов (НПГ).

Экспериментальный сахарный диабет (ЭСД) вызывали введением стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг внутривенно в хвостовую вену. Через 72 часа производили количественное определение глюкозы в крови ферментативным (глюкозооксидазным методом) с измерением величины оптической плотности надосадочной жидкости в кюветах с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 500 на спектрофотометре (ПЭ-5400В, ЭКРОС) с использованием наборов «Глюкоза ФКД» (Россия). За 18 часов до введения цитотоксина крысам ограничивали доступ к пище при свободном доступе к воде. В дальнейшее исследование отбирали животных с уровнем сахара крови 12-15 ммоль/л и выше, то есть крыс с развившимся СД (Баранов В.Г., 1983).

Недостаточность половых гормонов (НПГ) как модель нарушения функции эндотелия воспроизводилась путем экстирпации матки с придатками у крыс самок. Исследование проводилось на крысах-самках, рандомизированных по массе (180-210 гр.) и возрасту (половозрелые - 3 месяца) (патент на изобретение №2374699). С целью оценки изменения уровня гормонов в исследуемых группах при моделировании недостаточности половых гормонов был использован иммуноферментный анализ (ИФА) с помощью автоматического ридера Elx800 и с использованием наборов: Прогестерон ELISA EIA-1561, Пролактин ELISA EIA-1291, Фолликулостимулирующий гормон ELISA EIA-1288, Эстрадиол ELISA EIA-2693 (DRG Instruments GmbH, Германия).

Контроль эффективности кастрации производился с использованием цитологического метода определения стадии полового цикла у самок. Для анализа разного уровня эндогенных эстрогенов после операции были выбраны три наиболее характерные фазы полового цикла: диэструс, проэструс и эструс. Определение фаз полового цикла (диэструс, проэструс, эструс) у интактных крыс проводили с помощью характерных морфологических признаков по влагалищным мазкам согласно описанию Я. Д. Киршенблата.

Все проведенные нами исследования проходили тремя блокаи в несколько этапов.

В первом блоке, на первом этапе работы, проводили сравнительное изучение вазодилатирующей функции эндотелия сосудов головного мозга, печени, почек и кожно- мышечной области, на фоне модификации синтеза эндогенного оксида азота у интактных животных. На втором этапе работы оценивалась выраженность и продолжительность эндотелиальной дисфункции у животных с экспериментально вызванными - сахарным диабетом, недостаточностью половых гормонов и операционной травмой (операционным стрессом), как патологии сопутствующей хирургической кастрации (для исключения ее влияния на развитие эндотелиальных нарушений). В ходе проведения второго этапа исследований использовались методические приемы, позволяющие оценить вазодилатирующую и антитромботическую функции эндотелия (таблица 1). Дальнейшие эксперименты проводились еще двумя отдельными блоками. Так, во втором и третьем блоке исследований изучалось эндотелиопротективное действие сердечно-сосудистых средств: ингибиторов АПФ, антагонистов кальциевых каналов, статинов, сулодексида, флавоноидов, производных ГАМК у животных с ЭСД и НПГ (3 этап) (таблица 1).

Эндотелиопротекторные свойства изучались среди:

- сердечно-сосудистых средств: ингибитор АПФ - лизиноприл (диротон, «Гедеон Рихтер А.О., Будапешт - Венгрия») - 5мг/кг; b - блокаторы - небивалол (небилет, «Berlin-Chemie», Берлин, Германия)- 2,5мг/кг, и бисопролол (конкор «Nykomed», МеркКГаА, Германия для Никомед) - 5мг/кг; антагонист кальциевых каналов - нифедипин (Balkanpharma^R) - 10мг/кг; гипохолестеринимический препарат -симвастатин ( симваГЕКСАЛ,



Таблица 1 - Дизайн проведения экспериментов

1 блок	1 этап гетерогенность эндотелия #	Вазодилатирующая функция эндотелия	доплеровская флоуметрия при модификации синтеза NO (оценка ЭЗВД при введении ацетилхолина, N-L-аргинина)
	2 этап изучение эндотелиальной дисфункции при ЭСД, НПГ* и ХТ.**	Вазодилатирующая функция эндотелия	-доплеровская флоуметрия при модификации синтеза NO (оценка ЭЗВД при введении ацетилхолина, L-аргинина, N-L-аргинина; ЭНЗВД при введении нитроглицерина; мощности и стабильности NO-синтазной системы при многократном введении АЦХ)
		Антитромботическая функция эндотелия	-скорость образования тромба (артериальный тромбоз) - измерение вязкости крови -оценка агрегации тромбоцитов - тромбиновое время - протромбиновое время -активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) -содержание фибриногена -определение фактора Виллебрандта
2-ой и 3-й блок*	3 этап Изучение эндотелиопротективного действия исследуемых веществ при ЭСД и НПГ	Вазодилатирующая функция эндотелия	-доплеровская флоуметрия при модификации синтеза NO (оценка ЭЗВД при введении ацетилхолина, L-аргинина, N-L-аргинина; ЭНЗВД при введении нитроглицерина; мощности и стабильности NO-синтазной системы при многократном введении АЦХ)
		Антитромботическая функция эндотелия	-скорость образования тромба (артериальный тромбоз) - измерение вязкости крови -оценка агрегации тромбоцитов - тромбиновое время - протромбиновое время -активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) -содержание фибриногена -определение фактора Виллебрандта
		Оценка метаболических эффектов	-уровень глюкозы в крови -липидный спектр (ХСобщ, ХСЛПВП, ХСЛПНП ТГ, индекс атерогенности)
		Оценка гормонального статуса у животных с НПГ	-уровень эстрогенов
		Противоспалительная функция эндотелия	-уровень СРБ
		Антипролиферативная функция эндотелия	-морфометрическая оценка мозговых сосудов с наличием признаков пролиферации, а так же воспаления, тромбообразования
		Структурные изменения эндотелиоцитов	- ультраструктурная оценка эндотелиальных повреждений
		Определение уровня е-NOS и эндотелина-1, TRAIL, NF-kB, каспаза-3	- иммуногистохимическая оценка по степени экспрессии и уровню оптической плотности антител

Примечание: #-исследование проведено на интактных животных; *- исследование проведено через 4 недели после ЭСД и НПГ; **-исследование проведено в течении 4-х дней после оперативного вмешательства HEXAL, Германия) - 10 мг/кг. Дозы препаратов выбраны на основе литературного анализа многочисленных экспериментальных исследований, в которых эти вещества проявили высокую эндотелиопротекторную, антигипертензивную, противоишемическую и гипохолестеринемическую активность.

- производных ГАМК: РГПУ-147 (50мг/кг), РГПУ-189 (15мг/кг), фенибут - (25мг/кг), пикамилон (ОАО «Фармстандарт-УфаВИТА») - 100мг/кг. Использовались наиболее эффективные дозы данных веществ, выявленные при изучении нейропротекторной, антистрессорной, антиишемической и кардиотропной активности данных соединений. Вещества синтезированы на кафедре органической химии Российского государственного педагогического университета им. А.Н. Герцена (Санкт-Петербург, Россия) .

- веществ, обладающих антиоксидантными свойствами: мексидол (“НПК Фармасофт”, Россия) в дозе 100 мг/кг; предуктал МВ (триметазидин, “Servier”, Франция) в дозе 6 мг/кг; дибикор (таурин “ПИК-ФАРМА ПРО”) в дозе 168 мг/кг.

- индивидуальных флавоноидов: кверцетин (фирмы Merck), а также флавицин, диосмин, полученные из надземной части растения рода Vicia, сем. Fabaceae) и гесперидин, полученный из кожуры цитрусовых, выделенные на кафедре органической химии Пятигорской фармацевтической академии под руководством доктора фармацевтических наук, профессора Э.Т. Оганесяна, за что выражаем ему искреннюю благодарность. Все флавоноиды вводились в дозе - 100мг/кг, способ введения - per os.

Так же был исследован Сулодексид (Весел Дуэ Ф)- 30 ЕВЛ (единицы высвобождения липопротеинлипазы) (Аlfa Wassermann, Италия) (Комелягина Е.Ю., 2005). Способ введения всех перечисленных веществ - per os, в течении месяца, в первую половину дня. В качестве растворителя использовали 0,9% раствор хлорида натрия. Контрольным группам животных: интактным, ложнооперированным (ЛО), а также животным с НПГ и ЭСД вводился физиологический раствор в эквивалентном объеме.

Оценка вазодилатирующей функции эндотелия осуществлялась путем регистрации изменений скорости кровотока (СК) при модификации синтеза эндогенного оксида азота введением ацетилхолина (АЦХ) (0,01 мг/кг), L-аргинина (300 мг/кг), нитро-L-аргинина («Acros organics», США) (10 мг/кг). Для оценки эндотелионезависимой вазодилатации (ЭНЗВД) в/в вводили нитроглицерин (НТГ) (МТХ, Москва) (0,007 мг/кг). Для оценки мощности и стабильности NO-синтазной системы был использован метод многократного (10-кратного) введения АЦХ в фиксированной дозе (0,01 мг/кг). СК регистрировали в теменной области мозга крыс, в проекции среднемозговой артерии с помощью ультразвукового допплерографа, датчика УЗОП-010-01 (рабочая частота 25МГц, диаметром 0,3 см) и компьютерной программы ММ-Д-КMinimax Doppler v.1.9. (Санкт-Петербург, Россия), которая дополнительно позволяла анализировать периферическое сопротивление (индекс Пурселло) и эластичность мозговых сосудов (индекс Гослинга).

Оценка антитромботической функции исследуемых соединений осуществлялась с помощью комплексного подхода для оценки как сосудисто-тромбоцитарного, так и плазменного (коагуляционного) гемостаза. Артериальный тромбоз вызывался по методике Angelillo-Scherrer A., 2004. Показатели вязкости крови изучались на анализаторе крови реологическом АКР-2 (Россия), показатели агрегации тромбоцитов на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов фирмы "Биола" (г. Москва) по методу Born G. (1962) в модификации Габбасова З.А. (1989). Тромбиновое время (ТВ), протромбиновое время (ПВ), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) и содержание фибриногена определяли хронометрически на анализаторе показателей гемостаза АПГ2-01 “МИНИЛАБ 701” с использованием наборов НПО «Ренам» (Россия). Определение фактора Виллебранда проводилось на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов "Биола" (наборы “Ренам” для определения фактора Вллебранда).

Оценка липидного профиля (ХС_общ, ХС_ЛПВП, ХС_ЛПНП, ТГ) осуществлялась с использованием ферментативных колориметрических тестов “Ольвекс Диагностикум”), значение концентрации ХС_ЛПНП вычисляли по формуле Фридвальда (1972), индекс атерогенности (ИАТ) по А.Н. Климову (1999). Уровень глюкозы в плазме крови крыс определялся глюкозооксидантым способом с использованием набора «Глюкоза-ФКД» (Россия).

Противовоспалительная функция эндотелия оценивалась по уровню С-реактивного белка (СРБ) с помощью набора реагентов для качественного и полуколичественного определения СРБ в сыворотке крови методом латекс-агглютинации (”Ольвекс Диагностикум”).

Антипролиферативная функция эндотелия оценивалась с помощью комплексного морфологического подхода, основанного на морфометрической оценке параметров эндотелиальных клеток (размеры ядер (ус.ед.) и ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО)), степени сосудистых и эндотелиальных нарушений на базе компьютерной системы «ВидеоТестМорфо-4» (Россия), по соотношению интимы/медии эндотелиальной выстилки, признаков пролиферации сосудистой стенки и воспалительной инфильтрации в микроциркуляторном русле, а также явлений периваскулярного и перицеллюлярного отёка.

Для определения степени повреждения эндотелия проводилась гистологическая оценка десквамации (циркулирующие эндотелиоциты). Определение количества десквамированных эндотелиоцитов осуществлялось с помощью метода, основанного на изоляции клеток эндотелия вместе с тромбоцитами с последующим осаждением тромбоцитов с помощью АДФ (Петрищев Н.Н., 2001; Hladovec J., 1978).

Для электронномикроскопического исследования эндотелия забор фрагментов головного мозга производили с областей, где по данным световой микроскопии наблюдались наибольшие патологические изменения в микроциркуляторном русле, наиболее сильно затрагивающие эндотелиальную выстилку. Фрагмент объемом около 1 мм³ фиксировали в 1 % растворе глютарового альдегида 4 часа, и в течение 2 часов в 1 % растворе четырехокиси осмия на веррналацетатном буфере при температуре + 4° С. Затем материал подвергали дегидратации в серии спиртов возрастающей концентрации, проводили в окиси пропилена и заливали в эпоксидную смолу ERL-4206 (A.Spurr, 1968).

Определение уровня еNOS и эндотелина-1, маркеров апоптоза: каспазы-3, рецепторов TRАIL, NF-kB. Для гистологического исследования под эфирным наркозом производили забор головного мозга крыс. Материал фиксировали в течение 48 часов в 10% растворе нейтрального забуференного формалина (рН 7,4). После фиксации материал проводили по общепринятой гистологической методике через батарею спиртов возрастающей концентрации, хлороформ и заливали в парафин.

На роторном микротоме изготавливали серийные срезы толщиной 5-6 мкм. В дальнейшем производили окрашивание гематоксилином и эозином по общепринятой гистологической методике (депарафинизация в ксилоле, проводка по спиртам убывающей концентрации до воды, окраска гематоксилином Бёмера, дифференцировка солянокислым спиртом, окраска эозином, проводка по спиртам возрастающей концентрации до абсолютного этанола, просветление в ксилоле, заключение в канадский бальзам).

Для выявления степени функционирования эндотелия мозга в условиях стрептозотоцинового сахарного диабета, экспериментально вызванной недостаточности половых гормонов и эндотелиопротективного действия изучаемых веществ при данных патологиях оценивали оптическую плотность и использовали моноклональные антитела к эндотелину-1 (Endothelin-1 Receptor (ETA), Clone RJT 24, NCL-L-ETA P (HIER)) и моноклональные антитела к эндотелиальной NOS (Nitric Oxid Synthase, Clone RN5, NCL-NOS-3 F P (HIER)), к каспазе 3 (клон JHM62, Novocastra), к рецептору TRAIL - апоптоз-индуцирующий лиганд (клон 27B12, Novocastra), к транскрипционному фактору NF-kB (NF-kappa B p65, BioGenex). Визуализацию проводили с помощью непрямого иммунопероксидазного метода с высокотемпературной и ферментной демаскировкой антигенов. Индекс апопотоза рассчитывали как отношение эндотелиальных клеток с имуногистохимическими признаками апопотоза к нормальным эндотелиоцитам (%). Для достоверности полученных результатов применяли позитивные контроли антигенов (лимфатические узлы, печень при недифференцированном лейкозе), негативные контроли антигенов (предстательная железа, головной мозг) и негативные контроли антител (обработка срезов без нанесения первичных антител).

Для анализа морфологических показателей производили микрофотосъемку цифровой камерой Canon (Japan, 5.0 мегапикселей) на базе микроскопа Axiostar plus (Карл Цейс, Германия) с использованием объектива х40, х100 и окуляра х10. Оценивали процентное отношение иммунопозитивных клеток к общему количеству эндотелиальных клеток мозга.

Статистическая обработка результатов исследования: нормальность распределения выполнялась с использованием W критерия Шапиро-Уилка; анализ статистической значимости различий проводился с применением t-критерия Стьюдента; однофакторного дисперсионного анализа, критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони; однофакторного дисперсионного анализа Крускала-Уоллиса, критерия Дана для множественных сравнений; дисперсионного анализа повторных измерений, критерия Тьюки; критерия Фридмана для анализа повторных измерений, критерия Ньюмена--Кейлса

Обработка данных производилась с помощью пакетов программ Microsoft Office Excel, BioStat 2008 5.2.5.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Оценка вазодилатирующей функции эндотелия различных сосудистых регионов.

Проведённый этап исследований позволяет дать суммарную оценку функционирования эндотелия различных сосудистых регионов, как в норме, так и при патологии различного генеза.

Существенно то, что один и тот же датчик, размещенный над тканью органа, регистрирует кровоток в определенной, сопоставимой по массе ткани, а не во всем органе, поэтому возможно корректное сравнение скоростей кровотока или изменений (прироста/падения) кровотока в разных сосудистых регионах.



Примечание: АЦХ - прирост кровотока в ответ на введение ацетилхолина; н-Л-арг- падение кровотока в ответ на введение нитро-Л-аргинина.

Рисунок 1. Изменение мозгового, почечного, печеночного кровотока и кровотока в кожно-мышечной области при активации (А) (ацетилхолином) и подавлении (Б) (нLа) синтеза оксида азота.

При введении АЦХ интактным животным скорость мозгового кровотока повышалась на 25%, в почечной ткани на 20%, в сосудах печеночной области (36%), в кожно-мышечной области кровоток увеличился на 19 % от исходного уровня. Введение нитро-L-аргинина приводило к снижению скорости кровотока в проекции среднемозговой артерии на 24,6%, в почке на 18,2%, в печени на 32,2%, в кожно - мышечной области на 16,5% (рисунок 1 А,Б).

Таким образом, введение АЦХ вызывало достоверное по отношению к исходным данным повышение, а нитро-L-аргинина - снижение скорости кровотока во всех изучаемых сосудистых регионах, однако наиболее сильный прирост и падение наблюдались в печеночной ткани, органе с наименьшей исходной скоростью кровотока. Такая сосудистая реакция, возможно, связана с анатомическим строением микроциркуляторного русла печени и нахождением там клеток Купфера, принимающих дополнительное участие в синтезе NO и активирующихся в результате воздействия различных стимулов (Маянский Д.Н., Висе Э., Декер К., 1993). Следует отметить, что регистрация кровотока в печени требует вскрытия брюшной полости и осложняется помехами связанными с близким расположением аорты, задней полой вены и диафрагмы легких. Исходя из этого, нами были выбраны в качестве объекта изучения эндотелиальных функций сосуды мозга т.к. в течение опыта, легче обеспечить регистрацию мозгового кровотока, а полученные в ходе работы результаты свидетельствуют о том, что направленность изменений сосудистого тонуса гетерогенных эндотелиальных областей одинакова.

Оценка влияния ЭСД, НПГ и операционной травмы на эндотелиальную дисфункцию.

У животных с ЭСД и НПГ наблюдается снижение стабильности и мощности эндотелиальной NO-синтазной системы, ослабление эндотелиозависимой вазодилатации на фоне ЭСД и НПГ в 1,7 раза и 2,3 раза, соответственно (Рисунок 2).

Так же у животных с ЭСД и НПГ наблюдаются нарушения как со стороны коагуляционного (плазменного) гемостаза, так и со стороны сосудисто-тромбоцитарного (Рисунок 3,4).



Примечание: АЦХ - введение ацетилхолина; НТГ-введение нитроглицерина; nLarg-введение нитроLаргинина; НПГ-оперированные животные с удаленными маткой и придатками, ЛО - ложнооперированные крысы; ЭСД - животные с стрептозотацированным сахарным диабетом, Интак - интактные крысы, * - (P?0,05); ** - (P?0,01); достоверно по отношению к группам интактных и ЛО животных (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Рисунок 2. Изменения церебрального кровотока животных с НПГ (А) и с ЭСД (Б) при модификации выделения и синтеза эндогенного оксида азота.



Примечание: НПГ-оперированные животные с удаленными маткой и придатками, ЛО - ложнооперированные крысы; ЭСД - животные с стрептозотацированным сахарным диабетом, Интак - интактные крысы, * - (P?0,05); ** - (P?0,01); достоверно по отношению к группам интактных и ЛО животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений, непараметрический U- критерий Манна-Уитни).

Рисунок 3. Изменения индексов агрегации / дезагрегации тромбоцитов и максимального наклона у животных с недостаточностью половых гормонов и с сахарным диабетом.

Антикоагулянтный и антитромбогенный потенциал сосудистого эндотелия смещается в сторону повышения показателей агрегации тромбоцитов (повышение индекса агрегации тромбоцитов в 1,75 раза при НПГ и 2,25 раза при ЭСД, скорости агрегации в 1,6 раза при НПГ и 1,79 раза при ЭСД, снижение индекса дезагрегации тромбоцитов в 2,86 раза при НПГ и 3,14 раза при ЭСД). Увеличения скорости образования тромба на модели артериального тромбоза в 1,7 раза при НПГ и 2,6 раза при ЭСД (Рисунок 3,4). Под влиянием изучаемых патологий происходит достоверное (Р<0,05) укорочение тромбинового и протромбинового, а также активированного частичного тромбопластинового времени, повышение уровня фибриногена и фактора Виллебранда в крови (Рисунок 9), увеличение вязкости крови на всех скоростях сдвига (Таблица7,8,9).



Примечание: ЭСД - животные с стрептозотацированным сахарным диабетом, Интак - интактные крысы, НПГ-оперированные животные с удаленными маткой и придатками * - (P?0,05); ** - (P?0,01); достоверно по отношению к группам интактных животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений, непараметрический U- критерий Манна-Уитни)

Рисунок 4. Скорость образования тромба в сонных артериях у животных с НПГ и ЭСД, при аппликации хлорида железа на адвентицию сосуда.

При оценке вазодилатирующей функции эндотелия при хирургической травме, у интактных животных, отмечено, что в ответ на введение анализаторов СК у животных в первые и четвертые сутки после операции не достоверно отличались друг от друга. Введение же модификаторов синтеза эндогенного оксида азота животным на второй и третий день после операции вызывало повышение скорости кровотока значительно ниже по сравнению со скоростью кровотока животных, тестируемых в первый и четвертый день. Введение L-аргинина животным на вторые и третьи сутки после операции приводило к достоверно значимому усилению кровотока в брюшине в отличии от животных прооперированных в первые сутки. Полученные данные свидетельствуют о физиологически обратимом процессе нарушения эндотелиальной функции при хирургическом вмешательстве (Рисунок 5).



Примечание: 1,2,3,4 - сутки-после проведенного оперативного вмешательства; АЦХ - введение ацетилхолина; Ларг-введение Lаргинина; НТГ-введение нитроглицерина; нЛарг-введение нитроLаргинина;

Рисунок 5. Изменения кровотока брюшины у животных в различные сроки после оперативного вмешательства при модификации синтеза эндогенного оксида азота.

Стоит отметить, что ЭСД (Таблица 2) и НПГ сопровождаются существенным повышением уровня ТГ, ХС_ЛПНП, ХС_общ и снижением ХС_ЛПВП, что приводит к увеличению индекса атерогенности (Таблица 2).

Таблица 2. - Влияние ЭСД на показатели липидного спектра крови у животных (ммоль/л)

Группы животных	ХСобщ	ХС ЛПВП	ХС ЛПНП	ТГ	ИАТ
Интакт	2,58±0,07	0,85±0,05	1,42±0,09	0,68±0,03	2,09±0,17
ЭСД	3,8±0,15**	0,61±0,03**	2,83±0,15**	0,8±0,03*	5,5±0,46**

Примечание - * - (P?0,05); ** - (P?0,01); достоверно по отношению к группам интактных животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений, непараметрический U- критерий Манна-Уитни).

Существенно то, что активация атерогенных процессов, на фоне ЭСД и НПГ может лежать в основе нарушения эндотелиальной функции и увеличения вязкости крови (Таблица 3) и, соответственно, скорости напряжения сдвига, так как деформабельность эритроцитов прямо коррелирует с гиперглицерхолестеринемией и повышением содержания липопротеидов низкой плотности (Ефимов А.С., 1989; Балашова Т.С., 1996; Patel R. P., Hogg N., Kim-Shapiro D. B., 2011).

Нарушение функции эндотелия при ЭСД и НПГ, кроме всех выше перечисленных патофизиологических сдвигов, сопровождается выраженными патологическими изменениями его морфологического состояния (Загидуллин Ш.З., и д.р., 2010; Ohtani K., Dimmeler S., 2011). При световой и электронной микроскопии, у животных с ЭСД и НПГ, выявлено усиление тромбообразования и лейкоцитарной инфильтрации, увеличение соотношения интима/медиа и количества циркулирующих эндотелиоцитов. Кроме этого, при НПГ в 1,5 раза и при ЭСД в 2,2 раза наблюдалось увеличение С-реактивного белка и, соответственно, усилении провоспалительного статуса эндотелия.

Таблица 3. Влияние ЭСД и НПГ на вязкость крови крыс

Группы животных	Скорость сдвига, сПз
	300с-1	100с-1	50с-1	10с-1
Интакт	3,64±0,35	4,58±0,31	6,78±0,41	8,41±0,34
ЭСД	4,95±0,18**	6,72±0,34**	9,8±0,67***	15,12±0,7***
ЛО	3,55±0,14	4,7±0,32	5,91±0,36	7,69±0,45
НПГ	4,15±0,19*	6,5±0,23**	7,12±0,34**	12,01±0,78**

Примечание НПГ-оперированные животные с удаленными маткой и придатками, ЛО - ложнооперированные крысы; ЭСД - животные с стрептозотацированным сахарным диабетом, Интак - интактные крысы, * - (P?0,05); ** - (P?0,01); *** - (P?0,001); достоверно по отношению к группам интактных и ЛО животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений, непараметрический U- критерий Манна-Уитни).



Проведенный комплексный морфо-функциональный анализ развития и выраженности эндотелиальной дисфункции при ЭСД и НПГ позволяет говорить о высокой валидности предложенных нами моделей формирования нарушений функции эндотелия и адекватности подходов к выявлению эндотелиопротекторной активности фармакологических веществ.

Оценка влияния сердечно-сосудистых средств, производных ГАМК, веществ, обладающих антиоксидантной активностью и флавоноидов на вазодилатирующую функцию эндотелия у животных с ЭСД и НПГ.

У животных с ЭСД и НПГ, диротон, симвагексал, небилет достоверно улучшали вазодилатирующую функцию эндотелия, повышали стабильность системы синтеза NO. Конкор и нифедипин также положительно влияли на вазодилатирующую функцию эндотелия, хотя и в меньшей степени (Таблица 4).

Полученные результаты о положительном влиянии сердечно-сосудистых средств на вазодилатирующую функцию эндотелия подтверждают ранее выполненные исследования (Стрюк Р.И., Воронков Л.Г., 2002, 2003, Jorge PA., 2010; Kalipada Pahan, Weis M, Yamasaki, 2010) и впервые позволяют провести сравнительное ранжирование по данному виду активности как внутри группы сердечно-сосудистых средств, так и между другими классами фармакологических веществ, изучаемых в данном исследовании.

Таблица 4. Изменения кровотока у животных с ЭСД при модификации синтеза NO на фоне введения сердечно-сосудистых средств

Группы животных	Изменения кровотока при введении анализаторов от исходного уровня, в %
	Прирост кровотока	Падение кровотока
	Ацетилхолин	L-аргинин	Нитро-глицерин	N-L-аргинин
Интакт	44,05±2,35	11,24±1,34	50,25±3,25	37,84±2,23
ЭСД	12,08±1,41*	53,19±4,34**	48,52±2,2	17,34±1,9*
ЭСД +Вессел Дуэ Ф	28,54±2,54??	13,15±1,49??	47,7±3,27	32,03±2,18??
ЭСД +Диротон	24,13±3,19??	17,32±1,85??	49,52±2,46	31,5±2,29??
ЭСД+Симвагексал	23,45±1,51??	21,86±2,35??	46,58±4,09	30,6±2,52??
ЭСД +Небилет	22,97±3,11??	23,91±2,21??	49,62±3,77	29,13±2,5??
ЭСД+Конкор	17,71±2,43?	36,54±3,93?	50,19±3,51	24,88±1,91?
ЭСД +Нифедипин	14,15±2,03	40,81±2,5?	56,05±4,16	19,89±1,52
ЛО	32,85±4,79	9,74±1,21	47,7±1,37	45,79±6,75
НПГ	13,81±2,16**	58,41±6,47**	51,67±1,87	15,03±2,91**
НПГ+Вессел Дуэф	36,85 ±3,78??	15,23±1,84??	52,61±1,75	27,5±3,09??
НПГ +Диротон	30,28±2,37??	17,29±2,4??	51,55±2,07	25,7±2,62??
НПГ +Симвагексал	27,35±2,00??	21,47±1,75??	48,07±1,68	25,53±3,36??
НПГ +Небилет	26,37±2,09??	20,26±2,1??	47,91±2,35	25,0±2,57??
НПГ +Конкор	19,45±1,73?	33,37±2,65?	51,05±1,64	21,02±2,92?
НПГ+Нифедипин	16,46±1,29?	44,53±2,08	55,58±1,33	17,01±2,05

Примечание НПГ-оперированные животные с удаленными маткой и придатками, ЛО - ложнооперированные крысы; ЭСД - группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; интакт - интактная группа животных; * - (P?0,05); **-(P?0,01) достоверно по отношению к группе интактных и ЛО животных; ? - (P?0,05); ?? (P?0,01)- достоверно по отношению к группе животных с ЭСД и НПГ (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений, непараметрический U- критерий Манна-Уитни)

Исследуемые производные ГАМК - соединения РГПУ-189 и РГПУ-147, достоверно улучшают ЭЗВД, фенибут и пикамилон в меньшей степени улучшают вазодилатирующую функцию эндотелия (Таблица 5) у животных с НПГ и ЭСД.

Таблица 5. Изменения кровотока при модификации синтеза NO у животных с ЭСД, получавших производные ГАМК

Группы животных	Изменения кровотока при введении анализаторов от исходного уровня, в %
	Ацетилхолин	L-аргинин	Нитроглицерин	N-L-аргинин
Интакт	44,05±2,35	11,24±1,34	50,25±3,25	-37,84±2,23
ЭСД	10,23±0,51*	50,2±4,52**	50,91±2,15	-14,05±1,34*
ЭСД +РГПУ-189	17,61±0,73??	25,53±2,28??	53,22±4,25	-22,86±2,19??
ЭСД +РГПУ-147	16,23±0,75?	27,38±2,09?	47,48±2,74	-20,59±1,79??
ЭСД +Пикамилон	11,83±0,89	40,17±3,48	52,37±5,62	-16,6±1,98
ЭСД +Фенибут	11,77±0,94	41,46±3,21	49,45±3,43	-15,45±1,84
ЛО	36,24±1,94	8,81±0,94	46,73±3,01	-43,88±4,92
НПГ	12,41±2,1*	63,54±6,26**	43,02±3,46	-13,55±2,93*
НПГ +РГПУ-189	22,28±3,04??	27,45±2,58??	46,38±2,59	-20,69±2,76??
НПГ +РГПУ-147	20,73±2,11?	29,7±2,71?	43,71±2,71	-19,47±2,52?
НПГ +Пикамилон	14,82±1,71	50,42±5,18	49,34±2,5	-15,89±1,86
НПГ +Фенибут	14,21±2,07	50,07±5,37	57,33±4,43	-14,76±1,33

Примечание - обозначения как в таблице 4.

Таблица 6. - Изменения прироста кровотока у животных с ЭСД на фоне введения веществ с анитоксидантной активностью

Группы животных	Изменения кровотока при введении анализаторов от исходного уровня, в %
	Ацетилхолин	L-аргинин	Нитроглицерин	N-L-аргинин
Интакт	39,41±2,24	7,48±1,09	43,95±2,77	-35,66±2,11
ЭСД	11,04±1,58*	45,56±5,87**	48,61±3,27	-15,07±2,17**
ЭСД +Флавицин	18,48±1,93??	21,89±2,84??	47,55±3,64	-23,4±2,3??
ЭСД +Диосмин	14,14±1,61	32,92±4,03	49,94±4,00	-18,74±1,76
ЭСД+Кверцетин	17,2±2,37?	25,25±3,36?	50,47±3,03	-21,52±2,05?
ЭСД+Гесперидин	15,03±1,95	34,34±3,06?	52,48±1,68	-20,25±1,74?
ЭСД +Мексидол	15,74±1,48	29,71±3,51??	54,85±2,57	-21,51±1,92?
ЭСД+Предуктал	13,65±1,3	36,21±3,62	49,92±3,38	-18,63±1,38
ЭСД +Дибикор	12,36±1,3	38,75±3,54	50,17±3,37	-16,35±1,69
ЛО	41,79±5,38	8,69±1,41	48,51±0,98	-38,09±4,51
НПГ	14,57±2,03*	50,22±6,94**	50,76±1,93	-13,65±2,27*
НПГ +Флавицин	25,02±2,46??	20,88±2,48??	48,94±1,3	-20,0±2,09??
НПГ +Диосмин	19,0±1,16?	32,31±3,69?	47,54±2,33	-16,3±1,71
НПГ +Кверцетин	23,92±1,43??	24,23±1,37??	50,99±2,21	-19,5±0,82?
НПГ +Гесперидин	19,51±1,13?	35,87±2,33?	45,69±3,3	-18,67±1,42??
НПГ +Мексидол	20,59±1,4?	30,69±3,21??	53,11±1,58	-19,14±1,73??
НПГ +Предуктал	18,07±1,8?	38,45±4,07?	48,3±1,3	-16,84±1,45
НПГ +Дибикор	16,5±1,65	38,76±4,59?	47,54±2,33	-14,72±1,5

Примечание - обозначения как в таблице 4.

...