Конденсированные бензимидазолы – новый класс каппа-опиоидных агонистов

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

Актуальность исследования. Создание новых высокоэффективных опиоидных анальгетиков, лишенных серьезных побочных эффектов, характерных для типичных опиатов, остается одной из наиболее приоритетных и важных проблем современной фармакологии и медицины [Kivell B., 2010; Pasternak G.W., 2011].

Основными недостатками существующих морфиноподобных соединений являются респираторная депрессия, высокий наркогенный потенциал [Тюренков И.Н., Петров В.И., Звартау Э.Э., Игнатов Ю.Д.]. Для преодоления вышеуказанных проблем предложено несколько подходов, одним из которых является разработка опиоидных анальгетиков с более безопасным «рецепторным профилем», что позволит в значительной мере повысить эффективность и безопасность проводимой терапии [Игнатов Ю.Д., 2006; Воронина Т.А., 2010; Звартау Э.Э., 2011; Vanderah T., 2010; Lemos J., 2011].

С этой точки зрения каппа-селективные агонисты представляют перспективную группу веществ для создания новых конкурентно способных отечественных препаратов с оригинальным механизмом действия без риска развития респираторной депрессии и наркотической зависимости [Zvartau E., 2006; Спасов А.А., 2011]. Вместе с тем интерес к каппа-рецепторным лигандам выходит за рамки клинической проблемы боли [Ikeda Y., 2001; Harukuni I., 2006]. Каппа-селективные агонисты в течение ряда лет привлекают пристальное внимание фармакологов в качестве потенциальных церебропротекторных средств при ишемических, реперфузионных и травматических повреждениях мозга [Chen C.H., 2005; Петров В.И., 2007; Charron C., 2008]. Есть основания полагать, что стимуляция каппа-рецепторов может быть использована в недалеком будущем в качестве нового подхода к лечению эпилепсии [Loacker S., 2007; Pasternak G.W., 2011]. В настоящее время убедительно доказано, что каппа-опиоидная рецепторная система интегрирует эмоциональные компоненты беспокойства, тревоги, стресса и представляет интерес с точки зрения развития новой стратегии создания анксиолитиков нового типа [Серединин С.Б., 2011; Schwarzer C., 2011; Lemos J., 2011]. Изучение модуляции функциональной активности каппа-системы особенно важно, поскольку наряду с решением фундаментальных проблем способствует направленному синтезу препаратов, которые в перспективе смогут найти свое применение в анестезиологической и хирургической практике, травматологии, онкологии, неврологии.

Известно, что большинство селективных каппа-опиоидных лигандов являются производными циклических азотсодержащих гетеросистем [Rusovici D.E. et al., 2004; Metcalf M.D., 2005 Prisinzano T.E., 2008; Carlezon W.J. et al., 2009] к которым относятся конденсированные бензимидазолы [Alamgir M., 2007]. Накоплен фактический материал, свидетельствующий о вовлечении каппа-опиоидных механизмов в реализацию нейротропных, периферических эффектов производных бензимидазола [Yamada Y., 2007; Yaeko T.O., 2011; Thomson Reuters Integrity, 2011]. В настоящее время идентифицированы ключевые фармакофорные элементы, контролирующие процесс лиганд-рецепторного взаимодействия с селективными каппа-агонистами, которые во многом схожи с таковыми конденсированных бензимидазолов [Pogozheva I.D. et al., 2008; Kane B.E., 2008]. Наряду с данными литературы, результаты предварительных исследований также свидетельствуют о каппа-опиоидной агонистической активности производных полициклических систем на основе бензимидазола [Гречко О.Ю., 2007]. Представленные факты послужили предпосылкой к поиску новых веществ с каппа-рецепторным профилем фармакологической активности среди данного класса химических соединений.

Диссертационная работа выполнена в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения» (№ государственной регистрации 01200116045). Тема утверждена на заседании Ученого Совета ВолгГМУ (протокол № 7 от 10 марта 2010 г.) и включена в план НИР.

Целью исследования явился направленный поиск, изучение эффективности и механизма действия конденсированных безимидазолов, представителей нового класса каппа-опиоидных агонистов.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Провести многоэтапный направленный поиск каппа-агонистов среди производных конденсированных бензимидазольных систем.

2. Оценить влияние типа гетероциклической системы, провести подструктурный анализ влияния заместителей и частотный анализ влияния физико-химических параметров на уровень каппа-агонистической активности конденсированных бензимидазолов.

3. Разработать рекомендации по оптимизации направленного поиска и синтеза каппа-рецепторных агонистов среди производных бензимидазола.

4. Изучить спектр анальгетической активности, эффективности, продолжительности действия отобранного соединения.

5. Оценить нейропротекторную активность перспективного вещества при остром и хроническом ишемическом повреждении мозга.

6. Исследовать противоэпилептическое действие соединения-лидера при моделировании первично-генерализованных судорожных реакций, включая методику киндлинга.

7. Оценить противотревожные свойства наиболее активного вещества на основе базисных конфликтных и неконфликтных моделей анксиогенеза.

8. Изучить механизм действия наиболее активного производного конденсированных бензимидазольных систем:

§ in silico провести 2D-, 3D-анализ по сходству с референсными препаратами-эталонами и докинг в сайт связывания модели каппа-рецептора и каталитический домен p38 MAP-киназы, специфически ответственной за развитие каппа-опосредованных аверсивных реакций;

§ in vitro оценить влияние на подтипы опиоидных рецепторов, ионные токи;

§ in vivo установить каппа-рецепторные механизмы реализации антиноцицептивного, противосудорожного, анксиолитического действия и нейрохимический спектр активности.

9. Провести всестороннее изучение нейротоксикологического профиля, специфических побочных эффектов вещества-лидера (риск развития респираторной депрессии, наркогенного потенциала, аверсивных реакций) с целью обоснования перспективы создания на его основе новых лекарственных препаратов.

Научная новизна исследования. Впервые доказано, что конденсированные бензимидазолы являются источником веществ с высокой каппа-опиоидной агонистической активностью и благоприятным профилем побочных эффектов. Впервые осуществлен целенаправленный поиск потенциальных лекарственных средств со свойствами селективных каппа-агонистов среди производных конденсированных бензимидазолов с учетом их влияния на р38MAPK, специфически ответственной за развитие каппа-опосредованной седации и дисфории.

Проведен анализ зависимости между структурой, физико-химическими свойствами и функциональной активностью, в том числе с использованием компьютерных технологий, выявлены дескрипторы, определяющие значимые признаки высокого уровня каппа-рецепторной эффективности для класса новых замещенных конденсированных бензимидазолов.

Впервые изучены анальгетические, нейропротекторные, противосудорожные, анксиолитические свойства наиболее перспективного аналога конденсированных бензимидазольных систем вещества под лабораторным шифром РУ-1203 с виртуально и экспериментально установленным каппа-рецепторным профилем фармакологической активности.

Проведена комплексная доклиническая оценка фармакодинамики соединения РУ-1203, сочетающего в себе фармакологические свойства каппа-агониста и эффективного анальгетика, обладающего рядом преимуществ по сравнению с буторфанолом, не вызывающего респираторной депрессии, наркотической зависимости, аверсивных расстройств с перспективой создания на его основе каппа-селективного опиоидного анальгетика без аддиктивного потенциала.

Научно-практическая значимость. Разработанная система направленного поиска и компьютерного прогноза высокоактивных соединений in silico и in vitro может явиться основой направленного конструирования in silico структурно новых каппа-опиоидных лигандов с потенциально высоким уровнем активности, сочетающих каппа-рецепторную селективность действия и свойства избирательных ингибиторов p38 MAPK.

Результаты комплексной оценки значимых структурных и физико-химических признаков высокого уровня каппа-агонистической эффективности конденсированных бензимидазолов позволяют расширить представления о молекулярных фрагментах, ответственных за лиганд-рецепторное взаимодействие, и разработать рекомендации по направленному синтезу новых субстанций с заданным видом фармакологической активности.

По результатам проведенных исследований получены два патента: Патент РФ № 2 413 512 (2011), Патент РФ № 2 412 187 (2011).

Полученные данные об анальгетической эффективности, отсутствии специфических побочных эффектов, типичных для опиоидных соединений и известных каппа-агонистов, N9-замещенного имидазо[1,2-a]бензимидазола явились основанием для планирования его дальнейших расширенных доклинических химико-фармацевтичес-ких, фармакокинетических и токсикологических исследований.

Реализация результатов исследования. Данные о каппа-агонистической активности соединений и результаты анализа влияния типа гетероциклической системы, заместителей и физико-химических параметров на уровень каппа-селективности конденсированных бензимидазолов используется при направленном синтезе новых веществ в НИИ Физической и Органической Химии Южного Федерального Университета (г. Ростов). В работе НИИ фармакологии ВолгГМУ, Волгоградского научного медицинского центра, кафедры фармакологии ВолгГМУ применяется комплексный подход для конструирования структур с высокой новизной и потенциально высоким уровнем каппа-агонистической активности, который включает методы 2D-, 3D-молекулярного моделирования, докинг в сайты связывания 3D-моделей биомишеней и экспериментальную проверку перспективных по данным прогноза веществ. Результаты работы включены в лекционные курсы на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ, кафедре фармацевтической химии ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского, Ростовского медицинских университетов.

Положения, выносимые на защиту.

1. N9-замещенные 2-галогенофенилимидазо[1,2-a]бензимидазолы являются перспективным классом химических соединений для поиска структурно новых каппа-опиоидных агонистов.

2. Соединение под лабораторным шифром РУ-1203 по каппа-опиоидной рецепторной селективности в экспериментах in vitro превосходит эталонный препарат буторфанол в 194 раза. in silico вещество РУ-1203 проявляет свойства каппа-агониста и ингибитора р38 MAPK, сопоставимые с таковыми высокоизбирательных референсных препаратов U50,488 и SB203580, соответственно.

3. Новое производное конденсированных бензимидазолов РУ-1203 с установленным каппа-рецепторным профилем фармакологической активности проявляет выраженное анальгетическое, нейропротекторное, противосудорожное, анксиолитическое действие, не вызывает развитие респираторной депрессии, аддикции, аверсивных реакций.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на III съезде Фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007) на VII Всероссийской научной конференции «Химия и медицина, ОРХИМЕД-2009» (Уфа, 2009), на 56-й региональной научно-практической конференции «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранения Волгоградской области» (Волгоград, 2010), на II Международном Конгресс-Партнеринге и Выставке по биотехнологии и биоэнергетике «ЕвразияБио-2010» (Москва, 2010) на XIV, XVII, XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007, 2010, 2011), на 5th International Conference “Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs” (Moscow, 2010), на III Всероссийском научно-практическом семинаре «Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии» (Волгоград, 2011) на 11th European College of Neuropsychopharmacology (ECNP) Regional Meeting (St. Petersburg, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 печатных работы, в том числе 14 статей в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, получено 2 патента на изобретения.

1. Материалы и методы исследования

конденсированный наркогенный морфиноподобный бензимидазол

Объектами исследования являлись конденсированные производные полициклических систем на основе бензимидазола, синтезированных в НИИ физической и органической химии Южного Федерального Университета (НИИ ФОХ ЮФУ, Ростов-на-Дону) ведущим н.с., к.х.н. Анисимовой В.А., которые представлены следующими классами химических соединений: 1Н-бензимидазолы; N9-замещенные имидазо[1,2-a]бенз-имидазолы; N1-замещенные имидазо[1,2-a]бензимидазолы; N9-замещенные 2,3-ди-гидроимидазо[1,2-a]бензимидазолы, N1-замещенные 2,3-дигидроимидазо[1,2-a]бенз-имидазолы; N1,N9-замещенные 2,3-дигидроимидазо[1,2-a]бензимидазолы; 2,3,4,10-тетрагидропиримидо[1,2_a]бензимидазолы; пиразоло[1,5-a]бензимидазолы.

В экспериментах in vitro и in vivo использовались морфина гидрохлорид (ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), буторфанола тартрат («ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), U50,488 («SIGMA», США), норбиналторфимин (norBNI) («SIGMA», США), налоксон (ОАО «Московская фармацевтическая фабрика», Россия), формалин («Биомед», Россия), уксусная кислота («Реахимсервис», Россия), галоперидол («Gedeon Richter», Венгрия), апоморфина гидрохлорид («ICN Biomedical», США), 5-гидрокситриптофан (5-ГТФ) («Sigma», США), L-3,4-диоксифенилаланин (L-ДОФА) («Sigma», США), клофелин («Биомед», Россия), резерпин («Sigma», США), ареколин («Sigma», США), никотин («Sigma», США), пикротоксин («ICN Biomedical», США).

Исследования проводились на 1890 нелинейных половозрелых белых мышах- самцах массой 20-25 г, 694 самцах нелинейных белых крыс массой 200-250 г, 35 самцах-кроликах массой 3-4 кг, содержащихся в условиях вивария (температура 22-24С, относительная влажность воздуха 40-50%) с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных в соответствии с ГОСТ Р 50258_92 [1993], с соблюдением правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ, регламентированных ГОСТ Р 51000.3_96 [1996] и ГОСТ Р 51000.4_96 [1996], а также правил и Международных рекомендаций «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» [The European Convention …, 2007]. Протокол экспериментальной части исследования согласован с Региональным этическим комитетом (Протокол №109-2010 от 29 января).

Поиск соединений с каппа-опиоидной агонистической активностью среди производных конденсированных бензимидазолов проводился in vitro на тромбоцитах кролика в солевой среде (трис-HCl буфер, рН 7,4) с использованием техники малоуглового светорассеяния («Лайт-Скан», «Люмекс ЛТД», Россия) на модели активации тромбоцитов [Э.Ф. Дергачев, 1998]. Для наиболее перспективных веществ изучались концентрационные зависимости каппа-агонистического эффекта с определением величины ЕК50.

Острая токсичность определялась на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-22 г при внутрибрюшинном введении. Величину токсикологического показателя ЛД50 рассчитывали по методу Личфилда-Вилкоксона. В качестве интегрального показателя условной широты терапевтического действия использовался условный терапевтический индекс соединений, который рассчитывался как отношение ЛД50 к EК50.

Анализ зависимости между каппа-агонистической активностью и химической структурой производных бензимидазола проводился с применением методов теории распознавания образов [Горелик, 1984]. Для выявления QSAR-закономерностей использовались подструктурный анализ, частотная оценка влияния физико-химических параметров соединений. Кластеризация каппа-агонистической активности осуществлялась с применением двух методов: вероятностного гистограмм и геометрического расстояний [Мандель, 1988]. Показатели липофильности молекул вычислялись с использованием различных схем фрагментного приближения [Broto, 1984; Ghose, 1987; Viswanadhan, 1989]. Cтерические параметры оценивались по классической аддитивной схеме в различных модификациях [Иоффе, 1983; Ghose, 1987; Viswanadhan, 1989]. Вычисление электронных характеристик проводилось по методу AM1 [Dewar, 1985; Минкин, 1997] с предварительной оптимизацией конформации методом молекулярной механики MM2 [Буркерт, 1986; Кларк, 1990].

Исследования специфической активности проводились в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [ред. - Р.У. Хабриев, 2005], где дано подробное описание используемых в работе методов. Болевая чувствительность животных оценивалась в батарее тестов in vivo c использованием стандартных моделей ноцицептивных реакций: отдергивания хвоста при действии сфокусированного теплового пучка (установка 602000-TF-AD-MR-01 фирмы TSE-system, Германия), горячей воды (54 ?С) [D'Amor., 1941], горячей пластины [Kitchen I., 1985, Tjolsen A., 1991], «вокализации» [Carrol N., Lim P.K., 1960], Гаффнера [Haffner F., 1929; Bianchi C., 1957], Рандалл-Селитто [Randall L., Selitto J.J., 1957], формалиновой гипералгезии [Dubuisson , 1977, Abbot, 1995], уксусных корчей [Koster R., 1977]. Исследуемые вещества изучались в диапазоне доз 0,001-10,0 мг/кг при внутрибрюшинном введении. Для подтверждения специфичности опиоидного характера действия выполнялись тесты с налоксоном (10 мг/кг, п/к). Определялись показатели: анальгетической эффективности (кривая зависимости доза-эффект, ЕД50); условный терапевтический индекс; длительность анальгезии (кривая зависимости время-эффект) оценивалась по методу А.В. Древаль (1985) с определением показателей площади под кривой «время-эффект», рассчитанных по правилу трапеций.

Для изучения цереброваскулярной активности использовалась модель глобальной ишемии головного мозга по Мирзоян Р.С. (2005). Регистрацию локального мозгового кровотока в теменной области коры головного мозга крыс проводили на ультразвуковом допплерографе ММ-Д-К (Санкт-Петербург, Россия) с применением рабочей компьютерной программы ММ-Д-К-Minimax Doppler v.1.5. Хроническая цереброваскулярная недостаточность моделировалась согласно Мирзоян Р.С., 2005 и оценивалась по методу Ахапкиной В.И., Ворониной Т.А., 2006 с применением международной шкалы NDS (Neurological Deficit Score) [Zhang Z., 2003].

Противосудорожное действие исследовалось в тестах максимального электрошока [White, 1992], антагонизма с коразолом [Swinyard, 1969], а также при моделировании хронической эпилепсии с использованием классической методики киндлинг прогрессии [Воронина Т.А., 2005; Loaker S., 2007].

Изучение анксиолитической активности проводилось на стандартных моделях анксиогенеза: в тестах «открытое поле» [Lister, 1987], «приподнятый крестообразный лабиринт» [Воронина Т.А., Серединин С.Б., 2005], конфликтной ситуации «наказуемого взятия воды» [Vogel, 1983].

Детальная оценка механизма действия осуществлялась in silico с использованием метода сходства к эталонам [Molecular Similarity ..., 1995]. В качестве препаратов-стандартов были выбраны каппа-селективный агонист U50,488, а также избирательные ингибиторы б p38 MAPK-киназы SB203580, SB216995, SB220025. Расчеты выполнялись с помощью программы HyperChem 7 (Evaluation Copy).

Докинг веществ в сайты связывания каппа-опиоидного рецептора и каталитического домена б p38 MAPK-киназы (14) проводился с использованием программного пакета AutoDock Vina 1.1.1 [AutoDock Vina, 2010] в комплекте с дополнительными инструментами AutoDock Tools и PyMol [Trott O, 2010] на имеющемся в ВолгГМУ 24-х ядерном вычислительном кластере общей производительностью 190 Гфлопс.

Каппа-рецепторный механизм действия оценивался в экспериментах in vitro в соответствии с методикой [Oka T., 1980; Hayes A., 1985], влияние веществ на мю-, дельта-рецепторы изучалось на модели [Coupar I.M., 1996]. Регистрация биологического ответа производилась с использованием комплекса аппаратуры для работы на изолированных органах и тканях лабораторных животных UGO BASILE (Италия). Для подтверждения каппа-опиоидного характера действия веществ выполнялись тесты с селективным каппа-антагонистом norBNI.

Регистрация трансмембранных натриевых, кальциевых ионных токов нейронов прудовика осуществлялась с помощью метода внутриклеточного диализа и фиксации мембранного потенциала [Вислобоков А.И., Игнатов Ю.Д. и др., 2006].

Оценка специфичности опиоидного механизма действия проводилась с использованием антагониста опиоидных рецепторов налоксона на моделях экспериментальной патологии in vivo в тестах «вокализации», «максимального электрошока», «наказуемого взятия воды» [Булаев В.М., Коробов Н.В., 2005].

Изучение нейрохимического профиля осуществлялось в соответствии с методиками, основанными на взаимодействии с основными нейромедиаторными системами мозга [Андреева Н.И., 2005].

Для оценки возможных морфиноподобных побочных эффектов регистрировалось число дыхательных движений в минуту у бодрствующих мышей [Булаев В.М., Коробов Н.В., 2005]. Налоксон-индуцированный синдром отмены изучался на моделях острой физической зависимости по методу Воронина Т.А., 2005, и зависимости при субхроническом введении веществ по методу Mamiya T., 2001. Антиноцицептивная толерантность оценивалась в тесте уксусных «корчей» [Булаев В.М., 2005].

С целью выявления/исключения каппа-опосредованных аверсивных реакций использовались методики условнорефлекторной реакции избегания места [Звартау Э.Э., 2005; Bruchas M.R., 2007], принудительного «неизбегаемого плавания» [Porsolt R.D., 1977; McLaughlin J.P., 2003]. Возможное развитие седации проводилось с оценкой локомоторной активности животных с использованием актометра (UGO BASILE, Италия), в тестах «открытое поле», «удержания на вращающемся стержне» [Воронина Т.А., 2005]. Нейротоксикологический профиль изучался с применением схемы многотестового наблюдения по Ирвину [Irwin S., 1964].

Статистическая обработка данных проводилась с помощью стандартных пакетов статистических программ Statistica 6,0 (StatSoft, Inc., США), Microsoft Office Excel 2003 (Microsoft, США) с использованием непараметрического метода сравнения независимых групп Манна-Уитни (U-test), точного критерия Фишера для альтернативных реакций, рангового однофакторного анализа Крускала-Уоллиса.

Показатели ЭК50, ЭД50 рассчитывались методом наименьших квадратов. Уровень значимости p<0,05.

2. Результаты исследования и их обсуждение

В результате направленного поиска веществ с каппа-опиоидной рецепторной селективностью среди производных конденсированных бензимидазольных систем был выявлен ряд соединений с высокой каппа-агонистической активностью (табл. 1).

Таблица 1. Влияние конденсированных бензимидазолов, буторфанола и U50,488 в скрининговой концентрации (10-4 M) на активацию тромбоцитов кролика (каппа-агонистическая активность), Д %

Производные конденсированных бензимидазольных систем	Препараты сравнения
Название соединения	Каппа-эффективность, Д %	Название соединения	Каппа-эффективность, Д %	Название соединения	Каппа-эффективность, Д %
РУ-1203	87,6 (85,0-122,0)*	РУ-1196	28,4 (24,3-31,2)	Буторфанол	20,0 (17,3-21,8)
РУ-1204	80,4 (70,8-83,6)*	РУ-1195	22,5 (18,7-25,0)	U50,488	22,8 (20,4-23,7)

Примечание:*- p<0,05 - данные статистически значимы по отношению к препаратам сравнения. U-критерий Манна-Уитни.

Анализ базовых структур 249 экспериментально протестированных субстанций показал, что N9-замещенные имидазо[1,2-a]бензимидазолы являются перспективным классом химических соединений для поиска структурно новых каппа-агонистов с потенциально высоким уровнем каппа-рецепторной эффективности (p<0,001) (рис. 1).

Результаты комплексной оценки значимых структурных и физико-химических признаков высокого уровня каппа-агонистической активности N9-замещенных имидазо[1,2-a]бензимидазолов свидетельствуют о трехцентровом характере взаимодействия отобранных соединений с сайтом связывания каппа-рецептора. Это электростатическое взаимодействие отрицательно заряженного атома азота в положении 4 гетероциклического ядра, возможно, дополняемое р-р-стэкингом конденсированной трициклической системы, с фиксацией плоской сопряженной части молекулы на рецепторе; гидрофобное взаимодействие галогенарильного фрагмента, дополненное поляризационными эффектами за счет наличия отрицательно заряженного атома фтора в заместителе R2; электростатическое взаимодействие положительно заряженной аммониевой группы алкиламиноалициклического заместителя в положении 9, при котором гибкая алифатическая цепочка обеспечивает конформационную адаптацию лиганда к молекулярному полю рецептора и его оптимальное позиционирование в рецепторном пространстве (табл. 2,3).

Рис. 1. Влияние типа гетероциклической системы конденсированных производных бензимидазола на высокий уровень каппа-опиоидной агонистической активности

Примечание: 1Н-бензимидазолы (I); 2,3-дигидробензимидазолы (II); N9-имидазо[1,2-a]бензимидазолы (III); N1-имидазо[1,2-a]бензимидазолы (IV); N9-2,3-дигидроимидазо[1,2-a]бензимидазолы (V); N1-2,3-дигидроимидазо [1,2-a] бензимидазолы (VI); N1,N9-2,3-дигидроимидазо[1,2-a]бензимидазолы (VII); 2,3,4,10-тетрагидропиримидо [1,2_a]бензимидазолы (VIII); пиразоло[1,5-a]бензимидазолы (IX).

Таблица 2. Результаты подструктурного анализа влияния заместителей на высокий уровень каппа-агонистической активности N9-замещенных имидазо[1,2-a]бензимидазолов

Заместитель	Ph	Pnh	Pr	Ind
R1
-H; водород	0,5865	0,4135	1,21·10-02	3
R2
-4-C6H4F; 4-фторфенил	0,7806	0,2194	1,87·10-06	5
-3,4-С6H3Cl2; 3,4-дихлорфенил	0,9006	0,0994	2,00·10-04	5
-4-C6H4Cl; 4-хлорфенил	0,8531	0,1469	1,06·10-03	4
-C6H5; фенил	0,4358	0,5642	1,75·10-02	2
-б-C10H7; б-нафтил	0,5892	0,4108	1,84·10-02	2
R3
-(CH2)2NC4H8; пирролидиноэтил	0,8664	0,1336	1,09·10-05	5
-(CH2)2NC4H8O; морфолиноэтил	0,6398	0,3602	2,40·10-02	3

Примечание: Ph(nh) - Байесовская вероятность встречаемости признака в классе высокоактивных (невысокоактивных) соединений; Рr - значимость влияния признака на наличие или отсутствие высокой активности; Ind - индекс значимости.

Полученные результаты хорошо согласуются с данными литературы [Pogozheva I.D., 2008; Kane B.E., 2008] о критических фармакофорных элементах, контролирующих процесс лиганд-рецепторного взаимодействия с каппа-агонистами и свидетельствуют о том, что ключевые особенности аналогов конденсированных бензимидазолов во многом схожи с таковыми селективных агонистов каппа-рецепторов, что позволяет считать исследуемые вещества вполне сбалансированными для создания на их основе структурно новых каппа-рецепторных агонистов.

Таблица 3. Результаты частотного анализа зависимости каппа-опиоидной агонистической активности от физико-химических параметров N9-замещенных имидазо[1,2-a]бензимидазолов

Физико-химический параметры	Ph	Pnh	Pr	Ind
R2
M|Q|<0,092	0,8071	0,1929	5,50·10-03	4,0
0,142?Max(Q+)<0,169	0,6120	0,3880	3,75·10-02	3,0
Min(Q+)?0,095	0,6884	0,3116	4,85·10-02	3,0
Min(Q-)?-0,161	0,6655	0,3345	8,90·10-03	4,0
Log P ? 2,48	0,8147	0,1853	6,00·10-04	5,0
MR ? 31,78	0,6335	0,3665	6,36·10-02	2,0
R3
0,113?M|Q|<0,122	0,7311	0,2689	6,20·10-03	4,0
0,176?Max(Q+)<0,214	0,5929	0,4071	9,17·10-02	2,0
MR ? 26,1	0,5586	0,4414	1,71·10-01	1,0
Конденсированная система
-0,114?QN4<-0,101	0,6884	0,3116	4,85·10-02	3,0

Примечание: Ph(nh) - Байесовская вероятность встречаемости признака в классе высоко-/невысокоактивных веществ; Рr - значимость влияния признака на наличие/отсутствие высокой активности; Ind - инд. значимости.

С учетом вышеизложенного представляются три возможных пути направленной модификации структуры N9-замещенных имидазо[1,2-a]бензимидазолов, а именно введение заместителей в бензольное кольцо трициклической системы с целью плавного регулирования заряда на атоме азота в положении 4 в диапазоне -0,114? QN4<-0,101; фторированных липофильных радикалов в положение С2 гетероциклического ядра; увеличение длины алифатической цепочки алкиламинного заместителя в положении 9.

По результатам направленного поиска веществ с каппа-агонистической активностью было отобрано наиболее перспективное вещество под лабораторным шифром РУ-1203, 2-(4-фторфенил)-9-пирролидиноэтил имидазо[1,2-а]бензимидазол, проявляющее высокую каппа-агонистическую эффективность in vitro на тромбоцитах кролика, эксклюзивно экспрессирующих субпопуляцию каппа-рецепторов. Тестируемое соединение вызывало дозозависимую norBNI-обратимую активацию тромбоцитов, превосходило по каппа-опиоидному рецепторному действию, индексу относительной безопасности препараты сравнения буторфанол и U-50,488 в 4; 3,6 и 5; 34 раза, соответственно (табл. 4).

Таблица 4.. Величина каппа-агонистической активности (EК50), острой токсичности (ЛД50), условный терапевтический индекс (ТИ = ЛД50/EК50) буторфанола, U50,488, вещества РУ-1203 на модели активации тромбоцитов методом малоуглового светорассеяния

Вещество	EК50 (М)	ЛД50 (мг/кг)	ЛД50 (М/кг)	ТИ (ЛД50/EК50)
РУ-1203	4,2·10-5	312,8	7,4·10-4	17,6
Буторфанол	1,7·10-4	192,0*	5,8·10-4	3,4
U50,488	1,5·10-4	25,0**	0,7·10-4	0,5

Примечание: *- LD50 буторфанола тартрата (в/бр, мыши) по данным BBPSDY Pharmacology and Biochemical Properties of Drug Substances, 2, 19 (1979); ** Res. Compl. Med., 11, 144-149 (2004);

Учитывая, что основным направлением в разработке каппа-селективных агонистов является создание на их основе высокоэффективных опиоидных анальгетиков без риска развития респираторной депрессии и наркогенного потенциала [Wang Y., 2010; Kivell B., 2010; Lemos J., 2011], представлялось целесообразным изучить спектр антиноцицептивных характеристик нового производного полициклических систем на основе бензимидазола.

Таблица 5. Величина обезболивающей эффективности (EД50), показатель острой токсичности (ЛД50) и терапевтический индекс (ТИ=ЛД50/EД50) соединения РУ-1203 и буторфанола на центральных и периферических моделях болевой чувствительности

Тест	Вещество	ЕД50	ЛД50	ТИ (ЛД50/ ЕД50)
Супраспинальный уровень организации болевой чувствительности
Горячая пластина	РУ-1203	0,34 (0,63-0,18)	312,8	920,0
	Буторфанол	0,3 (0,9-0,1)	192,0	640,0
Вокализация	РУ-1203	0,06 (0,1-0,03)	312,8	5213,3
	Буторфанол	0,07 (0,12-0,04)	192,0	2742,9
Супраспинальный + периферический уровни организации болевой чувствительности
Гаффнера	РУ-1203	0,57 (0,82-0,32)	312,8	548,7
	Буторфанол	0,51 (0,78-0,33)	192,0	376,5
Рандалл-Селитто	РУ-1203	0,03 (0,07-0,01)	312,8	10426,7
	Буторфанол	0,02 (0,03-0,01)	192,0	9600,0
Спинальный уровень организации болевой чувствительности
Отдергивания хвоста	РУ-1203	0,08 (0,1-0,06)	312,8	3910,0
	Буторфанол	0,13 (0,2-0,07)	192,0	1476,9
Периферический уровень организации болевой чувствительности
Уксусные корчи	РУ-1203	0,14 (0,28-0,07)	312,8	2234,2
	Буторфанол	0,13 (0,28-0,06)	192,0	1600,0
Формалин I фаза	РУ-1203	0,02 (0,026-0,018)	312,8	15640,0
	Буторфанол	0,01 (0,023-0,006)	192,0	19200,0
Формалин II фаза	РУ-1203	0,004 (0,009-0,001)	312,8	78200,0
	Буторфанол	0,026 (0,08-0,01)	192,0	7384,6

Примечание:*- LD50 буторфанола тартрата (в/бр, мыши) по данным BBPSDY Pharmacology and Biochemical Properties of Drug Substances Drug Substances, 2, 19 (1979);

Соединение РУ-1203 в широком диапазоне доз 0,001-10 мг/кг проявляло дозозависимое налоксонообратимое анальгетическое действие на различных моделях ноцицептивных реакций, в тестах соматической, висцеральной, тонической боли, вызванной механическими, электрическими, термическими, химическими стимулами (табл. 5). В большинстве тестов исследуемое вещество было сопоставимо по эффективности с буторфанолом и превосходило эталонный препарат по продолжительности и широте терапевтического действия в 1,5-3,5 раза (табл. 5; 6). Наиболее выраженная активность соединения РУ-1203 отмечалась в условиях формалиновой гипералгезии, во II фазе ноцицептивного ответа, где тестируемое вещество превосходило по обезболивающему действию буторфанол в 6,5 раз (табл. 5).

Таблица 6. Оценка продолжительности действия (площадь под кривой) соединения РУ-1203 и буторфанола на различных моделях ноцицептивных реакций

Название вещества	Площадь под кривой, у.е. в тестах
	Рандалл-Селитто	Вокализация	Отдергивание хвоста	Горячая пластина	Корчи
РУ-1203	23544,75	25669,0	12507,0	23622,75	19509,0
Буторфанол	10444,5	18556,0	3529,5	14929,5	9582,2

Важным представляется тот факт, что вещество РУ-1203 проявляло антиноцицептивные свойства при различных путях введения, в том числе и при приеме внутрь, что открывает перспективы создания на его основе эффективной пероральной лекарственной формы, в отличие от буторфанола (рис. 2).

Рис. 2. Анальгетическая активность соединения РУ-1203 в дозе 1 мг/кг при различных путях введения в тесте электрической стимуляции кожи хвоста крыс Обозначения: по оси Y - изменение порога болевой чувствительности (%), по оси X - время (мин); *- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к эффектам вещества при per os введении.U-критерий Манна-Уитни

Следует отметить, что тестируемое соединение оказывало сопоставимое антиноцицептивное действие при в/м, п/к и пероральном путях введения со смещением кривой зависимости время-эффект вправо (рис. 3).

Принимая во внимание многочисленные данные литературы, свидетельствующие о ключевой роли каппа-опиоидной рецепторной системы в модуляции ишемических повреждений мозга, а также выраженной нейропротективной эффективности каппа-агонистов на экспериментальных моделях глобальной ишемии [Charron C., 2008; Aldrich J.V., 2009; Schwarzer C., 2010; Lemos J.C., 2011] следующим этапом работы явилось изучение нейропротекторных свойств исследуемого соединения в условиях острой и хронической цереброваскулярной недостаточности.

Рис. 3. Анальгетическая активность соединения РУ-1203 в дозе 1 мг/кг при per os, п/к и в/м путях введения в тесте электрической стимуляции кожи хвоста крыс Обозначения: по оси Y - изменение порога болевой чувствительности (%), по оси X - время (мин); *- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к эффектам вещества при per os введении.U-критерий Манна-Уитни

Установлено, что вещество РУ-1203 вызывает статистически значимое нейропротекторное действие при моделировании ишемического повреждения мозга.

Тестируемое соединение (2 мг/кг, в/в) через 20 мин после билатеральной окклюзии сонных артерий и снижения уровня АД до 40-50 мм рт.ст. полностью восстанавливает локальный кровоток в проекции средней мозговой артерии (рис. 4).

В группе животных, получавших вещество РУ-1203, отмечалось статистически значимое (в 2,4 раза; p<0,05) времязависимое увеличение площади под кривой скорости кровотока по сравнению с контрольными значениями.

Рис. 4. Влияние вещества РУ-1203 (2 мг/кг, в/в) на скорость локального кровотока (% от исходных значений) в условиях глобальной ишемии, вызванной билатеральной окклюзией сонных артерий и снижением уровня АД до 40-50 мм рт.ст. Обозначения: по оси Y - скорость локального мозгового кровотока (% от исхода), по оси X - время (мин);*- p<0,05- данные статистически значимы по отношению исходным значениям; #- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к контрольной группе животных. U-критерий Манна-Уитни

В постинсультный период (14 дней наблюдения) соединение РУ-1203 (1 мг/кг, в/бр, через 5 часов после ишемического инсульта, затем при однократном введении в течение 7 суток) оказывало налоксонообратимое лечебное действие. Курсовое введение исследуемого вещества в условиях хронической цереброваскулярной недостаточности способствовало выживаемости 50% животных (табл. 7). На третьи сутки после инсульта регистрировалось практические полное восстановление неврологического дефицита (табл. 8). Соединение РУ-1203 статистически значимо улучшало показатели двигательной, ориентировочно-исследовательской активности в парадигме «открытое поле» (табл. 9).

Таблица 7. Влияние соединения РУ-1203 (1 мг/кг, в/бр) и буторфанола (1 мг/кг, в/бр) после окклюзии на неврологический дефицит у крыс по международной шкале NDS, баллы (M±m)

Вещество/группа животных	Неврологический дефицит, баллы
	1 сутки	3 сутки	7 сутки	14 сутки
Ложнооперированные	4,5±0,2*&	3,8±0,3*&	4,5±0,7*&	3,5±0,3*&
Инсульт (ИИ)	9,6±0,5$#&	8,4±0,7$#&	8,8±0,4$#&	8,0±0,5$#&
ИИ+РУ-1203	6,2±0,7*	4,2±0,5*	4,7±0,4*	3,6±0,4*
ИИ+Буторфанол	7,3±0,3*	5,8±0,4*	6,2±0,3*	4,7±0,5*
ИИ+Налоксон	8,4±0,6$#	7,9±0,7$#	8,1±0,5$#&	7,6±0,6$#&
ИИ+Налоксон+РУ1203	8,7±0,4$#	8,0±0,9$#&	8,3±0,7$#&	7,9±0,9$#&
ИИ+Налоксон+Буторфанол	9,0±0,3$#&	8,2±0,6$#&	8,6±0,6$#&	8,1±0,5$#&

Примечание: $- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к ложнооперированным животным; *- p<0,05 - данные статистически значимы по отношению к крысам с ИИ; #- p<0,05 - данные статистически значимы по отношению к крысам с ИИ, получавшим вещество РУ-1203; &- p<0,05 - данные статистически значимы по отношению к крысам с ИИ, получавшим буторфанол; Ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, U-критерий Манна-Уитни.

Таблица 8. Влияние соединения РУ-1203 (1 мг/кг, в/бр) и буторфанола (1 мг/кг, в/бр) после ишемического инсульта (ИИ) на выживаемость животных

Группа животных	Количество погибших животных в течение 14 суток после ишемического повреждения головного мозга (n/N, %)
	1 сутки	3 сутки	7 сутки	14 сутки	Итого
	n/N	%	n/N	%	n/N	%	n/N	%	n/N	%
Ложнооперированные	1/10	10,0*&	0/9	0,0*&	1/9	11,1*	1/8	12,5*#&	3/10	30,0*&
Инсульт (ИИ)	5/12	41,7$#	4/7	57,1$#&	1/3	33,3$#	1/2	50,0$#&	11/12	91,7$#&
ИИ+РУ-1203	2/12	16,7*&	2/10	20,0$*&	1/8	12,5*	0/7	0,0$*	5/12	41,7*&
ИИ+Буторфанол	4/12	33,3$#	3/8	37,5$*#	1/5	20,0	0/4	0,0$*	8/12	66,7$*#
ИИ+Налоксон	5/12	41,7$#	3/7	42,9$#	1/4	25,0$#	1/3	33,3$*#&	10/12	83,3$#&
ИИ+Налоксон+РУ1203	4/12	33,3$#	3/8	37,5$*#	2/5	40,0$#&	2/3	66,7$#&	11/12	91,7$#&
ИИ+Налоксон+Буторфанол	5/12	41,7$#	3/7	42,9$#	2/4	50,0$*#&	1/2	50,0$#&	11/12	91,7$#&

Обозначения: n/N - количество погибших животных (n) из общего количества (N). $- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к ложнооперированным животным; *- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к животным с ИИ; #- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к животным с ИИ, получавшим вещество РУ-1203; &- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к животным с ИИ, получавшим буторфанол. Точный критерий Фишера.

Таблица 9. Влияние вещества РУ-1203 (1 мг/кг, в/бр), буторфанола (1 мг/кг, в/бр) на двигательную активность, ориентировочно-исследовательское поведение животных в тесте «открытое поле» после ИИ, (M±m)

Группа животных	Значения показателей после ишемии, M±m
	1 сутки	3 сутки	7 сутки	14 сутки
	ГДА	СОИА	ГДА	СОИА	ГДА	СОИА	ГДА	СОИА
Ложнооперированные	35,0±1,8*	12,0±1,1*&	29,1±1,3*&	11,0±0,8*&	26,2±1,4*&	8,0±0,9*&	23,0±1,4*&	6,3±0,3*&
Инсульт (ИИ)	22,4±2,1$#	5,6±0,3$#	17,6±1,5$#	4,5±0,3$#	17,2±1,3$#	2,5±0,7$#	14,7±1,3$#	2,0±0,4$#
ИИ+РУ-1203	34,6±1,2*	8,3±0,4$*&	28,5±1,3*&	10,5±0,4*&	25,8±1,2*&	6,8±0,4*&	24,3±1,5*&	5,9±0,3*&
ИИ+Буторфанол	28,1±3,3	6,1±0,2$#	15,4±1,1$#	5,7±0,5$#	17,3±1,5$	3,4±0,5$#	14,9±1,1$#	3,0±0,2$#
ИИ+Налоксон	20,1±1,4$#	5,2±0,3$#	18,3±1,7$#	4,1±0,3$#	16,8±1,8$	3,3±0,3$#	13,7±1,6$#	2,3±0,4$#
ИИ+Налоксон+РУ1203	22,5±1,7$#	4,8±0,4$#	17,8±1,3$#	3,8±0,7$#	17,0±2,1$	3,1±0,6$#	14,8±1,3$#	1,8±0,6$#
ИИ+Налоксон+Буторфанол	21,3±1,6$#	5,0±0,6$#	18,2±1,2$#	4,1±0,4$#	17,8±1,7$	2,7±0,2$#	13,4±1,9$#	2,4±0,2$#

Примечание: $- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к ложнооперированным животным; *- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к животным с ИИ; #- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к животным с ИИ, получавшим вещество РУ-1203; &- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к животным с ИИ, получавшим буторфанол. Ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, U-критерий Манна-Уитни.

В большинстве тестов исследуемое вещество превосходило по нейропротективной эффективности препарат позитивного контроля буторфанол.

Доказательства высокой эффективности каппа-селективных лигандов на различных моделях эпилептогенеза [Loacker S., 2007; Pasternak G.W. et al., 2011; Schwarzer C., 2011] послужили предпосылкой к изучению влияния соединения РУ-1203 на развитие судорожного синдрома в тестах максимального электрошока (МЭШ), антагонизма с коразолом, являющихся «золотым стандартом» при поиске веществ с антиконвульсантным действием, а также при моделировании хронической эпилепсии с использованием классической методики киндлинг прогрессии. В результате проведенных исследований было выявлено, что тестируемое вещество в широком диапазоне доз 0,001-3 мг/кг, в/бр, вызывает дозозависимый налоксонообратимый эффект на острых моделях эпилептогенеза, статистически значимо уменьшает выраженность генерализованных клонико-тонических судорог в тесте антагонизма с коразолом, тонической экстензии задних конечностей в тесте МЭШ, а также существенно предотвращает гибель животных (рис. 5).

Рис. 5 Противосудорожные эффекты соединения РУ-1203 и буторфанола в дозах 0,001-3 мг/кг, в/бр, в тестах коразол-индуцированного судорожного синдрома (А) и максимального электрошока (Б)

Примечание: *- p<0,05- данные статистически значимы к контрольной группе животных; #- p<0,05- данные статистически значимы по отношению к группе животных, получавших буторфанол. U-критерий Манна-Уитни.

По уровню ЕД50 соединение РУ-1203 в тестах МЭШ и коразол-идуцированного судорожного синдрома превосходит по противоэпилептической активности буторфанол в 3,6 и 142,5 раза, соответственно, а также стандартные референсные препараты, рекомендованные для сравнительной характеристики на представленных моделях экспериментальной патологии, карбамазепин (в тесте МЭШ) и диазепам (в тесте коразоловых судорог) в 13,7 и 30,5 раз, соответственно (табл. 9).

Таблица 10. Величина противосудорожной эффективности (EД50) соединения РУ-1203, буторфанола и стандартных референсных препаратов диазепама и карбамазепина в тестах антагонизма с коразолом и максимального электрошока

Название вещества	Тест антагонизма с коразолом	Тест максимального электрошока
	EД50 (мг/кг)	EД50 (мг/кг)
РУ-1203	0,04 (0,06-0,09)	0,67 (0,83-0,45)
Буторфанол	5,71 (6,82-4,12)	2,39 (3,62-1,84)
Диазепам	1,22 (1,43-0,81)	-
Карбамазепин	-	9,18 (13,06-6,39)

На классической модели хронической эпилепсии, вызванной подпороговыми дозами (30 мг/кг, в/бр, в течение 1,5 месяцев, 3 раза в неделю) коразола, тестируемое вещество (0,1 мг/кг, в/бр) в среднем 2,7 раза замедляет киндлинг прогрессию по сравнению с контрольной группой животных (табл. 10).

Таблица 11. Влияние соединения РУ-1203 (0,1 мг/кг, в/бр) на развитие судорожного синдрома на модели киндлинг прогрессии

День	1	3	5	7	9	12	14	16	19	21	23	26	28	30	33	35
№ ин.	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16
Баллы	Контроль
0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
1	4	3	3	2	1	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
2	1	1	1	3	3	5	3	4	3	1	1	2	3	3	2	-
3	5	5	5	4	4	2	5	4	5	7	6	4	4	3	3	5
4	-	-	-	-	1	2	1	1	1	1	2	3	2	3	4	4
Общ.	2,1	2,2	2,2	2,2	2,6	2,7	2,8	2,7	2,8	2,9	3,1	3,1	2,9	3,0	3,2	3,4
Баллы	Ру-1203

Подобные документы

• Опиоиды

  Класс препаратов, выделенных из макового сока для анальгезии (опиоиды). Эндогенные опиоиды, применение в периоперационном периоде, для регионарной анестезии. Побочный эффект спинального применения опиоидов. Сердечно-сосудистые эффекты опиоидных агонистов.
  
  контрольная работа [19,6 K], добавлен 04.08.2009
  

• Рефрактометрический метод в экспресс-анализе лекарственных форм

  Рефрактометрия как один из методов идентификации химических соединений, их количественного и структурного анализа, определения физико-химических параметров. Актуальность рефрактометрии для анализа лекарственных веществ для среднестатистической аптеки.
  
  курсовая работа [1,2 M], добавлен 02.06.2011
  

• Общие признаки и методы ортодонтического лечения

  Сбор диагностической информации: ортопантомограмма, телерентгенограмма в боковой проекции, сканирование зубов, фотографирование, компьютерная томограмма. Средства перемещения зубов: брекеты и каппы. Составление плана действий по лечению пациентов.
  
  презентация [1,9 M], добавлен 02.12.2015
  

• Каппа Бынина

  Аппарат Бынина для перемещения отдельных неправильно расположенных зубов верхней челюсти, лечения прогении, задержки роста нижней челюсти. Подготовка аппарата с мягкой и твердой оболочкой. Преимущества и недостатки. Конструкции ортодонтических аппаратов.
  
  доклад [710,1 K], добавлен 20.12.2012
  

• Этапы и технология изготовления штифтового зуба по Ричмонду

  Изготовление литой металлической и комбинированной каппы на корень зуба. Этапы изготовления штифтового зуба по Ричмонду. Изучение его положительных и отрицательных качеств. Фиксация мостовидного протеза вкладками. Морфологические особенности коронки зуба.
  
  презентация [1,2 M], добавлен 02.12.2015
  

• Физико-химических методы анализа лекарственных средств

  Классификация физико-химических методов анализа. Молекулярно-абсорбционный спектральный анализ. Законы поглощения излучения. Визуальная колориметрия. Определение концентрации в фотоэлектроколориметрии. Спектрофотометрия лекарственных препаратов.
  
  реферат [492,7 K], добавлен 14.11.2010
  

• Острая респираторная вирусная инфекция

  История настоящего заболевания (anamnesis morbi). История жизни, объективное исследование. Интоксикационный и катаральный синдром. Острая респираторная вирусная инфекция - широко распространенные заболевания, что характеризуются общей интоксикацией.
  
  история болезни [18,5 K], добавлен 24.10.2011
  

• Острая респираторная вирусная инфекция средней тяжести

  Результаты обследования больного ребенка с диагнозом "острая респираторная вирусная инфекция средней тяжести". История заболевания, аллергологический и семейный анамнез, результаты осмотра и лабораторных анализов. Постановка диагноза, лечение и прогноз.
  
  история болезни [37,4 K], добавлен 17.02.2011
  

• Потенциометрия в медицинской практике

  Сущность и область ее применения потенциометрии как метода определения различных физико-химических величин, основанного на измерении электродвижущих сил обратимых гальванических элементов. Оценка ее преимуществ и недостатков, используемое оборудование.
  
  презентация [363,8 K], добавлен 17.12.2015
  

• Детские заболевания

  Симптоматика, особенности клиники наиболее известных детских инфекционных болезней: скарлатины, кори, коклюша, ветряной оспы, краснухи и эпидемического паротита. Роль прививок в их профилактике. Острая респираторная вирусная и аденовирусная инфекции.
  
  реферат [46,3 K], добавлен 10.12.2010
  

• Составление базы данных медицинской информации

  Применение фенотерола при бронхоспазмах. Случаи внезапной смерти от астмы. Последствия длительного применения бета-2-агонистов, их влияние на легкие и сердце. Повышение мукоцилиарной активности и повышение отхаркивающего эффекта при применении препарата.
  
  презентация [4,2 M], добавлен 09.12.2014
  

• Культуры изолированных клеток и тканей как новый источник для получения лекарственного сырья

  История создания и понятие культуры клеток и тканей. Анализ влияния генетических, физических и химических факторов на рост и развитие культур. Особенности образования полифенолов, алкалоидов и вторичных метаболитов в культуре тканей различного рода.
  
  курсовая работа [400,8 K], добавлен 18.05.2010
  

• Лекарственные вещества, их свойства и анализ

  Виды и свойства лекарственных веществ. Особенности химических (кислотно-основное, не водное титрование), физико-химических (электрохимические, хроматографические) и физических (определение точек затвердевания, кипения) методов фармацевтической химии.
  
  курсовая работа [622,7 K], добавлен 07.10.2010
  

• Респираторная поддержка при патологии легких

  Цели респираторной поддержки при паренхиматозном повреждении легких и их обструктивной патологии. Выраженный интерстициальный отек, альвеолярный отек, недостаток сурфактанта и дисфункция дистальных воздухопроводящих путей. Подбор частоты дыхания.
  
  реферат [30,4 K], добавлен 05.10.2009
  

• Антрахиноны: жостер, алоэ, ревень

  Антраценопроизводные как большая группа природных соединений, их распространение, роль и классификация. Характеристика мономеров, димеров и конденсированных антраценопроизводных. Общие сведения об антрахиноне. Применение жостера, алоэ, ревеня, каскары.
  
  курсовая работа [2,3 M], добавлен 05.10.2011
  

• Острая респираторная вирусная инфекция. Острый бронхит (J 20)

  Всестороннее обследование больного. Изложения жалоб. Обоснование клинического диагноза "Острая респираторная вирусная инфекция, острый бронхит". Назначение терапии. Ведение дневника состояния больного и течения болезни. Оценка эффективности лечения.
  
  история болезни [23,4 K], добавлен 21.05.2012
  

• Клетка: структура, рост. Ферменты

  Клетка и ее строение. Прокариоты и эукариоты. Основы молекулярной структуры химических элементов и различных химических неорганических и органических соединений. Рост и биосинтез живого организма, его метаболизм. Роль ферментов и синтез полимеров.
  
  контрольная работа [1,1 M], добавлен 25.04.2009
  

• Рекуррентная депрессия: диагностика и лечение

  История болезни пациентки, поступившей на стационарное лечение с жалобами на снижение настроения, тоску, чувство сжатия в груди, плохой сон, отсутствие аппетита. Соматическое и неврологическое исследование. Анализ психического состояния, диагноз, прогноз.
  
  история болезни [10,9 K], добавлен 11.06.2009
  

• Острая респираторная вирусная инфекция, ринофарингит, необструктивный бронхит

  Недомогание, частый малопродуктивный кашель, возникающий в ночное время суток и под утро, насморк, повышение температуры. Эпидемиологический анамнез и результаты осмотра. Острая респираторная вирусная инфекция, ринофарингит, необструктивный бронхит.
  
  история болезни [22,2 K], добавлен 17.03.2009
  

• Лекарственные растения и сырье, содержащие простые фенолы

  Понятие и классификация простых фенольных соединений, их физико-химические свойства, качественное и количественное определение. Методы выделения и идентификации простых фенольных соединений. Фармакологическое действие и применение лекарственных средств.
  
  курсовая работа [195,4 K], добавлен 13.05.2015
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам