Клинико-диагностическое значение определения антител к эластину и эластазе у больных системной красной волчанкой с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента

Таблица 15 Сопоставление чувствительности и специфичности диагностических тестов

Таким образом, ИФА-исследование антител к эластину и эластазе при СКВ по специфичности и чувствительности сопоставимо с широко используемыми тестами диагностики данного заболевания.

Образование антител к эластину и эластазе у больных СКВ представляет интерес как проявление аутоагрессии при классическом аутоиммунном заболевании. Антителиндуцированное нарушение координации в системе эластин - эластаза может вызывать дезорганизацию эластических волокон (вследствие повышенного разрушения эластина) или их преждевременное старение (при инактивации эластаз, участвующих в катаболизме эластина). Дефекты структуры влекут за собой нарушение функций органов, содержащих эластические волокна, обуславливая наряду с другими патогенетическими факторами полиморфизм клинических проявлений волчанки. Изучение вопросов антителообразования к эластину - одному из основных компонентов соединительнотканного матрикса, и эластазе - участнику деградации эластина и медиатору воспалительных реакций, представляется актуальной задачей на пути совершенствования иммунологической диагностики СКВ.

Как уже было отмечено, иммунные механизмы являются ключевым звеном в патогенезе СКВ, поэтому иммунологическим методам придается особое значение в диагностике этого заболевания. Используемые для объективизации диагноза, они не только позволяют верифицировать заболевание, но и прогнозировать характер его течения, клинический вариант и выбрать оптимальную терапевтическую тактику. Повышение чувствительности и специфичности иммунологических методов диагностики аутоиммунных заболеваний, а также совершенствование технических аспектов постановки реакций является важным методическим направлением современной ревматологии.

Для выявления специфических антител в сыворотках крови больных СКВ нами был выбран иммуноферментный метод анализа с использованием иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами. ИФА, будучи высокоспецифичным и чувствительным, является наиболее информа-тивным методом в диагностике диффузных болезней соединительной ткани, а применение иммобилизированных биополимеров дает ему целый ряд неоспоримых преимуществ. Механическая прочность, устойчивость сорбентов к различным физико-химическим и биологическим воздействиям, а также возможность их неоднократного применения после проведения регенерации позволяет добиться значительного экономического эффекта.

Для совершенствования иммунологической диагностики СКВ нами были разработаны и целенаправленно апробированы при выявлении специфических антител у 65 больных СКВ, 57 больных с различными ревматическими заболеваниями (ревматоидный артрит, системные васкулиты, болезнь Шегрена) и 30 здоровых лиц иммобилизированные гранулированные антигенные препараты на основе эластина и эластазы. Унифицированный способ получения полиакриламидных гранул позволил качественно и количественно увеличить сорбционную емкость препарата. Применение метода эмульсионной полимеризации, при котором водорастворимые антигены фиксируются в пространственную решетку полиакриламидного геля методом "механического" включения без образования ковалентных связей, позволяет сохранить антигены в максимально нативном состоянии, а иммобилизация биополимеров в поверхностном слое "двойной" гранулы создает высокую концентрацию антигена в реакционно-активной зоне, что значительно повышает чувствительность ИФА. Включение магнитного материала дает возможность ускорить и упростить ряд манипуляций в твердофазных методах анализа, улучшить качественные характеристики определений и увеличить число обрабатываемых проб, что создает необходимые условия для разработки автоматизированных систем диагностики.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны и апробированы в варианте непрямого иммуноферментного анализа иммобилизированные гранулированные антигенные препараты (ИГАП) с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы. Полученные антигенные препараты применены для исследования специфических антител у здоровых лиц и у больных системной красной волчанкой, ревматоидным артритом, системными васкулитами и болезнью Шегрена.

2. Антитела к эластину и эластазе обнаружены методом ИФА с применением ИГАП в сыворотках крови значительной части обследованных больных. Частота выявления и уровень исследуемых антител у больных СКВ были достоверно выше, чем в контрольной группе: антитела к эластину выявлены у 41,5%, антитела к эластазе - у 78,5% больных СКВ.

3. Выявлена зависимость уровня исследуемых антител от активности, характера течения и клинических проявлений СКВ. Установлено, что максимальное значение антител к эластину наблюдается при васкулопатиях, антител к эластазе - при поражении кожи, сосудов и суставном синдроме.

4. Обнаружена прямая корреляционная связь между уровнем антител к эластину и эластазе, свидетельствующая о стимуляции антителообразования к эластину при нарушении иммунного ответа к эластазе.

5. Определение антител к эластазе и, в меньшей степени, к эластину методом ИФА с использованием ИГАП является чувствительным и высокоспецифичным тестом, сравнимым с общепринятыми иммунологическими тестами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами на основе эластина и эластазы рекомендуется использовать для выявления антител к ним у больных СКВ в разработанном варианте иммуноферментного анализа.

2. При определении антител к эластину и эластазе иммуноферментным методом с использованием ИГАП за границы нормы следует считать: 0,104 е.о.п. - для антител к эластину, 0,113 е.о.п. - для антител к эластазе.

3. Определение антител к эластину и эластазе в сыворотке крови рекомендуется применять в комплексе с традиционными критериями для диагностики системной красной волчанки и дифференциальной диагностики СКВ с другими ревматическими заболеваниями.

4. Рекомендуется использовать одновременное определение уровня антител к эластину и эластазе в сыворотке крови в качестве критерия активности заболевания, а также как прогностического теста в отношении клинических вариантов СКВ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ

Александров А.В., Алехина И.Ю., Шилова Л.Н., Маслова-Сорокина Е.В., Махачев М.А., Матасова Н.А., Емельянов Н.И. Современные биотехнологии в лабораторной диагностике ревматических заболеваний: иммунологические аспекты поражения сосудов у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т.9, №3. - С.334.

Александров А.В., Макарова Т.С., Курбанова Р.Д., Алехина И.Ю., Матасова Н.А., Емельянова О.И. Новые медицинские технологии в иммунодиагностике поражения сосудов у больных системной красной волчанкой. // Профилактическая медицина. - 2010, том 13, № 3. - С. 53.

Гонтарь И.П., Сычева Г.Ф., Александров А.В., Шилова Л.Н., Симакова Е.С., Емельянов Н.Н., Матасова Н.А., Маслакова Л.А., Зборовский А.Б. Эмульсионная полимеризация как метод, модифицирующий ферменты с сохранением биологических свойств их наноструктур. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010, №12. - С. 715 - 719.

Матасова Н.А. Антителогенез к системе эластин-эластаза у больных системной красной волчанкой. // Врач-Аспирант. - 2011, №1.2(44). - С.276-281.

Статьи в научных сборниках и журналах

Ненашева Н.В., Матасова Н.А., Кочнева Л.И., Сычева Г.Ф., Емельянова О.И., Зборовская И.А. Уровень антител к эластину в сыворотке крови практически здоровых людей. // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXV, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2008. с.77-78.

Ненашева Н.В., Матасова Н.А., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р., Зборовский А.Б.. Антителообразование к системе эластин-эластаза у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой и системной склеродермией. // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXVI, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2009. с.57-58.

Ненашева Н.В., Матасова Н.А., Аветисова Э.Р., Кочнева Л.И., Гонтарь И.П. Гуморальный ответ на эластин и эластазу у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией. // Материалы конф. «Актуальные проблемы современной кардиологии и терапии». - Киров, 2009. - С.119-121.

Ненашева Н.В., Матасова Н.А., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р. Изучение антителогенеза к эластину и эластазе у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией. // Материалы 67-й открытой науч-практ. конф. молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины»., 22-24 апреля 2009 г. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ. - С 123-124.

Ненашева Н.В., Матасова Н.А., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р. Образование аутоантител к эластину и эластазе у больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией. // Материалы 68-й открытой науч-практ. конф. молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины»., 13-15 сентября 2010 г. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ. - С 128-129.

Матасова Н.А., Ненашева Н.В., Кочнева Л.И., Аветисова Э.Р. Аутоиммунитет к эластину и эластазе у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией. // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXVII, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2010. с.64-65.

Матасова Н.А., Аветисова Э.Р., Парамонова О.В., Емельянова О.И., Трубенко Ю.А., Зборовская И.А. Особенности антителогенеза к эластину и эластазе у больных диффузными заболеваниями соединительной ткани в зависимости от активности воспалительного процесса. // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXVIII, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2011. с.65-66.

Размещено на Allbest.ru