Рис. 10 Спектр кругового дихроизма ДНК, выделенной из штамма E. coli в присутствии экстракта чистотела большого: 1- ДНК; 2- 10 мкл экстракта чистотела; 3- 20 мкл экстракта чистотела; 4- 30 мкл экстракта чистотела; ДE- величина оптического дихроизма

200 нм

Рис. 11 Спектр поглощения ДНК, выделенной из E.·coli в присутствии экстракта чистотела: 1 - ДНК; 2- 10 мкл экстракта чистотела; 3- 20 мкл экстракта чистотела; 4- 30 мкл экстракта чистотела; 5- 40 мкл экстракта чистотела

Взаимодействие экстракта чистотела с плазмидной ДНК, выделенной из клинического штамма

Для выделения небольших количеств плазмидной ДНК мы использовали методику Бирнбойма-Доли.

3 2 1

Рис. 12 Электрофоретический профиль плазмидных ДНК, выделенных из клеток E.·coli после обработки экстрактом чистотела: 1 - клетки без обработки экстрактом чистотела; 2- клетки после обработки экстрактом чистотела, разведенным в 10 раз; 3- клетки после обработки экстрактом чистотела без разведения

Рис. 12 иллюстрирует электрофоретические профили плазмидных ДНК, выделенных после обработки исходных бактериальных клеток экстрактом чистотела. Обращает на себя внимание уменьшение концентрации плазмидной ДНК после обработки клеток экстрактом чистотела. Алкалоиды имеют в своей структуре положительно заряженный атом азота. Возможно возникновение электростатических сил притяжения между отрицательно заряженным сахарофосфатным остовом ДНК и положительным атомом азота. Кроме положительного атома азота, алкалоиды имеют структуру плоских ароматических колец, которые, по всей видимости, могут интеркалировать в двойную спираль ДНК, изменяя структуру последней.

На основе полученных результатов, можно сделать предположение о том, что использование препаратов чистотела большого в качестве противоопухолевых средств может быть перспективным (рис. 13).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 13 Алгоритм выделения и исследования экстракта чистотела

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 15 Алгоритм использования чистотела для лечения урологических больных

Исходя из результатов проведенного исследования, нами предложен алгоритм использования экстракта чистотела для лечения больных хроническим пиелонефритом и, возможно, для уменьшения опухолевого процесса (рис. 14). Подобные рекомендации могут быть обоснованы антибактериальным и антибластомным эффектами экстракта чистотела. Вероятно, применение экстракта чистотела необходимо при тяжелых, длительно протекающих, хронических пиелонефритах с осложнениями или септическими проявлениями. Введение экстракта чистотела необходимо проводить через катетеры в мочевой пузырь или в почечную лоханку, чтобы избежать попадания и длительного контакта экстракта чистотела со здоровыми тканями.

Выводы

1. Наиболее оптимальным методом экстракции биологически активных соединений из чистотела является водная экстракция, по сравнению с использованием органических растворителей.

2. Биологически активные вещества, выделяемые из чистотела большого (Chelidonium majus), произрастающего в г. Саратове, вероятнее всего, относятся к алкалоидам, процентное содержание которых составляло примерно 1% от сухого остатка растения.

3. Присутствие алкалоида сангвинарина в экстракте чистотела большого подтверждено хроматографическими и спектральными методами исследования.

4. Обнаружено выраженное противоопухолевое действие экстракта чистотела. Установлено, что экстракт чистотела большого в разведении 1:10 от исходной концентрации вызывает уменьшение числа клеток миеломы мышей линии Sp-2X в S-фазе митоза на 45 %, а в разведениях 1:100 и 1:1000 достоверного ингибирования роста клеток миеломы в S-фазе митоза не выявлено. Определено, что изучаемый экстракт чистотела большого не оказывает токсического действия на спленоциты белых линейных мышей линии Balb-C во всех разведениях.

5. Антибактериальное действие экстракта чистотела обнаружено в концентрации 10^-3 М.

6. Биохимические показатели плазмы крови белых беспородных мышей-самцов изменялись в основном в сторону увеличения. Практически не изменялась концентрация альбуминов и общего белка плазмы крови у мышей. Выявлено, что экстракт чистотела большого вызывает дозозависимое нарушение функций печени (повышение активности АлАТ, АсАТ, ГГТ, ЩФ в плазме крови), почек (повышение содержания креатинина в плазме крови). Активность диагностического фермента лактатдегидрогеназы in vitro уменьшается в присутствии экстракта чистотела.

7. Алкалоиды чистотела взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и плазмидными ДНК, выделенными из бактериальных клеток E. coli больного пиелонефритом.

8. Предложен алгоритм использования экстракта чистотела для лечения больных хроническим пиелонефритом или циститом.

Практические рекомендации

1. Целесообразно готовить раствор экстракта чистотела с использованием воды в качестве растворителя.

2. Обнаружено, что алкалоиды сангвинарин и хелеретрин, по всей видимости, обладают выраженной биологической активностью, присущей экстракту чистотела большого.

3. Экстракт чистотела большого обладает антибактериальным, антибластомным и в меньшей степени выраженным цитотоксическим действием.

4. Раствор экстракта чистотела может применяться для лечения гнойничковых поражений кожи, хронических приелонефритов или обструктивных циститов.

5. При опухолях мочевого пузыря, возможно, наряду с другими лечебными мероприятиями применение экстракта чистотела.

6. Экстракт чистотела целесообразно применять или наружно, или вводить в организм с применением катетера для минимизации процессов повреждения активными соединениями экстракта чистотела здоровых тканей организма.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Чомаев, Х.-М.П. Спектрофотометрическое исследование алкалоида, выделенного из чистотела большого (Chelidonium maius) // «Молодые ученые - здравоохранению региона»: Тез. докл. 65-й Научно-практической конференции студентов и молодых специалистов СГМУ. Саратов, 2004. С. 104.

2. Чомаев, Х.-М.П. Спектральные характеристики сангвинарина и хелеретрина / В.Б. Бородулин, А.А. Свистунов // Успехи современного естествознания. 2004. №11. С. 104.

3. Чомаев, Х.-М.П. Противоопухолевая активность биологически активных веществ экстракта чистотела большого / Бородулин В.Б., Свистунов А.А. // Успехи современного естествознания. 2004. №11. С. 105.

4. Чомаев, Х.-М.П. Влияние экстракта чистотела большого на биохимические показатели сыворотки крови белых беспородных мышей / В.Б. Бородулин, А.А. Свистунов // Известия вузов. Северо-Кавказский регион. Естеств. науки. Приложение. 2006. №8. C. 52-54.

5. Чомаев, Х.-М.П. Исследование антибактериального, противоопухолевого и цитотоксического действия экстракта чистотела большого / В.Б. Бородулин, А.А. Свистунов // Саратовский научно-медицинский журнал. 2006. №4. С. 106-112.

6. Исследование влияния экстракта чистотела большого на биохимические показатели белых беспородных мышей-самцов / Х.-М.П. Чомаев, В.Б. Бородулин, А.А. Свистунов и др. // Саратовский научно-медицинский журнал. 2006. №4. С. 112-116.

Список сокращений

АлТ - аланинаминотрансфераза;

АсТ - аспартатаминотрансфераза;

ГГТ - г-глутамилтрансфераза;

ГЖХ - газово-жидкостная хроматография;

ДДС - додецилсульфат натрия;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

КД - круговой дихроизм;

КК - креатинкиназа;

ЛДГ - лактатдегидрогеназа;

НАД - никотинамиддинуклеотид;

НАД*Н₂ - никотинамиддинуклеотид восстановленный;

РНК - рибонуклеиновая кислота;

ТЕ - трис-ЭДТА;

Трис - тригидроксиметиламинометан;

ТСХ - тонкослойная хроматография;

ТЦБ - трис-цитратный буфер;

УФ - ультрафиолет;

ЩФ - щелочная фосфатаза;

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат.

Размещено на Allbest.ru