Сравнительный анализ поведенческих эффектов синтетических и растительных селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов при циклических колебаниях и дефиците эстрогенов

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Сравнительный анализ поведенческих эффектов синтетических и растительных селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов при циклических колебаниях и дефиците эстрогенов

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Казакова Светлана

Санкт-Петербург - 2009 г.

Работа выполнена в отделе нейрофармакологии им. С.В. Аничкова Научно-исследовательского института экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН (НИИЭМ СЗО РАМН).

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,

член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук,

профессор

Сапронов Николай Сергеевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Клименко Виктор Матвеевич

доктор медицинских наук, профессор

Шабанов Петр Дмитриевич

Ведущая организация: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. Академика И.П. Павлова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Не вызывает сомнений, что эстрогены оказывают модулирующее влияние на когнитивный и психо-эмоциональный статус. Вынужденная или естественная гипоэстрогения часто сопровождается комплексом расстройств, включая подавленное настроение, тревогу, плаксивость, депрессию. Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании пероральной контрацепции, во время предменструального синдрома, при беременности, в послеродовом климактерическом периоде. В основе патогенеза развития аффективного статуса лежит тесная взаимосвязь между гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой и нейромедиаторными системами головного мозга. Эстрогены оказывают модулирующее действие на холинергическую, дофаминергическую, серотонинергическую системы, способствуя развитию антиамнестического, антидепрессивного, анксиолитического эффектов. Кроме того, Bruse McEwen (1999, 2002) в условиях доклинических исследований продемонстрировал зависимость между синаптогенезом в нейронах гиппокампа и колебанием уровня эстрадиола в крови в течение эстрального цикла у крыс, что свидетельствует о нейропротективном действии эстрогенов. В настоящее время для купирования менопаузальных симптомов, для лечения пациенток после гистерэктомии, а также в качестве пероральной контрацепции широко используется заместительная гормональная терапия (ЗГТ). Однако применение ЗГТ связано с риском развития масталгии (болезненность молочных желез), пролиферации тканей молочной железы и эндометрия, что провоцирует развитие опухолей, маточного кровотечения, а длительное использование гормональной терапии может привести к венозной тромбоэмболии и патологическим изменениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах (Сапронов, Федотова, 2009). Поэтому возникает необходимость поиска новых лекарственных препаратов для коррекции психоэмоционального статуса в условиях естественного или вынужденного дисбаланса эстрогенов. Альтернативой ЗГТ выступает класс фармакологически активных веществ - селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (СЭРМ), - проявляющие избирательную активность в эстроген-чувствительных тканях, в том числе в ЦНС. СЭРМ это соединения, которые, в отличие от «чистых» агонистов и антагонистов эстрогенов, способны проявлять селективную избирательность к эстрогеновым рецепторам. Пока остается неясным, по какому механизму СЭРМы реализуют агонист/антагонистические эффекты в эстроген - чувствительных тканях. Однако наиболее вероятны 3 механизма действия: различной экспрессией рецептора эстрогена в ткани-мишени; разной конформацией эстрогенового рецептора и чувствительного к нему лиганда; различной экспрессией и образованием корегуляторных белков на рецепторе эстрогенов. Существуют противоречивые сведения и об эффектах СЭРМ на поведенческие процессы, аффективный статус. Очень мало исследований анализируют роль СЭРМов в формировании гормонального статуса при их длительном применении. Таким образом, особую актуальность представляет вопрос о взаимодействии гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы и нейромедиаторных систем головного мозга, участвующих в формировании эмоционального поведения и когнитивного статуса, на фоне хронического введения СЭРМ синтетического и растительного происхождения при циклических колебаниях половых гормонов и при дефиците эстрогенов.

Целью настоящей работы являлся сравнительный анализ эффектов агонистов\антагонистов эстрогеновых рецепторов, введенных изолированно или в комбинации с 17б-Э2 и с 17в-Э2, на депрессивноподобное и тревожное поведение у самок крыс, а также определение их гормонального статуса при естественном колебании эстрогенов в крови и в условиях экспериментального дефицита эстрогенов.

В задачи исследования входило:

1. Выяснить участие б- и в-эстрогеновых рецепторов (ЭР) в механизмах развития депрессии и тревожных расстройств при экспериментальном дефиците эстрогенов;

2. Изучить возможность применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов для коррекции аффективных состояний при вынужденном или естественном дефиците эстрогенов;

3. В эксперименте на животных оценить перспективность сочетанного применения СЭРМ в комбинации с высокочувствительным лигандом к б-ЭР - 17б-Э2, или в комбинации с лигандом к в-ЭР - 17в-Э2 в терапии депрессивных и тревожных состояний в условиях овариоэктомии;

4. Провести сравнительный анализ поведенческих эффектов 17б- и 17в-Э2, а также синтетических (тамоксифен) и растительных (экстракт цимицифуги, генистейн) модуляторов ЭР при дисбалансе половых гормонов.

Научная новизна. Впервые показано влияние ряда СЭРМ (тамоксифен, генистейн, климадинон) на аффективное поведение и гормональный статус при естественных колебаниях эстрогенов, а также в условиях экспериментального дефицита у самок крыс. Продемонстрированы разнонаправленные эффекты исследуемых препаратов и заместительной терапии 17б- и 17в-Э2 на депрессивное поведение и уровень тревожности у интактных и ОЭ самок крыс. Показано, что тамоксифен, генистейн и климадинон изолированно и в сочетании с 17б- и 17в-Э2 способны модулировать аффективный статус и баланс половых гормонов у животных. Установлено, что эффекты изолированного и сочетанного применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов различаются у ОЭ крыс и интактных самок.

Научно-практическое значение работы. Полученные результаты расширяют представления об участии половых гормонов в патогенезе депрессии и тревожных расстройств. Кроме того, показана корреляция между степенью вовлечения б- и в-ЭР, их физиологической активностью, а также уровнем циркулирующих в крови экзогенных и эндогенных лигандов к этим рецепторам и тревожно-депрессивным состоянием у грызунов. Результаты работы могут быть использованы для разработки схем лечения аффективного состояния при дисбалансе и дефиците половых гормонов у пациенток. Показана перспективность применения СЭРМ в комбинации с эстрогенами для лечения психоэмоциональных расстройств на фоне различных патологий репродуктивной системы.

Основные положения, выносимые на защиту: Естественные колебания эстрогенов на протяжении эстрального цикла у крыс сопровождаются изменением уровня тревожности и депрессивноподобного состояния. Как высокое содержание эстрогенов, так и низкое приводит к развитию тревожно-депрессивного состояния у грызунов. Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов вовлекаются в формирование психо-эмоционального статуса. Экспериментальная овариоэктомия у крыс сопровождается нарушением аффективного статуса, что выражается изменениями в различных поведенческих тестах. Депрессивные и тревожные нарушения у ОЭ животных лишь частично снижаются на фоне заместительной терапии 17в-Э2. Применение 17в-Э2 и/или 17б-Э2 в комплексе с тамоксифеном, генистейном или климадиноном повышает эффективность антидепрессантной и анксиолитической терапии при дефиците эстрогенов. Важную роль при этом играет формирование гормонального статуса на фоне указанных комбинаций препаратов.

Личный вклад соискателя. Соискателем написан обзор литературы, спланированы и выполнены эксперименты, статистическая обработка и анализ полученных результатов, а также подготовлены основные публикации по теме работы.

Апробация работы. Результаты были доложены и обсуждались на 2-ой Российско-китайской научной конференции «Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике» (Пермь, 2006), 1-й конференции Российской ассоциации психонейроэндокринологии (2008), на научных заседаниях отдела нейрофармакологии (2008, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 3 статьи в рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах, иллюстрирована 22 рисунками и 18 таблицами, включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, изложение результатов их обсуждение, а также заключение, выводы, список цитированной литературы, из которых 36 отечественных и 95 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 740 самках крыс линии Вистар, массой 180-200 г (возраст 4-5 месяцев), полученных из питомника РАМН “Рапполово”. Животных содержали в стандартных условиях освещения и пищевого режима. Операцию тотальной овариоэктомии, взятие влагалищных мазков и поведенческие тесты проводили не ранее, чем через 7 дней после поступления из питомника.

Овариоэктомию осуществляли с соблюдением правил асептики. Методические особенности и детали операции подробно изложены у Я. Д. Киршенблата (1969). Отсутствие эстрального цикла у самок подтверждали анализом влагалищных мазков в течение 4-х дней до начала эксперимента.

Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок. Для анализа влияния разного уровня эндогенных эстрогенов определяли 4 фазы полового цикла: диэструс, проэструс, эструс и метэструс. Определение стадии полового цикла у интактных крыс проводили с использованием характерных морфологических признаков по мазкам согласно описанию у Я. Д. Киршенблата (1969).

Депрессивноподобное поведение изучали в тесте Порсолта. Животное помещали в стеклянный цилиндр (23/50 см), заполненный на две трети водой с температурой 25° на 15 минут, затем извлекали из цилиндра и обсушивали в течение 1 часа. Через 24 часа животное повторно опускали в воду. Депрессивноподобное состояние оценивали по длительности иммобильности в течение 5 минут. Под иммобильностью понимали полное отсутствие плавательных движений при пассивном удержании животного на воде (Porsolt et al., 1978). Уровень тревожности оценивали в «приподнятом крестообразном лабиринте», состоящем из двух «открытых» и двух «закрытых» рукавов. Животное помещали в центр лабинринта и регистрировали общее время пребывания и число заходов в открытые и закрытые рукава в течение 5 минут (File,1996; Калуев, 1998; Себенцова и др., 2005). Эмоциональную реактивность, двигательную и исследовательскую активность животных изучали в тесте «открытое поле» в течение 3 минут (Петров и др., 1982; Калуев, 2002). Тестирование проводили в 9.00 - 12.00 часов). Концентрацию ЛГ, ФСГ, Э2 и П в сыворотке крови крыс определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов для ИФА. Оптическую плотность измеряли при 450 нм с помощью анализатора иммуноферментных реакций АИФР-01 (ПИКОН, Россия). Перед началом исследования проводили раститровку наборов с подбором оптимального разведения сыворотки крови, концентрацию антигена в исследуемых образцах рассчитывали на основании калибровочного графика.

В работе использовали СЭРМы синтетического и растительного происхождения: тамоксифен - синтетического происхождения, (Орион, Финляндия) вводили в дозе 10 мг/кг, внутрибрюшинно; генистейн («Sigma», Германия) - препарат растительного происхождения, относится к классу изофлавоноидов, получен из соевых бобов, вводили в дозе 1 мг/кг, внутрибрюшинно; климадинон (Bionorica, Германия) - лекарственный препарат, представляющий собой экстракт цимицифуги, вводили в дозе 20 мг/кг, внутрибрюшинно. Фармакологические вещества вводили в объеме 0,1 мл на животное ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели после овариоэктомии. Необходимо отметить, что СЭРМы были использованы в поведенческих дозах, соответствующих данным литературы (Dhandapani, 2002; Diez-Perez, 2006). 17б- и 17в-эстрадиол растворяли в стерильном персиковом масле и вводили внутримышечно в дозе 0,5 мкг на каждое животное. В данном исследовании были использованы низкие дозы эстрадиолов (Wise, 2000). Контрольные животные получали физиологический раствор.

Все интактные и ОЭ животные были разделены на следующие группы по 18-20 особей в каждой: 1-я - интактные крысы, получавшие физиологический раствор на протяжении всего эксперимента (контроль 1); 2-я - интактные крысы, которым вводили 17б-Э2; 3-я - интактные самки, получавшие 17в-Э2; 4-я группа - интактные крысы, которым вводили тамоксифен; 5-я - интактные крысы, которым вводили генистейн; 6-я - интактные самки, получавшие климадинон; 7-я - ОЭ самки, получавшие масляный растворитель в эквивалентном объеме внутримышечно (контроль 2); 8-я группа - ОЭ самки, получавшие 17в-Э2; 9-я группа - ОЭ самки, получавшие 17б-Э2; 10-я группа - ОЭ крысы, которым вводили тамоксифен; 11-я группа - ОЭ самки, получавшие тамоксифен и 17в-Э2; 12-я группа - ОЭ самки, которым вводили тамоксифен и 17б-Э2; 13-я группа - ОЭ самки, получавшие генистейн; 14-я группа - ОЭ крысы, получавшие в комбинации генистейн и 17в-Э2; 15-я группа - ОЭ самки, которым вводили генистейн и 17б-Э2; 16-я группа - ОЭ животные, получавшие климадинон; 17-я группа - ОЭ крысы, которым вводили климадинон и 17в-Э2; 18-я группа - ОЭ самки, получавшие климадинон и 17б-Э2. Все интактные самки перед началом эксперимента внутри каждой группы были разделены по фазам цикла таким образом, что в каждой стадии эстрального цикла находилось 4 - 5 животных. Поведенческие тесты проводили через 1 час после последнего введения указанных препаратов. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакетов прикладных программ ‹‹SPSS 12.0 for Windows›› и ‹‹STATISTICA 6.0›› с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA; post-hoc: Fisher's LSD test) и U-критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney U) (Беленький, 1959; Платонов, 2000). Различия между значениями считали статистически значимыми при p < 0,05. Все значения были представлены в виде M ± S.E.M., где M - среднее арифметическое, S.E.M. - стандартная ошибка среднего арифметического (Standart Error Means).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Влияние эстрального цикла и гормональной терапии 17в- или 17б-эстрадиолом на аффективное поведение интактных самок крыс

Как показало исследование, показатели аффективного статуса в зависимости от фазы цикла. Депрессивное поведение проявляется в стадии ди - и проэструса и ослабляется в фазах эструса и метэструса. Наряду с депрессивным поведением уровень тревожности в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» наиболее высок в фазе проэструса и эструса. В тесте «открытое поле» показатели вегетативного стресса (груминг, дефекация) существенно не менялись на протяжении всего цикла (табл. 2). 17б-Э2 и 17в-Э2 (нарушал фазность цикла, все животные находились в эструсе) значительно повышали депрессивное поведение у крыс по сравнению с контролем 1 (рис. 1). В тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» анксиолитическая активность 17в-Э2 проявлялась в увеличении числа заходов в открытые рукава. В то же время, введение 17б-Э2 приводило к резкому снижению числа заходов в открытые рукава и сопровождалось реакцией замирания (поведенческий показатель, свидетельствующий о высоком уровне тревожности у животных) в фазах проэструса и эструса. Анксиолитический эффект 17б-Э2 проявлял в стадии диэструса и метэструса (табл.1). В тесте «открытое поле» 17б-Э2 и 17в-Э2 не оказывали влияния на пространственно-ориентировочную активность (табл. 2). Таким образом, циклические колебания половых гормонов в крови интактных крыс сопровождаются изменением аффективного статуса. Хроническое введение 17б-Э2 или 17в-Э2 приводило к изменению поведенческих реакций, регистрируемых в тесте Порсолта, «приподнятом крестообразном лабиринте» и открытое поле». Длительное введение 17в-Э2 сопровождается развитием анксиолитического эффекта у интактных самок (эструс). Хроническое введение 17б-Э2 интактным животным приводило к развитию анксиолитического действия в фазах диэструса и метэструса. В стадиях проэструса и эструса 17б-Э2 проявлял анксиогенные свойства.

Аффективный статус самок в условиях хронического введения СЭРМ

Влияние тамоксифена на аффективный статус интактных самок

Из рисунка 1 видно, что время неподвижности интактных крыс, получавших тамоксифен, достоверно снижалось в фазы диэструса и метэструса по сравнению с контролем 1 и группой самок, получавших 17б-Э2. В стадию проэструса тамоксифен повышал продолжительность иммобильности по сравнению с контролем 1 и группой крыс, получавших 17б-Э2. Кроме того, тамоксифен нарушал фазность цикла и на 7-10 день введения препарата стадия эструса у крыс отсутствовала. Таким образом, при среднем уровне эстрогенов в крови в стадии диэструса и метэструса тамоксифен оказывал антидепрессивное действие. При высоком содержании эстрогенов в крови в фазу проэструса данный препарат проявлял депрессогенный эффект.

Рис. 1. Влияние тамоксифена на депрессивноподобное поведение интактных самок крыс в тесте Порсолта.

Группы животных: 1 - интактные (контроль 1); 2 - получавшие 17в-Э2; 3 - получавшие 17б-Э2; 4 - получавшие тамоксифен; * - различия между фазами полового цикла достоверны при р < 0,05; # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1.

Как видно из таблицы 1, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются значительными изменениями аффективного поведения. Так, в фазу диэструса при естественном среднем уровне эстрогенов в крови животных хроническое введение препарата вызывает анксиогенное действие, что выражается в преобладании фризинга. Однако при наиболее высоком уровне секреции эстрадиола в стадию проэструса тамоксифен проявляет анксиолитический эффект. В тесте «открытое поле» тамоксифен выраженно угнетает эмоциональный компонент поведения. Вместе с тем, в фазу метэструса при постепенном снижении уровня эндогенного эстрадиола тамоксифен не влияет на аффективное поведение животных. Таким образом, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются значительными изменениями аффективного поведения.

Влияние генистейна на аффективный статус интактных самок

Хроническое введение генистейна интактным крысам (рис. 2) достоверно снижало время иммобильности в стадиях диэструса, проэструса и метэструса по сравнению с контрольными животными и группой самок, которые получали 17б-Э2. В стадию эструса данный показатель на фоне генистейна не изменялся по сравнению с контролем 1, но был меньше по сравнению с группами животных, получавших 17б-Э2 или 17в-Э2. Таким образом, генистейн оказывал ярко выраженный антидепрессивный эффект в фазах диэструса, проэструса и метэструса и не влиял на степень депрессии в стадию эструса. Результаты исследований показали, что генистейн не влиял на тревожное поведение самок крыс, которые находились в стадии диэструса, а также не оказывал влияния на параметры поведения в условиях «открытого поля» (табл. 1, 2). Хроническое введение генистейна снижало уровень тревожности у животных в фазу проэструса, о чем свидетельствует увеличение числа заходов в «открытые» и «закрытые» рукава и числа «обследованных» норок, а также снижение эмоциональности крыс в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле». В фазу эструса препарат проявлял анксиолитическое действие, что подтверждается увеличением времени нахождения крыс в «открытых» рукавах

Таблица 1

Влияние эстрального цикла 17б- и 17в-эстрадиола, СЭРМ на поведение интактных самок крыс в «приподнятом крестообразном лабиринте»

Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при p < 0,05 по сравнению с фазой диэструса; # - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с контролем 1 в соответствующей фазе; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17б-эстрадиол; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17в-эстрадиол.

лабиринта, повышением исследовательского поведения и снижением эмоциональности в условиях «открытого поля». У крыс в стадию метэструса генистейн повышал время и число заходов в «открытые» рукава. Эти данные коррелировали со снижением эмоционального компонента в тесте «открытое поле», что указывает на анксиолитический профиль препарата у интактных самок в данной фазе.

Таблица 2

Влияние эстрального цикла, 17б- и 17в-эстрадиола и СЭРМ на поведение интактных самок крыс в тесте «открытое поле» в течение 180 сек

Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при p < 0,05 по сравнению с фазой диэструса, # - различия достоверны при <0,05 по сравнению с контролем 1; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17б-эстрадиол; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17в-Э2.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Таким образом, можно утверждать, что генистейн проявлял анксиолитическое действие независимо от уровня эндогенных эстрогенов в крови у животных.

Влияние климадинона на аффективный статус интактных самок

В фазах физиологического покоя (диэструс и метэструс), которые характеризуются средним уровнем эндогенных эстрогенов в крови, климадинон проявляет ярко выраженное антидепрессивное действие. Однако при высоком (проэструс) и низком (эструс) уровне данный препарат не оказывает существенного влияния на депрессивноподобное поведение (рис. 3).

В условиях «приподнятого крестообразного лабиринта» климадинон в стадии диэструса проявлял анксиогенное действие, так как у животных наблюдалась реакция замирания и снижалось число заходов в открытые и закрытые рукава (табл. 1). Однако результаты, полученные в «приподнятом крестообразном лабиринте», не коррелировали с полученными показателями в тесте «открытое поле». В «открытом поле» у животных в 2 раза повышалось исследовательское поведение и было снижено количество болюсов дефекации (показатели анксиолитичности) (табл. 2).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Однако, в стадию проэструса климадинон оказывал ярко выраженный анксиолитический эффект, о чем говорит значительное увеличение числа заходов в открытые и закрытые рукава в лабиринте и угнетение эмоциональности при тестировании крыс в «открытом поле». В стадию эструса климадинон снижал уровень тревожности, отмечалось увеличение времени пребывания и числа заходов в открытые рукава лабиринта, что коррелировало с угнетением эмоционального компонента в тесте «открытое поле». Хроническое введение климадинона не влияло на аффективное поведение грызунов в стадию метэструса. Таким образом, хроническое введение климадинона приводило к разнонаправленным эффектам в фазу диэструса. В фазы проэструса и эструса климадинон оказывал анксиолитическое действие, при этом в стадию проэструса указанный препарат приводил к более выраженному анксиолитическому эффекту. Однако введение климадинона не оказывало влияния на уровень тревожности грызунов в стадии метэструса.

Аффективное поведение самок крыс в условиях дефицита эстрогенов и заместительной терапии 17- или 17-эстрадиола

Овариоэктомия у самок крыс резко повышала продолжительность иммобильности в тесте Порсолта по сравнению с контролем 1 (диэструс). Время неподвижности у ОЭ самок крыс составляло 233,0 ± 2,6 сек, p < 0,05, в то время как у интактных крыс - 122,0 ± 1,9 сек, p < 0,05 (рис. 4). Хроническое введение 17в-Э2 ОЭ самкам приводило к снижению продолжительности иммобильности по сравнению с ОЭ крысами, получавшими масляный растворитель (контроль 2), но данный показатель был выше, чем в контроле 1 (рис. 4). Несмотря на отсутствие достоверных изменений времени неподвижности у ОЭ самок, которым вводили 17б-Э2, по сравнению с контролем 2, тем не менее, наблюдалась тенденция к снижению продолжительности иммобильности у этих животных по сравнению с ОЭ самками.

Овариоэктомия у самок крыс приводила к снижению времени пребывания в открытых рукавах лабиринта в 2 раза и уменьшению числа заходов в них по сравнению с контролем 1 (табл. 3). Овариоэктомия у самок крыс сопровождалась незначительным повышением исследовательской активности и снижением грумингового компонента по сравнению с интактными животными (табл. 4). Таким образом, искусственный дефицит эстрогенов выраженно повышает степень депрессии и уровень тревожности у животных, что говорит о депрессогенном и анксиогенном действии гипоэстрогении, не изменяя при этом ориентировочно-исследовательскую активность грызунов.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Хроническое введение 17в-Э2 в 2 раза повышало время нахождения ОЭ животных в открытых рукавах лабиринта по сравнению с контролем 2, при этом данный показатель не отличался по сравнению с контролем 1. Число заходов в открытые и закрытые рукава не отличалось от тех же показателей в группе ОЭ крыс (табл. 3). Общее время пребывания в открытых рукавах лабиринта ОЭ самок, получавших 17б-Э2, также повышалось в 2 раза по сравнению с ОЭ самками. Число заходов в открытые и закрытые рукава грызунов при этом выраженно повышалось по сравнению с контролями 1 и 2 (табл. 3). Время нахождения в открытых рукавах, число заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта у ОЭ крыс, получавших 17б-Э2, было выше по сравнению с ОЭ самками из группы, которым вводили 17в-Э2 (табл. 3). В тесте «открытое поле» 17в-Э2 у ОЭ крыс в 1,8 раза понижал горизонтальную двигательную активность, а также представленность груминга по сравнению с контрольными ОЭ крысами (табл. 4). ОЭ самки, получавшие 17б-Э2 характеризовались повышением исследовательской активности и увеличением уровня эмоционального компонента по сравнению с ОЭ животными. Число «обследованных» норок, количество болюсов и исследовательское поведение у ОЭ животных, которым вводили 17б-Э2, было выше по сравнению с ОЭ крысами, получавшими 17в-Э2. селективный модулятор эстроген расстройство

Таким образом, 17в-Э2 проявлял антидепрессивный и анксиолитический эффекты при дефиците эстрогенов, но при этом полностью не восстанавливал паттерн поведения до уровня интактных самок крыс. Хроническое введение 17б-Э2 не оказывало существенного влияния на время неподвижности ОЭ животных в тесте Порсолта, что свидетельствует об отсутствии антидепрессивного действия этого препарата. При этом, в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле» 17б-Э2 оказывал умеренное анксиолитическое действие, что выражалось увеличением числа заходов в открытые «рукава» в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт», и повышением исследовательской активности в «открытом поле». Анализ поведенческих эффектов 17в-Э2 и 17б-Э2 в условиях ОЭ показал, что 17в-Э2 проявлял антидепрессивный и анксиолитический эффекты более выраженно, чем 17б-Э2. Ряд авторов в своих исследованиях также демонстрировали положительные эффекты 17в-Э2 при аффективных расстройствах и отсутствие эффектов 17б-Э2 на психо-эмоциональный статус (Trent et al., 2005; Touxefis et al., 2006).

Эффекты СЭРМ на поведенческие реакции ОЭ самок крыс

Влияние тамоксифена на поведение ОЭ самок крыс

Хроническое введение тамоксифена ОЭ самкам уменьшало время неподвижности по сравнению с контролем 2 и группой крыс, которым вводили 17б-Э2. В то же время, данный показатель был выше, чем в контроле 1 и в группе крыс, которым вводили 17в-Э2 (рис. 5). Полученные результаты свидетельствуют об умеренном антидепрессивном эффекте тамоксифена при дефиците эстрогенов.

Однако тамоксифен оказывал менее выраженное антидепрессивное действие, чем гормональная терапия 17в-Э2. При этом, селективный модулятор эстрогеновых рецепторов не восстанавливал аффективный статус до уровня интактных крыс. Введение тамоксифена ОЭ самкам на фоне 17б-Э2 или 17в-Э2 (особенно) сопровождалось еще более выраженным снижением времени неподвижности в тесте Порсолта у крыс этой группы. Выполненная серия экспериментов показала, что тамоксифен снижал уровень тревожности у ОЭ крыс до уровня контрольных интактных самок, которые находились в фазе покоя. В «тесте приподнятый крестообразный лабиринт» крысы, получавшие тамоксифен, характеризовались увеличением времени нахождения и повышением в 2 раза числа заходов в открытые рукава лабиринта по сравнению с контролем 2, и эти показатели не отличались от таковых в контроле 1 (табл. 3). Приведенные результаты коррелировали с данными, полученными в тесте «открытое поле» (табл 4).

Таблица 3

Влияние ОЭ, хронического введения 17б- и 17в-эстрадиола и СЭРМ на поведение крыс в «приподнятом крестообразном лабиринте» при дефиците эстрогенов

Примечание: * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1, & - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 2, # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17в-эстрадиол, $ - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17б-эстрадиол; € - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших генистейн; - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших климадинон.

Сравнивая эффекты совместного введения указанных препаратов и изолированного введения тамоксифена на тревожное поведение ОЭ самок, можно отметить, что 17б-Э2 и тамоксифен, введенные в комбинации, в 3 раза повышали число заходов в открытые и закрытые «рукава», не влияя на время нахождения грызунов в этих «рукавах», что коррелировало с высокой норковой активностью и снижением числа болюсов дефекации у грызунов в тесте «открытое поле». Сочетанное введение тамоксифена и 17в-Э2 уменьшало время нахождения и число заходов в открытые «рукава» лабиринта, снижало специфическую норковую активность и увеличивало число актов дефекации в тесте «открытое поле» по сравнению с изолированным введением тамоксифена.

Таблица 4

Влияние ОЭ, хронического введения 17б- и 17в-эстрадиола и СЭРМ на поведение ОЭ крыс-самок в тесте «открытое поле» в течение 180 сек

Примечание: # - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с контролем 1; * - различия достоверны при p< 0,05 по сравнению с контролем 2; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17в-эстрадиол; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17б-эстрадиол, - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших генистейн.

Таким образом, в условиях дефицита эстрогенов наиболее выраженное анксиолитическое действие оказывало введение тамоксифена одного или в комбинации с 17б-Э2. Совместное введение 17в-Э2 и тамоксифена не оказывало существенного влияния на тревожное поведение ОЭ самок по сравнению с изолированным введением 17в-Э2. Все показатели тревожности, зарегистрированные в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле» при комбинированном введении препаратов, не отличались от таковых в группе крыс, получавших только 17в-Э2, что свидетельствует о нивелировании поведенческих эффектов тамоксифена при совместном введении этих препаратов на фоне дефицита эстрогенов у животных.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Влияние генистейна на поведение ОЭ самок крыс

Как видно из рисунка 6, изолированное введение генистейна, особенно, и комбинация генистейна с 17в-Э2 сопровождались резким снижением времени неподвижности, что свидетельствует о ярко выраженном их антидепрессивном действии. Комбинированное введение генистейна и 17б-Э2 также уменьшало продолжительность иммобильности по сравнению с контролями 1, 2 и изолированным введением 17б-Э2 ОЭ животным, но в меньшей степени, чем вышеуказанные препараты, что говорит об умеренном антидепрессивном действии данной комбинации препаратов. В тестах «приподнятый крестообразный лабринт» и «открытое поле» (Табл. 3 и 4) было установлено, что генистейн выраженно снижал уровень тревожности в условиях дефицита эстрогенов. ОЭ самки крыс, которым вводили генистейн, характеризовались увеличением в 4,2 раза времени пребывания в открытых рукавах лабиринта, повышением в 12 раз числа заходов в них по сравнению с контрольными ОЭ крысами, которые получали масляный растворитель. Показатели, полученные в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт», коррелировали с результатами в тесте «открытое поле». Так, у ОЭ крыс, получавших генистейн, значительно возрастала норковая активность и было угнетено эмоциональное поведение (груминг, дефекация).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Проведя сравнительный анализ поведенческих реакций ОЭ самок крыс, получавших 17б-Э2 или 17в-Э2, необходимо отметить, что генистейн проявлял более выраженное анксиолитическое действие, чем вышеуказанные препараты, о чем говорит увеличение времени пребывания и числа заходов в открытые рукава лабиринта и угнетение эмоциональности в тесте «открытое поле». Введение генистейна в сочетании с 17б-Э2 ОЭ самкам крыс повышало время пребывания и число заходов в открытые рукава лабиринта по сравнению с контролем 2. По сравнению с контролем 1 генистейн и 17б-Э2 незначительно увеличивали время нахождения в открытых рукавах лабиринта и повышали число заходов в эти рукава. Полученные результаты свидетельствуют о снижении степени тревожности у ОЭ самок, что коррелирует с повышением норковой активности грызунов в тесте «открытое поле». Однако комбинация генистейна с 17б-Э2 повышала эмоциональную реактивность у грызунов, что выражалось увеличением груминга и числа дефекаций по сравнению с контролями 1 и 2. Сравнивая эффекты совместного введения генистейна в сочетании с 17б-Э2 и изолированного введения генистейна в условиях дефицита эстрогенов, можно отметить, что более выраженное анксиолитическое действие оказывала монотерапия генистейном, что выражалось увеличением времени нахождения в открытых рукавах лабиринта и снижением эмоциональности в тесте «открытое поле». При сравнении влияния на тревожное поведение комбинированного введения генистейна с 17б-Э2 и изолированного введения 17б-Э2 достоверных изменений зарегистрировано не было. Совместное введение генистейна и 17в-Э2 снижало степень тревожности у ОЭ самок, о чем свидетельствует увеличение времени нахождения и числа заходов в открытые рукава лабиринта, а также отсутствие дефекаций в «открытом поле» по сравнению с контролем 2. При сравнении хронического введения указанных препаратов с контролем 1 отмечено повышение времени нахождения в открытых рукавах лабиринта, числа заходов в них, увеличение норковой активности и угнетение актов дефекации.

Таким образом, исследование показало, что наиболее отчетливое анксиолитическое действие в условиях ОЭ оказывает изолированное введение генистейна. Вместе с тем, очевидно, что 17б-Э2 и 17в-Э2 не восстанавливали аффективный статус при дефиците эстрогенов, в то время как введенные в комбинации с генистейном указанные препараты снижали тревожное поведение до уровня интактных.

Влияние климадинона на поведение ОЭ самок крыс

У ОЭ самок крыс на фоне введения климадинона уменьшалось время неподвижности по сравнению с контролем 2 и группой крыс, которым вводили 17б-Э2 или 17в-Э2; данный показатель был таким же, как в контроле 1 (Рис. 7), что свидетельствует об антидепрессивном эффекте климадинона в условиях дефицита эстрогенов. Климадинон на фоне 17б-Э2 или 17в-Э2 также оказывал антидепрессивное действие по сравнению с контролем 2 и терапией 17б-Э2 или 17в-Э2. Однако такое сочетание препаратов сопровождалось менее выраженным снижением времени неподвижности в тесте Порсолта по сравнению с изолированным введением климадинона. Тем не менее, комбинации климадинона с 17б-Э2 или 17в-Э2 восстанавливали аффективный статус до уровня интактных крыс. При тестировании ОЭ самок в «приподнятом крестообразном лабиринте» и «открытом поле» климадинон проявлял анксиолитические свойства, вызывая увеличение времени нахождения в открытых рукавах по сравнению с контрольными ОЭ крысами, и достигал значений, наблюдаемых у интактных самок (табл. 3). Эти данные коррелировали со значительным увеличением исследовательской активности в тесте «открытое поле» (табл. 4). По сравнению с введением 17в-Э2, климадинон более выраженно проявлял анксиолитические свойства, повышая время нахождения в открытых рукавах лабиринта и исследовательское поведение в тесте «открытое поле». Сравнивая анксиолитические свойства 17б-Э2 и климадинона в условиях ОЭ, можно отметить, что время пребывания и число заходов (особенно) в открытые рукава лабиринта были выше у крыс, получавших один 17б-Э2, что свидетельствует о более выраженном противотревожном действии указанного препарата, чем у климадинона. Однако, эти результаты не подтвердились в тесте «открытое поле».

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

При тестировании ОЭ самок в «приподнятом крестообразном лабиринте» и «открытом поле» климадинон проявлял анксиолитические свойства, вызывая увеличение времени нахождения в открытых рукавах по сравнению с контрольными ОЭ крысами, и достигал значений, наблюдаемых у интактных самок (табл. 3). Эти данные коррелировали со значительным увеличением исследовательской активности в тесте «открытое поле» (табл. 4). По сравнению с введением 17в-Э2, климадинон более выраженно проявлял анксиолитические свойства, повышая время нахождения в открытых рукавах лабиринта и исследовательское поведение в тесте «открытое поле». Сравнивая анксиолитические свойства 17б-Э2 и климадинона в условиях ОЭ, можно отметить, что время пребывания и число заходов (особенно) в открытые рукава лабиринта были выше у крыс, получавших один 17б-Э2, что свидетельствует о более выраженном противотревожном действии указанного препарата, чем у климадинона. Однако, эти результаты не подтвердились в тесте «открытое поле». Совместное введение климадинона с 17в-Э2 оказывало анксиолитическое действие в условиях ОЭ. При сравнении с изолированным введением климадинона или 17в-Э2, совместное введение климадинона с 17в-Э2 повышало время нахождения в открытых рукавах лабиринта и число заходов в эти рукава. Однако в условиях «открытого поля» были получены разнонаправленные данные, не подтверждающие результаты исследований в «приподнятом крестообразном лабиринте». Сочетанное введение климадинона с 17б-Э2 ОЭ самкам крыс оказывало умеренный анксиолитический эффект в условиях «приподнятого крестообразного лабиринта» по сравнению с контрольными ОЭ крысами, о чем говорит повышение числа заходов в открытые рукава лабиринта. Однако, в условиях «открытого поля» у ОЭ самок, получавших климадинон в комбинации с 17б-Э2, норковая активность была снижена, а эмоциональная реактивность повышалась по сравнению с контролем 2, что свидетельствует о высокой стрессированности животных. Сравнивая выраженность анксиолитического действия комбинированного введения климадинона с 17б-Э2 и изолированным введением 17б-Э2, можно сделать заключение, что 17б-Э2 эффективнее снижал уровень тревожности, о чем свидетельствуют более высокие показатели анксиолитичности, полученные в поведенческих тестах, чем в группе ОЭ крыс, которым вводили 17б-Э2 в сочетании с климадиноном. По сравнению с изолированным введением климадинона, совместное введение климадинона и 17б-Э2 ОЭ крысам оказывало разнонаправленное действие на уровень тревожности в условиях «приподнятого крестообразного лабиринта» и «открытого поля». Так, климадинон в сочетании с 17б-Э2 снижали время нахождения в открытых рукавах лабиринта и число «обследованных» норок по сравнению с изолированным введением климадинона. При этом, число заходов в открытые рукава было выше при комбинированном введении указанных препаратов, а эмоциональная реактивность у грызунов в обеих группах была одинаковой.

Влияние тамоксифена на концентрацию половых гормонов в сыворотке крови самок крыс в условиях дефицита эстрогенов

Хроническое введение тамоксифена ОЭ самкам крыс снижало содержание тропных гормонов в крови по сравнению с контролем 2 и с группой крыс, получавших 17б-Э2 или 17в-Э2. При этом уровень ФСГ не отличался, а содержание ЛГ уменьшалось по сравнению с контролем 1. Концентрация периферических гормонов на фоне введения тамоксифена ОЭ самкам крыс уменьшалась по сравнению с контролем 1, 2 и группой ОЭ животных, которым вводили 17б-Э2 или 17в-Э2 (Рис. 8). Хроническое введение тамоксифена в комбинации с 17б-Э2 ОЭ крысам не приводило к изменению уровня ФСГ в крови по сравнению с изолированным введением тамоксифена или 17б-Э2, но было значительно ниже, чем в контроле 2. Концентрация ЛГ на фоне введения указанных препаратов ОЭ самкам снижалась по сравнению с контролем 2 и тем же показателем в группе ОЭ самок, получавших только 17б-Э2. В то же время, тамоксифен, вводимый с 17б-Э2, повышал у ОЭ животных концентрацию ЛГ по сравнению с изолированным введением тамоксифена и контролем 1. Содержание Э в крови п...