Основы деятельности провизора

Вирус герпеса человека 3 типа (ВГЧ-Ш, варицелла-зостер) вызывает два варианта заболевания - это ветряная оспа и заболевание, наблюдаемое при активации латентной инфекции: опоясывающий лишай (герпес зостер).

Вирус герпеса человека 4 типа (ВГЧ-IV) или вирус Эпштейна - Барр является этиологичеким фактором инфекционного мононуклеоза, как заболевания, ассоциированного с первичной инфекцией. При активации латентной инфекции отмечается лимфома Беркитта, назофарингеальная карцинома, волосистая лейкоплакия языка.

Вирус герпеса человека 5 типа (ВГЧ-V) - возбудитель цитомегаловирусной инфекции (ЦМВ) вызывает заболевания, ассоциированные с первичной инфекцией: первичная ЦМВ-инфекция, врожденная ЦМВ-инфекция. При активации латентной инфекции отмечается хроническая ЦМВ-инфекция у иммунокомпетентных лиц; острая ЦМВ-инфекция у иммунодефицитных лиц; ретинит, колит, энцефалит (при пересадке органов и СПИДе).

Вирус герпеса человека б типа (ВГЧ-VI) вызывает заболевания, ассоциированные с первичной инфекцией, как экзантема новорожденных. При активации латентной инфекции - системное заболевание при пересадке органов. В современной литературе имеются данные, косвенно указывающие на вероятность участия ВГЧ-VI в развитии лимфогранулематоза, злокачественной клеточной лимфомы, саркоидоза, синдрома Шегрена, болезни Крона. Выявлена причастность этого вируса к развитию острых гепатитов у взрослых и детей, в том числе с фульминантным течением и быстрым летальным исходом.

Герпесвирус человека 7 типа (ВГЧ-VII) вызывает заболевания, ассоциированные с первичной инфекцией (экзантема новорожденных). При активации латентной инфекции возникает синдром хронической усталости.

Вирус герпеса человека 8 типа (ВГЧ-VIII) вызывает, в основном, заболевание, наблюдаемое при активации латентной инфекции: такое как саркома Капоши.

Диагностика: Для лабораторного подтверждения диагноза решающим является обнаружение ДНК ВПГ в содержимом пузырьков, крови, спинномозговой жидкости методом ПЦР. Серологические методы менее информативны за исключением определения специфических Ig М (ИФА). Для подтверждения рецидивирующего герпеса информативным является обнаружение высоких титров Ig GT или нарастания титра в динамике заболевания. Вирусологический метод - выделение вируса в культуре клеток и идентификация его цитопатогенных свойств в культуре клеток через 24-72 часа является информативным, однако в практическом здравоохранении не нашел широкого применения.

Экспресс-метод - метод иммунофлюоресценции, материалом для исследования служит содержимое везикул, соскобы со дна эрозий.

Цитологическое исследование мазков-отпечатков из очагов поражения проводят с целью обнаружения гигантских клеток.

Лечение герпетической инфекции в остром периоде болезни проводится ацикловиром (зовиракс), валтрексом (валацикловир), фамцикловиром. При локализованных формах - в виде мази. При тяжелых формах заболевания ацикловир в дозе 10-15 мг/кг в 3 приема вводится внутривенно. Дополнительно в качестве этиотропных препаратов назначаются интерфероновые препараты: виферон в свечах, рекомбинантный интерферон альфа, иммуноглобулины (внутримышечные и внутривенные). Местно могут также назначаться бонафтоновая мазь, теброфеновая, флореналь, рибавирин, хелепин, алпизарин.

В стадии ремиссии герпетической инфекции используются иммуномодуляторы: растительного происхождения (имунал) и синтетические (циклоферон, полудан). Адаптогены растительного происхождения (элеуторококк, женьшень), витамины группы B1, В2, В12.

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ №23

1. Основные принципы лабораторной диагностики вирусных инфекций

Инфекционных заболеваний составляет комплексное клинико-эпидемиологичное обследование больного, которое дополняется данными лабораторных и других специальных методов обследования. Принципы клинической диагностики принципиально не отличаются от тех, которые применяются в терапевтической практике, т.е. включают сбор анамнестических данных и объективное обследование больного. Однако, принципиально новым разделом при обследовании инфекционного больного является эпидемиологический анамнез. Цель эпидемиологического анамнеза - выяснить где, когда и от кого мог заразиться больной. Выясняют не было ли у пациента контакта с инфекционными больными, есть ли больные с подобной симптоматикой среди членов семьи, в квартире, доме, на работе; не выезжал ли больной в последнее время в эндемичные районы; как и где питается больной, нет ли случаев заболевания среди лиц, употреблявших один и тот же пищевой продукт. Выявляют факты контакта с животными, переливания крови, парентеральных вмешательств. Выясняют какие и когда проводились профилактические прививки.

Лабораторные методы исследования помогают подтвердить или поставить правильный диагноз. Они могут быть неспецифическими и специфическими. Первые включают в себя весь комплекс общеклинических и биохимических методов, которые широко используются в клиниках внутренних болезней. Специфические методы исследования позволяют обнаружить в материале от больного возбудителя инфекционного заболевания, или его антиген, или антитела к нему. Все методы специфической диагностики разделяют на группы.

1. Микроскопический метод. Материал от больного исследуют под микроскопом. Этот метод имеет решающее значение при диагностике гельминтозов и протозойных заболеваний (малярия, амебиаз, лямблиоз, лейшманиоз, шистосомоз и др.).

2. Бактериологический метод. Материал от больного высевают на искусственную питательную среду и получаю культуру возбудителя с последующей его идентификацией. Этот метод имеет ведущее значение при диагностике бактериальных инфекций (брюшной тиф (гемокультура - среда Рапопорта), дизентерия (среда Плоскирева), дифтерия (кровяной агар)). Вирусологический метод требует живых питательных сред (куриный эмбрион, культура тканей), сложен и поэтому используется только в крупных лабораториях.

3. Серологический метод обнаруживает в материале от больного антигены возбудителя или антитела к ним. Они основываются на реакции антиген-антитело. Этот метод имеет ведущее значение при диагностике вирусных инфекций. Используются следующие реакции: при бактериальных инфекциях - реакция агглютинации (РА), реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РНГА), реакция связывания комплемента (РСК); при вирусных инфекциях - реакция торможения гемагглютинации (РТГА), РНГА, РСК, иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА). Для экспесс-диагностики применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Результаты серологических реакций оценивают по высоте титра (диагностический титр) и динамике его нарастания в парных сыворотках. Например, при брюшном тифе диагностическим в реакции Видаля считается титр 1:200, а в РНГА - 1:160. При проведении реакции с парными сыворотками первое исследование проводится при поступлении больного, а повторное - через 7-10 дней. Диагноз считается подтвержденным при нарастании титра специфических антител в 4 раза и больше. Например, в крови больного при поступлении обнаружены антитела к вирусу гриппа в титре 1:20, а при повторном исследовании (через 7-10 дней) - в титре 1:100. Диагноз гриппа в таком случае подтвержден, т.к. в парных сыворотках наблюдается увеличение титра специфических антител в 5 раз.

4. Аллергический метод основан на обнаружении специфической сенсибилизации организма к определенному антигену. Накожно или чаще внутрикожно в организм больного вводится определенный антиген. У больного, сенсибилизированного к данному виду микроба, на месте введения специфического аллергена через 24-48 ч. развивается воспалительная реакция (положительная проба). Примером могут служить положительные внутрикожные реакции на тулярин (туляремия), туберкулин (туберкулез), бруцеллин (бруцеллез, проба Бюрне), токсоплазмин (токсоплазмоз).

5. Биологический метод основывается на заражении лабораторных животных материалом от больного. Затем из лабораторных животных выделяют чистую культуру возбудителя (бруцеллез, чума, туляремия, сибирская язва) или проводят на животных реакцию нейтрализации (ботулизм, столбняк).

2. Характеристика возбудителя сибирской язвы. Принципы лабораторной диагностики сибирской язвы

Сибирская язва (карбункул злокачественный, антракс) - особо опасная инфекционная болезнь сельскохозяйственных и диких животных всех видов, а также человека.

Болезнь протекает молниеносно, сверхостро, остро и подостро (у овец и крупного рогатого скота), остро, подостро и ангинозно (у свиней), преимущественно в карбункулёзной форме - у человека.

Характеризуется интоксикацией, развитием серозно-геморрагического воспаления кожи, лимфатических узлов и внутренних органов; протекает в кожной или септической форме (также у животных встречаются кишечная и легочная формы).

Сибирская язва, известная с древнейших времен под названиями «священный огонь», «персидский огонь» и др., неоднократно упоминалась в сочинениях античных и восточных писателей и учёных.

Возбудитель заболевания был почти одновременно описан в 1849-1850 гг. сразу тремя исследователями: Ф. Поллендером, Ф. Брауэллем и К. Давеном. В 1876 г. Р. Кох выделил его в чистой культуре. Общепринятое на сегодняшний день наименование сибирской язвы - антракс, что в переводе с греческого означает «уголь»: такое название было дано по характерному угольно-чёрному цвету сибиреязвенного струпа при кожной форме болезни.

Bacillus anthracis - грамположительная, спорообразующая бактерия. Возбудитель сибирской язвы.

Биологические свойства. Морфология

Неподвижная крупная палочка 1-1,2 х 3-5 мкм, на микропрепаратах располагаются одиночно, попарно в организме или длинными цепочками на питательных средах. Концы клеток бацилл при световой микроскопии кажутся обрубленными или слегка вогнутыми (напоминая бамбуковую трость). Бактериальная клетка образует капсулы. Овальные эндоспоры чаще располагаются центрально.

Культуральные свойства

Хемоорганогетеротроф, факультативный анаэроб, растёт на простых питательных средах (в том числе на МПА, МПБ) при 37°C. Колонии крупные, волокнистые (характерная морфология типа «голова медузы» или «грива льва» [1]), край колонии бахромчатый.

Патогенность. Отнесён к IV группе патогенности. В факторы патогенности входят:

- Образование капсулы, обладающей антифагоцитарной активностью и адгезивными свойствами;

- Образование термолабильного трёхкомпонентного экзотоксина, состоящего из трёх компонентов - эдематозного компонента (вызывает воспаления, отёки), защитного протективного антигена (не обладает токсичностью) и летального компонента

Сибиреязвенная бактерия вне организма при доступе кислорода воздуха образует споры, вследствие чего обладает большой устойчивостью к высокой температуре, высушиванию и дезинфицирующим веществам. Споры могут сохраняться годами; пастбище, заражённое испражнениями и мочой больных животных, может долгие годы сохранять сибиреязвенные споры. Вегетативные формы сибиреязвенной палочки быстро погибают при кипячении и воздействии обычных дезинфектантов.

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные сельскохозяйственные животные: крупный рогатый скот, лошади, ослы, овцы, козы, олени, верблюды, у которых болезнь протекает в генерализованной форме. Домашние животные - кошки, собаки - мало восприимчивы.

Характеризуется: (септическая форма) резким повышением температуры, апатией, снижением продуктивности, отеками головы, шеи и подгрудка. (кишечная форма) апатия, отказ от корма, кровавый понос и рвота, тимпания. Свиньи: (ангинозная форма) встречается только у свиней протекает бессимптомно. Заражение может произойти при участии большого числа факторов передачи. К ним относятся: выделения и шкуры больных животных, их внутренние органы, мясные и другие пищевые продукты, почва, вода, воздух, предметы внешней среды, обсеменённые сибиреязвенными спорами. Восприимчивость к сибирской язве у человека не зависит от возрастных, половых и других физиологических особенностей организма; она связана с путями заражения и величиной инфицирующей дозы.

Патогенез. Воротами инфекции для сибирской язвы обычно является повреждённая кожа. В редких случаях бацилла внедряется через слизистые оболочки дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта. На месте внедрения возбудителя в кожу возникает сибиреязвенный карбункул в виде очага серозно-геморрагического воспаления с некрозом, отёком прилегающих тканей и регионарным лимфаденитом. Местный патологический процесс обусловлен действием экзотоксина сибиреязвенной палочки, отдельные компоненты которого вызывают выраженные нарушения микроциркуляции, отёк тканей и коагуляционный некроз.

Вне зависимости от входных ворот инфекции первая стадия представляет собой локализованное поражение регионарных лимфатических узлов, вторая стадия - генерализацию процесса.

Генерализация инфекции с прорывом возбудителей сибирской язвы в кровь и развитием септической формы происходит при кожной форме сибирской язвы чрезвычайно редко.

В основе патогенеза лежит действие экзотоксина возбудителя, который состоит по крайней мере из трех компонентов, или факторов:

первого (I) эдематозного (воспалительного) фактора;

второго (II) протективного (защитного) фактора;

третьего (III) летального фактора. Добавление ко II фактору I фактора увеличивает иммуногенные свойства, а добавление III фактора - снижает их.

Смесь I и II факторов вызывает увеличение воспалительной реакции и отека за счет увеличения проницаемости капилляров. Смесь II и III факторов усиливает действие летального фактора и приводит к гибели морских свинок, крыс и мышей. Смесь трех факторов сибиреязвенного токсина (I, II, III) оказывает воспалительное (эдематозное) и летальное действие.

Кожная форма сибирской язвы. встречается в 98-99% всех случаев сибирской язвы. Наиболее частой ее разновидностью является карбункулёзная форма, реже встречаются эдематозная, буллёзная и эризипелоидная формы заболевания. Поражаются преимущественно открытые части тела; особенно тяжело протекает болезнь при локализации карбункулов на голове, шее, слизистых оболочках рта и носа.

Септическая форма сибирской язвы. Септическая форма встречается довольно редко. Заболевание начинается остро с потрясающего озноба и повышения температуры до 39-40°C. Наблюдаются выраженные тахикардия, одышка, тахипноэ, боли в груди и кашель с выделением пенистой кровянистой мокроты. Определяются признаки пневмонии и выпотного плеврита.

Диагностика. Диагноз ставится на основе клинико-эпидемиологических и лабораторных данных. Лабораторная диагностика включает бактериоскопический и бактериологический методы, а в целях ранней диагностики - иммунофлюоресцентный.

Применяют также аллергологическую диагностику сибирской язвы путем внутрикожной пробы с антраксином, дающей положительные результаты после 5-го дня болезни.

Материалом для лабораторного исследования являются содержимое везикул и карбункулов, а также мокрота, кровь, испражнения и рвотные массы при септической форме. Сибирскую язву различают с сапом, банальными фурункулами и карбункулами, чумой, туляремией, рожей, пневмониями и сепсисом иной этиологии.

Лечение и профилактика. Этиотропную терапию сибирской язвы проводят антибиотиками. Назначают пенициллин. В патогенетической терапии используют коллоидные и кристаллоидные растворы, плазму, альбумин, глюкокортикостероиды. Хирургические вмешательства при кожной форме болезни недопустимы: они могут привести к генерализации инфекции.

Профилактические мероприятия осуществляют в тесном контакте с ветеринарной службой. Выявленных больных животных следует изолировать, а их трупы сжигать; инфицированные объекты необходимо обеззараживатьПрогноз. Прогноз во многом определяется формой заболевания, в целом является условно неблагоприятным и возможен летальный исход даже при адекватном и своевременном лечении.

Профилактика и мероприятия в очаге. Лицам, подвергающимся опасности заражения сибирской язвой (работникам предприятий по переработке кожевенного сырья и шерсти, мясокомбинатов, ветеринарным работникам, работникам лабораторий, работающим с возбудителем сибирской язвы), проводят профилактические прививки сибиреязвенной живой сухой вакциной (СТИ).Одна из первых таких вакцин, вакцина Ланге, создана Иваном Николаевичем Ланге. Больных госпитализируют в отдельную палату, проводят текущую дезинфекцию. Выписывают после полного выздоровления и эпителизации язв. За лицами, контактировавшими с больными животными, устанавливается медицинское наблюдение в течение 2 нед.

3. Вирус гепатита А. Характеристика, принципы диагностики, специфическая профилактика и лечение

Гепатит А - это воспалительное заболевание печени, развивающееся в результате инфекции вируса гепатита А.

Вирус гепатита А (НАV) относится к семейству Пикорнавирусов, роду Энтеровирус, где числится как «энтеровирус 72». Его вирион представляет собой» голый» безоболочечный икосаэдральный нуклеокапсид диаметром 27-30 нм. Он включает в себя геномную молекулу однонитчатой РНК и 4 структурных белка, три из которых (VP 1-3) образуют капсид, а один (VP-4) связан с РНК. Капсидные белки объединяются в понятие» антиген ВГА» (HAV Ag), который детерминирует образование вируснейтрализующих антител.

Вирус гепатита А - единственный из вирусов гепатита, который удается культивировать в клеточных культурах (он не вызывает цитопатическое действие, а просто персистирует в клетках (обезьяны - мартышки и мармозеты).

ВГА - кишечная инфекция с фекально - оральным механизмом передачи. Возбудитель передается через зараженную воду, пищу и контактно-бытовым путем. Этому способствует

Устойчивость вируса во внешней среде и высокая восприимчивость к нему человека. Заболеваемость регистрируется от спорадических форм до вспышек и даже эпидемий. Отмечается сезонный подъем с конца июля - августа до ноября месяца.

В 90% отмечаются безжелтушные формы. В отличие от других энтеровирусов, вирус ВГА не размножается в слизистой оболочке кишечника, а сразу трансформируется через воротную вену в печень.

Инкубационный период - от 10 до 50 дней (в среднем 30 дней). Клиническим симптомам предшествует период нецитопатической репликации вируса в гепатоцитах (7-10 дней). Ему сопутствует накопление сывороточных маркеров повреждения гепатоцитов (трансаминаз), вирусемия и выход вируса с желчью в кишечник. Затем следует фаза поражения гепатоцитов с развитием клинических проявлений острого гепатита. С этого момента больной практически не опасен для окружающих, так как вирусемия, а главное выделение ВГА Аg идет на убыль.

Прекращению процесса способствует быстрый и интенсивный иммунный ответ. Антитела появляются уже в инкубационном периоде, блокируя распространение вируса. Клиническое выздоровление знаменует полное освобождение от антигена ВГА.

Персистенция вируса и осложнения (хроничесий гепатит, гепатома не встречаются).

Специфическая профилактика - применение вакцин. В настоящее время имеются несколько инактивированных вакцин против гепатита А. Это вакцина «Аваксим» (фирма Пастер Мерье Соннот),

«Хаврикс» (фирма СмитКляйн Бичем),» Вакта» (фирма Мерк и К). Эти вакцины показали высокую иммуногенную активность: титры анти - ВГА определяются у 99% вакцинированных взрослых уже через месяц после введения первой дозы вакцины.

Иммуноглобулинопрофилактика - введение иммуноглобулина эффективно при проведении до контакта с вирусом или в течении двух недель после контакта. Показана в очагах заболевания.

Диагностика.

1. Обнаружение антигена ВГА в экстрактах фекалий

2. Обнаружение антител класса IgM (анти ВГА - М).

Единственным доступным маркером острой формы гепатита А являются специфические антитела класса Ig M.

Антитела к вирусному гепатиту А (анти ВГА-М) появляются в крови еще в конце инкубации, за 3-5 дней до появления первых симптомов и продолжают циркулировать на всем протяжении клинического периода болезни и позже до 4-6 месяцев.

Выявление анти ВГА-М - антител в сыворотке проводится с целью:

- диагностики вирусного гепатита А

- дифференциальной диагностики вирусных гепатитов

- определения распространенности ВГА при эпидемиологических исследованиях

Выявление проводится с использованием тест-систем ИФА.

3. Маркером перенесенного гепатита А являются антитела класса G к антигену вируса гепатита А (анти - ВГА - G)

Обнаружение в сыворотке антител анти-ВГА-G свидетельствует об окончании активного инфекционного процесса, санации организма, являясь маркером пост-инфекции. Появляются в крови уже на 10-12 сутки с момента заражения до развития клинических проявлений и сохраняются в течение практически всей жизни, предохраняя от повторного заражения гепатитом А.

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ №24

1. Реакции, используемые для индикации и идентификации вирусов: реакция гемагглютинации (РГА), реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция биологической нейтрализации

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) - метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в присутствии иммунной к нему сыворотки крови.

Реакция торможения гемагглютинации(РТГА) основана на блокаде, подавлении антигенов вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.

РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных. 50

Механизм. Типирование вируса проводят в реакции торможения гемаг-глютинации (РТГА) с набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса А с антигенами H0N1, H1N1, Н2N2, H3N2 и др. могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток

2. Характеристика возбудителя чумы. Принципы лабораторной диагностики. Препараты для специфической профилактики и лечения

Таксономия: Y.pestisвызывает чуму; отдел Gracilicutes, семейство Enterobacteriaceae, род Yersinia. Возбудитель - Yersiniapestis.

Морфологические свойства: грамотрицательные палочки, овоидной формы, окрашиваются биполярно. Подвижны, имеют капсулу, спор не образуют.

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы. Температурный оптимум +25С. Хорошо культивируются на простых питательных средах. Ферментируют большинство углеводов без образования газа. Психофилы - способны менять свой метаболизм в зависимости от температуры и размножаться при низких температурах. Вирулентные штаммы образуют шероховатые (R) колонии, переходные (RS) и сероватые слизистые гладкие авирулентные(S) формы.

Два типа колоний - молодые и зрелые. Молодые с неровными краями. Зрелые колонии крупные, с бурым зернистым центром и неровными краями. На скошенном агаре черед двое суток при +28 С образуют серовато - белый налет, врастающий в среду, на бульоне - нежную поверхностную пленку и хлопковидный осадок.

Биохимические свойства: фенментативная активнсть высокая: ферментация до кислоты ксилозу, синтез плазмокоагулазы,

фибринолизина, гемолизина, лецитиназу, сероводород. Рамнозу, мочевину не ферментирует.

Антигенная структура.

Группа белково - полисахаридных и липополисахаридных антигенов: термостабильный соматический О-антиген и термолабильный капсульный V, W антигены. С W-антигеном связывают вирулентность бактерий. Продуцирует факторы патогенности: фибринолизин, плазмокоагулазу, эндотоксин, экзотоксин, капсулу, V, W антигены.

Резистентность: чувствителен к антибиотикам (особенно стрептомицин), нестоек к окружающей среде при высокой температуре.

Патогенные свойства.

Обладает патогенным потенциалом, подавляет функции фагоцитарной системы, подавляет окислительный взрыв в фагоцитах и беспрепятственно в них размножается. Факторы патогенности контролируются плазмидами трех классов. В патогенезе выделяют три основных стадии - лимфогенного заноса, бактеремии, генерализованной септицемии. Имеют адгезины и инвазины, низкомолекулярные протеины (ингибируют бактерицидные факторы), энтеротоксин. Часть факторов контролируется плазмидами вирулентности.

Клинические особенности: Инкубационный период - несколько часов до 8 сут. Различают локальные - кожно-бубонная, бубонная; внешне-диссеминированные - первично-легочная, вторично-легочная и кишечная; генерализованная - первично-септическая, вторично-септическая формы чумы. Региональная лимфоаденопатия, энтероколиты, реактивные артриты,

спондилит, лихорадка.

Эпидемиология: Чума - классический природноочаговый зооноз диких животных. Основные носители в природе - сурки, суслики, в городских условиях - крысы. В передаче возбудителя - блохи животных, способные заражать человека.

Иммунитет: клеточно-гуморальный, ограничен по длительности и напряженности.

Микробиологическая диагностика:

Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Граму и водным раствором метиленового синего. Бактерии чумы представляют собой грамотрицательные палочки овоидной формы Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на чашки с питательным агаром. Посевы инкубируют при 25С. Первичное

изучение посевов производят через 10 ч. К этому сроку появляются колонии, которые образованы вирулентными R-формами.

Мало- и авирулентные бактерии формируют S-формы колоний. Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток, характеру роста, антигенным и биохимическим свойствам, чувствительности к специфическому фагу и биопробе.

На бульоне бактерии образуют пленку; ферментируют многие сахара до кислоты, индола не образуют, желатин не разжижают.

Содержат групповой термостабильный соматический антиген и специфический термолабильный капсульный антиген.

Биопроба. Проводится для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Наиболее чувствительными лабораторными животными являются морские свинки, которым материал вводят подкожно.

Внутрибрюшинно материал вводят в том случае, если он не загрязнен другими бактериями. После гибели животных отмечают патологические изменения органов и проводят бактериологическое исследование

Экспресс-методы лабораторной диагностики:

1. Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутствие возбудителя как в патологическом материале, так и в объектах окружающей среды (вода, воздух), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люминесцентную видоспецифическую противочумную сыворотку, люминесцентные противокапсульную и противосоматическую

сыворотку.

2.РПГА - для обнаружения антигенов бактерий в материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела которой нагружены на эритроциты.

Лечение: антибиотики - стрептомицин, препараты тетрациклинового ряда.

Профилактика: специфическая профилактика - живая ослабленная чумная вакцина EV. Имеется сухая таблетированная вакцина для перорального применения. Для оценки иммунитета к чуме (естественного постинфекционного и вакцинального) может применяться внутрикожная аллергическая проба с пестином.

Чумной бактериофаг - при идентификации Y.pestis.

Чумная сухая вакцина - высушенная живая культура Y.pestis вакцинного штамма EV, используется для профилактики чумы

3. Вирусный гепатит В. Характеристика, принципы диагностики

Вирус гепатита В-семейство Hepadnaviridae род Orthohepadnavirus.

Морфология: ДНК-содержаший вирус сферической формы. Состоит из сердцевины, состоящей из 180 белковых частиц, составляющих сердцевинный НВс-антиген и липидсодержащей оболочки, содержащей поверхностный HBs-антиген. Внутри сердцевины находятся ДНК, фермент ДНК-полимераза, обладающая ревертазной активностью, и концевой белок НВе-антиген.

Геном представлен двунитевой ДНК кольцевой формы.

Культуральные свойства. Не культивируется на куриных эмбрионах, не обладает гемолитической и гемагглютинирующей активностью. ВГВ культивируется только в культуре клеток. 96

Резистентность. Высокая к факторам окружающей среды и дезинфицирующим веществам. Вирус устойчив к длительному воздействию кислой среды, УФ-излучению, действию спирта, фенола.

Антигенная структура. Сложная. В суперкапсиде вируса находится HBs-антиген, который локализован в гидрофильном слое на поверхности вириона. В формировании HBs-антигена участвуют 3 полипептида в гликозилированной форме: preSl - большой полипептид; preS2 - средний полипептид; S - малый полипептид.

Эпидемиология: Развитие инфекционного процесса при попадании в кровь. Заражение происходит при парентеральных манипуляциях (инъекциях, хирургических вмешательствах), переливании крови.

Патогенез и клиника заболевания. Инкубационный период 3-6 месяцев. Инфекционный процесс наступает после проникновения вируса в кровь. ВГВ из крови эндоцитозом проникает в гепатоцит. После проникновения вируса происходит достраивание плюс-нити ДНК ДНК-полимеразой до полноценной структуры. Клиническая картина характеризуется симптомами поражения печени, в большинстве случаев сопровождается развитием желтухи.

Иммунитет. Гуморальный иммунитет, представленный антителами к HBs-антигену, защищает гепатоциты от вируса, элиминируя его из крови.

Клеточный иммунитет освобождает организм от инфицированных гепатоцитов благодаря цитолитической функции Т-киллеров.

Переход острой формы в хроническую обеспечивается нарушением Т-клеточного иммунитета.

Микробиологическая диагностика. Используют серологический метод и ПЦР. Методами ИФА и РНГА в крови определяют маркеры гепатита В: антигены и антитела. ПЦР определяют наличие вирусной ДНК в крови и биоптатах печени. Для острого

гепатита характерно обнаружение HBs антигена, НВе антигена и анти-HBc-IgM антитела.

Лечение. Использование интерферона, интерфероногенов: виферона, амиксина, ингибитора ДНК-полимеразы, препарата аденинрибонозида.

Профилактика. Исключение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и переливаниях крови (применением одноразовых шприцев, проверкой на гепатит В по наличию HBs-антигена в крови доноров крови).

Специфическая профилактика осуществляется вакцинацией рекомбинантной генно-инженерной вакциной, содержащей HBs-антиген. Вакцинации подлежат все новорожденные в первые 24 часа жизни. Длительность поствакцинального иммунитета - не менее 7 лет.

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ №25

1. Экспресс-диагностика инфекционных заболеваний

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - основана на амплификации (увеличения кол-ва копий) специфического гена возбудителя. Для этого двухнитевую ДНК вырезают из исследуемого материала, денатурируют и достраивают (при охлаждении) к расплетенным нитям ДНК новые комплиментарные нити. В результате данных операций из одного гена образуется 2. Этот процесс многократно повторяется при заданных температурных режимах до образования нужного количества копий необходимого гена.

Иммуноферментный анализ (ИФА). В основе метода лежит выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, коньюгированных с ферментом-меткой. Специфический антиген адсорбируют на поверхности лунок в пластинках из полимерного материала, фиксированный на пластинке антиген инкубируют с испытуемыми человеческими сыворотками. После отмывания от несвязавшихся белков связанные иммобилизированными антигенами Ig выявляют с помощью антивидовой иммуноблоттинговой сыворотки, антителам которой прикреплён фермент (пероксидаза). После инкубации с субстратом и индикотором (диаминобензидином) оценивают ферментативную активность по интенсивности окраски.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, метод Кунса) Различают разновидности методов:

1. Прямой - основан на том, что антигены тканей или микробов способны светиться под УФ-излучением после обработки иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами. Бактерии в мазке после обработки такой люминесцентной сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зелёного цвета.

2. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген-антитело с помощью антиглобулиновой сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем, антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой сывороткой, меченной флюорохромами.

Радиоиммунный анализ (РИА) Высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген-антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом. После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике: интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

Иммуноблоттинг - высокочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИФ. Используют, как метод диагностики при ВИЧ. Антигены возбудителя разделяют с помощь электрофореза в геле, затем переносят их из геля на активированную бумагу и проявляют с помощью ИФА. Выпускаются такие полоски с «блотами» антигенов. На эту полоску наносят сыворотку больного, затем, после инкубации, отмывают и наносят сыворотку против Ig человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

Реакции иммобилизации (трепонем, холерных вибрионов) применяется при диагностике заболеваний, возбудителем которых являются подвижные бактерии. Для этого материал, взятый у больного обрабатывают специфическими сыворотками - если реакция положительнанаблюдается иммобилизация бактерий на стекле.

Газожидкостная хроматография (ГЖХ) Этот метод является высокоэффективным методом обнаружения анаэробных бактерий, которые в процессе своей жизнедеятельности выделяют летучие жирные кислоты (изомасляная, масляная, валериановая, изовалериановая, капроновая). Для проведения этого анализа проводят экстракцию ЛЖК летучим органическим растворителем, после чего полученный экстракт вводят в хроматограф.

2. Характеристика возбудителей пищевых токсикоинфекций - сальмонеллезов. Принципы лабораторной диагностики

Острая кишечная зоонозная инфекция, вызываемая сероварами сальмонелл, характеризующаяся поражением ЖКТ.

Морфологические свойства: подвижные, грам «-» палочки, капсулы нет. Хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных - образуют колонии в R-и S-формах, на жидких - помутнение. На лактозособержащих средах образуют бесцветные колонии.

Эпидемиология. Возбудителями сальмонеллеза является большая группа сальмонелл, входящая в подвид enterica. Наиболее часто возбудителями сальмонеллезов у человека являются серовары S. Typhimurium, S. Dublin, S. Choleraesuis. Основные факторы передачи - мясо, молоко, яйца, вода.

Микробиологическая диагностика. Бактериологическому исследованию подвергают рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь, мочу, кровь. При идентификации выделенных культур необходим широкий набор диагностических О- и Н - сывороток.

Для серологического исследования применяют РНГА, ИФА. Важное диагностическое значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания.

Профилактика. Специфическая профилактика сальмонеллеза у с/х животных и птиц. Неспецифическая профилактика - проведение ветеринарно-санитарных мероприятий.

3. Вирус иммунодефицита человека. Характеристика, принципы лабораторной диагностики

Вирус иммунодефицита человека вызывает ВИЧ-инфекцию, заканчивающуюся развитием синдрома приобретенного иммунного дефицита.

Возбудитель ВИЧ-инфекции - лимфотропный вирус, относящийся к семейству Retroviridae роду Lentivirus.

Морфологические свойства: РНК-содержащий вирус. Вирусная частица сферической формы Оболочка состоит из двойного слоя липидов, пронизанного гликопротеинами. Липидная оболочка происходит из плазматической мембраны клетки хозяина, в которой репродуцируется вирус. Гликопротеиновая молекула состоит из 2 субъединиц, находящихся на поверхности вириона и пронизывающих его липидную оболочку.

Сердцевина вируса конусовидной формы, состоит из капсидных белков, ряда матриксных белков и белков протеазы. Геном образует две нити РНК, для осуществления процесса репродукции ВИЧ имеет обратную транскриптазу, или ревертазу.

Геном вируса состоит из 3 основных структурных генов и 7 регуляторных и функциональных генов. Функциональные гены выполняют регуляторные функции и обеспечивают осуществление процессов репродукции и участие вируса в инфекционном процессе.

Вирус поражает в основном Т- и В-лимфоциты, некоторые клетки моноцитарного ряда (макрофаги, лейкоциты), клетки нервной системы.

Микробиологическая диагностика.

Вирусологические и серологические исследования включают методы определения антигенов и антител ВИЧ. Для этого используют ИФА, ИБ и ПЦР. Сыворотки больных ВИЧ-1 и ВИЧ-2 содержат антитела ко всем вирусным белкам. Однако для подтверждения диагноза определяют антитела к белкам gp41, gpl20, gpl60, p24 у ВИЧ-1 и антитела к белкам gp36, gpl05, gpl40 у ВИЧ-2. ВИЧ-антитела появляются через 2-4 недели после инфицирования и определяются на всех стадиях ВИЧ.

Метод выявления вируса в крови, лимфоцитах. Однако при любой положительной пробе для подтверждения результатов ставится реакция ИБ. Применяют также ПЦР, способную выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периоде, однако ее чувствительность несколько ниже, чем у ИФА.

Клинический и серологический диагнозы подтверждаются иммунологическими исследованиями, если они указывают на наличие иммунодефицита у обследуемого пациента.

Диагностическая иммуноферментная тест-система для определения антител к ВИЧ - включает вирусный АГ, адсорбированный на носителе, АТ против Ig человека. Используется для серодиагностики СПИДа.

Лечение: применение ингибиторов обратной транскриптазы, действующих в активированных клетках. Препараты являются производные тимидина - азидотимидин и фосфазид.

Профилактика. Специфическая - нет.

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ №26

1. Серологические реакции, применяемые для диагностики инфекционных заболеваний

Иммунные реакции используют при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы, т.е. методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген-антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

Обнаружение в сыворотке крови больного антител против антигенов возбудителя позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микробов, различных биологически активных веществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов клеток и др.

При выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т.е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемаясерологическая идентификация микроорганизмов.

В микробиологии и иммунологии широко применяются реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный методы). Перечисленные реакции различаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако, все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов. Реакции иммунитета характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью.

Особенности взаимодействия антитела с антигеном являются основой диагностических реакций в лабораториях. Реакция invitroмежду антигеном и антителом состоит из специфической и неспецифической фазы. В специфическую фазу происходит быстрое специфическое связывание активного центра антитела с детерминантой антигена. Затем наступает неспецифическая фаза - более медленная, которая проявляется видимыми физическими явлениями, например образованием хлопьев (феномен агглютинации) или преципитата в виде помутнения. Эта фаза требует наличия определенных условий (электролитов, оптимального рН среды).

Связывание детерминанты антигена (эпитопа) с активным центром Fab-фрагмента антител обусловлено ван-дер-ваальсовыми силами, водородными связями и гидрофобным взаимодействием. Прочность и количество связавшегося антигена антителами зависят от аффинности, авидности антител и их валентности.

2. Характеристика возбудителя газовой гангрены. Принципы лабораторной диагностики

Препараты для специфической профилактики и лечения.

Анаэробная инфекция - болезнь, вызываемая облигатными анаэробными бактериями в условиях, благоприятствующих жизнедеятельности этих микробов. Анаэробы могут поражать любые органы и ткани. Облигатные анаэробы разделяются на две группы: 1) бактерии, образующие споры (клостридии) и 2) неспорообразующие или так называемые неклостридиальные анаэробы. Первые вызывают клостридиозы, вторые - гнойно-воспалительные заболевания различной локализации. Представители обеих групп бактерий относятся к условно-патогенным микробам.

Газовая гангрена - раневая инфекция, вызываемая бактериями рода Clostridium, характеризуется быстро наступающим некрозом преимущественно мышечной ткани, тяжелой интоксикацией и отсутствием выраженных воспалительных явлений.

Таксономия. Возбудители - несколько видов рода Clostridium, отдел Firmicutes. Основными представителями являются C.perfringens, C.novii, C.ramosum, C.septicum и др. Первое место по частоте встречаемости и тяжести вызываемого заболевания занимает C.perfringens.

Морфологические и культуральные свойства. Палочковидные, грамположительные бактерии, образующие споры. В пораженных тканях клостридии газовой гангрены формируют капсулы, обладающие антифагоцитарной активностью, при попадании в окружающую среду образуют споры.

Биохимические свойства. Обладают высокой ферментативной активностью, расщепляют углеводы с образованием кислоты и газа; проявляют гистолитическую активность.

Антигенные свойства и токсинообразование. Каждый вид клостридии разделяется на серовары, продуцирующие экзотоксины и различающиеся по антигенным свойствам. Например, токсин С. perfringens подразделяется на 6 сероваров: А, В, С, D, Е и F. Из них патогенными для человека являются А и F, остальные патогенны для животных. С. novii по антигенным свойствам токсина разделяются на серовары А, В, С и D. Некоторые токсины обладают свойствами ферментов.

Факторы патогенности: Клостридии газовой гангрены образуют экзотоксин - а-токсин, являющийся лецитиназой, а также гемолизины, коллагеназу, гиалуронидазу и ДНКазу. Экзотоксины специфичны для каждого вида клостридий.

Резистентность. Чувствительны к кислороду, солнечному свету, высокой температуре, дезинфектантам. Возбудители газовой гангрены, являясь нормальными обитателями кишечника животных и человека, с фекалиями попадают в почву, где споры длительное время сохраняются. В некоторых почвах клостридии могут размножаться.

Эпидемиология. При тяжелых травмах и несвоевременной хирургической обработке ран. В эпидемиологии газовой гангрены большое значение имеет загрязнение ран почвой.

Патогенез. Возникновению газовой гангрены способствует ряд условий: попадание микробов в рану (заболевание обычно вызывается ассоциацией нескольких видов анаэробов и реже одним из них), наличие некротических тканей, снижение резистентности. В некротических тканях анаэробы часто находят условия гипоксии, благоприятные для их размножения. Образуемые ими токсины и ферменты приводят к повреждению здоровых тканей и тяжелой общей интоксикации организма; а-токсин, лецитиназа, расщепляет лецитин - важный компонент клеточных мембран. Выделяемые гиалуронидаза и коллагеназа увеличивают проницаемость тканей, а также способствуют распространению микроба в окружающей ткани.

Клиника. Инкубационный период короткий - 1-3 дня. Отеки, газообразованием в ране, выраженной интоксикацией организма. Течение болезни усугубляют сопутствующие бактерии.

Иммунитет. Перенесенная инфекция не оставляет иммунитета. Ведущая роль в защите от токсина принадлежит антитоксинам.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования (кусочки пораженных тканей, раневое отделяемое) микроскопируют. Диагноз подтверждается при обнаружении грам «+» палочек в материале в отсутствии лейкоцитов. Проводят бактериологическое исследование - обнаружение С.perfringens в фекалиях - пищевая токсикоинфекция;

Лечение. Хирургическое: удаляют некротические ткани. Вводят антитоксические сыворотки, применяют антибиотики и гипербарическую оксигенацию.

Антитоксические сыворотки - в жидком и сухом виде после очистки методом ферментативного гидролиза анатоксических сывороток, полученных при иммунизации лошадей анатоксинами. Применяют для экстренной профилактики и специфич. терапии.

Профилактика. Хирургическая обработка ран, соблюдение асептики и антисептики при операциях. Для специфической активной иммунизации применяют анатоксин в составе секстанатоксина, создающий приобретенный, искусственный, активный, антитоксический иммунитет.

3. Вирус гепатита С. Характеристика, принципы диагностики, специфическая профилактика и лечение

Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae роду Hepacivirus.

Морфология. Сложноорганизованный РНК-содержащим вирус сферической формы. Геном представлен одной линейной «+» цепью РНК, обладает большой вариабельностью.

Эпидемиология. Заражение ВГС аналогично заражению ВГВ. Наиболее часто ВГС передается при переливаниях крови, трансплацентарно, половым путем.

Микробиологическая диагностика: Используются ПЦР и серологическое исследование. Подтверждением активного инфекционного процесса является обнаружение в крои вирусной РНК ПЦР. Серологическое исследование направлено на определение антител к NS3 методом ИФА.

Профилактика и лечение. Для профилактики - тоже, что и при гепатите В. Для лечения применяют интерферон и рибовирин. Специфическая профилактика - нет.

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ №27

1. Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней. Пути преодоления лекарственной устойчивости

Антибиотикорезистентность - это устойчивость микробов к антимикробным химиопрепаратам. Бактерии следует считать резистентными, если они не обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме. Резистентность может быть природной и приобретенной.

Природная устойчивость. Некоторые виды микробов природно устойчивы к определенным семействам антибиотиков или в результате отсутствия соответствующей мишени (например, микоплазмы не имеют клеточной стенки, поэтому не чувствительны ко всем препаратам, действующим на этом уровне), или в результате бактериальной непроницаемости для данного препарата (например, грамотрицательные микробы менее проницаемы для крупномолекулярных соединений, чем грамположительные бактерии, так как их наружная мембрана имеет «маленькие» поры).

Приобретенная устойчивость. Приобретение резистентности - это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды. Она, хотя и в разной степени, справедлива для всех бактерий и всех антибиотиков. К химиопрепаратам адаптируются не только бактерии, но и остальные микробы - от эукариотических форм (простейшие, грибы) до вирусов. Проблема формирования и распространения лекарственной резистентности микробов особенно значима для внутрибольничных инфекций, вызываемых так называемыми «госпитальными штаммами», у которых, как правило, наблюдается множественная устойчивость к антибиотикам (так называемая полирезистентность).

Генетические основы приобретенной резистентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях. Приобретенная лекарственная устойчивость может возникать и распространяться в популяции бактерий в результате:

* мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т.е. отбором) мутантов. Особенно легко селекция происходит в присутствии антибиотиков, так как в этих условиях мутанты получают преимущество перед остальными клетками популяции, которые чувствительны к препарату. Мутации возникают независимо от применения антибиотика, т.е. сам препарат не влияет на частоту мутаций и не является их причиной, но служит фактором отбора. Далее резистентные клетки дают потомство и могут передаваться в организм следующего хозяина (человека или животного), формируя и распространяя резистентные штаммы. Мутации могут быть: 1) единичные (если мутация произошла в одной клетке, в результате чего в ней синтезируются измененные белки) и 2) множественные (серия мутаций, в результате чего изменяется не один, а целый набор белков, например пенициллинсвязывающих белков у пенициллин-резистентного пневмококка);

* переноса трансмиссивных плазмид резистентности (R-плазмид). Плазмиды резистентности (трансмиссивные) обычно кодируют перекрестную устойчивость к нескольким семействам антибиотиков. Впервые такая множественная резистентность была описана японскими исследователями в отношении кишечных бактерий. Сейчас показано, что она встречается и у других групп бактерий. Некоторые плазмиды могут передаваться между бактериями разных видов, поэтому один и тот же ген резистентности можно встретить у бактерий, таксономически далеких друг от друга. Например, бета-лактамаза, кодируемая плазмидой ТЕМ-1, широко распространена у грамотрицательных бактерий и встречается у кишечной палочки и других кишечных бактерий, а также у гонококка, резистентного к пенициллину, и гемофильной палочки, резистентной к ампициллину;

...