Газообразные посредники как эндогенные модуляторы освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе

Блокатор ФДЭ-III quazinone в концентрации 10 мкМ не приводил к достоверным изменениям вызванного освобождения медиатора. К 40 мин аппликации квантовый состав ТКП составил 81.1±26.7% (n=5, p>0.05) по отношению к контролю (Рис. 13). Последующая аппликация СО приводила к увеличению секреции медиатора, однако, эффект СО был выражен значительно меньше, чем в контрольных экспериментах. Квантовый состав повышался лишь до 139.8±11.6% (n=6, p<0.05) по отношению к уровню секреции на фоне действия quazinone (Рис. 13).

Полученные данные указывают на то, что цГМФ-ингибируемая фосфодиэстераза (ФДЭ-III) вовлечена в реализацию модулирующего эффекта СО на нервно-мышечную передачу.

Влияние ингибитора гем-оксигеназы (ZnPP-IX) на ионные токи нервного окончания и секрецию медиатора. В условиях двухэлектродной фиксации потенциалов исследовали влияние ингибитора гем-оксигеназы ZnPP на миниатюрные МТКП и ТКП в стандартном растворе Рингера ([Ca2+]0 - 1.8 мМ). Аппликация ZnPP-9 в концентрации 10 мкМ приводила к снижению частоты МТКП до 80.4±2.2% (n=6; p<0.05) относительно контроля (Рис.14 А, Б) без изменения их амплитудно-временных параметров. ZnPP-9 уменьшал также амплитуду ТКП до 83.9±4.2% (n=6; p<0.05) относительно контроля (Рис.14 В, Г). В условиях сниженной концентрации Са2+ (0.3-0.4 мМ) с использованием внеклеточной регистрации синаптических сигналов исследовали влияние ZnPP-9 на квантовый состав ТКП и ионные токи двигательного нервного окончания.



Рис. 12. Роль аденилатциклазной системы в эффектах СО на вызванное освобождение медиатора.

А - суперпозиция ответов нервного окончания и токов концевой пластинки при внеклеточной регистрации в контроле, при действии 8Вr-cAMP (100 мкМ) и СО (96 мкМ) на фоне 8Вr-cAMP (по 10 реализаций).

Б - изменение квантового состава ТКП при действии MDL-12330A (10 мкМ) СО (96 мкМ) на фоне MDL-12330A.

В - Эффекты СО (96мкМ) квантовый состав ТКП в контроле и на фоне 8Вr-цАМФ

Время аппликации веществ показано сплошной линией, [Ca2+]0 - 0.2-0.4 мМ



Рис. 13. Эффекты СО на фоне действия блокаторов цГМФ-зависимых фосфодиэстераз.

Изменения квантового состава ТКП на фоне действия СО в контроле, блокатора цГМФ-стимулируемой фосфодиэстеразы (EHNA, 50 мкМ) и ингибитора цГМФ-ингибируемой фосфодиэстеразы (quazinone, 10 мкМ) и после аппликации СО (96 мкМ) на фоне соответствующих блокаторов. [Ca2+]0 - 0.2-0.4 мМ, * - p<0.05.

Аппликация ZnPP-9 приводила к снижению усредненной амплитуды ТКП до 71.3±6.7% (n=5; p<0.05) и квантового состава ТКП до 65.46.2% (n=5; p<0.05) (Рис.15). Параметры ответа нервного окончания при действии ZnPP-9 не изменялись.

Таким образом, ингибирование гемоксигеназы приводило к эффектам, противоположным действию экзогенно апплицируемого монооксида углерода, что предполагает эндогенный синтез газа в области нервно-мышечного синапса.

Иммуногистохимическое определение гемоксигеназы-2 в скелетных мышечных волокнах. Иммуногистохимичесий метод был использован для выявления гемоксигеназы-2 в кожно-грудинной мышце лягушки с помощью поликлональных антител.

Иммунореактивность к гемоксигеназе-2 была обнаружена в экстрафузальных и интрафузальных волокнах кожно-грудинной мышцы лягушки. В миофибриллах гемоксигеназа-2 локализована в субсарколеммной области, в саркоплазматическом ретикулуме и мембране ядра (Рис. 16). В интрафузальных волокнах гемоксигеназа-2 локализована в субсарколеммной области и мембране ядра (Рис. 16). В капсуле мышечного веретена осадок

Рис. 14. Влияние ингибитора гем-оксигеназы-2 ZnPP-IX (10 мкМ) на спонтанную и вызванную секрецию медиатора

Усредненные миниатюрные токи концевой пластинки (МТКП) (А) и токи концевой пластинки (ТКП) (Б) в контроле и на фоне аппликации ZnPP-IX Изменение частоты МТКП (В) и амплитуды ТКП при действии ZnPP-IX (Г). [Ca2+]0 - 1.8 мМ, * - p<0.05.

реакции не обнаружен. Подобное распределение фермента было обнаружено также в скелетных мышечных волокнах млекопитающих (Baum et al., 2000, Kusner, 1999). Таким образом, впервые в наших исследованиях было показано присутствие СО-синтезирующего фермента в скелетных мышечных волокнах лягушки.

Таким образом, результаты наших экспериментов свидетельствуют, что монооксид углерода подобно оксиду азота II является эндогенным модулятором высвобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе холоднокровных животных. Впервые показано, что гемоксигеназа-2 локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышечных волокон лягушки. Активация фермента приводит к синтезу монооксида углерода, который является относительно устойчивым и мембранопроникающим соединением. Поступая в нервное окончание в качестве ретроградного посредника, СО будет усиливать высвобождение ацетилхолина путем увеличения внутриклеточного уровня цАМФ как за счет увеличения его синтеза, так и снижения его деградации.

Рис. 15. Эффекты ZnPP-9 (10 мкМ) квантовый состав ТКП.

Изменение квантового состава ТКП при действии ZnPP-IX. Сверху - суперпозиция ответов нервного окончания и токов концевой пластинки при внеклеточной регистрации в контроле, при действии ZnPP-IX и после отмывки раствором Рингера (по 10 реализаций). [Ca2+]0 - 0.2-0.4 мМ.



Рис 16. Гемоксигеназа-2 экспрессируется в скелетных мышечных волокнах.

На рисунке представлено иммуногистохимическое окрашивание кожно-грудинной мышцы лягушки с антителами против гемоксигеназы-2.

А - При малом увеличении (15х10) показаны иммунопозитивные сайты экстрафузальных (звездочка) и интрафузальных (толстая стрелка) мышечных волокон. Б - При большом увеличении (25х10) представлена внутриклеточная локализация преципитата. Тонкие стрелки указывают на перинуклеарное и треугольник - на субсарколеммное окрашивание.

Сероводород как эндогенный модулятор освобождения медиатора из двигательного нервного окончания Исследования эффектов и механизмов действия сероводорода на нервно-мышечную передачу проводилось совместно с ассистентом кафедры физиологии человека и животных Казанского государственного университета Е.В. Герасимовой.

Влияние H2S и NaHS на секрецию медиатора и электрогенез двигательного нервного окончания лягушки. Аппликация H2S (500 мкМ) в условиях низкой внеклеточной концентрации Са2+ (0.2-0.4 мМ) (внеклеточное отведение) приводила к быстрому и обратимому увеличению амплитуды и квантового состава ТКП до 216.7±29.0% и 320.0±42.3% (n=5; р<0.05) относительно контроля (рис. 17А). Донор сероводорода - NaHS (500 мкМ) также обратимо повышал амплитуду и квантовый состав ТКП до 225.6±21.2% и 288.9±31.2% (n=5; p<0.05) (рис. 17А), соответственно. Идентичность эффектов H2S и NaHS позволила нам в дальнейших экспериментах использовать NaHS в качестве донора сероводорода. На Рис. 17 Б представлена кривая дозозависимости эффектов NaHS на квантовый состав ТКП, ЕС50=72±31 мкМ. Ни H2S, ни его донор - NaHS не вызывали изменения параметров ответа нервного окончания, что свидетельствует об отсутствии эффекта на потенциалзависимые Na2+- и К+-токи. В условиях блокирования потенциалзависимых К+-каналов 4-аминопиридином (100 мкМ) NaHS также не

А

Б

Рис. 17. Влияние H2S и NaHS на вызванную секрецию медиатора.



А - Изменение квантового состава токов концевой пластинки на фоне действия H2S (500 мкМ) и NaHS (500 мкМ) при одиночной стимуляции (Ў- H2S, ? - NaHS). На вкладке -усредненные ответы нервного окончания и следующие за ними токи концевой пластинки (30 реализаций) в контроле, при действии H2S (500 мкМ) и NaHS (500 мкМ) в отдельных экспериментах. Б - Кривая дозозависимости эффектов NaHS на квантовый состав токов концевой пластинки. [Ca2+]о =0.2-0.4 мМ.

изменял амплитуды 3-ей фазы ответа, что свидетельствует об отсутствии его влияния на кальций-активируемые калиевые токи нервного окончания. С использованием внутриклеточного отведения в условиях нормального содержания Ca2+ в растворе (1.8 мМ) анализировали влияние донора H2S на ПКП и МПКП в нервно-мышечном синапсе лягушки. Аппликация NaHS приводила к обратимому увеличению амплитуды ПКП до 125.6±8.9% (n=5; р<0.05) относительно контроля (Рис. 18 А). При этом наблюдали увеличение частоты МПКП до 253.4±46.7% (n=5; р<0.05) относительно контроля (Рис. 18 Б), без изменения амплитудно-временных характеристик сигналов.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что экзогенный сероводород в микромолярных концентрациях оказывает облегчающее влияние на вызванное освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки и его эффекты не опосредуются изменением электрогенеза нервного окончания и чувствительности постсинаптических рецепторов к ацетилхолину.



Рис. 18. Влияние NaHS (100 мкМ) на спонтанные и вызванные потенциалы концевой пластинки в нервно-мышечном синапсе лягушки.

А - Влияние NaHS на амплитуду потенциалов концевой пластинки. Сверху - усредненные потенциалы концевой пластинки (10 реализаций) в контроле и при действии NaHS (отдельный эксперимент). Б - Изменение частоты миниатюрных потенциалов концевой пластинки при действии NaHS. [Ca2+]о =1.8 мМ, * - p<0.05.

Исследование роли аденилатциклазной и гуанилатциклазной систем в эффектах H2S на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки. В условиях повышенной внутриклеточной концентрации цАМФ (pCPT-cAMP, 100 мкМ) эффекты NaHS были выражены в меньшей степени, чем в контроле: квантовый состав ТКП повышался до 174.5±5.6% (n=7; р<0.05) (Рис. 19 А) по отношению к уровню секреции на фоне действия pCPT-cAMP. В условиях сниженной активности аденилатциклазы (MDL-12330А, 0.8 мкM) эффект NaHS полностью сохранялся: амплитуда ТКП к 20 минуте действия вещества повышалась до 170.135.6% (n=5; p<0.05), а квантовый состав ТКП увеличивался до 219.0±15.6% (n=5; р<0.05) (Рис. 19 Б) по отношению к уровню секреции на фоне действия MDL-12330А.

В условиях повышенной внутриклеточной концентрации цГМФ (pCPT-cGMP, 100 мкМ) эффекты NaHS были выражены в той же степени, что и в контроле - квантовый состав ТКП увеличивался до 240.1±18.9% (n=5; р<0.05) (Рис. 20). В условиях сниженной активности гуанилатциклазы (ODQ, 100 мкМ). эффект NaHS полностью сохранялся, амплитуда ТКП к 20 минуте действия вещества повышалась до 182.316.7% (n=5; p<0.05), а квантовый состав ТКП увеличивался до 224.5±9.0% (n=5; р<0.05) (Рис. 20) по отношению к уровню секреции на фоне действия ODQ.

Таким образом, эффекты сероводорода не связаны с изменением активности гуанилатциклазной системы, тогда как увеличение уровня цАМФ снимает часть эффектов сероводорода.

Рис. 19. Эффекты NaHS на вызванную секрецию медиатора в условиях увеличенной концентрации цАМФ и при ингибировании аденилатциклазы.

А - Изменение квантового состава токов концевой пластинки при действии NaHS (100 мкМ) в контроле (_) и на фоне действия аналога цАМФ - pCPT-cAMP (100 мкМ) (¦). Б - Изменение квантового состава токов концевой пластинки при действии NaHS (100 мкМ) в контроле (_) и на фоне действия ингибитора аденилатциклазы - MDL-12330 А (0.8 мкМ) (¦).Время действия вещества показано сплошной линией. [Ca2+]о =0.2-0.4 мМ.



Рис. 20. Эффекты NaHS на вызванную секрецию медиатора в условиях увеличенной концентрации цГМФ и при ингибировании гуанилатциклазы.

Изменения квантового состава токов концевой пластинки под действием NaHS (100 мкМ) в контроле, на фоне аналога цГМФ - pCPT-cGMP (100 мкМ), и ингибитора гуанилатциклазы - ODQ (100 мкМ). [Ca²⁺]_о =0.2-0.4 мМ, * - p<0.05

Исследование роли рианодиновых рецепторов внутриклеточных Са2+-депо в эффектах H2S на секрецию медиатора. Для выявления влияния сероводорода на рианодиновые рецепторы (Ри-рецепторы) внутриклеточных Са2+-депо использовали активатор Ри-рецепторов - кофеин и ингибитор Ри-рецепторов - дантролен (F. Znao et al., 2001; О.П. Балезина, 2002). Кофеин сенсибилизирует Ри-рецептор к ионам Са2+ и открывает Са2+-канал (B.Ehrlich et al., 1994). В условиях нормального содержания Са2+ (1.8 мМ) в растворе кофеин (3 мМ) вызывал увеличение амплитуды ТКП до 145.6±17.8% (n=5; р<0.05) относительно контроля. Аппликация NaHS на фоне действия кофеина не приводило к достоверному изменению амплитуды ТКП (Рис. 21 А).

Аппликация дантролена (25 мкM) вызывала уменьшение секреции медиатора из нервной терминали. Амплитуда ТКП к 30 минуте действия дантролена уменьшалась до 65.610.1% (n=4; p<0.05) относительно контроля. На фоне блокирования Ри-рецепторов добавление NaHS не приводило к увеличению амплитуды ТКП (Рис. 21 Б).

Таким образом, активация и блокирование Ри-рецепторов эндоплазматического ретикулума предотвращало усиление вызванного освобождения медиатора при действии сероводорода.

Влияние субстрата и блокаторов синтеза H2S на секрецию медиатора из двигательного нервного окончания лягушки. L-цистеин является основным субстратом эндогенного синтеза сероводорода в тканях (K.N. Maclean, E. Kraus, 2004). Аминооксиацетиловая кислота (AOAК) - ингибитор цистатионин в-синтазы (CBS) и в-цианоаланин (в-ЦА) - ингибитор цистатионин г-лиазы (CSE), широко используются для блокирования эндогенного синтеза сероводорода (A.E. Braunstein et al., 1971; B. Teague et al., 2002).

А

Б

Рис. 21. Эффекты NaHS на вызванную секрецию медиатора в условиях активации и ингибировании рианодиновых рецепторов.

А - Изменение амплитуды токов концевой пластинки на фоне действия активатора Ри-рецепторов - кофеина (3 мМ) и NaHS (100 мкМ), апплицированного на фоне кофеина.

Б - Изменение амплитуды токов концевой пластинки на фоне действия ингибитора Ри-рецепторов - дантролена (25 мкМ) и NaHS (100 мкМ), апплицированного на фоне дантролена. Время действия вещества показано сплошной линией. [Ca2+]о = 1.8 мМ

Аппликация субстрата синтеза сероводорода L-цистеина (1 мМ) приводила к увеличению амплитуды ТКП до 117.8±2.3% (n=5; р<0.05) по отношению к контролю (Са2+ - 1.8 мМ) (Рис. 22 А). Ингибиторы ферментов синтеза сероводорода приводили к противоположным эффектам: в-цианоаланина (1 мМ) уменьшал амплитуду ТКП до 63.4±13.4% (n=5; p<0.05) (Рис. 22 Б), аминооксиацетиловая кислота (1 мМ) - до 63.4±16.7% (n=5; p<0.05) относительно контроля (Рис. 22 Б).

Полученные данные указывают на возможность эндогенного синтеза H2S в области нервно-мышечного синапса.

Влияние донора H2S и блокаторов синтеза H2S на секрецию медиатора из двигательного нервного окончания мыши.

Следующей задачей нашего исследования было выявить ферменты синтеза сероводорода в скелетных мышечных волокнах. Для выявления CBS и CSE в различных тканях обычно используют метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией, что связано с отсутствием коммерчески доступных антитела к этим ферментам. Однако, этот метод возможно использовать только на животных с известным геномом, например, на мышах.

Рис. 22. Эффекты субстрата и блокаторов ферментов синтеза H2S на вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки.

А - Изменение амплитуды токов концевой пластинки при действии субстрата синтеза H2S - L-цистеина (1мМ). Б - Влияние блокаторов ферментов синтеза H2S в-цианоаланина (в-ЦА, 1 мМ) и аминооксиацетиловой кислоты (АОАК, 1 мМ) на амплитуду токов концевой пластинки. [Ca2+]о =1.8 мМ, * - p<0.05.

Поэтому нами были проведены эксперименты с выявлением эффектов экзогенного газа и блокаторов его синтеза на нервно-мышечном препарате диафрагмальной мышцы мыши. Аппликация NaHS (100 мкМ) вызывала быстрое и обратимое увеличение спонтанной и вызванной секреции медиатора ([Ca2+]0 - 1.8 мМ). Частота МПКП повышалась до 189.0±35.6% (n=7, p<0.05) относительно контроля (Рис. 23 Б), без изменения амплитудно-временных параметров МПКП. Амплитуда ПКП увеличивалась до 186.7±15.6% (n=5; p<0.05) относительно контроля (рис. 23А). Блокирование ферментов синтеза H2S приводило к противоположным эффектам. в-цианоаланин (1 мМ) снижал амплитуду ТКП до 73.4±8.9% (n=5; p<0.05), аминооксиацетиловая кислота (1 мМ) - до 69.0±9.0% (n=5; p<0.05) относительно контроля.

Таким образом, донор H2S усиливает секрецию медиатора из двигательного нервного окончания мыши, а блокаторы ферментов синтеза H2S оказывают противоположные эффекты, что предполагает его эндогенный синтез и модулирующее влияние на нервно-мышечную передачу и у теплокровных животных.

Рис. 23. Эффекты NaHS на вызванную и спонтанную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши.

А- Изменение амплитуды потенциалов концевой пластинки при действии NaHS. На вкладке усредненные потенциалы концевой пластинки (10 реализаций) в контроле и при действии NaHS (100 мкМ) в отдельном эксперименте. Б - Влияние NaHS на частоту миниатюрных потенциалов концевой пластинки. Время действия вещества показано сплошной линией. [Ca2+]о =1.8 мМ, * - p<0.05.

Выявление ферментов, генерирующих сероводород, в скелетной мышце мыши методом полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). При введении в реакцию ОТ-ПЦР препаратов мРНК, полученных из диафрагмы мыши, на электрофореграмме были выявлены фрагменты ДНК лежащие в области 320-330 (n=3) и 240-250 (n=3) п.о. Обнаруженные фрагменты по своему размеру соответствуют теоретически ожидаемым 325 п.о. - для мРНК CSE и 232 п.о. - для мРНК CBS (Рис. 24 А Б, колонка 1).

Амплификационный синтез ДНК отсутствовал в образцах, предварительно обработанных рибонуклеазой А, что свидетельствует о том, что молекулярной мишенью в реакции ОТ-ПЦР служила мРНК, а не геномная ДНК (Рис.24, колонка 3). Для проверки специфичности реакции ОТ-ПЦР, образовавшиеся амплификоны были обработаны рестриктазой HaeIII, которая разрезает продукт реакции в строго определенном участке (см. Методы). В дальнейшем полученные фрагменты были подвергнуты электрофоретическому разделению. Амплификон размером 325 п.о. был расщеплен на фрагменты с размерами, близкими к теоретически ожидаемым (78 и 247 п.о.).

Рис. 24. Выявление мРНК CSE и CBS в диафрагме мыши методом полимеразно-цепной реакции с обратной транскрипцией

А- электрофореграмма для мРНК CSE;Б- электрофореграмма для мРНК CBS;

М - маркер молекулярных размеров; 1 - фрагмент кДНК, специфичный мРНК CSE или CBS 2 - фрагменты кДНК, полученные в результате разделения исходного амплификона рестриктазой HaeIII в определенных участках; 3 - полимеразно-цепная реакция отсутствововала в образцах, обработанных рибонуклеазой А; 4 - отрицательный контроль (деионизованная вода).

При анализе размеров продуктов рестрикции фрагмента 232 п.о. на электрофореграмме выявлены полосы, соответствующие фрагментам с массой 39 и 193 п.о., что соответствует теоретически ожидаемым (Рис. 24, колонка 2). На основании полученных результатов можно сделать вывод об экспрессии мРНК CSE и CBS в изученных образцах.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что экзогенный H2S оказывает облегчающее влияние на спонтанное и вызванное освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши. С использованием активатора и ингибитора Ри-рецепторов было показано, что основным механизмом облегчающего влияния H2S является активация рианодиновых рецепторов внутриклеточных Са2+-депо. Участие цАМФ в эффектах газа может быть связано с активации протеинкиназы А, которая регулирует внутриклеточный уровень Са2+, фосфорилируя субъединицы потенциалзависимых кальциевых каналов и рианодиновых рецепторов (D.M. Terrian, 1995). Нельзя исключать и возможности непосредственного вмешательства H2S в механизмы экзоцитоза синаптических везикул, связанных с трансформацией белков SNARE-комплекса, о чем свидетельствует увеличение частоты МПКП. Выявлена экспрессия мРНК ферментов синтеза сероводорода в диафрагмальной мышце мыши. Синтез H2S регулируется как на уровне экспрессии ферментов CSE и CBS в тканях, так и путем изменения их активности (E. Lowicka, J. Beltowski, 2007). В нервной системе электрическая стимуляция и глутамат увеличивают активность CBS Ca/кальмодулин-зависимым образом (K. Eto et al., 2002). Деполяризация мембраны нервного окончания или мышечных волокон может приводить к эндогенному синтезу H2S и усилению освобождения медиатора.



ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе исследования роли газообразных посредников в модуляции синаптической передачи мы проанализировали эффекты и механизмы влияния NO, СО и H2S на освобождение медиатора из двигательного нервного окончания. Газообразные посредники образуют особую группу веществ, имеющих ряд свойств, отличающих их от классических медиаторов (R.Wang, 2002, 2004). Все они легко проникают через мембрану, выделяются из любого участка клетки, не запасаются в везикулах и не освобождаются экзоцитозом, являются коротко живущими. Клеточные эффекты газов опосредуются либо через систему внутриклеточных посредников, либо через прямое влияние на субъединицы ионных каналов, белки экзоцитоза, внутриклеточные ферменты. В роли нейромедиаторов и нейромодуляторов газы имеют преимущества перед другими посредниками по скорости синтеза и выделения, степени проницаемости через мембрану и широкому спектру мишеней (R.Wang, 2002). Особенности действия газов позволяют предположить их важную роль в формировании кратковременных и долговременных изменений в синаптических структурах в процессах памяти и обучения. Нами было показано, что оксид азота и монооксид углерода оказывают разнонаправленное действие на секрецию медиатора из двигательного нервного окончания. NO уменьшает освобождение ацетилхолина и усиливает потенциалзависимые калиевые токи нервного окончания. СО вызывает усиление высвобождения медиатора без изменения электрогенеза нервной терминали. Известно, что оба газа являются активаторами растворимой формы гуанилатциклазы. При этом микромолярные концентрации NO усиливают активность гуанилатциклазы в 100 раз, тогда как СО является слабым активатором фермента, увеличивая его активность в миллимолярных концентрациях только в 4 раза (J.A.Stone, M.A.Marletta, 1994). В ходе наших экспериментов было показано, что изменение активности гуанилатциклазы опосредует эффекты NО и CO в двигательном нервном окончании, однако, существуют и другие мишени их действия. Известно, что цГМФ осуществляет перекрестное взаимодействие цАМФ и цГМФ-зависимых систем через цГМФ-регулируемые фосфодиэстеразы (ФДЭ II и ФДЭ III). Активация того или иного сигнального пути будет зависеть от базальной активности гуанилатциклазы, аденилатциклазы и внутриклеточной локализации ферментов. Полученные нами данные позволяют предположить, что эффект NO реализуется через активацию ФДЭ II, что ведет к уменьшению уровня цАМФ и снижению секреции медиатора. Образование СО ведет к запуску другого внутриклеточного пути - ингибированию ФДЭ III и активации синтеза цАМФ, что приводит к повышению уровня циклического нуклеотида и увеличению вызванной секреции медиатора. Действительно, эффекты как NO, так и CO полностью предотвращались увеличением уровня цАМФ.

Третий газ - H2S только недавно начал интенсивно исследоваться в качестве эндогенного посредника, механизмы его действия практически не известны (E. Lowicka, J. Beltowski, 2007). Проведенные нами исследования впервые показали, что сероводород и его донор - гидросульфид натрия приводят к усилению секреции медиатора из двигательного нервного окончания, не изменяя электрогенеза нервной терминали. Основной точкой приложения H2S является изменение уровня внутриклеточного кальция за счет активации рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума нервного окончания.

По-видимому, все три газа могут синтезироваться в области нервно-мышечного синапса. Об этом свидетельствуют эксперименты как с блокированием ферментов синтеза газов, так и выявлением ферментов их синтеза в исследуемом препарате. Так, известно, что м-форма нейрональной NO-синтазы экспрессируется в области концевой пластинки и связана с дистрофиновым гликопротеиновым комплексом мембраны мышечного волокна. Нами была выявлена конститутивная форма гем-оксигеназы 2 в скелетных мышечных волокнах лягушки, а также показана экспрессия мРНК ферментов синтеза сероводорода в скелетных мышечных волокнах диафрагмы мыши.

Известно, что регуляция активности ферментов синтеза газов может происходить как кратковременно - в ответ на повышение уровня Са2+ и активацию протеинкиназ, так и долговременно - на уровне экспрессии генов (R.Wang, 2004). Активация этих ферментов в ответ на повышение уровня Са2+, например при сокращении мышцы будет приводить к синтезу газообразного посредника, который диффундируя через синаптическую щель, будет оказывать влияние на выделение медиатора, оказывая положительную или отрицательную обратную связь в системе нервное окончание аксона - скелетная мышца. О возможности эндогенного синтеза газов свидетельствуют и эксперименты с блокаторами NO-синтазы, гем-оксигеназы, CBS и CSE. Все они вызывали эффекты, противоположные действию соответствующего газа или донора, хотя выраженность эффектов была меньшей по сравнению с действием экзогенного газа. По-видимому, даже в условиях одиночной стимуляции имеется тоническая активность ферментов, приводящая к синтезу газа, и этот синтез осуществляется вблизи нервного окончания - в области нервно-мышечного синапса.

Имеются данные о тесном взаимодействии газов, как на уровне регуляции синтеза, так и мишеней действия. Показано, что СО и H2S связываются с NO-синтазой, ингибируя ее активность. CBS - является одной из предполагаемых мишеней действия CO. NO модулирует синтез H2S усиливая экспрессию фермента CSE в тканях (R.Wang, 2004, Wu, Wang, 2006, E. Lowicka, J. Beltowski, 2007). Газы могут взаимодействовать друг с другом, поэтому необходимо рассматривать все три газа как единую систему посредников, регулирующих функцию синапса.

Таким образом, представленные данные свидетельствуют о том, что газообразные посредники - оксид азота, монооксид углерода и сероводород эндогенно синтезируются в области нервно-мышечного синапса и оказывают выраженное модулирующее действие на секрецию медиатора из двигательного нервного окончания. В нервно-мышечном синапсе эффекты оксида азота и монооксида углерода опосредуются изменением уровня циклических нуклеотидов, влияние сероводорода - активацией рианодиновых рецепторов внутриклеточных кальциевых депо. В конечном счете, эти влияния проводят к изменению концентрации внутриклеточного кальция в нервном окончании и модуляции секреции медиатора. Все газы объединяет образование в скелетных мышечных волокнах и ретроградный эффект на пресинаптическое нервное окончание.

Экзогенные (SNP, SNAP), эндогенные (гидроксиламин) доноры NO угнетают вызванную секрецию медиатора и активируют потенциалзависимый калиевый ток в двигательном нервном окончании лягушки.

Субстрат для NO-синтазы - L-аргинин в концентрации 100 мкМ вызывает снижение квантового состава токов концевой пластинки и повышение амплитуды 3-ей фазы ответа нервного окончания, что связано с эндогенным синтезом NO. В концентрации 1000 мкМ L-аргинин вовлечен в механизм ингибирования NO-синтазы, а также имеет собственные NO-независимые эффекты

Увеличение концентрации цГМФ в нервном окончании с помощью мембранопроникающих аналогов (дб-цГМФ, 8Br-цГМФ) и ингибитора цГМФ-специфичной фосфодиэстеразы V (запринаст) снимает действие NO на секрецию медиатора и потенциалзависимый калиевый ток нервного окончания. Снижение синтеза цГМФ путем блокирования растворимой гуанилатциклазы (ODQ) приводит к ослаблению угнетающего действия доноров NO на освобождение медиатора и активирующего действия на потенциалзависимые калиевые каналы нервного окончания.

Повышение внутриклеточной концентрации цАМФ (8Br-cAMP) в нервном окончании снимает эффекты NO на секрецию медиатора и потенциалзависимые калиевые каналы. Уменьшение синтеза цАМФ с помощью ингибитора аденилатциклазы (MDL-12330A) не изменяет эффектов NO на вызванное высвобождение медиаторов и потенциалзависимые калиевые токи. Блокирование протеинкиназы А снимает активирующее действие NO на потенциалзависимые калиевые каналы и ослабляет ингибирующее действие на вызванную секрецию медиатора нервного окончания.

Ингибирование фосфодиэстеразы III (милринон) не влияет на эффекты NO на вызванную секрецию медиатора и потенциалзависимый калиевый ток. Блокирование цГМФ-стимулируемой фосфодиэстеразы II (EHNA) увеличивает вызванную секрецию медиатора и уменьшает амплитуду потенцилзависимого калиевого тока, оказывая эффекты противоположные действию NO. В условиях блокирования цГМФ-стимулируемой фосфодиэстеразы II ослабляется угнетающее действие NO на вызванную секрецию и полностью устраняется активирующий эффект NO на потенциалзависимый калиевый ток.

Экзогенный монооксид углерода увеличивает частоту миниатюрных токов концевой пластинки без изменения из амплитудно-временных параметров и повышает амплитуду и квантовый состав токов концевой пластинки в нервно-мышечном синапсе лягушки. СО не изменяет кинетики ионных токов двигательного нервного окончания.

Увеличение концентрации цГМФ в нервном окончании (8Br-цГМФ) полностью предотвращает увеличение освобождения медиатора при действии монооксида углерода. Снижение синтеза цГМФ путем блокирования растворимой гуанилатциклазы (ODQ) приводит к ослаблению эффекта монооксида углерода на секрецию ацетилхолина из двигательного нервного окончания.

Повышение внутриклеточной концентрации цАМФ (8Br-cAMP) и ингибирование аденилатциклазы полностью снимает облегчающие эффекты монооксида углерода на секрецию медиатора.

На фоне ингибирования цГМФ-стимулируемой фосфодиэстеразы II (EHNA) эффект монооксида углерода на вызванное освобождения медиатора полностью сохраняется. В условиях блокирования фосфодиэстеразы III (quazinone) облегчающее действие монооксида углерода на вызванную секрецию ацетилхолина проявляется в меньшей степени, чем в контрольных условиях.

Блокирование гем-оксигеназы (ZnPP IX) приводит к уменьшению спонтанной и вызванной секреции медиатора, что свидетельствует об эндогенном синтезе монооксида углерода в нервно-мышечном соединении.

Фермент гем-оксигеназа-2 экспрессируется в скелетных мышечных волокнах лягушки. Показана локализация гем-оксигеназы в субсарколеммной области, саркоплазматическом ретикулуме и ядерной мембране.

Сероводород (H2S) и его донор - NaHS вызывают дозозависимое и обратимое увеличение амплитуды и квантового состава токов концевой пластинки (ТКП), не изменяя электрогенез и синхронность выброса медиатора из двигательного нервного окончания лягушки. NaHS увеличивает частоту миниатюрных потенциалов концевой пластинки (МПКП), не изменяя их амплитудно-временных параметров.

Увеличение внутриклеточной концентрации цГМФ с помощью мембранопроникающего аналога pCPT-cGMP, ингибирование гуанилатциклазы с помощью ODQ и аденилатциклазы с помощью MDL-12330А не предотвращает эффекта NaHS на вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки. В условиях увеличения внутриклеточной концентрации цАМФ с помощью мембранопроникающего аналога pCPT-cAMP NaHS приводит к менее выраженному усилению секреции медиатора, чем в контроле.

Влияние сероводорода на вызванную секрецию медиатора опосредуется через модификацию рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума двигательного нервного окончания, так как на фоне активации кофеином или ингибировании дантроленом рианодиновых рецепторов эффект NaHS не проявляется.

В диафрагмальном нервно-мышечном препарате мыши NaHS (100 мкМ) увеличивает амплитуду потенциалов концевой пластинки и повышает частоту миниатюрных потенциалов концевой пластинки без изменения их амплитудно-временных параметров.

Блокатор цистатионин г-лиазы (в-цианоаланин) и блокатор цистатионин в-синтазы (аминооксиацетиловая кислота) оказывают эффекты противоположные действию H2S на секрецию медиатора из двигательных нервных окончаний лягушки и мыши.

Выявлена экспрессия мРНК цистатионин в-синтазы и цистатионин г-лиазы в диафрагмальной мышце мыши с помощью метода полимеразной цепной реакции c обратной транскрипцией.



СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ситдикова Г.Ф. Циклические нуклеотиды в эффектах оксида азота на нервно-мышечную передачу / А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Сборник статей конференции “Функциональная роль монооксида азота и пуринов”. - Минск, 2001. - С. 208-211.

2. Ситдикова Г.Ф. Двухфазные эффекты оксида азота на нервно-мышечную передачу / А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Материалы XVIII съезда Физиологического общества им. И.П. Павлова. - Казань, 2001. - С. 289.

3. Ситдикова Г.Ф. Роль циклических нуклеотидов в реализации эффектов оксида азота (II) на секрецию медиатора и электрогенез двигательного нервного окончания / А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров //Доклады Академии Наук. - 2002. - Т.382, № 2. - С. 1-4.

4. Sitdikova G.F. Role of the cGMP and cAMP-dependent systems in the effects of nitric oxide on transmitter release and potassium currents in the frog neuromuscular junction / A.V. Yakovlev, G.F. Sitdikova, A.L. Zefirov //Neurophysiology. - 2002. - Vol. 34, № 2/3. - P. 267-269.

5. Sitdikova G.F. Changes in the asynchronicity of transmitter release at the neuromuscular junction during prolonged high frequency stimulation / A.L. Zefirov, M.A. Moukhamediarov, G.F. Sitdikova // Neurophysiology. - 2002. - Vol. 34, № 2/3. - P 273-275.

6. Ситдикова Г.Ф. Ионные каналы нервного окончания / А.Л.Зефиров, Г.Ф. Ситдикова // Успехи физиологических наук. - 2002. - Т. 33, № 4. - С. 3-33.

7. Ситдикова Г.Ф. Механизмы влияния высоких концентраций L-аргинина на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки / А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Материалы 4 съезда Физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 2002. - С. 313.

8. Ситдикова Г.Ф. Механизмы эффектов монооксида азота на нервно-мышечную передачу / А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Материалы II Международной конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности. - Москва, 2003. - С. 61-62.

9. Ситдикова Г.Ф. Разнонаправленные эффекты высоких и низких доз субстрата для NO-синтазы - L-аргинина на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания / Г.Ф. Ситдикова, А.В. Яковлев, В.Р. Гарипова, А.Л. Зефиров //Материалы Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино, 2003. - С. 192-194.

10. Ситдикова Г.Ф. Механизмы действия монооксида азота в нервно-мышечном синапсе / А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, О.В. Архипова, А.Л. Зефиров // Материалы Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино, 2003. - С. 206-208.

11. Sitdikova G. Effects of high and low doses of arginine stereoisomers on neuromuscular transmission / G. Sitdikova, A. Yakovlev, A Zefirov // International symposium «Neuron differentiation and plasticity regulation by intercellular signals». - Moscow, 2003. - P. 71-72

12. Sitdikova G. Role of cGMP-stimulated phosphodiesterase in inhibitory effects of nitric oxide (II) on neuromuscular transmission /A. Yakovlev, G. Sitdikova, O. Archipova, A. Zefirov // International symposium «Neuron differentiation and plasticity regulation by intercellular signals». - Moscow, 2003. - P. 72.

13. Sitdikova G.F. Effects of L- and D-arginine stereoisomers on synaptic transmission / G.F.Sitdikova, A. Yakovlev, A Zefirov // 2nd INMED Conference “Transmitter and guiding signals in the formation of cortical networks.- La Ciotat, France, 2003. - Р.17-18.

14. Sitdikova G. Targets and effects of nitric oxide (II) in synaptic transmission / A. Yakovlev, G. Sitdikova, S. Grishin, O. Arkhipova, A. Zefirov // 2nd INMED Conference “Transmitter and guiding signals in the formation of cortical networks. - La Ciotat, France, 2003. - Р. 20-22.

15. Ситдикова Г.Ф. Прижизненное флуоресцентное исследование двигательного нервного окончания лягушки с использованием эндоцитозного маркера FM 1-43 / А.Л. Зефиров, П.Н. Григорьев, А.М. Петров, М.Г. Минлебаев, Г.Ф. Ситдикова //Цитология. - 2003. - Т.45, N 12. - С. 1163-1171.

16. Ситдикова Г.Ф. Эффекты L-и D-стереоизомеров аргинина на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания / Г.Ф. Ситдикова, А.В. Яковлев, А.Л. Зефиров, О.В. Архипова // Доклады Академии Наук. - 2003. - Т.393., №5. - С. 15-19.

17. Sitdikova G. Effects of L-arginine on evoked transmitter release and ionic currents in frog neuromuscular junction / A. Yakovlev, G. Sitdikova, E. Gerasimova, A. Zefirov // Abstr. of International symposium “Biological motility”. - Moscow-Puschino, 2004. - P. 73-74.

18. Sitdikova G.F. Effects of heme oxygenase inhibitor zinc protoporphyrine IX on spontaneous and evoked transmitter release in frog neuromuscular junction / G.F. Sitdikova, S.N. Grisin, V.R. Bikeeva, G.R. Burhanova, E.R. Valiullina // International symposium “Biological motility”. - Moscow-Puschino, 2004. - P.65.

19. Sitdikova G. Carbon monoxide modulated the synaptic transmission by cAMP-and cGMP-dependent mechanisms / A. Yakovlev, G. Sitdikova, A. Zefirov // 3nd INMED conference. - La Ciotat, France, 2004. - P. 15.

20. Ситдикова Г.Ф. Ретроградная модуляция нервно-мышечной передачи газообразными посредниками / Г.Ф. Ситдикова // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. - 2004. - Т. 90, № 8. - С. 279-280.

21. Sitdikova G. Effects of L-arginine on neuromuscular transmission / A. Yakovlev, G. Sitdikova, A. Zefirov // Conference of neurobiology. - Gif-sur-Yvette, France, 2004. - P. 58.

22. Ситдикова Г.Ф. Внутриклеточные пресинаптические механизмы эффектов оксида азота (II) в нервно-мышечном соединении лягушки / А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Нейрохимия. - 2005. - Т.22, №1. - С. 81-87.

23. Ситдикова Г.Ф. Пресинаптические эффекты арахидоновой кислоты и простагландина Е2 в нервно-мышечном синапсе лягушки / О.В. Архипова, С.Н. Гришин, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова - 2005. - Т.91, №3. - С. 268-276.

24. Ситдикова Г.Ф. Пресинаптические эффекты монооксида углерода в нервно-мышечном синапсе лягушки / Г.Ф. Ситдикова, С.Н. Гришин, А.Л. Зефиров // Доклады Академии Наук. - Т. 403, № 1. - 2005. - С. 121-125.

25. Ситдикова Г.Ф. Исследование роли гуанилатциклазной системы в эффектах монооксида углерода на нервно-мышечную передачу / А.Р. Ибатуллина, Г.Ф. Ситдикова // Материалы III Всероссийской с международным участием школы-конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности. - Москва, 2005. - С. 107.

26. Ситдикова Г.Ф. Влияние газообразных посредников - оксида азота и монооксида углерода на нервно- мышечную передачу / Г.Ф. Ситдикова, А.В. Яковлев, А.Л. Зефиров // Тезисы докладов научной конференции «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты», 2005. - С. 121.

27. Ситдикова Г.Ф. Исследование внутриклеточных механизмов действия монооксида углерода на нервно-мышечную передачу/ Г.Ф. Ситдикова, А.Р. Ибатуллина, А.Л. Зефиров// Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино, 2005. - С. 181-184.

28. Ситдикова Г.Ф. Дозозависимые эффекты сероводорода на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе / Е.В. Герасимова, А.В. Яковлев, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров// Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино, 2005. - С. 166-169.

29. Ситдикова Г.Ф. Роль гуанилат- и аденилат циклазных систем в эффектах монооксида углерода на вызванную секрецию медиатора/ Г.Ф. Ситдикова, А.Л Зефиров //Бюллетень Сибирской медицины. - Т. 4. - 2005. - С. 50.

30. Ситдикова Г.Ф. Иммуногистохимическое определение гемоксигеназы в скелетных мышечных волокнах лягушки и электрофизиологический анализ влияния СО на высвобождение ацетилхолина / Г.Ф. Ситдикова, А.Р. Ибатуллина, А.Р. Гиниатуллин, А.Л. Зефиров // Научные труды I Съезда физиологов СНГ. - Сочи, Дагомыс, 2005. - С.17-18.

31. Ситдикова Г.Ф. Роль ингибирования NO-синтазы в эффектах монооксида углерода на высвобождение медиатора/ В.В. Пермякова, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // XII Международное совещание и IV Школа по эволюционной физиологии. - Санкт-Петербург, 2006. - С. 168.

32. Ситдикова Г.Ф. Роль аденилатциклазной системы в реализации эффектов газообразных посредников на вызванное освобождение ацетилхолина / Г.Ф. Ситдикова, Е.В. Герасимова, А.В. Яковлев, А.Л. Зефиров // Материалы I Всероссийского с международным участием конференции по управлению движением. - Великие Луки, 2006. -С. 86-87.

33. Ситдикова Г.Ф. Газообразные посредники в нервной системе / Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - Т. 97, №7. - 2006. - С. 872-882.

34. Ситдикова Г.Ф. Влияние внутриклеточного уровня цАМФ на эффекты монооксида углерода на вызванное освобождение ацетилхолина в нервно-мышечном синапсе / Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Тезисы докладов и стендовых сообщений научной конференции нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС. - Пенза, 2006. - С. 50.

35. Ситдикова Г.Ф. Роль ЦГМФ-зависимых фосфодиэстераз в эффектах монооксида углерода на вызванное освобождение ацетилхолина в нервно-мышечном синапсе / Г.Ф. Ситдикова, А.Р. Ибатуллина, А.Л. Зефиров // 1-й международный междисциплинарный Конгресс "Нейронаука для медицины и психологии". - Судак, 2006. - С. 37.

36. Sitdikova G.F. Cyclic AMP level mediates the effects of carbon monoxide in frog neuromuscular junction / G.F. Sitdikova, A.L. Zefirov // Abstr. of International symposium “Biological motility”. - Pushchino, 2006. - Р. 61-62.

37. Sitdikova G.F. AMP-system in the effects of carbon monoxide in frog neuromuscular junction / G.F. Sitdikova, A.L. Zefirov // VII east European conference of the International society of invertebrate neurobiology “Simpler nervous systems”. - Kazan, 2006.- P. 81.

38. Ситдикова Г.Ф Роль внутриклеточного уровня цАМФ в эффектах газообразных посредников на нервно-мышечный синапс / Г.Ф. Ситдикова, Е.В. Герасимова, В.В. Пермякова // Тезисы VII всероссийского симпозиума и школы семинара молодых ученых и учителей «Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке». - Казань, 2006. - С. 100-101.

39. Ситдикова Г.Ф. Газообразные посредники - оксид азота (II), монооксид углерода и сероводород как модуляторы освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе / Г.Ф. Ситдикова, Е.В. Герасимова, О.В. Яковлева, В.В. Пермякова // Материалы международной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение». - Астрахань, 2006. - С. 144-147.

40. Ситдикова Г.Ф. Жирные кислоты модулируют процессы секреции медиатора и функционирования калиевых каналов в двигательном нервном окончании / О.В. Яковлева, Г.Ф. Ситдикова, Е.В. Герасимова, А.Л. Зефиров // Нейрохимия. - 2006. - Т. 23. - № 4. - С. 310-316.

41. Sitdikova G.F. The presynaptic effects of arachidonic acid and prostaglandin E2 at the frog neuromuscular junction / O.V. Arkhipova, S.N. Grishin, G.F. Sitdikova, A.L. Zefirov // Neurosci. Behav. Physiol. - 2006. - Vol. 36, № 3. - P. 307-312.

42. Sitdikova G.F. Modulation of neurotransmitter release by carbon monoxide at the frog neuro-muscular junction/ G.F. Sitdikova, R.R. Islamov, M.A. Mukhamedyarov, V.V. Permyakova, A.L. Zefirov, A. Palotas // Curr. Drug. Metab. - 2007. - Vol. 8, №2. - Р. 177-184.

43. Sitdikova G.F. Fatty Acids Modulate Transmitter Release and Functioning of Potassium Channels in Motor Nerve Endings / O.V. Yakovleva, G.F. Sitdikova, E.V. Gerasimova, A.L. Zefirov // Neurochemical Journal. - 2007. - Vol. 1, №. 2. - P. 143-149.

44. Ситдикова Г.Ф. Сероводород - модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе теплокровных и холоднокровных / Е.В. Герасимова, В.В. Пермякова, Г.Ф. Ситдикова // Тезисы докладов ХХ съезда физиологического общества им. И.П. Павлова - Москва, 2007. - С. 192.

45. Ситдикова Г.Ф. Оксид азота (II) и монооксид углерода как эндогенные модуляторы синаптической передачи / Г.Ф. Ситдикова, А.В. Яковлев, А.Л. Зефиров // Тезисы докладов ХХ съезда физиологического общества им. И.П. Павлова - Москва, 2007. - С. 416.

46. Ситдикова Г.Ф. Роль цАМФ и цГМФ в эффектах сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки / Е.В. Герасимова, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино, 2007. - С. 114-116.

47. Ситдикова Г.Ф. Влияние монооксида углерода на процессы экзо- и эндоцитоза синаптических везикул в двигательном нервном окончании лягушки / Г.Ф. Ситдикова, В.В. Пермякова, А.Л. Зефиров // Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино, 2007. -С. 138-141

48. Ситдикова Г.Ф., Исследование блокаторов синтеза сероводорода на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки / Е.В. Герасимова, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Неврологический вестник.- Казань. - 2007. - Т. XXXIX.- выпуск 1.-С. 83-84.

49. Ситдикова Г.Ф. Сероводород как эндогенный модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки/ Е.В. Герасимова, Г.Ф. Ситдикова, А.Л. Зефиров // Нейрохимия. - 2008.- Т. 25, №1-2.- С. 138-145.

50. Sitdikova G.F. Hydrogen Sulfide as an Endogenous Modulator of Mediator Release in the Frog Neuromuscular Synapse / E.V. Gerasimova, G.F. Sitdikova, A.L Zefirov // Neurochemical Journal. - 2008.- Vol. 2, № 1-2. - P. 120-126.

51. Sitdikova G. Regulation of calcium-activated potassium channels activity by hydrogen sulfide / G. Sitdikova, T.M. Weiger, A.L. Zefirov, A. Hermann // International symposium “Biological motility”. - Moscow, Puschino, 2008. - P.181-185

52. Sitdikova G.F. Effect of hydrogen sulfide on the kinetics of transmitter release in frog neuromuscular junction / E.V. Gerasimova, G.F. Sitdikova, A.V. Yakovlev, A.L. Zefirov // International symposium “Biological motility”. - Moscow, Puschino, 2008. - P. 153-156.

53. Sitdikova G. Hydrogen sulfide increases the activity of calcium-activated potassium channels (BK) of rat pituitary tumor (GH3) cells/ G. Sitdikova, T.M. Weiger, A. Hermann // 6th Forum of European Neuroscience. - Geneva, Switzerland, 2008. - P.180.31.

54. Ситдикова Г.Ф. Монооксид углерода и сероводород: газообразные посредники в нервно-мышечном синапсе / Г.Ф. Ситдикова, Е.В. Герасимова, А.Л. Зефиров // Бюллетень Сибирской медицины. Тезисы докладов VI Сибирского физиологического съезда, 2008. - C. 28

55. Ситдикова Г.Ф. Анализ эффектов сероводорода и блокаторов его синтеза на нервно-мышечную передачу в диафрагмальной мышце мыши / Е.В. Герасимова, Г.Ф. Ситдикова // Бюллетень Сибирской медицины. Тезисы докладов VI Сибирского физиологического съезда, 2008. - C. 35

56. Ситдикова Г.Ф. Везикулярный цикл в двигательных нервных окончаниях диафрагмы мыши / А.Л. Зефиров, А.В. Захаров, Р.Д. Мухамедзянов, А.М. Петров, Г.Ф. Ситдикова // Росс. физиол. журнал им. И.М.Сеченова. - 2008. - Т.94, №2. - С. 129-142.

57. Ситдикова Г.Ф. Влияние монооксида углерода на динамику экзоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях при высокочастотной стимуляции / Г.Ф. Ситдикова, Е.В. Герасимова, А.Л. Зефиров // Материалы IV Конференция Украинского общества нейронаук, Донецк-Славянск, 2008. - С. 47.

58. Автор выражает искреннюю благодарность чл-корр. РАМН, доктору медицинских наук, профессору А.Л. Зефирову за консультативную помощь и ценные рекомендации при выполнении и обсуждении работы.

Размещено на Allbest.ru

...