Размещено на http://www.allbest.ru/

Государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Нижегородская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Факторы и условия, регулирующие функциональную активность буккальных эпителиоцитов и их взаимодействие с Candida albicans

03.03.01 физиология

03.02.03 микробиология

Лукова О.А.

Нижний Новгород 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Функциональная активность эпителиоцитов слизистых оболочек

1.2 Адгезивные взаимодействия мукозальных эпителицитов с микроорганизмами

1.3 Толл - подобные рецепторы эпителиоцитов слизистых оболочек

1.4 Внутриклеточные сигнальные пути эпителиоцитов

1.5 Факторы, способные влиять на функциональную активность эпителиоцитов

1.5.1 Гормоны

1.5.2 Цитокины

1.5.3 Иммуномодуляторы

1.5.4 Микробные метаболиты

1.6 Эпителиоциты слизистых оболочек в клинико-лабораторных исследованиях

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объем исследований

2.2 Получение эпителиоцитов слизистых оболочек

2.3 Оценка естественной колонизации эпителиоцитов

2.4 Получение клеточной суспензии Candida аlbicans

2.5 Оценка адгезии в системе «эпителиоциты - C.albicans»

2.6 Приготовление факторов для воздействия на эпителиоциты

2.6.1 Получение продуктов метаболизма микроорганизмов

2.6.2 Женские половые гормоны

2.6.3 Цитокины

2.6.4 Иммуномодулирующие препараты

2.6.5 Антисептические средства

2.7 Определение уровня экспрессии Toll-подобных рецепторов на буккальных эпителиоцитах и жизнеспоспособности клеток

2.8 Ингибирование внутриклеточных сигнальных путей

2.8.1 Подавление активации транскрипционного фактора NF-kB

2.8.2 Ингибирование активности внутриклеточных митоген-активированных киназ ERK1/p38

2.9 Получение сыворотки человека

2.10 Определение уровня сывороточных иммуноглобулинов IgE и IgG

2.11 Определение уровня растворимых sCAM - I в сыворотке

2.12 Схема применения лизоцим-содержащего антисептического препарата у часто болеющих детей

2.13 Схема лечения больных с онихомикозом и микробной экземой с использованием иммуномодулирующих препаратов

2.14 Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Влияние эндогенных и экзогенных факторов на адгезивность эпителиоцитов слизистых оболочек в экспериментальной системе с C. albicans in vitro

3.1.1 Влияние женских половых гормонов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C. albicans

3.1.2 Влияние цитокинов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C. albicans

3.1.3 Влияние иммуномодуляторов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C.albicans

3.1.4. Влияние антисептических препаратов на адгезивные реакции мукозальных эпителиоцитов в системах с C. albicans

3.1.5 Влияние микробных метаболитов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C. albicans

3.2 Участие внутренних метаболических путей в регуляции адгезивных реакций буккальных эпителиоциов

3.3 Условия и факторы, регулирующие экспрессию TLR-2 и TLR-4 на буккальных эпителиоцитах

3.3.1 Влияние половых гормонов на экспрессию toll-подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro

3.3.2 Влияние цитокинов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro

3.3.3 Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальных эпителиоцитов здоровых доноров in vitro

3.3.4 Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальных эпителиоцитов у пациентов с заболеваниями пародонта

3.3.5 Влияние антисептических препаратов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro

3.3.6 Влияние микробных метаболитов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальными эителиоцитами

3.4 Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов в оценке эффективности применения иммуномодуляторов и антисептиков при некоторых хронических патологиях

3.4.1 Естественная колонизация буккального эпителия больных с микробной экземой до и после лечения с использованием препарата «Полиоксидоний»

3.4.2. Естественная колонизация буккального эпителия взрослых с онихомикозом дрожжевого генеза до и после лечения с использованием препарата «Деринат»

3.4.3. Естественная колонизация буккального эпителия у часто болеющих детей до и после применения лизоцим - содержащего препарата

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДМСО - диметилсульфоксид

ЗФР - забуференный физиологический раствор (рН 7,2-7,4)

ЛГ - лютеинизирующий гормон

ОРЗ - острое респираторное заболевание

ФСГ - фолликулостимулирующий гормон

ХГЧ - хорионический гонадотропин

ЧБД - часто болеющие дети

CD - маркёры клеточной дифференцировки (cluster of differentiation)

sICAM-I - растворимые молекулы межклеточной адгезии I

IFN - интерферон (interferon)

IL - интерлейкин (interleukin)

NF-kB - - нуклеарный фактор kB

NK - естественный киллер (natural killer)

PAMPs - патоген-ассоциированные паттерны и молекулярные образы микроорганизмов

TLR - толл-подобные рецепторы (toll-like receptor)

TNFб - Фактор некроза опухоли б (tumor necrosis factor)

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время большое внимание уделяется поиску простых и неинвазивных методов выявления патологических изменений в организме человека. Одним из таких перспективных направлений является исследование функционального состояния эпителиоцитов слизистых оболочек, которое может служить источником важной диагностической и прогностической информации [Маянский А.Н. и соавт. 2004; Полякова В.О. и соавт., 2015)].

Функциональная активность мукозальных клеток находит отражение в процессах клеточной дифференцировки, синтезе различных молекул, экспрессии рецепторов и отражает состояние местного и общего гомеостаза организма человека, а также его нарушения при патологии и старении [Маянский А.Н и соавт., 2004; Пальцев М.А.и соавт., 2012; Полякова В.О. и соавт., 2015]. Изменение функционального состояния эпителиоцитов является следствием различных воздействий на рецепторный аппарат клетки. Так, благодаря способности экспрессировать toll-подобные рецепторы (TLRs), эпителиальные клетки могут обнаруживать типовые молекулярные последовательности-паттерны (PAMPs) микробного или иного происхождения, не свойственные тканям человека [Полторак, А.Н., 2014; Brightbill H., Modlin R. 2000; Zhang G.,2001; Cario E.,2002; Akira S., Hemmi H., 2003; Takeda K., Akira S., 2005; Weindl, G. et all, 2007. Naglik, J.R., Moyes D., 2011а; McClure R., Massari P., 2014].

TLRs являются мощными активаторами внутриклеточных сигнальных путей, таких как система нуклеарного фактора kB и МАР-киназ, которые способствуют синтезу функционально активных молекул (цитокины, молекулы межклеточной адгезии, рецепторы, белки острой фазы, ферменты, молекулы главного комплекса гистосовместимости и др.) мукозальными клетками [Маянский А.Н. и соавт., 2007; Baldwin A.S.Jr., 1996; Barnes P.J. et all., 1997; Andreakos E. et.all. 2005; Weindl, G. et all, 2010; Hayden M. S., Ghosh S. 2011]. Через продукцию данных медиаторов, эпителиоциты слизистых оболочек активно вовлекаются в воспалительные и иммунные реакции, транслируя сигналы лимфоцитам, макрофагам и дендритным клетками, присутствующим в lamina propria [Топтыгина А.П., Афанасьев С.С., 2009].

Для оценки функциональной активности эпителиоцитов слизистых оболочек в настоящее время используют различные методы, основанные на изучении их морфологии, выявлении клеточных маркеров и рецепторов (иммуногистохимия), продукции цитокинов, медиаторов, определении содержания ДНК (микроспектрофотометрия), а также уровня естественной колонизации нормальной микрофлорой [Банченко Г.В. и соавт. 1997; Быков В.Л.,1997; Абаджиди М.А. и соавт., 2003; Авдалян А.М. и соавт., 2003; Сапронова Е.А. и соавт, 2003; Махрова Т.В., и соавт., 2004; Маянский А.Н. и соавт.. 2005; Караулов А.В. и соавт.,2012; Бочкарева О.П. и соавт, 2013; Полякова В.О. и соавт., 2015; Steele С., Fidel P.L., 2002]. В то же время, функционирование рецепторного аппарата эпителиоцитов и его реактивность, т. е. способность отвечать на стимулы - изучены недостаточно. Также не в полной мере определен спектр экзогенных и эндогенных факторов, способных регулировать экспрессию рецепторов эпителиальных клеток, в частности, обеспечивающих адгезивные контакты с микроорганизмами.

В настоящей работе были использованы новые методические подходы для оценки функционального статуса клеток слизистых оболочек, основанные на изучении работы их рецепторного аппарата. Реактивность рецепторов эпителиоцитов оценивалась по экспрессии TLRs, а также по способности клеток к адгезивным взаимодействиям с тест-культурой Сandida albicans в процессе искусственной колонизации in vitro.

Целью работы является исследование функциональной активности рецепторного аппарата буккальных эпителиоцитов под влиянием различных факторов и условий, а также при взаимодействии с C. albicans и микробиотой полости рта.

Задачи исследования:

Определить влияние эндогенных и экзогенных факторов: половых гормонов, цитокинов, иммуномодуляторов, антисептиков и микробных метаболитов - на функциональную активность рецепторного аппарата эпителиоцитов слизистых оболочек при адгезивных контактах с C. albicans.

Проанализировать взаимоотношение систем нуклеарного фактора kB и митоген-активированных киназ с активностью рецепторного аппарата буккальных эпителиоцитов при адгезивных взаимодействиях с C. albicans.

Оценить экспрессию TLR-2 и TLR-4 буккальными эпителиоцитами под влиянием эндогенных и экзогенных факторов, а также, при хроническом пародонтите.

Сравнить уровень естественной колонизации буккального эпителия у пациентов с заболеваниями различного генеза до и после терапии с использованием иммуномодуляторов и оральных антисептиков.

Научная новизна

Впервые получены данные об изменении адгезивных свойств буккальных эпителиоцитов под действием эндогенных и экзогенных факторов: половых гормонов, цитокинов, иммуномодуляторов и антисептиков в системах с C. albicans in vitro.

Получены новые сведения о значении нуклеарного фактора kB для реализации контактных взаимодействий буккальных эпителиоцитов с

С. albicans.

Впервые определен уровень экспрессии TLR-2 и TLR-4 на буккальных эпителиоцитах в норме и при пародонтите методом проточной цитофлюориметрии, а также выявлены субпопуляционные изменения среди TLR-2- и TLR-4-позитивных клеток под влиянием эндогенных и экзогенных факторов.

Впервые изучена динамика изменения уровня естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у пациентов на фоне применения комплексной терапии с использованием иммуномодуляторов и оральных антисептиков.

Теоретическая и практическая значимость

Подтверждена высокая чувствительность и информативность экспериментальной модели «адгезия C. albicans на эпителиоцитах слизистых оболочек in vitro» для оценки реактивности рецепторного аппарата эпителиальных клеток в ответ на различные стимулы.

Показано, что эпителиоциты разных биотопов - буккальные и вагинальные клетки - однотипно меняют адгезивную активность в отношении кандид под действием половых гормонов in vitro.

Разработан способ изучения функциональной активности и реактивности буккальных эпителиоцитов по оценке экспрессии toll-подобных рецепторов методом проточной цитофлюориметрии.

На основе метода исследования естественной колонизации буккального эпителия разработан алгоритм оценки эффективности применения иммуномодуляторов и оральных антисептиков в комплексном лечении хронических патологий.

Внедрение результатов работы

Разработанные методы и алгоритмы используются в лабораторно-диагностической и научно-исследовательской работе Нижегородского филиала ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава РФ и стоматологической поликлинике ГОУ ВПО «НижГМА Минздрава» (г. Нижний Новгород).

Положения, выносимые на защиту

Гормоны, участвующие в обеспечении овуляции и поддержании состояния беременности (лютеинизирующий гормон, прогестерон) усиливают адгезивность эпителиоцитов слизистых оболочек в отношении C. albicans in vitro.

Обработка эпителиоцитов иммуномодуляторами и оральными антисептиками in vitro снижает способность буккальных клеток адгезировать C. albicans.

Кандида-зависимая активация нуклеарного фактора kB в буккальных клетках усиливает контактное взаимодействие эпителиоцитов с C. albicans.

Экспрессия TLR-2 и TLR-4 на буккальных эпителиоцитах способна регулироваться микробными метаболитами и иммуномодуляторами, а также меняется при хроническом пародонтите.

Анализ изменения уровня естественной колонизации буккального эпителия может применяться в оценке эффективности терапевтических мероприятий с использованием иммуномодуляторов и оральных антисептиков у пациентов разных возрастных групп с хроническими патологиями (онихомикоз, микробная экзема, респираторные заболевания).

Апробация материалов диссертации

Диссертация апробировалась на расширенном заседании кафедры микробиологии и иммунологии ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава (г. Нижний Новгород) 20 февраля 2015 г; протокол № 8.

Основные результаты диссертации докладывались и обсуждались на: XI, XII, XVI научно-практических конференциях по медицинской микологии (Санкт-Петербург; 2008, 2009, 2013), 2-ом съезде Микологов России (Москва, 2008), Х международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань,2009), 2-ом Международном конгрессе по пробиотикам (Санкт-Петербург,2009), XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва,2010), всероссийской научно-практической конференции, посвященной 95-летию ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной (Нижний Новгород, 2014), на III Санкт-Петербургском международном экологическом форуме «Инфекция и иммунитет» (Санкт-Петербург, 2014).

Публикации

По материалам диссертации опубликована 21 печатная работа, из них 3 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 27 таблицами и 39 рисунками. Библиографический указатель включает 185 источников литературы, в том числе 118 отечественных и 67 зарубежных авторов.

Вклад автора

Диссертация представляет собой обобщение результатов, полученных автором лично. Эксперименты на проточном цитофлюориметре выполнялись совместно с к.б.н. Кропотовым В.С. на базе ФГУ "Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии" Минздрава РФ. Оценка ряда лабораторных показателей у больных с микробной экземой и онихомикозом проводилась совместно с врачами ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава РФ (Пышкина Е.И., к.м.н. Шебашова Н.В, к.м.н. Мишина Ю.В). Работы по изучению уровня колонизационной резистентности полости рта у часто-болеющих и здоровых детей проводились совместно с сотрудниками кафедры гигиены ГБОУ НижГМА Минздрава РФ (проф., д.м.н. Якубова И.Ш., к.м.н. Поляшова А.С.). Буккальный эпителий от больных пародонтитом был предоставлен зав. стоматологической поликлиникой ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава РФ, к.м.н. Китаевой Е.В.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Функциональная активность эпителиоцитов слизистых оболочек

Эпителиальные клетки слизистых оболочек входят в систему мукозального иммунитета, обеспечивающую первую линию защиты против колонизации различными патогенами [Маянский А.Н. 2006]. От функционального состояния и активности мукозальных эпителиоцитов во многом зависит устойчивость к микробной агрессии, острота ранней фазы воспаления и ее исходы [Маркелова Е.В. и др.,2005; Лебедева О.П, и др.,2006].

Поддержание целостности и барьерных свойств эпителия обеспечивают три взаимноуравновешенные и одновременно протекающие процесса [ГемоновВ.В.,1996,Быков В.Л., 1997; Kalinin A.E.et all.,2002]:

1) регенерация - непрерывное образования клеток в самом глубоком (базальном) слое благодаря делению малодифференцированных предшественников;

2) дифференциация - изменение морфофункциональных характеристик

клеток одновременно с их смещением в вышележащие слои;

десквамация - удаление с поверхности эпителия клеток (роговых чешуек), поврежденных и содержащих на своей поверхности микробы.

Функциональный статус эпителиоцитов слизистых оболочек зависит от степени их зрелости. В составе многослойного пласта клетки эпителия находятся на разных стадиях морфофункциональной дифференцировки - от малодифференцированных предшественников в базальном слое (обеспечивают регенерацию эпителия) до высокоспециализированных клеток, которые по мере дифференцировки смещаются в поверхностные слои, подвергаясь десквамации [Банченко Г.В. и др., 1997, Быков В.Л.,1997], с признаками ороговения (наличие кератина) [Jacob H.S. et all.,1980]. Ороговение эпителия служит мощным защитным механизмом слизистой оболочки полости рта благодаря механической прочности, высокой химической устойчивости и низкой проницаемости рогового слоя. Интенсивное воздействие на буккальный эпителий раздражающих факторов (микробных, механических, химических, температурных) способно вызывает его усиленное ороговение [Данилевский Н.Ф. и др.,1979; Бурягина Н.В. и др., 2013]

Присутствие в эпителиальных чешуйках гидролитических ферментов (кислая фосфотаза, неспецифическая эстераза) также свидетельствуют в пользу участия клеток эпителия в защитных реакциях слизистой оболочки в качестве элемента, способного вызвать протеолиз микроорганизмов. Это возможно либо в результате разрушения эпителиальных чешуек, либо на их поверхности, в результате прямого действия на адсорбированные микроорганизмы [Быков В.Л., 1997].

Десквамация и секреция слизи являются физиологическими функциями эпителия, благодаря которым формируется физический (механический) барьер противомикробной защиты. Химический компонент представлен растворимыми и связанными с клеткой рецепторами, а также антимикробными пептидами [Ахматова, Н.К. и др.,2008; Ярилин, 1999]. Подобно другим клеткам, эпителиоциты секретируют различные медиаторы, которые оказывают влияние на развитие иммунных и воспалительных реакций. Зпителиальные клетки способны синтезировать интерлейкины IL-6, IL-8, IL-18, гамма-интерферон, хемокины, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), лейкотриены (ЛТ-В4), простагландины (ПГ-Е2), а также экспрессировать коадгезивные (CD54), костимулирующие (CD40) и антигенпредставляющие (HLA) молекулы [Eberhard, J. et al., 2002, Ellmerich, S et al.,2000; Farmer, I. et al., 2001; Mannhardt, W. et al.,1999; Rouabhia, M et al.,2002; Smith, J.K et al., 1996; Steele C. et al., 2002]. С помощью этих активных молекул мукозальные эпителиоциты способны вступать в кооперацию с индукторами и эффекторами воспаления и иммунитета, такими как нейтрофилы, макрофаги, Т- и В-лимфоциты, тучные клетки, эозинофилы, дендритные клетки [Симбирцев А.С., 2004]. Таким образом эпителиоциты слизистых оболочек участвуют в поддержании функций гомеостаза и способны координировать иммунные реакции [Маянский А.Н.2006; Weindl G, et all., 2010; Сотникова Н.Ю.,2009].

Образование медиаторов и других активных молекул зависит от функционального состояния буккальных эпителиоцитов, меняясь под влиянием различных воздействий [Rouabhia M, 2002. et al].

Известно, что эпителиоциты постоянно подвергаются механическому травмированию, воздействию широкого спектра температур и значений pH, раздражающих и повреждающих веществ, а также атаке микроорганизмов [Абаджиди, и др., 2003; Бурягина Н.В., и др., 2013]. Все эти воздействия способны улавливать различные группы сигнальных молекул, в частности, toll-подобные рецепторы (TLRs) (см. п 1.3.), после чего сигнал транслируется на генетический аппарат клетки при помощи ряда внутриклеточных сигнальных систем (см. п. 1.4.). Изменение уровня экспрессии генов, отвечающих за синтез биологически активных молекул, процессы дифференциации и апоптоза способствуют переходу клетки в новое функциональное состояние.

1.2 Адгезивные взаимодействия мукозальных эпителиоцитов с микроорганизмами

Закрепление микроорганизмов на поверхности эпителиальных клеток может служить началом инфекционного процесса [Маянский А.Н., 2006; E. Nester., et all., 2009]. При этом, успех микробной колонизации зависит от наличия у микроорганизма соответствующих рецепторов, вирулентности штамма, выраженности иммунных реакций на уровне слизистых оболочек и состояния колонизируемой ткани [Маянский А.Н. 2006; Cannon, R.D. et all.,1995; Лесовой В.С.и др.,2003; Величко Е.В.,2003; Сергеев А. Ю., Сергеев Ю.В., 2001].

Способность к адгезивным взаимодействиям является важнейшей функциональной характеристикой эпителиоцитов. Прикрепление (адгезия) микроорганизма к клеткам слизистых оболочек имеет два механизма. Первый - не зависит от уровня метаболической и цитоскелетной активности эпителиоцитов. Это пассивный механизм, который не связан со специфическими рецепторами и может определяться гидрофобными, электростатическими или прочими слабыми взаимодействиями в системе «эпителиоцит-микроорганизм». Второй механизм - рецептор-зависимый - является результатом метаболической активности мукозальных клеток [Махрова Т.В., 2004ав]. В рецепторные взаимодействия эпителиоцитов с микроорагнизмами могут быть вовлечены разнообразные группы молекул, такие как гликосфинголипидные рецепторы, фукозные (N-ацетил-D-глюкозаминовые остатки), RGD-содержащие полипептиды, содержащие последовательность Арг-Гли-Асп [Cannon R.D et al.,1995].

При этом, на реализацию адгезии потенциала в системе «эпителиоцит-микроорганизм» могут оказывать влияние многие факторы, как со стороны макроорганизма, так и со стороны потенциального патогена [Черкасов С.В. и др, 2011].

Регулирование адгезии микроорганизмов на эпителиоцитах часто зависит от секрета слизистых оболочек. Так, гипосаливация может предшествовать развитию инфекций ротовой полости, в то же время антиадгезивным эффектом обладают различные факторы слюны, в частности, антитела, муцины, катионные белки, ферменты [Зеленова Е.Г. и др. 2004 Махрова Т.В. и др. 2005, Naglik J.R.В 2011]. Гормональные изменения могут оказывать влиянии на адгезию микроорганизма к мукозальным эпителиоцитам [Кравцов Э.Д и др.,2014], также как и наличие местного или системного воспалительного процесса [Абаджиди М.А. и др, 2000., Маянский А.Н и др., 2002]. В последнем случае рецепторный аппарат эпителиоцитов подвергается воздействию протеолитических и гликозидазных ферментов мукозальных секретов, влияющих на поверхностные структуры эпителиальных клеток. Количество подобных ферментов подвержено изменениям, заметно повышаясь во время тяжелых (критических) заболеваний. Это вызывает функциональную трансформацию эпителиальных клеток, что отражается на качественных и количественных показателях микробиоценоза слизистых оболочек [Маянский А.Н. и др.1987; Абаджиди, М.А. и др. 2000; Маянский, А.Н. и др. 2004] и ведет к ослаблению колонизационной резистентности.

Конкурентные отношения между представителями микробиоценоза, а также продукты их метаболизма могут оказывать влияние на взаимодействие микроорганизмов с эпителиоцитами [Махрова T.В. и др., 2004; Кремлева Е.А. и др., 2012].

Адгезины микроорганизмов могут выполнять и другие функции, помимо собственно адгезии (прикрепления к поверхности). Некоторые из них являются антигенами и способствуют активации эпителиоцитов, через взаимодействие с сигнальными молекулами на поверхности клеток, например такими как toll- подобные рецепторы (TLR) [Weindl, G. et al., 2007].

1.3 Толл - подобные рецепторы эпителиоцитов слизистых оболочек

Клетки человека способны обнаруживать и распознавать структуры, общие для разных групп патогенов (PAMP), используя toll - подобные рецепторы [Akira S, 2003; McClure et.all., 2014]. Toll-зависимая рецепция является пусковым моментом для активации эпителиальных клеток через каскад внутриклеточных реакций, в результате чего изменяется функциональная активность эпителиоцитов, которая может проявляться в виде усиленной секреции цитокинов, пептидных медиаторов, дифенсинов, ингибиторов провоспалительных агентов, цитокиновых и прочих рецепторов, молекул главного комплекса гистосовместимости и молекул межклеточных взаимодействий [Cario E., et al., 2002; Sasai M,et all., 2013; Weindl, G. et al., 2007; Weindl G. et all.,2010; Naglik J.R.,2011а; McClure R. et.all., 2014].

Таким способом - через активацию TLRs - эпителиоциты могут принимать участие в регуляции врожденного и адаптивного иммунитета за счет трансдукции сигнала лимфоцитам, макрофагам и дендритным клеткам, присутствующим в Lamina propria [Топтыгина А.П., и др. 2009; Бережная Н.М. 2013].

Непосредственный контакт TLR с лигандом инициирует внутриклеточную передачу сигнала. При этом, один из путей связан с включением адаптерного белка MyD 88 (белок первичного ответа миелодной дифференцровки 88), который активирует ядерный (нуклеарный) транскрипционный фактор - NF-kB, инициирующий в ядре транскрипцию генов провоспалительных цитокинов и антимикробных пептидов [Лебедева О.П. и др.,2012].

Известно, что эпителиоциты человека способны экспрессировать широкий спектр toll-подобных рецепторов - от TLR-1 до TLR-9 [Naglik J.R., 2011А]. В зависимости от локализации, в клетке выделяют рецепторы, расположенные на цитоплазматической мембране (TLR-1, TLR-2, TLR-4, TLR-5, TLR-6) или на мембранах внутриклеточных органелл - лизосом, эндосом, аппарата Гольджи. (TLR-3, TLR-7, TLR-8 и TLR-9). При этом, каждый член семейства TLR распознает определенные PAMP грибкового, вирусного, бактериального и другого происхождения..

Лигандами toll-подобных рецепторов, локализованных на цитоплазматической мембране, являются поверхностные структуры микроорганизмов - липопротеины, липополисахариды, флагеллин, маннаны, зимозан. Рецепторы, локализованные в мембранах внутриклеточных органелл, распознают молекулы ядерных структур микроорганизмов (ДНК), но могут быть активированы и поврежденными молекулярными структурами собственного организма [Naglik, J.R., 2011а; Кубанов А.А.,и др.,2013; Катунина О.Р., 2011; Сорокина Е.В., 2012].

Наиболее изучены мишени и принцип работы для мебранных рецепторов TLR-2 и TLR-4. TLR-2 по структуре сходен с TLR-1 и TLR-6. TLR-2 формирует гетеродимеры с TLR-1 и TLR-6, что необходимо для распознавания диацетилированных и триацетилированных липопептидов. Комплекс TLR-1 и TLR-2 распознает различные микробные компоненты, такие, как пептидогликан грамположительных и грамотрицательных бактерий, фенол-растворимый модулин Staphylococcus aureus и гликолипиды Treponema maltophylum. В женских половых путях TLR2 способен также распознавать пептидогликан Chlamydia trachomatis, липополисахарид и фрагменты пептидогликана Neisseria gonorrhoeae и фософолипоманнан Candida albicans [Симбирцев А.С., 2005, Ганковская Л.В., и др.2009]. TLR-2 также вовлечен в распознавание компонентов вирусов простого герпеса I типа и цитомегаловируса. TLR-2 в совокупности с TLR-6 распознают белки клеточной стенки микоплазмы [Akira S.,2004; Сорокина Е.В., 2012].

TLR4 экспрессируется в маточных трубах, эндометрии, шейке матки и влагалище, гладкомышечных клетках матки и шейки матки, стромальных клетках эндометрия и маточных натуральных киллерах [Hirata T., et al., 2005]. Лигандом рецептора TLR-4 являются липополисахариды клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Кроме того, TLR-4 распознает белок теплового шока 60, гликофосфолипиды простейших и белковую оболочку вирусов. В клинических исследованиях показана способность TLR4 связываться с липополисахаридами Neisseria gonorrhoae, липополисахаридами и белками теплового шока Chlamydia trachomatis, маннаном Candida albicans [Симбирцев А.С., 2005].

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис.1 Участие TLR в регуляции функцональной активности эпителиальной клетки (по McClure R., Massari P., 2014; в собственной модификации)

Сложность структуры патогена или иных лигандов, а также множественность его распознавания с участием толл-подобных рецепторов создают возможность регулирования и «индивидуализации» реагирования клеток. Так, некоторые сигналы могут вызывать «физиологический» уровень продукции медиаторов (например, цитокинов), поддерживая саногенез, другие же сигналы, наоборот - способны индуцировать гиперпродукцию цитокинов и хемокинов и как следствие - воспалительные процесс [Лебедева О.П., и др., 2012; McClure R., et al.2014](рис.1.). Изменение уровня экспрессии сигнальных рецепторов может меняться в процессе инфекционного или аллергического заболевания [Воропаева Е.А.,и др. 2008; Ганковская Л.В. и др., 2009.; Сорокина Е.В., 2012; Ю.А. Тюрин и др., 2013]. Также есть данные, что экспрессия толл-подобных рецепторов может зависеть от фазы менструального цикла [Hirata T. 2007].

Полагают, что активация клеток через TLR4 возбуждает секрецию хемокинов, мобилизацию нейтрофилов и организацию иммунного воспаления (Th1), что связывают с развитием иммунитета, уничтожением возбудителя и выздоровлением [Hirata T.,2005]. Активация TLR2, в большей мере, вызывает «иммунологическое отклонение» - смещение равновесия Th1/Th2 в сторону Th2 (стимуляция гуморальных реакций / гиперчувствительности немедленного типа) - такое развитие инфекционного процесса грозит формированием «пермиссивного фенотипа» и хронизацией заболевания. В то же время, распознавание через лектиновые рецепторы и рецепторы комплемента играет важную роль в фагоцитозе возбудителя и регулировании воспаления [Альтман Э.Д., и др. 2011; Zhang G. et al., 2001; Hirata T.2007].

1.4 Внутриклеточные сигнальные пути эпителиоцитов

Изменение реактивности эпителиальных клеток в ответ на внеклеточные стимулы опосредуется через внутриклеточные сигнальные пути, осуществляющие передачу активирующего сигнала с поверхности на генетический аппарат клетки. Транслирующую функцию в клетках человека выполняют внутриклеточные регуляторы генной транскрипции, такие как нуклеарный фактор-kB (NF-kB) [Baldwin, A.S. 2001, Jobin Ch, Sartor R.B., 2000., Маянский А.Н., 2007], и митоген-активированные протеинкиназы (MAP- киназы)[ Tian W. et al., 2000]. Эти системы играют важную роль в регуляции активности генов, отвечающих за адаптивные реакции клеток [Baldwin, A.S. 2001; Jobin Ch., Sartor R.B., 2000; Tang, N.et al. 2004; Tato C.M., Hunter C.A., 2002]. Имеются сведения об участии TLRs в качестве стартового сигнала, путем эстафетной стимуляции NF-kB и MAP- киназ р38 [Andreakos E2005].

NF-kB активируется в ответ на воспалительные цитокины, митогены, инфекции, и микробные продукты [Matthew E. Poynter, 2002; M. R.Milward I. L. C.Chapple, 2007].

Активация NF-kB под действием различных стимулов (провоспалительные цитокины, физические и химические агенты, микробные компоненты и пр.) ведет к усилению экспрессии многих генов (рис.3), задействованных в иммунном, воспалительном процессах и апоптозе [Маянский А.Н., 2007;, C.M. Tato, C.A. Hunter 2002]. Мишенями для NF-кB служат гены, кодирующие цитокины (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ИФ-г, ФНО-б, ГМ-КСФ, и др.), адгезивные молекулы межклеточного взаимодействия (ICAM, VCAM, ELAM и др.), острофазные белки, ферменты (NO-синтаза, циклооксигеназа-2), антимикробные пептиды (в-дифенсины), молекулы главного комплекса гистосовместимости (HLA), регуляторы апоптоза (Fas-лиганд, с-myc, p53, циклин D1) и пр. [Caamano J. Hunter C.A., 2002.).

Протеинкиназы также играют важную роль в передаче сигналов. Группа ферментов, объединенная под названием «протеинкиназы» катализирует перенос концевого остатка фосфата с АТФ на различные химические группы в структуре белка [Tian W.et al., 2000] и активируется по каскадному механизму. Протеинкиназы активируют внутриклеточные сигнальные каскады, которые в свою очередь регулируют экспрессию генов, метаболизм и адаптивное поведение клеток.

Протеинкиназы разделены на пять классов в зависимости от мишеней для фосфорилирования. Митоген-активированные протеинкиназы (MAP) относятся к протеинкиназам первого класса - группе серин-треониновых киназ [Tang, et al. 2004] - переносящим фосфат на спиртовые группы серина и треонина [Гусев, Н.Б. 2000]. Классические МАР киназы проходят в ядро, где фосфорилируют свои



Рис. 3 Некоторые механизмы и функциональные последствия активации NF-B и митоген-активированных - киназ. (по Villena J.,2014 в собственной модификации)

мишени - факторы транскрипции. Альтернативным путем является фосфорилирование цитоплазматических факторов [Tian W. et al., 2000].

Митоген-активированные протеинкиназы участвуют в трансдукции сигналов, вызванных митогенами, стрессорными факторами (УФ-излучение, нагревание, осмотический шок), ростовыми факторами, провоспалительными цитокинами (такими как ФНО-б и ИЛ-1) и патогенами [Tian W. et al., 2000, Tang N.et al. 2004].

В настоящее время описаны 4 подгруппы MAP-киназ: киназы, регулируемые внеклеточными сигналами (ERK); c-jun N-концевая, или стресс-активируемая протеинкиназа (JNK/SAPK), p38 и ERK-большая MAP-киназа 1 (Big MAP).

Активация MAP-киназ играет существенную роль в продукции провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ФНО-б и ИЛ-6), индукции ферментов (COX-2), адгезивных белков (VCAM-1 и др.), экспрессии внутриклеточных ферментов (iNOS) [Tian W. et al., 2000].

Таки образом, активация нуклеарного фактора-kB (NF-kB) и митоген-активированных протеинкиназ (MAP- киназы) приводит к усилению экспрессии индуцибельных генов, перестраивает фенотип клеток и адаптируя их к новым условиям [Jobin Ch, Sartor R.B., 2000].

1.5 Факторы, способные влиять на функциональную активность эпителиоцитов

Функциональная активность эпителиоцитов может изменяться под действием эндогенных и экзогенных стимулов [Маянский А.Н, Маянская И.В., 2004].

1.5.1 Гормоны

Основные женские половые гормоны - эстрогены, такие как эстрадиол, эстриол и эстрон [Шустов С. Б, и соавт, 2012;. Леонова З.А, Флоренсов В.В., 2013]. Эстрогены относятся к подклассу стероидных женских половые гормонов и производятся, в основном, фолликулярным аппаратом яичников у женщин. Эстрадиол - главный эстроген, функционирующий с момента полового созревания до менопаузы; он несет ответственность более чем за четыреста функций в организме женщины. Эстрадиол, в отличие от прогестерона, потенцирует действие возбуждающих нейромедиаторов. В синапсах эстрадиол обеспечивает рецептивность клеток к прогестерону, индуцируя экспрессию рецепторов прогестерона [Шустов С. Б, и соавт, 2012; Леонова З.А., Флоренсов В.В.; 2013 Butts C.L et all.,2010; Beagley K.,2003]. Эстриол -- самый «слабый» из эстрогенов, в наибольшем количестве производится плацентой во время беременности, у небеременных женщин его мало. Прогестерон -- является не только одним из стероидных гормонов, но и фактически родоначальником их подавляющего большинства. Прогестерон образуется главным образом желтым телом в лютеиновую фазу, секретируется также фетоплацентарным комплексом во время беременности. [Татарчук Т.Ф.,2003; Леонова З.А., Флоренсов В.В.,2013]. В фолликулярной фазе менструального цикла концентрация прогестерона в плазме равна 0,06-1,25 мкг/л, на пике овуляции - 0,08-1,2мкг/л, в лютеиновой фазе - 2,5-25мкг/л, в менопаузе - 0,06-1,6 мкг/л [Камышников,2004]. Прогестерон относят к группе гормонов - нейростероидов, названных так в связи с его значимым влиянием на мозговые структуры. Он способен взаимодействовать не только с собственными рецепторами, но и рецепторами других стероидных гормонов: глюкокортикостероидов, андрогенов, минералокортикоидов. Однако приоритетной функцией для прогестерона является поддержка беременности [Pluchino N., et al. 2009.; Репина М.А.,2011].

Лютеинизирующий гормон (ЛГ) совместно с фолликулостимулирующим гормоном (ФСГ) необходимы для нормальной работы репродуктивной системы. Содержание ЛГ в крови составляет 0,4-3,0 мкг/л сыворотки. ЛГ способен стимулировать секрецию эстрогенов яичниками, при этом, пиковое повышение его уровня в крови в середине менструального цикла инициирует овуляцию. ФСГ ускоряет развитие фолликулов в яичниках у женщин и образование эстрогенов [Шустов С. Б, и соавт, 2012].

Процессы, происходящие в течение менструального цикла, регулируются вышеописанными гормонами и могут быть представлены как фазы, соответствующие изменениям в яичниках (фолликулярная, овуляторная и лютеиновая), и в эндометрии (менструальная, пролиферативная и секреторные фазы) [Fahey J.V., 2005].

Рис.2. Динамика изменения сывороточной концентрации женских половых гормонов в течение менструального цикла ( по Татарчук Т.Ф.,Сольский Я.П.2003)

Стоит также упомянуть еще один важный гормон - хорионический гонадотропин (ХГЧ), который выделяется плацентой во время беременности у женщин и играет важную роль в поддержании этого состояния. Концентрация ХГЧ постепенно нарастает к 11 неделе беременности, затем несколько снижается [Шустов С. Б, и соавт, 2012].

В последние годы установлено, что метаболические процессы в эпителиальных тканях разных органов являются гормонозависимыми [Ferrucci L. Guralnik J.M.,2003; Mariottu A., 2013]. В эпителиоцитах слизистой оболочки десны обнаружены рецепторы к ряду гормонов, в том числе и к эстрадиолу и токсостеролу, которые преимущественно находятся в ядрах клеток промежуточного и камбиального слоев [Кравцов Э.Г.и др.,2014; Wira C.R., Fahey J.V.,2010].

Половые гормоны обладают не только специфическим системным воздействием, но и оказывают значительнее влияние на состояние местного иммунитета слизистых оболочек [Pluchino N., et al.2009; Татарчук Т.Ф.,Сольский Я.П. 2003; Леонова, З.А., Флоренсов В.В.2013; Klein S. L., 2004]. Гормоны могут влиять на физиологию эпителиальных клеток слизистых оболочек [Ochiel D.O., et all.,2008]. При гормональном дисбалансе в эпителии слизистой оболочки полости рта развиваются морфофункциональные изменения [Markou E., 2011; Герасимов И.Г. и др.,1996; Сафонова О.П.и др., 2004]. Морфологические изменения в эпителии у женщин в разные фазы менструального цикла [Сапронова Е.А. и др. 2003; Служаев, И.Ф. и др., 2004]. Доказано участие эстрогена в регуляции процукции цитокинов в клетках парадонта [Zhou Y, et all., 2009]. Установлено влияние женских половых гормонов на адгезию кандид к буккальному эпителию, а также формироване микрофлоры влагалища [Кравцов Э.Г.и др.,2014.; Лебедева О.П., Калуцкий П.В., 2006; Лебедева.О.П. и др.2009].

1.5.2 Цитокины

Цитокины - группа пептидных медиаторов с молекулярной массой от 8 до 80 кДа, продуцируемая клетками организма [Ройт А.2000]. Цитокины участвуют в регуляции различных процессов, таких как иммунный ответ (дифференцировка предшественников клеток иммунной системы, представление антигена, активация и пролиферацию иммунокомпетентных клеток и др.), воспаление (экспрессия молекул межклеточной адгезии, миграция лейкоцитов и пр.), гемопоез, эмбриогенез (в том числе, закладка и развитие органов иммунной системы) и апоптоз [Ройт А.2000,; Ярилин А.А. 1999; Парахонский А.П.,2005; Симбирцев А.С., 2007].

Синтез цитокинов начинается после активации клеток, например при проникновении в ткани патогенов либо нарушении целостности тканей, что обычно протекает параллельно. Регуляция защитных реакций организма цитокинами в рамках иммунного и воспалительного ответа связана с двумя основными направлениями биологического действия цитокинов - защитой от инфекционных агентов и восстановлением поврежденных тканей [Ройт А.2000; Ярилин А.А. 1999; Парахонский А.П.,2005; Симбирцев 2007].

Цитокины воздействуют на клетку через специфические рецепторы клеточной мембраны и вызывают активацию или подавление регулируемых ими генов [Эфрон, 1998; Ярилин А.А. 1999]. Цитокины в первую очередь регулируют развитие защитных реакций в тканях с участием различных типов клеток крови, эндотелия, соединительной ткани и эпителиев. Защита на местном уровне развивается путем формирования типичной воспалительной реакции с ее классическими проявлениями: гиперемией, развитием отека, появлением болевого синдрома и нарушением функции [Эфрон, А.Г. 1998; Железникова Г.Ф., 2009; Белова О.В., 2008; Mantovani A.,1997].

Продукция цитокинов является составной частью клеточного ответа, связанного с распознаванием клетками миеломоноцитарного ряда сходных структурных компонентов различных патогенов, называемых патоген-ассоциированными молекулярными паттернами [Меджитов Р., Джаневей Ч., 2004]. Активация TLR приводит к синтезу двух основых групп цитокинов: провоспалительных цитокинов и интерферонов I типа, главным образом INFб/в [Takeda K., 2005]. Ключевым по значимости событием является синтез комплекса провоспалительных цитокинов из семейств IL-1, IL-6, TNF и хемокинов, стимулирующих большинство дальнейших событий в развитии воспалительной реакции и обеспечивающих веерное расширение активации различных типов клеток, участвующих в поддержании и регуляции воспаления, включая все типы лейкоцитов, дендритные клетки, Т и В-лимфоциты, НК клетки, эндотелиальные и эпителиальные клетки, фибробласты и другие. Это обеспечивает последовательные этапы развития воспалительной реакции, являющейся основным механизмом реализации врожденного иммунитета [Белан Э.Б. и др., 2011; Симбирцев А.С., 2007; Абаджиди М.А. и др.,2002].

Экспрессия генов отдельных цитокинов происходит стадиоспецифически на определенных этапах эмбрионального развития. Фактор стволовых клеток, трансформирующие ростовые факторы, цитокины семейства TNF и хемокины регулируют дифференцировку и миграцию различных клеток и закладку органов иммунной системы [Lv W. 2013]. После этого синтез некоторых цитокинов может не возобновляться, тогда как другие продолжают регулировать нормальные физиологические процессы или участвуют в развитии защитных реакций [Mantovani A ,1997]. Несмотря на то, что большинство цитокинов являются типичными индуцибельными медиаторами и в постнатальном периоде не синтезируются клетками вне воспалительной реакции и иммунного ответа, некоторые ? не подпадают под это правило. В результате конститутивной экспрессии генов часть из них синтезируются постоянно и в достаточно больших количествах находятся в циркуляции, регулируя пролиферацию и дифференцировку отдельных типов клеток в течение всей жизни. Примерами такого типа физиологической регуляции функций цитокинами может быть постоянно высокий уровень эритропоэтина и некоторых КСФ для обеспечения гемопоэза [Серебренникова С.Н., и др., 2008].
Эффект цитокинов проявляется уже при пикограммовых концентрациях. Определение концентрации цитокинов в крови и других жидкостях тела имеет прогностическое значение. Для оценки тяжести заболевания и прогнозирования его течения целесообразно определять концентрацию про- и противовоспалительных цитокинов в динамике развития болезни. Цитокиновый статус организма важно оценивать и во время цитокинотерапии для оценки эффективности проводимого лечения и его оптимизации [Татаурщикова И.С. и др., 2012; Arend W.P.,2001; Демихов В.Г., 2011; Хаитов, Р.М.,2009].

1.5.3 Иммуномодуляторы

Иммуномодуляторы представляют собой лекарственные средства, устраняющие дисбаланс различных звеньев иммунной системы. В соответствии с основными требованиями, предъявляемыми к иммунотропным препаратам, они должны отвечать следующим характеристикам: [Хаитов Р.М. и др.,1996; Хаитов, P.M. и др. 2005].

* обладать иммуномодулирующими свойствами;

* иметь высокую эффективность;

* быть безопасными, не иметь противопоказаний, не вызывать привыкания, побочных реакций и канцерогенных эффектов;

* не вызывать иммунопатологических реакций;

* не провоцировать чрезмерную сенсибилизацию и не потенцировать ее у других лекарственных средств;

* легко метаболизироваться и выводиться из организма;

* не вступать во взаимодействие с другими препаратами, обладать высокой

совместимостью с ними;

* иметь непарентеральные пути введения

В зависимости от происхождения иммуномодуляторы делят на 6 основных групп: микробные, тимические, костномозговые, цитокины, нуклеиновые кислоты и химически чистые иммуномодуляторы (синтетические препараты) [Хаитов М.Р. и др., 1996; Справочник Видаль, 2014 ] ( табл.1.).

Иммуномодуляторы микробного происхождения условно можно разбить на 3 поколения. Первым препаратом, разрешенным к медицинскому применению в качестве иммуностимулятора, была вакцина БЦЖ, обладающая выраженной способностью усиливать факторы как врожденного, так и приобретенногоиммунитета [Хаитов Р.М. и др., 2005]. К микробным препаратам I поколения можно отнести также Пирогенал и продигиозан, представляющие собой полисахариды бактериального происхождения. В настоящее время из-за пирогенности и других побочных эффектов они применяются редко [Петров Р. М. и др., 1998]. К микробным препаратам II поколения, в свою очередь, принадлежат

лизаты (Бронхомунал, ИPC-19, Имудон, Бронхо-Ваксом) и рибосомы (Рибомунил) бактерий, относящихся в основном к возбудителям респираторных инфекций (Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Haemophilus influezae и др.). Эти препараты имеют двойное назначение - специфическое («вакцинирующее», т.е. действуют как мукозальные вакцины) и

Таблица 1

Примеры иммуномодулирующих препаратов разных групп

Группа	Состав	Торговое название ®
Естественные бактериальные препараты	Смесь лизатов бактерий: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus fermentum, Streptococcus pyogenes группа A, Streptococcus sangius, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Fusobacterium nucleatum, Corynebacterium pseudodiphtheriticum, Candida albicans	Имудон
	Рибосомы бактериальные	Рибомунил
	Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типа B Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Neisseria subflava и perflava, Moraxella catarrhalis, Streptococcus pyogenes группы A, Streptococcus dysgalactiae группы C Enterococcus faecium и faecalis Streptococcus группы G.	ИРС-19
Синтетические препараты	Глюкозаминид мурамилдипептид	Ликопид
Препараты на основе природных компонентов растений	Эхинацеи пурпурной травы сок	Иммунал
Рекомбинантный интерферон	Интерферон-?	Гриппферон
Производные различных химических групп	Азоксимер бромид	Полиоксидоний
Нуклеиновые кислоты	Дезоксирибонуклеат натрия	Деринат
Иммунорегулятор-ные пептиды	Тимуса экстракт	Тактивин

неспецифическое (иммуностимулирующее) [Шумский А.В., 2000]. Наконец, к микробным препаратам III поколения можно отнести Ликопид. Он состоит из природного дисахарида - глюкозаминилмурамила и присоединенного к нему синтетического дипептида - L-аланил-D-изоглутамина [Винницкий Л.И. и др., 1997; Жаркова О.А.,2005; Воронина Е.В.,2011].

В организме главной мишенью для микробных иммуномодуляторов являются фагоцитарные клетки. Под влиянием этих препаратов усиливаются функциональные свойства фагоцитов (повышаются фагоцитоз и внутриклеточный киллинг поглощенных бактерий), возрастает продукция провоспалительных цитокинов, необходимых для инициации гуморального и клеточного иммунитета. В результате может увеличиваться продукция антител, активироваться образование антигенспецифических Т-хелперов и Т-киллеров [Hadden J.W. 1993; Хаитов Р.М. и др., 1996].

К иммуномодуляторам, получаемым из костного мозга млекопитающих (свиней или телят), относится Миелопид. В его состав входят 6 специфичных для костного мозга медиаторов иммунного ответа, называемых миелопептидамин (МП), которые обладают способностью стимулировать различные звенья иммунного ответа, особенно гуморальный иммунитет. Каждый МП обладает определенным биологическим действием, совокупность которых и обусловливает его клинический эффект. МП-1 восстанавливает нормальный баланс активности Т-хелперов и Т-супрессоров. МП-2 подавляет пролиферацию злокачественных клеток и существенно снижает способность опухолевых клеток продуцировать токсические субстанции, ингибирующие функциональную активность Т-лимфоцитов. МП-3 стимулирует активность фагоцитарного звена иммунитета и, следовательно, повышает антиинфекционный иммунитет. МП-4 оказывает влияние на дифференцировку гемопоэтических клеток, способствуя их более быстрому созреванию, т. е. обладает лейкопоэтическим эффектом. При иммунодефицитных состояниях препарат восстанавливает показатели В- и Т-систем иммунитета, стимулирует продукцию антител и функциональную активность иммунокомпетентных клеток, способствует восстановлению ряда других показателей гуморального звена иммунитета [Богомолова Н.С. и др., 1999].

Основой для создания большой группы иммуномодуляторов являются цитокины - эндогенные молекулы, участвующие в регуляции иммунного ответа (см. п. 1.5.3.). К подгруппе, имеющих естественное происхождение относятся Лейкинферон и Суперлимф, к группе рекомбинантных препаратов - Бета-лейкин, Ронколейкин и Лейкомакс (молграмостим) [Hadden J.W., 1993]. К лекарственным средствам, характеризующимся выраженными иммуномодулирующими свойствами, следует отнести также цитокины -интерфероны (природные и рекомбинантные) и индукторы интерферонов.

...