Факторы и условия, регулирующие функциональную активность буккальных эпителиоцитов и их взаимодействие с Candida albicans

3.2 Участие внутриклеточных сигнальных систем в регуляции адгезивных реакций буккальных эпителиоцитов

Одной из универсальных систем, обеспечивающей трансляцию сигнала от клеточной поверхности на генетический аппарат клетки является система регуляторов генной транскрипции - NF-kB [Baldwin A.S.,1996; Barnes P.J et all.,1997; Caamano J. et all,2002; Маянский А.Н. и др.,2007]. В передаче сигнала с поверхности клетки на систему NF-kB также могут принимать участие митоген-активированные киназы (МАРK) [Tato C. M., et all., 2002]. NF-kB, через активацию соответствующих генов влияет на синтез цитокинов, хемокинов, молекул межклеточной адгезии, HLA, белков острой фазы, индуцибельные ферментов и рецепторов, участвуя, таким образом, в регуляции функций клетки.

В настоящем исследовании мы попытались установить взаимосвязь между активностью NF-kB, МАР-киназ (p-38 и ERK1/2) и способностью эпителиоцитов слизистых оболочек вступать в контактные взаимодействия с микроорганизмами, с использованием тест-системы искусственной колонизации C. albicans.

Для подавления активации транскрипционного фактора NF-kB в эпителиальных клетках использовали протеасомный ингибитор - ALLN («Sigma»,USA). Буккальные эпителиоциты (10⁶ кл/мл) инкубировали с ALLN (90 мин, 37°С, 100 ?M). В контроле использовали интактные клетки (без ингибитора) (см. п.2.8.1.). Блокаду внутриклеточных MAP - киназ (ERK1/2 и p38) в эпителиоцитах проводили путем прединкубации клеток (60 мин,37°С, 20M) со специфическими ингибиторами U0126 («Sigma», США) или SB203580 («Sigma», USA) (см. п.2.8.2.). В контроле использовали интактные клетки. Искусственную колонизацию C.albicans на буккальных эпителиоцитах производили методом, описанным ранее (п.2.5.).

Эксперименты показали, что блокирование NF-kB в клетках человека приводило к снижению уровня адгезии кандид на буккальных эпителиоцитах в 1,7 ? 0,6 раза и составляло 6,6 ? 1,3 усл. ед. в контроле и 4,1 ? 0,9 усл ед. в экспериментах с ингибитором протеасом ALLN (p? 0,05) (см. табл.13, рис. 17) .

Таблица 13

Влияние блокады нуклеарного фактора -kB и МАР - киназ в эпителиоцитах на их способность к контактным взаимодействям с C.albicans штамм 601, М ± m

Внутриклеточные сигнальные системы (молекулы)	Показатели адгезии (усл. ед.)
	Необработанные эпителиоциты	после обработки эпителиоцитов соответствующими ингибиторами
NF-kB	6,60 ± 1,30	4,10 ± 0,9 *
МАР - киназы	p38	6,24 ± 0,64	7,81 ± 1,03
	ERK1/2	3,89± 0,65	3,86± 0,55

Рис. 17 Влияние блокады нуклеарного фактора kB и МАР - киназ на адгезию буккальных эпителиоцитов с C.albicans

- необработанные эптелиоциты

- эпителиоциты после обработки ингибиторами метаболических путей

*- достоверные отличия относительно контроля (p? 0,05)

При добавлении ингибитора p38 киназы к буккальным эпителиоцитам наблюдалась некоторое увеличение индекса адгезии кандид: 6,24 ? 0,64 (контроль) и 7,81 ? 1,03 (эксперимент ) усл.ед. (р ? 0,05). В то же время, ингибитор ERK1/2-киназ не вызывал значимых изменений адгезии в системе по сравнению с контролем: 3,89 ? 0,65 и 3,86 ? 0,55 усл.ед. соответственно (рис17).

Таким образом, было установлено, что активность системы NF-kB, возможно чрез усиление экспрессии адгезивных молекул, способствует контактному взаимодействию буккальных клеток с микроорганизмами, такими как C. albicans.

3.3 Условия и факторы, регулирующие экспрессию TLR-2 и TLR-4 на буккальных эпителиоцитах

Активация эпителиальных клеток возможна через toll-подобные рецепторы (TLRs) [Naglik J.R., et all 2011а; McClure R., et all 2014]. Распознавание патоген-ассоциированных молекулярных образов (PAMP) c помощью TLRs запускает каскад внутриклеточных реакций, в результате чего меняется функциональная активность эпителиоцитов, что может проявляться в виде усиления секреции цитокинов, пептидных медиаторов, дифенсинов, ингибиторов провоспалительных агентов, молекул главного комплекса гистосовместимости, молекул межклеточных взаимодействий, цитокиновых и прочих рецепторов [Naglik J.R., et all 2011б].

В нашей работе мы исследовали «фоновую» экспрессию TLR-2 и TLR -4 у буккальных эпиелиоцитов, а также изменение экспрессии toll-подобных рецепторов под влиянием эндогенных и экзогенных факторов стимулов в норме и при патологии.

Эпителиоциты предварительно инкубировали с исследуемыми субстанциями (гормоны, цитокины, иммуномодулирующие препараты, антисептики, микробные метаболиты) в течение 30 мин, затем оценивали количество жизнеспособных клеток в популяции, экспрессирующих toll-подобные рецепторы, на проточном цитофлюориметре BD FACS Canto II System with Fluidics Cart (6-color, blue/red, USA) (см. п.2.7). Живые клетки выявляли по их способности не воспринимать краситель 7-AAD (7-амино-актиномицин D, BD Pharmingen, USA). Экспрессию TLR-2 и TLR-4 оценивали у клеток жизнеспособного пула по наличию на их поверхности CD 282 или CD 284 (BD Pharmingen, USA) соответственно. Полученные результаты выражали в процентах, как отношение числа клеток, презентирующих на своей поверхности TLR-2, TLR-4 или экспрессирующих одновременно оба рецептора, к общему числу жизнеспособных эпителиоцитов.

3.3.1 Влияние половых гормонов на экспрессию toll - подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro

В экспериментах использовали пул эпителиоцитов, полученных от 5-7 здоровых доноров. Ставили серию экспериментов, где часть пула инкубировали отдельно с каждым из гормонов (прогестерон, эстрадиол, тестостерон, эстриол, ЛГ, ХГЧ), затем замеряли экспрессию TLR-2 и TLR-4 рецепторов на проточном цитофлюориметре. Одновременно оценивали число жизнеспособных клеток пула в каждой серии. Контролем служили необработанные эпителиоциты.

Было отмечено, что экспрессия TLR-2 на нативных (необработанных) буккальных эпителиоцитах была достаточно низкая (табл.14). Под воздействием гормонов процент буккальных клеток, способных экспрессировать TLR-2 дополнительно снижался, однако эти изменения были незначительны (р > 0,05) (таблица 14, рис.18).

Общее количество TLR-4 - позитивных клеток среди нативных (необработанных) буккальных эпителиоцитов было существенно выше, чем экспрессирующих TLR-2 (табл.15.). Процент буккальных клеток, экспрессирующих TLR-4 после обработки гормонами менялся незначительно (р > 0,05) (таблица 15, рис.19).

Таблица №14

Процент буккальных эпителиоцитов, экспрессирующих TLR - 2 до и после обработки гормонами in vitro, М ± m

Гормоны	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-2 (% клеток в популяции)
	TLR-2 -позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -2
Контроль	0,1 ± 0,01	8,8 ± 2,3	8,9 ± 2,25
Прогестерон	0,1 ± 0,01	5,6 ± 1,2	5,7 ± 1,22 v
Эстрадиол	0,2 ± 0,02	6,5 ± 2,2	6,7 ± 2,25 v
Тестостерон	0,1 ± 0,02	6,1 ± 2,8	6,2 ± 2,84 v
Эстриол	0,1 ± 0,01	5,7 ± 2,2	5,8 ± 2,19 v
ХГЧ	0,1 ± 0,01	5,7 ± 2,3	5,7 ± 2,35 v
ЛГ	0,1 ± 0,01	5,6 ± 1,9	5,7 ± 1,89 v

v - снижение показателя

Рис.18 Влияние половых гормонов на экспрессию TLR-2 буккальными эпителиоцитами, где ПГ-прогестерон, ЭД-эстрадиол, ЭС-эстриол, ХГЧ-хорионический гормон, ЛГ-лютеинизирующий гормон.

Таблица №15

Процент буккальных эпителиоцитов, экспрессирующих TLR - 4 до и после обработки гормонами in vitro, М ± m

Гормоны	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-4 (% клеток в популяции)
	TLR-4 -позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -4
Контроль	29,2 ± 4,3	8,8 ± 2,3	38,0 ± 6,4
Прогестерон	36,3 ± 3,1	5,6 ± 1,2	41,9 ± 4,5 ^
Эстрадиол	24,5 ± 4,2	6,5 ± 2,2	31,0 ± 6,3 v
Тестостерон	28,5 ± 3,5	6,1 ± 2,8	34,1 ± 6,1 v
Эстриол	27,5 ± 2,1	5,7 ± 2,2	33,2 ± 4,4 v
ХГЧ	39,8 ± 2,1	5,7 ± 2,3	45,5 ± 4,2 ^
ЛГ	37,9 ± 5,0	5,6 ± 1,9	43,5 ± 6,8 ^

^- увеличение, v - снижение показателя



Рис.19 Влияние половых гормонов на экспрессию TLR-4 буккальными эпителиоцитами, где ПГ-прогестерон, ЭД-эстрадиол, ЭС-эстриол, ХГЧ-хорионический гонадотропный гормон, ЛГ-лютеинизирующий гормон.

Однако, мы обратили внимание на тенденцию к некоторому увеличению общего процента TLR-4-позитивных клеток после воздействия гормонов, участвующих в обеспечении овуляции (ЛГ) и поддержании беременности (прогестерона и ХГЧ). Возможно, именно с этим связано некоторое изменение взаимоотношений эпителиоцитов слизистых оболочек с представителями нормальной (облигатной и факультативной микрофлоры), наблюдаемое у беременных [Акопян Т.Э., 1996]. Отметим, что жизнеспособность эпителиоцитов под воздействием гормонов существенно не изменялась, и даже - в ряде случаев - незначительно увеличивался процент живых клеток в пуле после проведения мангипуляций. Так, жизнеспособных клеток в контроле было 66,7 ± 8,2 %, а после воздействии прогестерона, эстрадиола, тестостерона, эстриола, ХГЧ и ЛГ - 67,0 ±7,4; 77,5 ±7,8; 75,1 ±8,1; 76,2 ±7,6; 59,7±8,2; 61,2±7,9 % соответсвенно (р > 0,05).

Таким образом, воздействие эндогенных факторов, таких как половые гормоны незначительно изменяло уровень экспрессии TLR-2 и TLR-4 буккальными эпителиоцитами.

3.3.2 Влияние цитокинов на экспрессию toll - подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro

Изменения процента TLR-2 и TLR-4 - позитивных клеток после стимуляции цитокинами IL-1, IL-6, IL-8,TNF-б и IFN-б представлены в табл.16 и рис.20..

Жизнеспособность клеток после воздействия цитокинов не менялась и оставалась высокой. Так, процент живых клеток в популяции был 92,1 ± 4,1% в контроле (нативные эпителиоциты) и 90,3 ± 3,8; 90,5 ± 4,2; 85,8 ± 3,9; 92,1 ± 3,6; 95,1 ± 5,1 % после обработки IL-1, IL-6, IL-8,TNF-? и IFN-?,соответственно (р > 0,05). Добавление цитокинов к эпителиоцитам существенно не влияли на экспрессию ими TLR-2 (см. табл.16, рис.20.), за исключением IL-6, который снижал количество TLR-2 позитивных клеток.

Таблица № 16

Процент буккальных эпителиоцитов, экспрессирующих TLR - 2 после обработки цитокинами in vitro, М ± m

Цитокины	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-2 (% клеток в популяции)
	TLR-2 -позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -2
Интактные эпителиоциты	0,1± 0,01	1,0 ± 0,19	1,1 ± 0,
IL-1	0,1 ± 0,01	0,8 ± 0,09	0,9 ± 0,1 v
IL-6	0,1 ± 0,02	0,6 ± 0,03	0,7 ± 0,07 * v
IL-8	0,1 ± 0,01	1,1 ± 0,09	1,2 ± 0,3 ^
TNF-б	0,2 ± 0,03	1,0 ± 0,02	1,2 ± 0,06 ^
IFN-б	0,1 ± 0,01	0,8 ± 0,09	0,9 ± 0,2 v

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

^ - увеличение, v- снижение показателя



Рис.20 Влияние цитокинов на экспрессию TLR-2 буккальными эпителиоцитами.

* - достоверность отличий относительно контроля ( р< 0,05)

Отметим, что IL-6 также заметно влиял и на экспрессию TLR-4, тогда как остальные цитокины практическит не изменяли процент TLR-4 -позитивных клеток (табл.17, рис. 21).

Таблица № 17

Процент буккальных эпителиоцитов, экспрессирующих TLR - 4 до и после обработки цитокинами in vitro, М ± m

Цитокины	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-4 (% клеток в популяции)
	TLR-4 -позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -4
Интактные эпителиоциты	76,4 ± 3,3	1,0± 0,19	77,4± 3,47
IL-1	85,8 ± 4,0	0,8± 0,09	86,6± 4,07 ^
IL-6	90,7 ± 2,0	0,6± 0,03	91,3± 2,05 *^
IL-8	84,8 ± 3,1	1,1± 0,09	85,9± 3,15 ^
TNF-?	80,7 ± 5,2	1,0± 0,02	81,7± 5,23 ^
IFN- ?	76,1 ± 3,0	0,8± 0,09	76,9± 3,2 v

* - достоверность отличий относительно контроля ( р< 0,05)

^ - увеличение, v- снижение показателя

Рис.21 Влияние цитокинов на экспрессию TLR-4 буккальными эпителиоцитами.

* - достоверность отличий относительно контроля ( р< 0,05)

Таким образом, эксперименты показали, что среди всех тестируемых цитокинов, только IL-6 обладает способностью изменять экспрессию TLR-2 и TLR-4 на букальных клетках.

3.3.3 Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию toll-подобных рецепторов эпителиоцитов здоровых доноров in vitro

Определяли количество эпителиоцитов способных экспресиировать TLR-2 и TLR-4 после воздействия на клетки ряда иммуномодулирующих препаратов. Проводили серию экспериментов, в каждом из которых эпителиоциты предварительно инкубировали с препаратами «Рибомунил», «Деринат», «Имудон», «Полиоксидоний», «Ликопид», «Иммунал», «Гриппферон» (см. п. 2.5.4.) Затем, к буккальных эпителиоцитам добавляли антитела для идентификации TLR-2 и TLR-4. Результаты представлены в таблице 18.

Таблица №18

Экспрессия TLR-2 на буккальных эпителиоцитах после обработки иммуномодулирующими препаратами in vitro, М ± m

Группы иммуномодулирующих препаратов	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-2 (% клеток в популяции)
	TLR-2 -позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -2
Контроль (без препарата)	0,1± 0,01	19,5 ± 2,1	19,6± 2,3
1. Содержащие бактериальные компоненты (рибосомы, лизаты)
Рибомунил	0,4± 0,03	23,9± 3,4	24,3± 3,43 ^
Имудон	0,1± 0,01	24,1± 3,6*	24,2± 3,65 ^
2. Растительного происхождения (Echinбcea purpъrea)
Иммунал	7,6± 0,04	38,3± 3,5	45,9± 3,52* ^
3. На основе нуклеиновых кислот
Деринат	1,5± 0,01	34± 2,9	35,5± 2,94* ^
4. Синтетические / полусинтетические препараты
Ликопид	0,1± 0,03	14,5± 2,5	14,6± 2,54 v
Полиоксидоний	0,1± 0,02	6,8± 1,6	6,9± 1,64* v
5. Цитокины (рекомбинантный интерферон)
Гриппферон	0,1± 0,01	5,5± 1,1	5,6± 1,15* v

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

^ - увеличение, v- снижение показателя

Эксперименты показали, что иммуномодуляторы по - разному влияли на экспрессию TLR-2 и TLR-4. Так, количество клеток, экспрессирующих TLR-2 под влиянием препаратов «Иммунал» и «Деринат» значительно увеличиывалось (р< 0,05), тогда как «Полиоксидоний» и «Гриппферон» вызывали сниженения числа TLR-2 - позитивных клеток (р< 0,05) (см. табл. 18, 19; рис.22, 23).

Рис.22 Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию TLR-2 на буккальными эпителиоцитами

* - достоверность отличий относительно контроля (р < 0,05)

Рис.23 Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию TLR-4 на буккальными эпителиоцитами

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

Таблица 19

Экспрессия TLR-4 на буккальных эпителиоцитах после обработки иммуномодулирующими препаратами in vitro, М ± m

Группы иммуномодулирующих препаратов	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-4 (% клеток в популяции)
	TLR-4 -позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -4
Контроль (без препаратов)	76,2± 5,6	19,5 ± 2,1	95,7± 7,9
1. Содержащие бактериальные компоненты (рибосомы, лизаты)
Рибомунил	63,2± 4,9*	23,9± 3,4	87,1± 8,5 v
Имудон	65,4± 4,8*	24,1± 3,6*	89,5± 8,2 v
2. Растительного происхождения (Echinбcea purpъrea)
Иммунал	1,5± 0,4	38,3± 3,5	39,8± 3,8* v
3. На основе нуклеиновых кислот
Деринат	30± 3,2	34± 2,9	64± 6,3* v
4.Синтетические/полусинтетические препараты
Ликопид	44,1± 4,3	14,5± 2,5	58,6± 6,4 * v
Полиоксидоний	53,5± 4,6	6,8± 1,6	60,3± 6,5* v
5. Цитокины (рекомбинантный интерферон)
Гриппферон	76,1± 5,1	5,5± 1,1	81,6± 6,4 v

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

^-увеличение, v- снижение показателя

Затетим, что изменение экспресcия TLR-2 - и TLR-4 на буккальных эпителиоцитах было схожим под воздействием иммуномодуляторов, принадлежащих к одной химической группе (например, группа бактериальных препаратов «Рибомунил»-«Имудон», группа синтетических/полусинтетических препаратов «Полиоксидоний»-«Ликопид») (см. табл. 18, 19; рис.22, 23).Таким образом, разные группы иммуномодуляторов способны разнонаправлено изменять функциональную активность клеток через регуляцию экспрессию toll-подобных рецепторов TLR-2 и TLR-4.

3.3.4 Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию toll - подобных рецепторов буккальных эпителиоцитов у пациентов с заболеваниями пародонта

Было произведено сравнение экспрессии toll-подобных рецепторов на буккальных эпителиоцитах здоровых людей и пациентов с заболеваниями пародонта (табл.20, рис.24, 25. 25а,б).

Таблица 20.

Процент буккальных эпителиоцитов, экспрессирующих toll - подобных рецепторов у здоровых людей и пациентов с заболеваниями пародонта, М ± m

Вариант экспрессии toll-подобных рецепторов на эпителиоцитах	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие toll-подобные рецепторы (% клеток в популяции)	Кратность снижения или увеличения процента toll -позитивных клеток (кол-во раз)
	здоровые люди (контроль)	пациенты с заболеваниями пародонта
только TLR-2	0,28 ± 0,01	1,91 ± 0,1*	6,7 ± 0,2*	^
только TLR-4	64,0 ± 10,2	26,72 ± 7,1*	2,4 ± 0,1*	v
TLR-2/ TLR-4	11,16 ± 5,2	27,32 ±10,2*	2,4 ± 0,2*	^
всего TLR-2-позитивных	11,44 ± 5,23	29,23 ±10,32 *	2,6 ± 0,2*	^
всего TLR-4-позитивных	75,16 ± 15,45	54,04 ±17,34 *	1,4 ± 0,1*	v

* - достоверность отличий относительно здоровых (контроль) (р < 0,05)

^- увеличенияе, v- снижение показателя (р > 0,05)

Было отмечено, у больных с хроническим пародонтитом процент клеток экспрессирующих TLR-2 увеличивается в 6,7 ± 0,2 (р < 0,05), а TLR-4 - уменьшалась в 2,4 ± 0,1 раза (р < 0,05). Доля клеток экспрессирующих оба варианта рецепторов возрастала в 2,4 ± 0,2 раза (р < 0,05), количество клеток не экспрессирующих ни один из этих рецепторов также увеличивалось (рис.26 а, б).

Таким образом, экспрессия TLR-2 и TLR-4 эпителиальными клетками разнонаправлено изменяется при пародонтите. У пациентов с воспалительным заболеванием тканей пародонта увеличивается количество эпителиоцитов, экспрессирующих TLR-2 , а TLR-4 - уменьшается.

Рис. 24. Общее количество TLR-4 и TLR-2 - позитивных буккальных эпителиоцитов у пациентов с заболеваниями пародонта до (контроль) и после обработки иммуномодулирующими препаратами

- общая фракция TLR-4- позитивных клеток

- общая фракция TLR-2- позитивных клеток

* - достоверность отличий относительно контроля (р < 0,05)



Рис 25. Общее количество TLR-4 и TLR-2 - позитивных буккальных эпителиоцитов у здоровых доноров до (контроль) и после обработки иммуномодулирующими препаратами.

- общая фракция TLR-4- позитивных клеток

- общая фракция TLR-2- позитивных клеток

* - достоверность отличий относительно контроля (р < 0,05)



Рис. 26 Процент буккальных эпителиоцитов, экспрессирующих TLR-2 и TLR-4 в популяции здоровых доноров (а), у пациентов с заболеваниями пародонта (б), после обработки эпителиоцитов больных людей препаратом «Имудон» in vitro (в).

На следующем этапе оценивали изменение уровня экспрессии toll-подобных рецепторов эпителиальными клетками пациентов с заболеваниями пародонта под влиянием иммуномодулирующих препаратов.

Обработка эпителиоцитов от больных пародонтитом иммуномодуляторами in vitro показала следующее: все иммуномодулирующие препараты, за исключением препарата «Деринат», не меняли существенно способности клеток экспрессировать TLR-2. Деринат способствовал увеличению количества TLR-2 позитивных клеток в 2 раза (p<0,05)(рис.24).В то же время, при определении числа клеток, экспрессирующттх TLR-4, было установлено, что препараты «Ликопид», «Иммунал», «Деринат» и «Полиоксидоний» заметно снижали спообность к экспрессии данного рецептора(p<0,05) (рис.24).

Изменение процента эпителиоцитов экспрессирующих TLR-2 и TLR-4 при патологии слизистых оболочек полости рта - пародонтите позволили предположить следующее. Экспрессия TLR-2 (в норме низкая) может быть связана с уровнем возбужденности клеток, поскольку увеличивается при патологических состояниях. С другой стороны, экспрессия TLR-4 (в норме высокая) снижается при заболевании, это указывает на то, что данный признак связан с возможностью клетки отвечать на стимулы, т.е. отражает ее реактивность (рис.24,25). Отметим, что на снижении реактивности клеток при парадонтите указывает также и то, что количество TLR-2-/ TLR-4 - негативных клеток (не способных экспрессировать данные TLRs) резко увеличивается при данной патологии (рис. 2 а,б).

Изменение общего процента буккальных клеток в популяции, экспрессирующих TLR-2 или TLR-4 (с учетом клеток, экспрессирующих TLR-2/ TLR-4) под действием иммуномодуляторов было слабее выражено у больных с парадонтитом, чем у здоровых (рис.24, 25, рис 26 а, б, в). Это связано, по-видимому, с тем, что уже значительный процент буккальных клеток подвергся ранее воздействию со стороны эффекторов воспаления, что могло повысить уровень возбуждения (активность) эпителиоцитов, и одновременно понизить их способность отвечать на стимулы (реактивность).



Рис.27 Количество буккальных эпителиоцитов, способных экспрессировать только TLR-4 или TLR-2 у пациентов с заболеваниями пародонта до (контроль) и после обработки иммуномодулирующими препаратами.

- TLR-4- позитивные клетки

- TLR-2- позитивные клетки

Рис 28. Количество буккальных эпителиоцитов, способных экспрессировать только TLR-4 или TLR-2 у здоровых доноров до и после обработки иммуномодулирующими препаратами.

- TLR-4- позитивные клетки

- TLR-2- позитивные клетки

Рис.29 Количество, клеток, экспресиирующих TLR-4 в популяции больных

с пародонтитом под влиянием иммуномодуляторов.

- общий процент TLR-4 (TLR-4 ,TLR-4/2) - позитивных клеток (%)

- процент, клеток, экспрессирующих только TLR-4 (%)

Рис.30 Количество, клеток, экспресиирующих TLR-2 в популяции больных с пародонтитом под влиянием иммуномодуляторов.

- общий процент TLR-2 (TLR-4 ,TLR-4/2) - позитивных клеток (%)

- процент, клеток, экспрессирующих только TLR-2 (%)

Проанализировав полученные результаты, мы обратили внимание на то, чтобы дать оценку направления изменений, которые вызывает иммуномодулятор в клетках при патологии, удобнее рассматривать на примере фракций эпителиоцитов, экспрессирующих только TLR-2 или только TLR-4 (без учета клеток экспрессирующих оба рецептора TLR-2 / TLR-4), поскольку изменения в этих фракциях резче выражены (рис.27,28).

Основанием для подобного мнения могут послужить наши результаты, показывающие, что иммуномодуляторы вызывают однонаправленные колебания количества клеток как в общей фракции эпителиоцитов, экспрессирующих TLR-2 или TLR-4 (с учетом TLR-2/ TLR-4) так и в отдельных «малых» фракциях, которые экспрессируют только один из TLR (рис. 29, 30).

3.3.5 Влияние антисептических препаратов на экспрессию toll - подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro

В экспериментах эпителиоциты предварительно инкубировали с антисептическими препаратами, рекомендуемыми для обработки слизистых оболочек: «Лизобакт» и «Ксидифон».

Процент клеток, экспрессирующих TLR-4 существенно не изменяется под влиянием антисептических препаратов (табл. 21, рис.31).

Таблица № 21

Экспрессия TLR-4 на буккальных эпителиоцитах после обработки антисептическими препаратами in vitro, М ± m

Антисептические препараты	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-4 (% клеток в популяции)
	TLR-4-позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -4
Контроль	80,8 ± 7,5	15,5± 0,5	96,3± 7,8
Лизобакт	88,3 ± 7,2	8,2± 0,6	96,5± 8,2
Ксидифон	71,5 ± 7,9	22,8± 1,5	94,3± 9,1

В отношении TLR-2 наблюдали незначительное снижении экспрессии toll-подобных рецепторов под влиянием препарата «Лизобакт» и некоторое увеличение количества TLR-2-позитивных клеток под действием препарата «Ксидифон» (р> 0,05) (табл. 22, рис.31).

Таблица №22

Экспрессия TLR-2 на буккальных эпителиоцитах после обработки антисептическими препаратами in vitro, М ± m

Антисептические препараты	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-2 (% клеток в популяции)
	TLR-2-позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -2
Контроль	0,1± 0,01	15,5± 0,5	15,6± 0,53
Лизобакт	0,1± 0,01	8,2± 0,6	8,3± 0,62 v
Ксидифон	0,1± 0,01	22,8± 1,5	22,9± 1,53 ^

^ -увеличение, v - снижение показателя

контроль Лизобакт Ксидифон контроль Лизобакт Ксидифон

Рис.31 Влияние антисептических препаратов на экспрессию TLR-2 и TLR-4 буккальными эпителиоцитами

Таким образом, антисептические препараты, рекомендуемые к использованию для орошения полости рта, не меняют функциональную активность клеток по уровню экспрессии toll - подобных рецепторов. Примечательно, что подсчет количества живых клеток после воздействия антисептиков показал, что «Лизобакт» не влиял (р> 0,05) на жизнеспособность эпителиоцитов, тогда как «Ксидифон» заметно (р< 0,05) поддерживал высокое число живых клеток в популяции по сравнению с контролем: 49,9± 8,5 % живых клеток («Лизобакт»), 71,2± 6,2% («Ксидифон») и 6,7± 7,5 % (контроль). Возможно, это связано с тем, этидроновая кислота, входящая в состав препарата «Ксидифон», обладает мембранопротекторным свойством [Лукоянова Т.В.,2011].

3.3.6 Влияние микробных метаболитов на экспрессию toll - подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro

Известно, что экспрессия TLR может меняться в присутствии различных микроорганизмов [McClure R., et all 2014]. Для оценки способности микроорганизмов регулировать экспрессию toll-подобных рецепторов, использовали метаболиты кандид и бактерий разных видов: C.albicans штамм 601, C.glabrata штамм 44_1, C. krusei штамм 583, S. aureus штамм 5983, E.faecium штамм 179/2 и E.coli штамм 205. Буккальные эпителиоциты обрабатывали микробными метаболитами в течение 30 мин при 37°С (см.п.2.6.1.), затем добавляли антитела для выявления TLR-2 b TLR-4.

Результаты показали, что микробные продукты не влияли на жизнеспособность клеток. Так, в контроле процент жизнеспособных клеток был 78,85 ± 7,6 %, а после воздействия метаболитами C.albicans, C. glabrata, C.krusei, S.aureus, E.faecium, E.coli- 86,66 ± 8,2; 88,19 ± 6,3; 90,10 ± 7,6; 86,21 ± 7,8; 99,56 ± 8,5; 87,78 ± 8,4 % соответсвенно (р> 0,05).

Эксперименты позволили установить, что метаболиты всех исследуемых бактерий: S. aureus, E. faecium и E.coli - подавляли клеточную экспрессию TLR-2, что проявлялось в снижение процента TLR-2-позитивных эпителиоцитов в популяции (табл. 23, рис.32).

Таблица №23

Экспрессия TLR-2 на буккальных эпителиоцитах после обработки микробными метаболитами in vitro, М ± m

Метаболиты бульонных культур микроорганизмов	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-2 (% клеток в популяции)
	TLR-2-позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -2
контроль (бульон Сабуро/TSB)	1,1 ± 0,3	27,4 ± 2,5	28,5 ± 2,8
C. albicans 601	1,4 ± 0,2	32,7 ± 3,1	34,2 ± 3,3 ^
C.glabrata 44	1,6 ± 0,3	32,4 ± 2,7	34,0 ± 3,0 ^
C. krusei 583	1,7 ± 0,3	35,9 ± 3,3	37,6 ± 3,6 * ^
S. aureus 5983	2,4 ± 0,5	17,1 ± 2,9	19,5 ± 3,4 * v
E. faecium 179/2	0,4 ± 0,2	15,2 ± 2,3	15,6 ± 2,5 * v
E. coli 205 (lact+)	1,1 ± 0,3	18,3 ± 2,1	19,4 ± 2,4 * v

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

^- увеличение, v - снижение показателя

Рис.32 Влияние микробных метаболитов на экспрессию TLR-2 - рецепторов буккальных эпителиоцитов in vitro.

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

Так, действие метаболитов S. aureus уменьшало общее количество TLR -2-позитивных клеток в 1,46 раза (р< 0,05); а метаболитов E.faecium и E.coli в 1,83 и 1,47 раз соответственно (р< 0,05). В то же время, метаболиты кандид различных видов: C. albicans , C.glabrata, C. krusei - усиливали способность эпителиоцитов к экспрессии TLR-2, причем для экспериментов с супернатантами C. krusei эти измения носили выраженный характер, увеличивая процент TLR-2 позитивных клеток с 28,5 ± 2,8% (контроль) до 37,6 ± 3,6 (р< 0,05) ( см. табл. 23, рис.32) .Похожие результаты были получены и при оценке экспрессии TLR-4 (табл. 24, рис.33).

эпителиоцит гормон метаболит ингибирование

Таблица №24

Экспрессия TLR-4 на буккальных эпителиоцитах после обработки микробными метаболитами in vitro, М ± m

Метаболиты бульонных культур микроорганизмов	Буккальные эпителиоциты, экспрессирующие TLR-4 (% клеток в популяции)
	TLR-4-позитивные клетки	TLR-2 /TLR-4 -позитивные клетки	Всего клеток, экспрессирующих TLR -4
контроль (бульон Сабуро/TSB)	63,35 ± 7,2	27,4 ± 2,5	90,7 ± 7,6
C. albicans 601	64,76 ± 8,3	32,7 ± 3,1	97,5 ± 8,2 ^
C.glabrata 441	63,60 ± 7,5	32,4 ± 2,7	96,0 ± 7,8 ^
C. krusei 583	58,58 ± 6,9	35,9 ± 3,3	94,5 ± 7,2 ^
S. aureus 5983	45,91 ± 6,5	17,1 ± 2,9	63,3 ± 7,8 * v
E. faecium 79/2	53,71 ± 7,1	15,2 ± 2,3	68,9 ± 8,5 * v
E. coli 205 (lact+)	69,31 ± 9,1	18,3 ± 2,1	87,6 ± 8,4 v

* - достоверность отличий относительно контроля (р < 0,05)

^- увеличение, v - снижение показателя

Метаболиты бактерии преимущественно подавляли экспрессию TLR-4 на буккальных клетках: в экспериментах с супернатантами S. aureus и E.faecium процент TLR-4 - позитивных клеток существенно уменьшалось: в 1,43 и 1,32 раз соответственно (р < 0,05); эксперименты с метаболитами E. coli имели такую же тенденцию, но оказывали менее выраженный эффект (р> 0,05). В то же время,

Рис.33 Влияние микробных метаболитов на экспрессию TLR-4 буккальных эпителиоцитов.

метаболиты кандид приводили к незначительному увеличению процента TLR-4 - позитивных эпителиоцитов в популяции (p>0,05).

Таким образом, результаты показали, что представители кандиды и бактерии, обладают разными механизмами регуляции экспрессии TLR-2 и TLR-4 на эпителиальных клетках слизистых оболочек. Поскольку регуляция экспрессии toll-подобных рецепторов эпителиальных клеток ротовой полости является одним из механизмов, сопряженных со стимуляцией местного и общего иммунитета [Weindel G. et all., 2010], то, по-видимому, представители фунгальной и бактериальной микрофлоры могут вносить разный вклад в этот процесс.

Кроме того, нами были отмечены однонаправленные изменения реактивности рецепторного аппарата буккальных эпителиоцитов и количества TLR-4 - позитивных клеток под действием микробных метаболитов. При этом направление изменений определялись, в первую очередь, видом микроорганизма и его принадлежностью к одной из категорий - к микромицетам или бактериям (рис.34).

- уровень искусственной колонизации - Процент TLR-4 + клеток

Рис.34 Влияние метаболитов микроорганизмов на экспрессию TLR-4 буккальными эпителиоцитами и уровень искусственной колонизации

Таким образом, было установлено, что экзогенные факторы, такие как иммуномодулирующие и антисептические препараты, а также микробные метаболиты, в большей степени, меняют экспрессию TLR-2 и TLR-4 на буккальных эпителиоцитах, чем эндогенные стимулы (гормоны, цитокины) при кратковременной экспозиции в системах in vitro. В то же время наличие в организме хронического воспалительного процесса (пародонтит) резко меняет соотношение клеток, способных TLR-2 и TLR-4, а также число эпителиоцитов, лишенных данных трецепторов.

3.4 Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов в оценке эффективности применения иммуномодуляторов и антисептиков при некоторых хронических патологиях

Уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов оральной микрофлорой (рис.35) отражает функциональное состояние эпителиальных клеток и считается одним из показателей состояния как местного иммунитета, так и здоровья организма в целом [Маянский А.Н.,2006]. Известно, что при разных патологических состояниях уровень естественной колонизации может меняться [Зеленова Е.Г. и др.,1999, Маянский А.Н. и др.,1991 ; МаянскийА.Н. и др., 1999].

Естественную колонизацию буккальных клеток можно рассматривать как интегральный показатель активности рецепторного аппарата эпителиоцитов, которая реализуется при непосредственных контактах с представителями нормального биоценоза полости рта.

Ранее в нашей работе (п. 3.1.3.) было установлено, что иммуномодуляторы и оральные антисептики способны регулировать адгезивные реакции эпителиоцитов (на примере тест-системы с участием C. albicans). Поэтому, мы поставили себе цель - оценить возможность использования показателя естественной колонизации буккального эпителия в качестве критерия эффективности комплексной терапии с использованием иммуномодуляторов и оральные антисептиков у больных с хроническими патологиями.

Исследование проводили с участием следующих групп:

1-я группа - здоровые доноры (дети и взрослые);

2-я группа - больные с микробной экземой.

3-я группа - больные с онихомикозом дрожжевого генеза.

Во 2-й и 3-й группах использовали стандартное или комплексное лечение с применением иммуномодуляторов (п.2.13);

4-я группа - дети, учащиеся средних школ г. Нижнего Новгорода с хроническими патологиями респираторного тракта (в состоянии ремиссии). Используемый профилактический препарат содержащий лизоцим («Биофит», Россия).

Рис.35. Естественная колонизация буккального эпителиоцита (увеличение 800, окраска азуром А).

Уровень естественной колонизации оценивали по числу бактериальных клеток в пересчете на один буккальный эпителиоцит (просматривали 100 клеток) (рис. 35) ( п 2.3.).

3.4.1 Естественная колонизация буккального эпителия больных с микробной экземой до и после лечения с использованием препарата «Полиоксидоний»

Экзема - аллергическое полиэтиологическое заболевание, сопровождающееся воспалительно-дистрофической реакцией кожи, характеризующееся полиморфизмом элементов сыпи. Заболевание развивается на фоне изменений реактивности организма, сопровождается нарушениями в работе иммунных факторов и склонно к хроническому рецидивирующему течению [Парахонский А.П.,2004; Абдрахимова Н.А. и др., 2013 Никонова И.В. и др.,2011]. Одним из этиологических факторов развития экземы могут могут быть микроорганизмы («микробная экзема»).

В работе определяли уровень сывороточных молекул sICAM-I, IgЕ и IgG, а

также естественную колонизацию буккального эпителия у больных с микробной экземой до и после лечения по стандартной схеме, либо после комплексного лечения с применением препарата «Полиоксидоний» (п.2.13). Выбор сывороточных факторов для исследования был обусловлен патогенезом заболевания.

ICAM-I (InterCellular Adhesion Molecule I, CD54) - мембранный гликопротеин с молекулярной массой 80-114 кДа. ICAM-I относится к группе молекул клеточной адгезии, вовлечённых в межклеточные адгезивные контакты, а также в контакты между клетками и межклеточным матриксом. Существует несколько суперсемейств молекул адгезии клеток, различающихся структурными и фунциональными особенностями (селектины, интегрины, кадгерины, хоминговые рецепторы лейкоцитов и прочие рецепторы суперсемейства иммуноглобулиновых молекул), при этом помимо мембраносвязанных форм, существуют также растворимые формы молекул адгезии клеток [Новиков В.В., и др., 2007; Lawson C, Wolf S., 2009]. Изменения уровня экспрессии молекул межклеточной адгезии, в частности ICAM-I, увеличение их концентрации на мембране клеток, а также в сыворотке крови наблюдается при активации иммунной системы, воспалительных и опухолевых процессах [Никулин Н.К., Клеменова И.А., 2003; Максимова А.В. и др., 2005]. В свою очередь, известно, что концентрация IgE и IgG в сыворотке возрастает при антигенных нагрузках и атопиях [Ройт А., 2000].

Эксперименты показали, что у больных микробной экземой наблюдалось некоторое повышение средних величин всех исследуемых показателей (р > 0,05) (табл.25). Так, уровень IgE в сыворотке повышался в 1,6 раза, уровень Ig G - в 1,2 раза, ICAM-I - в 1,4; а показатель адгезии (уровень естественной колонизации) увеличился в 2,5 раза (р > 0,05). Стандартная схема лечения (п. 2.13) не приводила к существенному снижению индекса естественной колонизации - 35,12 ± 15,21 бакт/эп. (р > 0,05). После комплексной терапии с использованием препарата «Полиоксидоний», индекс естественной колонизации снижался в большей степени и составлял 26,47 ± 12,03 бакт/эп., приближаясь к показателям в контрольной группе (табл.25, рис.36). Уровень sICAM-I снижался крайне незначительно во время стандартного и комплексного лечения (р > 0,05).

Таблица 25

Естественная колонизация буккального эпителия и сывороточные показатели у больных с микробной экземой при различных схемах лечения, М ± m

показатели группы Пациентов	Показатель адгезии (бакт/эпит)	факторы сыворотки
		sIСАM-I (ng/ml)	IgG (mg/ml)	IgE (mg/ml)
здоровые (n=25)	14,31 ± 6,91	377,6 ± 92,78	10,45 ± 0,68	25,53 ± 5,51
пациенты с экземой до лечения (n=52)	36,79 ± 15,52^	514,73 ± 110,57^	12,92 ± 0,93	42,38 ± 15,74^
пациенты с экземой после стандартного лечения (n=28)	35,12 ± 15,21	510,54 ± 110,26	12,92 ± 0,89	42,85 ± 15,25
пациенты с экземой после комплексного лечения ? (n=24)	26,47 ± 12,03v	505,61 ± 114,29	12,87 ± 0,56	43,81 ± 16,87

? - комплексное лечение с применением препарата «Полиоксидоний»

^ - увеличение показателя относительно группы здоровых; v - снижение показателя в процессе лечения.



Рис.36 Влияние терапии с использованием препарата «Полиоксидоний» на уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у больных экземой.

В то же время, положительная динамика изменений уровня IgG, IgE в период наблюдений (20 дней) не отмечалась.

Проведенные исследования показали, что индекс естественной колонизации, молекулы межклеточной адгезии sICAM-I, титр иммуноглобулинов IgE возможно использовать в оценке выраженности патологического процесса при микробной экземе. Однако, только индекс естественной колонизации имеет динамику положительных изменений показателя в ходе лечении данной патологии.

3.4.2 Естественная колонизация буккального эпителия у пациентов с онихомикозом дрожжевого генеза до и после лечения с использованием препарата «Деринат»

Онихомикоз является грибковой инфекцией ногтей рук или ног, вызывающий уплотнение, обесцвечивание, деформацию и растрескивание ногтей. Одним из этиологических факторов являются грибы рода Candida (онихомикоз дрожжевого генеза) [Сергеев Ю.В., 1998].

Сравнительная оценка естественной колонизации детей и взрослых с онихомикозом показала одинаковую динамику изменений (табл.26) уровня естественной колонизации при патологии: у детей и взрослых увеличивается количество бактерий, закрепившихся на эпителиоцитах в 2,08 и 3,17 раза соответственно (р > 0,05).

Таблица 26

Естественная колонизация буккального эпителия детей и взрослых при поражениях ногтевой пластины дрожжевого генеза, М ± m

Группы пациентов	Показатель адгезии (бакт/эп.)
здоровые дети n =28	40,56 ± 18,98
здоровые взрослые n =28	14,30 ± 7,89
онихомикоз у детей n =23	84,31 ± 39,06
онихомикоз у взрослых n = 53	45,32 ± 22,14

Таким образом, увеличение естественной микробной колонизации буккального эпителия при онихомикозах дрожжевого генеза отражает наличие очага местной инфекции, как у детей, так и у взрослых.

Проводили оценку естественной колонизации буккального эпителия на фоне комплексного лечения онихомикозов, вызываемых грибами рода Candida с использованием препарата «Деринат». В работе использовали буккальные эпителиоциты, полученные от больных с онихомикозом, взятые до и после курса лечения: классическое лечение антимикотиками (26 человек), и комплексное (вместе с препаратом «Деринат») (27 человек), а также взятые от здоровых доноров-добровольцев (28 человек).

Эксперименты показали, что уровень естественной колонизации эпителиоцитов у больных онихомикозом был значительно выше, чем у здоровых доноров: 45,32 ± 22,14 и 14,30 ± 7,89 соответственно (p<0,05) (рис.37).

После проведенного курса стандартного лечения уровень естественной колонизации был ниже и составлял 34,19 ± 17,21 (p>0,05). После комплексной

Рис. 37 Влияние препарата «Деринат» на уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у больных онихомикозом.

терапии с использованием препарата «Деринат», индекс естественной колонизации снижался еще в большей степени и составлял 23,71 ± 11,0 (p>0,05), приближаясь к показателям в контрольной группе.

Таким образом, при использовании в комплексной терапии имммуномодуляторов восстановление уровня естественной колонизации у буккальных эпителиоцитов были выражены сильнее.

3.4.3 Естественная колонизация буккального эпителия у часто-болеющих детей до и после применения лизоцим - содержащего препарата

Часто болеющие дети (ЧБД) - термин, обозначающий группу детей, выделяемую при диспансерном наблюдении, характеризующуюся более высоким, чем их сверстники, уровнем заболеваемости острыми респираторными инфекциями [Альбицкий и др., 1986]. Среди ЧБД значительно чаще выявляются хронические заболевания носоглотки и легких, тяжелее протекает бронхиальная астма и аллергический ринит, выше частота ревматизма, гломерулонефрита и ряда других заболеваний. В подростковом возрасте ЧБД склонны к хроническим заболеваниям желудочно-кишечного тракта, сосудистым дистониям, у них легче развиваются невротические реакции, они быстрее утомляются и хуже учатся [Коровина и др., 2001]. В эту группу педиатры относят детей на основании критериев, предложенных В.Ю.Альбицким и А.А.Барановым (1986):

дети до 3 лет - 6 и более эпизодов ОРЗ в год;

дети 4-5 лет - 5 и более эпизодов ОРЗ в год;

дети старше 5 лет - 4 и более эпизодов ОРЗ в год.

В нашей работе были проанализированы результаты состояния естественной колонизации буккального эпителия у здоровых детей, а также у ЧБД с заболеваниями респираторной системы в анамнезе до и после курса приема сублингвального таблетированного препарата («Биофит», Россия) содерожащего лизоцим.

Результаты показали, что у ЧБД наблюдалась тенденция к повышению уровня естественной колонизации до 70,18 ± 31,97 (бакт/эп) по сравнению с группой здоровых: 40,56±18,98 (бакт/эп) (табл.27.). После курса приема сублигнгвального препарата, содержащего лизоцим, индекс естественной колонизации эпителиоцитов у ЧБД снижался до 48,36 ± 31,15 (бакт/эп) (р>0,05) (рис.38), приближаясь к среднему значению показателя в контрольной группе (здоровые дети) (р>0,05).

Таблица 27.

Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов у часто-болеющих детей с заболеваниями респираторной системы, М ± m

Группа детей	Уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов (бакт/эпит)
здоровые n=29	40,56 ± 18,98
больные (заболевания респираторной системы) n=21	70,18 ± 31,97
больные после применения лизоцим-содержащего препарата n=21	48,36 ± 31,15

Рис.38. Естественная колонизация буккального эпителия у здоровых детей и больных до и после курса приема сублингвального препарата с лизоцимом

Таким образом, наши исследования с участием взрослых и детей с различными хроническими патологиями (онихомикоз дрожжевого генеза, микробная экзема, часто болеющие дети) показали, что изменение индекса естественной колонизации буккальных клеток отражает наличие данных патологических процессов среди пациентов различных возрастных групп. При этом, положительная динамика изменений уровня естественной колонизации эпителиоцитов полости рта позволяла в короткие сроки (сразу же, после окончания курса терапии) объективно оценить эффективность лечебных и профилактических мероприятий с использованием иммуномодуляторов и оральных антисептиков.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Эпителиоциты слизистых оболочек человека являются частью мукозальной системы, которая играет существенную роль в поддержании гомеостаза и обеспечивает «первую линию» защиты от инфекционных агентов [Меджитов Р, 2004; Быков В.Л., 2006, Маянский А.Н., 2006; Ахматова Н.К., и др.2008: Ярилин А.А, 2008; Сотникова Н.Ю., 2009; Комарова Ю.Р. и др., 2010; Бурменская О.В.и др., 2011, Цывкина А.А. и др., 2011, Бурягина Н.В.,2013; Takizawa H.,1998, Farmer I. et.all., 2001; Nester, E. 2009.; Zhu, W.,2010; Weindl G., Wagener J., 2010, Maier E. et.all, 2014].

Известно, что функциональное состояние клеток слизистых оболочек способно меняться под влиянием различных факторов экзогенной и эндогенной природы, патологических процессах и старении [Абаджиди М.А.и др., 2003; Альтман Э...