Факторы и условия, регулирующие функциональную активность буккальных эпителиоцитов и их взаимодействие с Candida albicans

Химически чистые (синтетические) иммуномодуляторы можно разделить на 2 подгруппы - низкомолекулярные и высокомолекулярные. К первым относятся лекарственные средства, дополнительно обладающие иммунотропной активностью. Их родоначальником стал левамизол (Декарис) - известное противоглистное средство, у которого в последующем были выявлены выраженные иммуностимулирующие свойства. Другим перспективным лекарством из подгруппы низкомолекулярных иммуномодуляторов является Галавит - производное фталгидразида. Особенность этого препарата заключается в наличии не только иммуномодулирующих, но и выраженных противовоспалительных свойств. К подгруппе низкомолекулярных иммуномодуляторов также относятся и 3 синтетических олигопептида: Гепон, Глутоксим и Аллоферон [Арион В.Я., 1991]. К высокомолекулярным химически чистым иммуномодуляторам, полученным с помощью направленного химического синтеза, относится Полиоксидоний. Этот препарат характеризуется широким спектром фармакологического действия на организм, включающим иммуномодулирующий, антиоксидантный, детоксирующий и мембранопротекторный эффекты [Петров Р.В. и др.,1999; Караулов А.В., 2008].

Обширный диапазон положительных воздействий на организм характерен и для иммуномодулирующих препаратов из группы нуклеиновых кислот, которые подразделяются на синтетические (Полудан) и естественные (Деринат, нуклеинат натрия). В частности, Деринат, активирующий противовирусный, противогрибковый и противомикробный местный иммунитет за счет иммуномодулирующего действия на клеточном и гуморальном уровнях и повышения фагоцитоза, реализует также радиопротекторный, репаративный, противовоспалительный, анальгезирующий и противоопухолевый и легкий антикоагулянтный эффекты. Это обусловливает применение данного иммуномодулятора при очень большом круге заболеваний (прежде всего, инфекционных) различной природы и локализации [Дугина В.В.,2010; Каплина Э.Н. и др.,2005].

Определение степени поражения иммунной системы является одним из важнейших этапов в подборе препарата для иммуномодулирующей терапии. Точка приложения действия препарата должна соответствовать степени нарушения деятельности определенного звена иммунной системы с целью обеспечения максимальной эффективности проводимой терапии [Арион В.Я., 1991; Аллахвердиева Л.И, и др. 2011]. Однако, стоит сказать и о том, что, к сожалению, в настоящее время нет четкого алгоритма, позволяющего определиться с точным выбором иммуномодулятора для коррекции работы иммунной системы при различных патологических состояниях.

1.5.4 Микробные метаболиты

Патогенные/условно-патогенные бактерии и микромицеты обладают способностью продуцировать экзтоксины, интимины (инъекционные/ контактные токсины) и ферменты инвазии, способные разрушать структуру клеток человека, либо нарушать их фунцкии [Маянский, А.Н. 2006; Nester E., et all.2009; Сергеев А.Ю.,Сергеев Ю.В.,2001]. С другой стороны, имеются примеры стимулирующего действия и усиления функций эпителиальных клеток и других механизмов мукозальног иммунитета под влияним пробиотических штаммов микрооранизмов - представителей нормальной микрофлоры человека [Шендеров, Б. А, 1998: Forsythe P., Bienenstock J. 2010; Wan L.Y., et all , 2015].

1.6 Эпителиоциты слизистых оболочек в клинико-лабораторных исследованиях

Известно, что эпителиатные клетки (в частности, буккальные), являются чувствительным индикатором изменений местного и общего гоместоза [Маянский А.Н. и др., 1987; Быков В.Л., 1997; Зеленова Е..Г. и др.,1999; Абаджиди М.А.и др., 2000; Ланкина М.В., 2002; Величко Е.В., 2003; Маянский, А.Н., и др. 2004; Полякова В.О. и др., 2015]. Однако, до сих пор не существет единого мнения о том, какие методы и молекулярные маркеры наиболее эффективно отражают функциональые сдвиги в эпителиоцитах [Полякова, В.О. и др., 2015].

Классичечствим методом исследования является оценка морфофункциональных изменений клеток и определения электрокинетических характеристик ядра эпителиоцитов [Банченко Г. В. и др. ,1997; Быков, В.Л., 1997; Хусаинова, И.С. и др. 1997; Цепов Л.М. и др.,1999; А.М. Авдалян и др., 2003.; Бочкарева Е.П. и др.,2013]

Довольно широко используется метод определения функциональной активность эпителиальных клеток по выраженности их взаимоотношений с нормальной микрофлорой полости рта - естественная колонизация буккальных эпителитоцитов [Маянский, А.Н. и др. 1991, Лукиных Л.М. и др.,1999 , Караулов А.В. и др, 2012].

В настоящее время активно развивается направление молекулярной морфологии, основанное на использовании гистохимических, иммуногистохимических и иммуноцитхимическтие методов [Полякова, В.О. м др. 2015]. Данные методы позволяют выявлять особенности строения клеток и сигнальные молекулы - биологически активные вещества, секретируемые эпителиоцитами. Патологические сдвиги в организме могут сопровождаться изменением количества продукции следующих маркеров мукозальных эпителиоцитов: матриксные металлопротеиназы [Montagner A. F. et al., 2014], факторы роста эндотелия сосудов - VEGFp [Astekar M. et al., 2012 ], хромогранин А и мелатонин, [Angelone T. et al.,, 2012], клеточный маркер пролиферации Ki67, активатор генной транскриапции p53, экспрессию TNF-б, [Полякова, В.О. и др., 2015], продукцию в-дефезинов [Гемонов, В.В.и др.,1996, Цывкина А.А. и др., 2011].

Все эти методы отражают измененное состояние эпителиоцитов при локальном или системном патологическом процессе.

Нам представляется, что с появлением возможности оценивать эксперссию клкточных маркеров и рецепторов методом проточной цитофлуориметрии, может развиться новое направление в исследования эпителиоцитов слизистых оболочек - по выраженности экспрессии toll-подобных рецепторов или иных сигнальных молекул. Такой метод позволит оценить не только функциональное состояние клеток на момент исследования, но и их реактивность, т.е. немедленную способность отвечаьть на стимулы.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Объем исследований

В работе было исследовано свыше 1800 препаратов эпителиоцитов (буккальных и вагинальных) человека. Проведено 54 серии экспериментов с искусственной колонизацией кандид на эпителиоцитах. Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов исследована у пациентов с онихомикозом (53 взрослых и 23 детей), у 52 больных микробной экземой, у часто болеющих детей (21 человек), а также у 57 здоровых доноров. Проведено свыше 200 анализов сыворотки 78 пациентов методом иммуноферментного анализа. Выполнено 17 серий экспериментов с использованием проточного цитофлюориметра (BD FACS Canto II System with Fluidics Cart, 6-color, blue/red, USA).

2.2 Получение эпителиоцитов слизистых оболочек

Клетки буккального эпителия получали утром, натощак от здоровых женщин и мужчин 21-38 лет, а также детей и подростков 2-14 лет путем соскоба с внутренней поверхности щеки. Клетки вагинального эпителия получали от женщин 25-36 лет (на базе женской консультации №1, г. Нижний Новгород). Эпителиальные клетки трижды отмывали от слизистого секрета ЗФР (40g, 5 минут), готовили взвесь с концентрацией 10⁶ кл/мл. Концентрацию эпителиоцитов определяли путем измерения оптической плотности суспензии на денситометре DEN-1 (ООО «Biosan», Латвия). В каждой серии экспериментов участвовали эпителиоциты, полученные не менее чем от 5 доноров.

2.3 Оценка естественной колонизации эпителиоцитов

Индекс естественной колонизации оценивали методом подсчёта бактериальных клеток, адгезировавшихся на эпителиоцитах. Для этого из суспензии эпителиоцитов готовили мазки, фиксировали метанолом (10 мин) и окрашивали 0,25% водным раствором азура А («Sigma», USA). Индекс естественной колонизации оценивали по числу бактериальных клеток в пересчёте на один эпителиоцит (бакт/эп). Учитывали средний результат после подсчета 100 эпителиоцитов.

В ряде экспериментов оценивали уровень естественной колонизации при различных патологиях у взрослых и детей, а также после применения препаратов (иммуномодуляторов, антисептиков) (см. п. 2.12., 2.13.).

2.4 Получение клеточной суспензии Candida аlbicans

В работе использовали штамм Candida аlbicans штамм 601 (из коллекции кафедры микробиологии и иммунологии ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава РФ, г. Н. Новгород). Культуру C. albicans получали в дрожжевой фазе на декстрозном агаре Сабуро (HiMedia, India) (24 ч, 37°С). Посевы смывали забуференным физиологическим раствором (ЗФР, рН 7,2-7,4), трижды отмывали десятикратным объемом ЗФР (1000g, 15 мин), удаляли клеточные агрегаты центрифугированием (40g, 2 мин) и ресуспендировали в концентрации 10⁷ кл/мл в ЗФР.

2.5 Оценка адгезии в системе «эпителиоциты - C.albicans»

Эпителиоциты получали в концентрации 10⁶ кл/мл (см. п. 2.2) и подвергали влиянию различных факторов (см. п. 2.6.). Эпителиальные клетки и исследуемый фактор смешивали в равных объемах (по 0,5 мл) и инкубировали 30 мин при 37?С. В контрольных пробах вместо фактора использовали растворитель (ЗФР, бульоны для культивирования микроорганизмов). Эпителиоциты дважды отмывали ЗФР.

Получали суспензию C.albicans штамм 601 как описано ранее (см. п. 2.4.), удаляли клеточные агрегаты центрифугированием (40g, 2 мин) и доводили до концентрации 10⁷ кл/мл.

Проводили искусственную колонизацию C.albicans штамм 601, для чего равные объемы (по 0,5 мл) взвеси эпителиоцитов (10⁶ кл/мл) и кандид (10⁷ кл/мл) Выбранная концентрация кандид давала максимальные показатели искусственной колонизации при наименьшем количестве отмывок для получения препаратов свободных от не прикрепившихся к эпителиоцитам кандид, полученных в дрожжевой фазе инкубировали (30 мин, 37°С) в растворе Хенкса без фенолового красного, встряхивая каждые 5 мин.

Эпителиоциты трехкратно отмывали ЗФР от неприкрепившихся кандид (40g, 5 мин), из осадка клеток (0,2 мл) готовили мазок, который после фиксации метанолом (10 мин) окрашивали 0,25% раствором азура А. Подсчитывали количество кандид, закрепившихся на одном эпителиоците. Рассчитывали индекс искусственной колонизации как среднее количество адгезированных кандид в перерасчете на один эпителиоцит (канд/эп), после световой микроскопии 100 эпителиальных клеток.

2.6 Приготовление факторов для воздействия на эпителиоциты

2.6.1 Получение продуктов метаболизма микроорганизмов

Candida albicans штамм 601, Candida krusei штамм 583, Candida glabrata штамм 44₁ выращивали на бульоне Сабуро (ННПЦ ГИП, Оболенск) (24 ч, 37°С). Staphylococcus. aureus штамм 5983, Enterococcus faecium штамм 179/2 и E.coli штамм 205 (lact+) 601 (из коллекции кафедры микробиологии и иммунологии ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава РФ, г. Н. Новгород) культивировали в бульоне TSB (Soybean-Casein Digest broth, Becton, Dickenson and Company, USA, France). Супернатанты отделяли от микробных клеток центрифугированием при 2000g в течение 15 минут, и фильтровали через бактериальные фильтры с диаметром пор 20 мкм (Sterile syringe filter, Corning, Germany).

2.6.2 Женские половые гормоны

В экспериментах использовали растворы гормонов в ЗФР: эстрадиол - 450 пмоль/л («Sigma», USA), прогестерон - 50 нмоль/л («Sigma», USA), ХГЧ - 500 МЕ/л («Sigma», USA), Эстриол - 15 нг/мл («Sigma», USA). ЛГ- 100мМе/мл («Sigma», USA), ФСГ - 50 мМЕ/мл («Sigma», USA), тестостерон - 1,71 нмоль/л («Sigma», USA).

2.6.3 Цитокины

В экспериментах использовали цитокинов человека в ЗФР: IL-1 («Sigma», USA;10- ¹² г/мл) с; IL-6 («Sigma», USA;10- ¹² г/мл) IL8 («Sigma», USA;10- ¹² г/мл); с TNFб («Sigma», USA;10- ⁹ г/мл) и с INFб («Sigma», USA;10- ⁹ г/мл).

2.6.4 Иммуномодулирующие препараты

В экспериментах использовали коммерческие препараты с заявленным иммуномодулирующим действием в рекомендованных терапевтических дозах: Ликопид® ? 1мг/мл (ЗАО «ПЕПТЕК», Россия); Рибомунил® ?0,15 мг/мл (Пьер Фабр Медикамент Продакшн», Франция); Полиоксидоний® ? 6мг/мл (ООО « НПО Петровакс Фарм», Россия); Иммунал® ? 8мг/мл (Лек , Словения); Деринат® ? 0,25% раствор (ЗАО ФП «Техномедсервис», Россия), Имудон® ? 5мг/мл (ОАО «Фармстандарт-Томскхимфарм», Россия); Гриппферон ® - 3000МЕ (ЗАО «Фирн М», Россия).

2.6.5 Антисептические средства

В экспериментах использовали коммерческие препараты с заявленным антисептическим эффектом. Применяли водный 2% раствор препарата Ксидифон® (ФГУП «Мосхимфармпрепараты», Россия), и Лизобакт® (1мг/мл) (АО «Босналек», Босния и Герцеговина).

2.7 Определение уровня экспрессии toll-подобных рецепторов на буккальных эпителиоцитах и жизнеспоспособности клеток

Пул буккальных эпителиоцитов получали от 5-6 здоровых некурящих доноров-добровольцев. В ряде экспериментов использовали эпителиоциты, полученные от больных пародонтитом. Взвесь клеток ресуспендировали в ЗФР (концентрация 10⁸ кл/мл), пропускали через через фильтры CellTricks с диаметром пор 100 мкм (Partec, Germany) и переносили в пробирки для цитофлюориметра. Клетки осаждали центрифугированием (5 мин, 40 g), к осадку добавляли 1 мл среды 199 с солями Хэнкса и глутамином (ПанЭко, г. Москва). В ряде экспериментов эпителиоциты предварительно инкубировали (30 мин, 37°С) с различными факторами (п. 2.6.). Затем эпителиоциты дважды отмывали ЗФР (5 мин, 40 g) и взвешивали в 100 мкл жидкости для цитофлюориметра «Cell wash». Эксперименты каждой серии ставили в трех повторах. К 100 мкл взвеси буккальных эпителиоцитов добавляли следующие реактивы:

1) 20 мкл 7AAD (7-амино-актиномицин D) (BD Pharmingen, USA) и инкубировали 15 минут. Известно, что клетки с поврежденными мембранами (мертвые) способны воспринимать (окрашиваться) 7-AAD, в отличие от живых [Сырцова М.А.,и др., 2014]. В контрольный образец не добавляли краситель, с целью определения спонтанного окрашивания.

2) 10 мкл коктейля (смеси) антител для идентификации TLR-2 (CD282) (5мкл) и TLR-4 (CD284) (5мкл) (BD Pharmingen, USA) для анализа активности эпителиоцитов в контроле и при различных вариантах стимуляции.

Пробирки с материалом перемешивали на лабораторном механическом встряхивателе (Вортекс V3, Elmi Латвия), затем помещали в проточный цитофлюориметр BD FACS Canto II System with Fluidics Cart (6-color, blue/red, USA). Для калибровки прибора применяли программу BD Cytometer Setup and Tracking Beads (BD CS&T). Использовали полуавтоматический режим с ручной подачей пробирки.

Гейт эпителиальных клеток (рис.4) отбирали на основании параметров бокового (SSC) и прямого (FSC) светорассеивания характерных для буккальных эпителиоцитов (клетки с низкой гранулярностью - регион низкого светорассеяния) [Хайдуков С.В, и др., 2011; Хаитов Р.М. и др.,2009]. Было выделены следующие зоны (облака, гейты):

1) с низкой гранулярностью и малыми размерами; было сделано предположение, что это остатки разрушенных клеток (дебрис);

Рис.4. Гейты эпителиальных клеток.

2) с небольшими размерами и более высокой гранулярностью - эпителиальные клетки [Копыльцова Е.А., и др., 2005] (рис.4).

В работе проводили анализ гейта №2 (эпителиальные клетки). Результаты (рис.5,6) обрабатывались с помощью программы FacsDiva 4.1. и выражались в процентах, как отношение числа клеток, презентирующих на своей поверхности TLR-2 или TLR-4 к общему числу жизнеспособных клеток в популяции.

Рис.5. Гистограмма (вариант №1), показывающая общее содержание TLR-2 и TLR-4- позитивных буккальных клеток в популяции жизнеспособных эпителиоцитов.

Рис.6. Гистограмма (вариант №2), показывающая содержание отдельных фракций TLR-2 и TLR-4- позитивных буккальных клеток в популяции жизнеспособных эпителиоцитов.

2.8 Ингибирование внутриклеточных сигнальных путей

2.8.1 Подавление активации транскрипционного фактора NF-kB

Блокаду активации транскрипционного фактора NF-kB проводили с использованием протеасомного ингибитора - ALLN (N-acetyl-leucinyl-leucinyl-norleucinal) («Sigma», USA) [Dahan, S. et all .,2000; Carlson D.L., et all., 2003). Ингибитор (1 мг) растворяли в ДМСО. Буккальные эпителиоциты человека (10⁶ кл/мл) инкубировали с ALLN (100 мкл, 90 мин, 37°С). В контроле использовали интактные клетки (без ингибитора).

2.8.2 Ингибирование активности внутриклеточных митогенактивированных киназ ERK1/2 и p38

В качестве специфического ингибитора ERK1/2 использовали U0126 («Sigma», USA) [Tian W., et all., 2000] , специфическим ингибитором p38 MAP-киназы служил SB203580 («Sigma», USA) (Jiang Y, et all.,1996). Ингибиторы MAP-киназ (1 мг) растворяли в ДМСО. В эксперименте использовали ингибиторы в конечной концентрации 20 ?M. Эпителиоциты (10⁶) человека инкубировали с раствором ингибитора (37°С, 1ч). В контроле использовали интактные клетки (без ингибитора).

2.9 Получение сыворотки человека

Кровь из локтевой вены отбирали утром натощак в объеме 5 мл, получали сыворотку путем центрифугирования (1000g, 20 мин, 4°С).

2.10 Определение уровня сывороточных иммуноглобулинов IgE и IgG

В работе исследовали уровень IgE и IgG в сыворотке пациентов с микробной экземой. Исследования проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) на спектрофотометре BIO-RAD-480 (USA), c использованием коммерческих тест-систем для определения IgE и IgG (ЗАО «Вектор Бест», Россия).

2.11 Определение уровня растворимых s ICAM-I в сыворотке

В работе исследовали уровень sICAM-I в сыворотке пациентов с микробной экземой. Исследования проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) на спектрофотометре BIO-RAD-480 (USA), c использованием коммерческих тест-систем для определения ICAM-I (Bender MedSystems, Austria).

2.12 Схема применения лизоцим-содержащего антисептического препарата у часто-болеющих детей

В ряде экспериментов оценивали состояния нормальной микрофлоры буккального эпителия у часто-болеющих детей с острыми заболеваниями респираторной системы в анамнезе, в период ремиссии, до и после приема сублингвального препарата, содержащего лизоцим (ЗАО «Биофит», Россия). 1 таблетка препарата содержит 7 мг лизоцима. Препарат использовали по следующей схеме: 3 таблетки 1 раз в день; курс приема - 21 день.

2.13 Схема лечения больных с онихомикозом и микробной экземой с использованием иммуномодулирующих препаратов

Пациенты с онихомикозом получали комбинацию из 3-4 препаратов по следующей схеме [Шебашова Н.В., и др.,2008]:

Таблица 3

Схема комплексного лечения пациентов с онихомикозом

Группы препаратов:	Препараты выбора:
1.Системный антимикотик (в соответствии с данными резистограммы)	1. Флюконазол (Дифлюкан, Франция) ?150мг в неделю до полного отрастания ногтевых пластин; 2. Интраконазол?400мг/день в течение недели (Орунгал, Бельгия); 3. Кетаконазол?200 мг/день в течение 7-14 дней (Низорал, Россия)
2.Местный антимикотик (мазь): (в соответсвии с данными резистограммы)	1. Клотримазол, (Польша) 2. Пимафуцин, (Нидерланды) 3. Низорал, (Бельгия) 4. Травоген, (Германия) 5. Микоспор (Германия)
3.Поливитаминный препарат	1. Ревалид?1-2 капсулы 3 раза в день 2-4 месяца (Revalid, Венгрия) 2. Цинкертал?1 таблетка 2 раза в день 3-4 месяца, (Zincertal, Польша)
4.Иммуномодулятор (в подгруппе с комплесным лечением)	Полиоксидоний® ?24мг 2 раза/день 10 дней (ООО «НПО Петровакс Фарм», Россия).

Пациенты с микробной экземой получали терапию согласно стандарту лечения. данного заболевания. В подгруппе с комбинированной терапией пациенты дополнительно получали иммуномодулятор Деринат® (ЗАО ФП «Техномедсервис», Россия) внутримышечно по 5 мл 1,5% раствора с интервалом 24-72 часа (курс 5-10 инъекций).

2.14 Статистическая обработка результатов

Статистическую обработку проводили по общепринятой методике с использованием компьютерных программ Excel и Stadia. Данные проверяли на нормальность распределения и представляли в таблицах (вместе со значением n) в виде группового среднего арифметического (М) и стандартной ошибки среднего (SEM). Межгрупповые различия анализировались параметрическими или непараметрическими методами, в зависимости от типа распределения. В качестве параметрического критерия будет использован критерий Стьюдента. В качестве непараметрического критерия - критерий Вилкоксона-Манна-Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05. Взаимосвязь параметров оценивали методом корреляционного анализа, определяя коэффициент ранговой корреляции Спирмена (r_s). Силу корреляционной связи определяли по значению r_s: ниже 0,3 считали слабой, от 0,3 до 0,7 - средней и от 0,7 до 1,0- сильной.

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Влияние эндогенных и экзогенных факторов на адгезивность эпителиоцитов слизистых оболочек в экспериментальной системе с C. albicans in vitro

Адгезия и колонизация патогенных /условно-патогенных микроорганизмов на тканях хозяина является первым и обязательным этапом инфекции [Маянский А.Н. 2006; Nester E., 2009]. При этом, адгезия рассматривается не только как прикрепление микроорганизма к субстрату, но и как процесс, в котором оба компонента системы «эпителиальная клетка - микроорганизм» активно взаимодействуют между собой [Маянский А.Н. 2006; Зеленова Е.Г.и др., 2002; Кремлева Е.А.и др., 2012]. При этом, на функциональную активность и реактивность эпителиоцитов слизистых оболочек могут оказывать влияние различные факторы как экзогенной, так и эндогенной природы [Цывкина А.А. и др., 2011].

В нашей работе мы исследовали изменение адгезивности эпителиальных клеток слизистых оболочек в отношении микроорганизмов под воздействием факторов экзо - и эндогенной природы. Для оценки способности эпителиоцитов вступать в адгезивные контакты, использовалась экспериментальная тест-система «искусственная колонизация C. albicans на буккальных клетках in vitro» (рис.7.).



Рис 7. Искусственная колонизация буккальных эпителиоцитов клетками С.albicans штамм 601 (увеличение ? 800, окраска азуром А).

Для этого, эпителиоциты инкубировали (37°С, 30 мин) с эндогенными или экзогенными факторами, отмывали от несвязавшихся кандид (см.п.2.6.). Из осадка клеток готовили мазки. Подсчитывали количество кандид, закрепившихся на одном эпителиоците. Определяли индекс искусственной колонизации C. albicans как среднее количество адгезированных кандид на один эпителиоцит (канд/эп), после микроскопии 100 эпителиальных клеток.

3.1.1 Влияние женских половых гормонов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C. albicans

Гормональные изменения, регулярно происходящие в организме женщины, влияют на фунциональную активность эпителиоцитов [Beagley K. et all.,2003; Coleman H. et all., 2001]. Имеются данные, что изменение гормонального фона изменяет чувствительность эпителия к кандидам. [Тютюнник В.Л. и др., 2013; Бурменская О.В.и др.,2011;Лебедева Т.Н. 2004]. Поэтому важно учитывать фазу менструального цикла и соответственно гормональное влияние на эпителиоциты слизистых оболочек различных биотопов [Служаев И.Ф. и др., 2004; Fahey J.V. et all,2005; Сапронова Е.А.и др., 2003].

Было проведено сравнение действия основных гормонов, регулирующих менструальный цикл у женщин: прогестерон, ФСГ, ЛГ, эстрадиол, эстриол, тестостерон, ХГЧ ? на возможность эпителиоцитов слизистых оболочек ротовой полости вступать в адгезивные контакты с C.albicans in vitro (табл.4, рис.8).

Инкубация эпителиальных клеток ротовой полости с эстрадиолом, эстриолом, тестостероном и ХГЧ приводила к подавлению адгезии кандид в 1,29 ± 0,2; в 1,4 ± 0,3; в 1,29 ± 0,3; в 1,42 ± 0,2 раз соответственно (р <0,05) (см. табл 4). В то же время, обработка эпителиоцитов прогестероном и ЛГ повышала адгезию C.albicans на буккальных клетках в 1,26 ± 0,2; в 1,31 ± 0,1 раз (р <0,05). Обработка эпителиоцитов ФСГ не приводила к изменению адгезивности клеток (р <0,05). (см. табл. 4). Таким образом, адгезивная эпителиоцитов изменяется в разные периоды менструального цикла, в результате работы разных гормонов.

Таблица №4

Влияние гормонов репродуктивного цикла женщин на адгезивные взаимодействия буккальных эпителиоцитов с C. albicans штамм 601, М ± m

Гормоны	Показатель адгезии (канд/эпит)	Кратность изменения показателя адгезии относительно контроля (количество раз)	Снижение (v) или увеличение (^) уровня адгезии кандид на эпителиоцитах относительно контроля
	Контроль: интактные эпителиоциты (канд/эпит)	Эпителиоциты, обработанные гормонами до контакта с C.albicans (канд/эпит)
ЛГ	3,6 ± 0,2	4,7 ± 0,2*	1,31 ± 0,1*	^
Прогестерон	6,5 ± 0,4	8,2 ± 0,3*	1,26 ± 0,2*	^
ФСГ	5,1 ± 1,1	5,2 ± 0,6	0,90 ± 0,1	?
Эстрадиол	4,9 ± 0,3	3,8 ± 0,2*	1,29 ± 0,2*	v
Эстриол	8,3± 0,5	5,7 ± 1,1*	1,40 ± 0,3*	v
Тестостерон	6,0 ± 0,9	5,4 ± 0,6*	1,29 ± 0,3*	v
ХГЧ	3,7 ± 0,4	2,6 ± 0,2*	1,42 ± 0,2*	v

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

Рис.8. Влияние половых гормонов на способность буккальных эпителиоцитов адгезировать C. albicans; по оси ординат: «+» - увеличение показателя, «?» - снижение показателя.

Условные обозначения: ЛГ-лютеинизирующий гормон, ПГ-прогестерон, ФСГ фолликулостимулирующий гормон, ЭД - эстрадиол, ЭС-эстриол, ТС - тестостерон, ХГЧ - хориониический гонадотропин.

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

Та же схема была использована и в экспериментах с вагинальными эпителиоцитами. Было проведено сравнение способности буккальных и вагинальных клеток, прединкубированных с гормонами, к адгезивным контактам с C.albicans (табл. 5, рис.9).

Таблица №5

Влияние гормонов на адгезивные взаимодействия буккальных и вагинальныхклеток с C. albicans при разных режимах обработки эпителиоцитов, М ± m

Гормоны	Кратность изменения индекса искусственной колонизации эпителиоцитов (количество раз)	Корреля-ция ( r )
	Обработка гормонами буккальных эпителиоцитов до контакта с C. albicans	Обработка гормонами буккальных эпителиоцитов в процессе контакта с C. albicans	Обработка гормонами вагинальных эпителиоцитов до контакта с C. albicans
ЛГ	1,31 ± 0,1 * ^	2,59 ± 0,1*/** ^	1,28 ± 0,1 * ^	0,82
Прогестерон	1,26 ± 0,2 * ^	1,34 ± 0,1 * ^	1,17 ± 0,1 ^	0,71
ФСГ	0,90 ± 0,2	1,40 ± 0,1	1,11 ± 0,3	0,81
Эстрадиол	1,29 ± 0,2 * v	1,60 ± 0,2 * v	1,25 ± 0,2 * v	0,76
Эстриол	1,40 ± 0,3 * v	1,36 ± 0,3 * v	1,61 ± 0,3 * v	0,83
Тестостерон	1,29 ± 0,3 * v	1,80 ± 0,2 * v	1,27 ± 0,2 * v	0,82
ХГЧ	1,42 ± 0,2 * v	1,60 ± 0,3 * v	1,38 ± 0,3 * v	0,71

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

Эксперименты показали сходное по направлению изменение адгезивности у буккальных и вагинальных эпителиоцитов в отношении кандид под влиянием гормонов (р > 0,05) ( рис. 9). Изменения имели сильную корреляцию от 0,71 до 0,83 (см. табл.5).

Отсутствие различий в адгезивности эпителиоцитов из разных биотопов (вагинальная, оральная полости) позволило сделать вывод об однотипной реактивности мукозальных клеток человека в системах с кандидами. В связи с этим, в последующих экспериментах использовали тест-системы только с буккальными эпителиоцитами.



рис.9. Влияние женских половых гормонов на изменение адгезивности взаимодействия буккальных и вагинальных эпителиоцитов к C. albicans штамм 601 in vitro

Условные обозначения: ЛГ - лютеинизирующий гормон, ПГ - прогестерон, ФСГ - фолликулостимулирующий гормон, ЭД - эстрадиол, ЭС - эстриол, ТС - тестостерон, ХГЧ - хориониический гонадотропин

Для оценки возможного изменения адгезивности эпителиоцитов уже после контакта с кандидами проводили дополнительную серию экспериментов по исследованию влияния гормонов на способность буккальных эпителиоцитов удерживать прикрепившиеся к ним C. albicans (табл.6, рис. 10).

Адгезивность эпителия в процессе их контакта с кандидами также изменяется на фоне действия различных половых гормонов. Эстрадиол, эстриол, тестостерон и ХГЧ приводили к снижению адгезии в 1,60 ± 0,2; 1,36 ± 0,3; 1,80 ± 0,2; 1,60 ± 0,3 раз соответственно (р < 0,05). А ЛГ и прогестерон, напротив способствовали увеличению адгезии кандид на эпителиоцитах 2,59 ± 0,1; 1,34 ± 0,1 раз соответственно (р < 0,05) (табл. 6, рис.10).

Кроме того существенное усиление адгезивности эпителиоцитов во время контакта с микробом под влиянием ЛГ. Это может указывать на то, что данный гормон (ЛГ) и кандиды могут обладать костимулирующим эффектом в отношении экспрессии адгезивных молекул на букаальных клетках.

Таблица 6

Влияние женских половых гормонов на адгезивность буккальных клеток к C. albicans штамм 601 при разных режимах обработки эпителиоцитов, М ± m

Гормоны	Обработка гормонами эпителиоцитов до контакта с C. albicans	Обработка гормонами эпителиоцитов в процессе контакта с C. albicans
	Кратность изменения индекса искусствен-ной колонизации (количество раз)	Снижение (v) или увеличение (^) адгезивности эпителиоцитов	Кратность изменения индекса искусствен-ной колон изации (количество раз)	Снижение (v) или увеличение (^) адгезивности эпителиоцитов
ЛГ	1,31 ± 0,1*	^	2,59 ± 0,1*/**	^
Прогестерон	1,26 ± 0,2*	^	1,34 ± 0,1*	^
ФСГ	0,90 ± 0,2		1,40 ± 0,1
Эстрадиол	1,29 ± 0,2*	v	1,60 ± 0,2*	v
Эстриол	1,40 ± 0,3*	v	1,36 ± 0,3*	v
Тестостерон	1,29 ± 0,3*	v	1,80 ± 0,2*	v
ХГЧ	1,42 ± 0,2*	v	1,60 ± 0,3*	v

* - достоверность отличий относительно необработанных эпителиоцитов (контроль) (р < 0,05)

** - достоверность отличий относительно эпителиоцитов, обработанных до контакта с C. albicans (р < 0,05)

Таким образом, наши исследования показали, что половые гормоны: прогестерон, ФСГ, ЛГ, эстрадиол, эстриол, тестостерон, ХГЧ -- способны изменять реактивность эпителиоцитов слизистых оболочек в отношении C.albicans. Зная, что изменение концентрации женских половых гормонов наблюдается как во время менструального цикла, так и при беременности [Леонова З.А., и др., 2013], можно предположить, что высокий уровень прогестерона, характерный для состояния беременности и ЛГ, характерный для стадии овуляции, повышают готовность мукозальных эпителиоцитов к адгезивным взаимодействиям с кандидами. Это косвенно подтверждается исследованиями, указывающими на увеличении частоты вагинального кандидоза среди беременных женщин [Лебедева О.П.,и др., 2006].

Рис. 10. Среднее значение изменения уровня искусственной колонизации C. albicans при разных режимах обработки буккальных эпителиоцитов гормонами

- обработка гормонами эпителиоцитов до контакта с C. albicans

- обработка гормонами эпителиоцитов в процессе контакта с C. albicans

«+» - увеличение показателя; «?» - снижение показателя

Условные обозначения: ЛГ-лютеинизирующий гормон, ПГ-прогестерон, ФСГ - фолликулостимулирующий гормон, ЭД - эстрадиол, ЭС - эстриол, ТС - тестостерон, ХГЧ - хорионический гонадотропин.

* - достоверность отличий системы «эпителиоциты - C. albicans» относительно эпителиоцитов (р < 0,05)

При этом, отметим, что вагинальный кандидоз не обязательно сопровождается кандидозом полости рта. Это противоречие можно объяснить тем, что микробная колонизация слизистых оболочек является не только результатом контакта между эпителиоцитом и патогеном и патогеном, но также зависит от механизмов клиренса (самоочищения) слизистых оболочек, а также конкуренции C. albicans с облигатными представителями микробиоты данного биотопа [Лебедева О.П.и др., 2006; Лебедева О.П. и др., 2007; Cannon R.D. et all,1999].

3.1.2 Влияние цитокинов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C. albicans

Известно, что цитокины IL-1, IL-6, IL-8, TNF-б относятся к медиаторам, запускающим и поддерживающим воспалительную реакцию [Хаитов Р.М. и др., 2009], тогда как IFN-б и IFN-в образуются при вирусной инфекции, и опосредованно участвуют в подавлении репликации вирусов, а IFN-г обладают иммунорегуляторной активностью [Ярилин А.А.,1999 ,Симбирцев А.С.,2004].

В работе оценивали влияние различных цитокинов IL-1 (IL-1в), IL-6, IL-8, TNF-б, IFN-б на способность буккальных эпителиоцитов взаимодействовать с C.albicans in vitro.

Прединкубация эпителиальных клеток с IFN-б приводила к снижению адгезии в системе в 2,1 ± 0,3 раз (p<0,05). В то же время, обработка эпителиоцитов IL-1, TNF-б, IL-6, IL-8 повышала адгезию C.albicans на буккальных клетках в 1,3 ± 0,1; 2,0 ± 0,2; 1,2± 0,1; 1,8 ± 0,5 раз соответственно по сравнению с контролем (p<0,05) (табл 7, рис.11).

Таблица 7

Влияние цитокинов на адгезивные взаимодействия буккальных эпителиоцитов с C. albicans штамм 601, М ± m

Цитокины	Показатель адгезии (канд/эпит)	Кратность изменения показателя адгезии относительно контроля	Увеличение(^) или снижение (v) адгезии кандид на эпителиоцитах относительно контроля
	интактные эпителиоциты (контроль)	Эпителиоциты, обработанные цитокинами до контакта с C. albicans (эксперимент)
IL-1	6,62 ± 2,0	8,83 ± 2,3 *	1,3 ± 0,1 *	^
IL-6	8,59 ± 2,7	10,24 ± 2,8 *	1,2 ± 0,1 *	^
IL-8	3,21 ± 1,1	5,52 ± 0,8 *	1,8 ± 0,5 *	^
TNF- б	5,04 ± 1,8	10,16 ± 2,2 *	2,0 ± 0,2 *	^
IFN- б	4,83 ± 1,0	2,31 ± 0,3 *	2,1 ± 0,3 *	v

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

Рис.11. Влияние цитокинов на способность буккальных эпителиоцитов адгезировать C. albicans штамм 601; по оси ординат: «+» - увеличение показателя, «?» - снижение показателя.

* - достоверность отличий относительно контроля (р< 0,05)

Проводили дополнительную серию экспериментов под влиянием цитокинов на процесс взаимодействия буккальных эпителиоцитов с C. albicans (табл. 8, рис.12).

Таблица 8

Влияние цитокинов на адгезивные взаимодействия буккальных клеток с C. albicans при разных режимах обработки эпителиоцитов, М ± m

Цитокины	Кратность изменения индекса искусственной колонизации буккальных эпителиоцитов (количество раз)
	Обработка цитокинами эпителиоцитов до контакта с C. albicans (контроль)	Обработка цитокинами эпителиоцитов в процессе контакта с C. albicans
IL-1	1,3 ± 0,1 *	^	1,5 ± 0,1 *	^
IL-6	1,2 ± 0,1 *	^	1,2 ± 0,15	^
IL-8	1,8 ± 0,5 *	^	1,8 ± 0,7	^
TNF-б	2,0 ± 0,2 *	^	1,9 ± 0,2 *	^
IFN-б	2,1 ± 0,3 *	v	2,0 ± 0,8 *	v

* - достоверность отличий относительно небработанных эпителиоцитов (р< 0,05)

^ - увеличение, v - снижение адгезии

Рис.12. Среднее значение изменения уровня искусственной колонизации C. albicans при разных режимах обработки буккальных эпителиоцитов цитокинами; по оси ординат: «+» - увеличение показателя, «?» - снижение показателя.

- обработка цитокинами эпителиоцитов до контакта с C. albicans

- обработка цитокинами эпителиоцитов в процессе контакта с C. albicans

* - достоверность отличий относительно необработанных эпителиоцитов (контроль) (р< 0,05)

Влияние провоспалительных цитокинов IL-1, IL-6, IL-8, TNF-? - в процессе взаимодействия также приводили к увеличению индекса искусственной колонизации, но только действие IL-1 и TNF-? приводило к достоверному увеличению адгезивности клеток (табл.8, рис.12).

Таким образом, цитокины способны влиять на функциональный статус эпителиальных клеток, при этом разные группы цитокинов могут оказывать противоположные эффекты.

Эксперименты показали, что патологические процессы, протекающие на уровне слизистых оболочек и сопровождаемые синтезом большого количества цитокинов [Серебренникова С.Н. и др., 2008], участвующих в развитии воспалительной реакции: IL-1, IL-6, IL-8 и TNF-б - способны увеличивать риск развития кандидоза. В то же время, цитокины обладающие опосредованной противомикробной активностью - IFN-б - снижают возможность контаминации эпителиоцитов C. albicans.

3.1.3 Влияние иммуномодуляторов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C. albicans

Известно, что иммуномодулирующие препараты способны менять функциональную активность клеток. Была проведена оценка способности иммуномодулирующих препаратов различных групп (см. п.1.2.3.): «Деринат», «Имудон», «Иммунал», «Рибомунил», «Гриппферон», «Полиоксидоний», «Ликопид» - влиять на адгезивность буккальных эпителиоцитов в отношении кандид. Для этого, буккальные эпителиоциты обрабатывали растворами иммуномодулирующих препаратов (терапевтическая доза, 30 мин, 37°С), отмывали ЗФР. В контроле вместо иммуномодуляторов использовали ЗФР. Равные объёмы взвеси эпителиоцитов и C. albicans штамм 601 инкубировали 30 мин при 37° С, затем отмывали от неприкрепившихся кандид (см. п.2.5.) Из осадка отмытых эпителиальных клеток готовили мазки. Посчитывали индекс искусственной колонизации C. albicans как среднее количество адгезированных кандид в пересчёте на один эпителиоцит (канд/эп).

Было установлено, что прединкубация буккальных клеток с иммуномодулирующими препаратами: «Деринат», «Имудон», «Иммунал», «Рибомунил», «Гриппферон», «Полиоксидоний» приводила к изменению адгезивности в диапазоне от 1,2 ± 0,2 и до 2,1 ± 0,7 раз (табл.9, рис. 13). Также, было отмечено, что прединкубация буккальных клеток с препаратом «Ликопид» приводила к незначительному снижению адгезивности кандид к эпителиоцитам (p>0,05).

На следующем этапе проводили серию экспериментов влияния иммуномодуляторов на процесс взаимодействия буккальных эпителиоцитов с C. albicans in vitro. Для этого, взвесь эпителиоцитов, кандид и иммуномодулирующих препаратов (в терапевтической дозе) инкубировали совместно (30 мин, 37° С), после чего отмывали ЗФР от неприкрепившихся кандид. В контроле вместно иммуномодуляторов использовали ЗФР. Из отмытых клеток (осадок) готовили мазок, определяли индекс искусственной колонизации (канд/эп.).

Таблица 9

Влияние иммуномодулирующих препаратов на адгезивные взаимодействия буккальных эпителиоцитов с C. albicans штамм 601, М ± m

Группы иммуномодулирующих препаратов	Показатель адгезии (канд/эпит)	Кратность изменения показателя адгезии относи тельно контроля	Увеличение (^) или снижение (v) адгезии кандид на эпителио-цитах относи тельно контроля
	Необрабо танные эпителио циты (контроль)	Эпителио циты, обработан ные до контакта с C. albicans
1. Содержащие бактериальные компоненты (рибосомы, лизаты)
Рибомунил	2,9±1,5	1,9±0,9*	1,7±0,5*	v
Имудон	6,4±2,1	3,1±1,2*	2,1±0,7*	v
2. Растительного происхождения (Echinбcea purpъrea)
Иммунал	8,5±2,5	5,6±1,2*	1,6±0,4*	v
3. На основе нуклеиновых кислот
Деринат	4,5±1,5	3,5±1,7*	1,6±0,4*	v
4. Синтетические препараты
Ликопид	1,9±0,5	1,7±0,6	1,2±0,2	?
Полиоксидоний	4,5±0,5	3,1±0,8*	1,7±0,4*	v
5. Цитокины ( рекомбинантный интерферон)
Гриппферон	5,3±2,1	2,9±1,1*	1,8±0,6*	v

* - достоверность отличий относительно необработанных эпителиоцитов (контроль) (р< 0,05)

Было выявлено, что иммуномодулирующие препараты: «Деринат», «Имудон», «Иммунал», «Рибомунил», «Гриппферон», «Полиоксидоний», также влияли на процесс взаимодействия и приводили к снижению уровня искусственной колонизации эпителиоцитов в диапазоне 1,2 до 2,1 раз по сравнению с контролем (рис.14, табл. 10).

Рис.13. Влияние иммуномодулирующих препаратов на способность буккальных эпителиоцитов адгезировать C. albicans

* - достоверность отличий относительно необработанных эпителиоцитов (контроль) (р< 0,05)

Рис.14. Среднее значение изменение уровня искусственной колонизции C. albicans при разных режимах обработки буккальных эпителиоцитов иммуномодулирующими препаратами.

- обработка иммуномодулирующими препаратами эпителиоцитов до контакта с C. albicans

- обработка иммуномодулирующими препаратами эпителиоцитов в процессе контакта с C. albicans

* - достоверность отличий относительно интактных эпителиоцитов (р < 0,05)

** - достоверность отличий относительно эпителиоцитов, обработанных до контакта с C. albicans (р < 0,05)

Таблица 10

Влияние иммуномодулирующих препаратов на процесс взаимодействия буккальных эпителиоцитов и C. albicans штамм 601, М ± m

Группы иммуномодулирующих препаратов	Показатель адгезии (канд/эпит)	Кратность снижения индекса искусственной колониза ции (кол-во раз)	Увеличение (^) или снижение (v) адгезии кандид на эпителио-цитах относи тельно контроля
	Необработанные эпителиоци ты(контроль)	Эпителио циты, обработанные во время контакта с C. albicans (экспери мент)
1. Содержащие бактериальные компоненты (рибосомы, лизаты)
Рибомунил	4,3±0,4	2,2±0,3*	2,1±0,3*	v
Имудон	2,9±1,1	1,8±0,4*	1,9±0,5*	v
2. Растительного происхождения (Echinбcea purpъrea)
Иммунал	6,1±1,2	3,4±1,1*	1,7±0,9*	v
3. На основе нуклеиновых кислот
Деринат	4,5±0,5	3,4±0,5*	1,5±0,3*	v
4. Синтетические препараты
Ликопид	1,5±0,5	1,4±0,6	1,2±0,3	?
Полиоксидоний	2,3±0,5	2,1±0,4*	1,6±0,8*	v
5. Цитокины (рекомбинантный интерферон)
Гриппферон	7,5±1,2	3,7±1,1*	2,0±0,8*	v

* - достоверность отличий относительно необработанных эпителиоцитов (контроль) (р< 0,05).

Исключением, как и в предыдущем случае, представлял препарат «Ликопид», который гораздо слабее снижал адгезивную способность эпителиоцитов в системах с C. albicans.

Таким образом, вещества с иммуномодулирующим эффектом снижают восприимчивость эпителиоцитов к кандидам и этот эффект наблюдается при их добавление в тест-систему как до, так и во время взаимодействия эпителиальных клеток с C. albicans. Отметим, что препарат «Рибомунил», дополнительно снижал адгезивность эпителиоцитов к кандидам, если был добавлен во время взаимодействия буккальных клеток с C. albicans.

Таким образом, все исследованные иммуномодулирющие препараты, через регуляцию адгезивности эпителиоцитов позволяют снижать риск контаминации эпителия слизистых оболочек (ротовая полость) представителями условно-патогенной микрофлоры, такими как кандиды.

3.1.4 Влияние антисептических препаратов на адгезивные реакции эпителиоцитов в системах с C. albicans

Эпителиоциты предварительно инкубировали с препаратами «Ксидифон», «Лизобакт», затем инкубировали с C.albicans (30 мин, 37°С). В отдельной группе экспериментов изучали влияние антисептических препаратов на сам процесс адгезии, для чего «Ксидифон», и «Лизобакт» смешивали с буккальными эпителиоцитами и взвесью C.albicans, а затем инкубировали (30 мин, 37°С). В контроле вместо препаратов использовали ЗФР. Эпителиоциты отмывали от несвязавшихся кандид, из осадка клеток готовили мазки. Посчитывали индекс искусственной колонизации C. albicans (канд/эп) (см. п.2.5). Результаты представлены в табл. 11.

Таблица 11

Влияние антисептических препаратов на адгезивные взаимодействия буккальных эпителиоцитов с C. albicans штамм 601, М ± m

Исследуемые антисептические препараты	Обработка препаратами эпителиоцитов до контакта с C. albicans	Обработка препаратами эпителиоцитов в процессе контакта с C. albicans
	Кратность снижения индекса искусственной колонизации (количество раз)	Снижение (v) адгезивности эпителиоцитов	Кратность снижения индекса искусствен-ной колонизации (количество раз)	Снижение (v) адгезивности эпителиоцитов
Ксидифон	1,4 ± 0,2*	v	1,5 ± 0,3*	v
Лизобакт	1,4 ± 0,3*	v	1,3 ± 0,1*	v

* - достоверность отличий относительно необработанных эпителиоцитов (р< 0,05)



Рис.15 Кратность снижения уровня искусственной колонизации C. albicans при разных режимах обработки буккальных эпителиоцитов антисептическими препаратами «Лизобакт» и «Ксидифон»

* - достоверность отличий относительно необработанных эпителиоцитов (р< 0,05)

Обработка препаратами «Ксидифон» и «Лизобакт» буккальных эпителиоцитов приводили к снижению уровня искусственной колонизации эпителиоцитов в: 1,4 ± 0,2 и 1,4 ± 0,3 соответственно (р<0,05) (табл. 11 рис.15).

Та же закономерность наблюдалась и при добавлении антисептиков в процессе контакта эпителиоцитов с кандидами: «Ксидифон» снижал уровень искусственной колонизации в 1,5 ± 0,3 раз, а «Лизобакт» в 1,3 ± 0,1 раз соответственно (р<0,05) (табл. 11 рис.15).

3.1.5. Влияние микробных метаболитов на адгезивность эпителиоцитов в системах с C. albicans

Были проведены эксперименты с микробными метаболитами, полученными от Candida albicans штамм 601, Enterococccus faeсium штамм 179/2, Staphylococcus aureus штамм 5983, Escherichia coli штамм 205 с целью установления их влияния на способности эпителиоцитов адгезировать микробные клетки, такие как C. albicans.

Метаболические продукты S. aureus и E. faecium не изменяли уровень искусственной колонизации кандид на эпителиоцитах: результаты адгезии были приблизительно одинаковы в контроле и опыте: 11,3 ± 0,75 / 10,6 ± 0,99 и 4,86 ± 2,32 / 5,85 ± 2,06 соответственно (р < 0,05) (табл.12. рис.16).

Таблица 12

Влияние микробных метаболитов на адгезивные взаимодействия буккальных эпителиоцитов с C. albicans штамм 601, М ± m

Цитокины	Показатель адгезии (канд/эп)	Кратность увеличения показателя адгезии относительно контроля ( кол-во раз)
	интактные эпителиоциты (контроль)	Эпителиоциты, обработанные микробными метаболитами (эксперимент)
C. albicans 601	8,04 ± 3,04	10,52 ± 2,78 *	1,43 ± 0,22 * ^
E. faecium 179/2	4,86 ± 2,32	5,85 ± 2,06	1,12 ± 0,31 ^
S. aureus 5983	11,3 ± 0,75	10,6 ± 0,99	1,07 ± 0,30 ^
E.col...

Подобные документы

• Мукозный иммунитет

  Концепция иммунитета слизистых оболочек. Групповые лимфоидные фолликулы, червеподобный отросток. Небные миндалины, лимфоидные клетки слизистых оболочек. Регуляция процесса переключения классов. Иммунный ответ в слизистых оболочках, мукозные вакцины.
  
  курсовая работа [7,9 M], добавлен 19.10.2010
  

• Функционирование нервной системы пиявки

  Сенсорные и моторные клетки в ганглиях пиявки. Взаимодействие чувствительных и двигательных нейронов. Мембранный потенциал, пресинаптическое ингибирование и освобождение медиатора. Повторная активность и блок проведения сигнала, высшие уровни интеграции.
  
  реферат [15,2 K], добавлен 26.10.2009
  

• Теломеры. Теломеразная активность

  Понятие и функциональные особенности теломер как районов хромосомы, локализованных на ее конце. История их открытия и исследования, современные достижения в данной области. Теломеразная активность и определение основных факторов, влияющих на нее.
  
  презентация [641,8 K], добавлен 25.03.2016
  

• Биологическая активность кремнийорганических соединений

  Роль кремния и кремнийорганических соединений для живых организмов. Особенности функционирования кремнийсодержащих препаратов. Инсектицидное и инсекторепеллентное действие. Регулирование роста растений. Фунгистатическая и бактериостатическая активность.
  
  курсовая работа [272,4 K], добавлен 13.12.2014
  

• Суточная активность рыб

  Индивидуальная активность рыб. Промысел плотвы на водоемах. Старомаинский залив как место массового размножения и нагула рыб. Лимитирующие факторы численности густеры. Ерш как небольшая, медленно растущая рыба наших рек. Использование леща в реках.
  
  курсовая работа [24,7 K], добавлен 25.01.2010
  

• Морфология и гормональная активность половых желез

  Эндокринная система человека. Железы внешней и внутренней секреции. Свойства гормонов. Гипофиз как важнейшая железа эндокринного аппарата. Гормоны щитовидной железы. Морфология женских и мужских половых желез. Гормональная активность половых желез.
  
  курсовая работа [33,7 K], добавлен 16.06.2012
  

• Исследование уровня цитокинов у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями

  Клетки-продуценты цитокинов. Рецепторы цитокинов и механизм действия цитокинов на клетку. Классификация цитокинов по механизму действия. Гнойно-воспалительные заболевания: фурункулез и остеомиелит. Определение уровня гамма-интерферона в сыворотке крови.
  
  дипломная работа [712,1 K], добавлен 15.12.2008
  

• Цитокины. Определение. Основные характеристики. Роль цитокинов в индукции и регуляции иммунного ответа

  Определение цитокинов, их свойства, функции, особенности, виды. Регуляторная роль цитокинов в организме. Механизм действия на клетки. Образование "микроэндокринной системы" (взаимодействие клеток иммунной, кроветворной, нервной и эндокринной систем).
  
  презентация [1,9 M], добавлен 18.09.2016
  

• Биохимическое значение резорцинольных липидов в проявлениях жизнедеятельности прокариот и эукариот

  Взаимодействие липидов с биологическими мембранами и модельными бислоями. Подавление бактериального, грибкового, протозойного и паразитарного роста. Влияние на процесс окисления, на структуру и активность белка, взаимодействие с ДНК, цитотоксичность.
  
  реферат [33,6 K], добавлен 19.05.2017
  

• Влияние пирроксана на активность карбоксипептидазы н и фмфс-ингибируемой карбоксипептидазы в нервной ткани крыс

  Изучение влияния пирроксана на активность основных карбоксипептидаз в нервной ткани крыс позволило выяснить, что так как при воздействии активность КПН и ФМСФ-КП изменяется однонаправлено, то оба фермента обладают сходной биологической функцией.
  
  курсовая работа [64,5 K], добавлен 15.12.2008
  

• Встречаемость и морфометрические показатели в прыткой ящерицы в окрестностях г. Гомеля

  Морфометрические особенности, распространение и плотность населения прыткой ящерицы. Значение и охрана пресмыкающихся. Встречаемость прыткой ящерицы на изучаемых участках. Суточная активность прыткой ящерицы. Изменчивость характеристик жизненного цикла.
  
  курсовая работа [2,6 M], добавлен 30.10.2013
  

• Теломеры. Теломеразная активность

  Изучение тонкой структуры теломер и механизма действия теломераз. Образование теломерной ДНК. Разработка методов избирательного подавления теломеразной активности в раковых опухолях. Поиск новых средств борьбы со злокачественными заболеваниями.
  
  презентация [741,6 K], добавлен 29.05.2013
  

• Биология фермантов

  Катализ и энергия активации. Кофакторы ферментов и неорганические ионы, их разновидности и свойства. Скорость ферментных реакций и основные факторы, влияющие на нее. Ингибирование ферментов, его этапы и закономерности, биологическое обоснование.
  
  реферат [602,0 K], добавлен 27.02.2017
  

• 15 возможных вариантов конца света

  Высокая солнечная активность. Столкновение астероидов с Землей. Пространство "ложный вакуум". "Вытекание" времени из Вселенной. Извержение вулкана Ла-Пальма на Канарских островах. Смена магнитных полюсов. Пучок высокоэнергетического гамма-излучения.
  
  презентация [4,9 M], добавлен 29.11.2016
  

• Теломеры. Теломеразная активность

  Открытие и исследование теломер - специализированных ДНК-белковых структур, их функции. Связь длины теломерных районов хромосом и активности теломеразы с процессами старения и злокачественного роста. Основное назначение теломеразы, принцип работы.
  
  презентация [649,0 K], добавлен 08.12.2014
  

• Активность основных карбоксипептидаз при действии нейролептиков

  Рассмотрение острого введения диазепама и галоперидола на активность карбоксипептидазы Н, фенилметилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы и карбоксипептидазы М в головном мозге, надпочечниках и семенниках крыс через различные промежутки времени.
  
  диссертация [647,7 K], добавлен 15.12.2008
  

• Цитокины. Общее описание

  Понятие и внутренняя структура цитокинов как важного элемента при взаимодействии разных лимфоцитов между собой и с фагоцитами. Оценка их биологической роли, характеристика и значение в организме. Варианты проявления действия цитокинов, иммунный ответ.
  
  презентация [168,9 K], добавлен 22.10.2015
  

• Изучение антиоксидантной активности растений

  Антиоксидантная активность растительных материалов. Описание растений, обладающих антиоксидантной активностью. Определение содержания витамина С в калине обыкновенной в период созревания, содержания полифенольных соединений в различных сортах чая.
  
  дипломная работа [309,8 K], добавлен 02.04.2009
  

• Здоровый образ жизни

  Стиль жизни, способствующий хорошему здоровью и долголетию. Элементы здорового образа жизни: оптимальный режим труда и отдыха, правильное питание, двигательная активность, личная гигиена, закаливание, отказ от вредных привычек, эмоциональное состояние.
  
  презентация [75,1 K], добавлен 30.11.2014
  

• Кортикостероиды

  Биохимическое исследование кортикостероидов как подкласса стероидных гормонов, производимых исключительной корой надпочечников. Химическое строение и минералокортикоидная активность кортикостероидов. Анализ биологической роли и биосинтез кортикостероидов.
  
  реферат [491,8 K], добавлен 16.04.2011
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам