Проведение лабораторных биохимических исследований

4. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

5. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



4 день. Исследование белкового обмена

1. Определение общего белка в сыворотке и плазме крови, моче и ликворе

1. Определение общего белка в сыворотке и плазме крови

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Белок образует окрашенный комплекс с ионами меди в щелочной среде. Интенсивность окраски при длине волны 540 нм прямо пропорциональна концентрации общего белка в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Сыворотка или плазма крови без следов гемолиза.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - БИУРЕТОВЫЙ РЕАГЕНТ

натр едкий-0,5 моль/л

калий-натрий виннокислый-80 ммоль/л

калий йодистый-75 ммоль/л

сульфат меди-30 ммоль/л

КАЛИБРАТОР

альбумин сывороточный-70 г/л

натрий хлористый-154 ммоль/л.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА: Содержимое флакона №1 (или аликвоту) развести бидистиллированной водой в 5 раз (например, 10 мл реагента №1 + 40 мл бидистиллированной воды). Рабочий реагент стабилен 6 месяцев при температуре хранения 18-25°С. Хранить в плотно закрытой посуде в темноте.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Внести в пробирки

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,1 мл-

Рабочий реагент 5,0 мл 5,0 мл 5,0 мл

Калибратор -0,1 мл 0,5 мл

Бидистилированная вода- -0,1 мл

Пробы перемешать и инкубировать 30 мин при 18-25 °С. Фотометрировать.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации общего белка (С): С = Еоп/Екал х 70 [г/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

70 г/л - концентрация общего белка в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ: 65-85 г/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня общего белка в крови: Острая и хроническая инфекция (включая туберкулез), нарушение функции коры надпочечников, аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, системная красная волчанка, склеродермия), аллергические состояния, потеря жидкости (диабетический ацидоз, хронический понос и др.), дыхательная недостаточность, разрушение эритроцитов, активный хронический гепатит.

Причины понижения уровня общего белка в крови: Задержка жидкости в связи с нарушением функции почек или ослаблением работы сердца, недостаточность поступления белка в организм или нарушение усвоения пищи в желудочно-кишечном тракте (вследствие голодания, недоедания, сужения пищевода, заболеваний кишечника воспалительного характера), снижение синтеза белка в печени (из-за гепатита, цирроза/атрофии печени, интоксикации), врождённые нарушения синтеза отдельных белков крови, повышенный распад белка (как результат злокачественных новообразований, гиперфункции щитовидной железы, послеоперационного состояния, длительной лихорадки, травмы, долгого лечения гормональными противовоспалительными препаратами), чрезмерная потеря белка при заболеваниях почек, сахарном диабете, кровотечениях.

2. Определение общего белка в моче и ликворе

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Белок образует окрашенный комплекс с красителем бромфеноловым синим в кислой среде.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Моча и ликвор.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - БУФЕР, рН 3,0

лимонная кислота-320 ммоль/л

фосфат натрия-160 ммоль/л

РЕАГЕНТ №2 - ХРОМОГЕН

бромфеноловый синий-120 мг/100 мл

КАЛИБРАТОР

альбумин сывороточный-0,25 г/л

натрий хлористый-154 ммоль/л.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА:

Смешать необходимые количества реагента №1 и реагента №2 в соотношении 23+2. Рабочий реагент стабилен 30 дней при температуре хранения 18-25 °С. Хранить в плотно закрытой посуде в темноте.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,5 мл--

Рабочий реагент 2,5 мл 2,5 мл 2,5 мл

Калибратор-0,5 мл-

Дидистилированная вода--0,5 мл

Пробы перемешать и инкубировать 30 мин при 18-25 °С. Фотометрировать.

Длина волны: 620 нм (610-630 нм).

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации общего белка (С): С = Еоп/Екал х 0,25 [г/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы, Екал -оптическая плотность калибровочной пробы, 0,25 г/л - концентрация белка в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Моча: до 0,24 г/л, ликвор: до 0,40 г/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня общего белка в моче:

1. Заболевания почек:

первичные заболевания почек: пиелонефрит, синдром Фанкони, острый тубулоинтерстициальный нефрит;

поражения почек при системных заболеваниях: сахарном диабете, артериальной гипертензии, системных заболеваниях соединительной ткани, амилоидозе, злокачественных новообразованиях (легких, желудочно-кишечного тракта, крови), серповидно-клеточной анемии и др.;

поражение почек при лечении нефротоксическими препаратами;

поражение почек при отравлении солями свинца и ртути;

почечно-клеточная карцинома.

2. Увеличение образования и фильтрации белка в организме (протеинурия "переполнения").

3. Транзиторная (доброкачественная) протеинурия: дегидратация, стресс, диета с высоким содержанием белка, значительная физическая нагрузка, лихорадка; ортостатическая протеинурия.

4. Другие причины: застойная сердечная недостаточность, подострый инфекционный эндокардит; гипертиреоз; заболевания центральной нервной системы; рак мочевого пузыря; кишечная непроходимость; травма и другие.

Понижение уровня общего белка в моче не является диагностически значимым.

Причины повышения общего белка в ликворе:

Абсцесс головного мозга;

Злокачественная опухоль головного мозга;

Опухоль спинного мозга;

Диабетическая невропатия;

Синдром Фройна;

Отравление тяжелыми металлами;

Черепно-мозговая травма;

Кровоизлияние (внутримозговое, субарахноидальное);

Вирусный менингит;

Туберкулезный менингит;

Системная красная волчанка;

Тромбоз сосудов головного мозга;

Употребление алкоголя;

Применение изопропанола и фенитоина

Причины понижения:

Успешное лечение заболевания;

Водная интоксикация;

Хроническая ликворея;

Некоторые случаи идиопатической внутричерепной гипертензии;

Возраст 6 месяцев - 2 года.

3. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

3. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

4. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

5. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



5 день. Исследование белкового обмена

1. Определение альбумина

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Альбумин образует окрашенный комплекс с бромкрезоловым зеленым (БКЗ) в слабокислой среде в присутствии детергента.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Сыворотка или плазма крови без следов гемолиза.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОНОРЕАГЕНТ

ацетатный буфер, рН 4,2-50,0 ммоль/л

БКЗ-0,10 ммоль/л

детергент

КАЛИБРАТОР

альбумин сывороточный-60,0 г/л

натрий хлористый-154,0 ммоль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,01 мл -

Дистиллированная вода-0,01 мл

Реагент №1 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Калибратор-0,01 мл-

Пробы перемешать, инкубировать 5 мин при 18-25 °С или

при 37°С.

Фотометрировать при длине волны: 590 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации альбумина (С): С = Еоп/Екал х 60 [г/л]; где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы;

60 г/л - концентрация альбумина в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ 35-50 г/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины снижения уровня альбумина:

Заболевания почек (нефротический синдром).

Белково-синтетическая недостаточность при тяжелом поражении печени: (цирроз, терминальные стадии гепатита).

Ожоги.

Обширные травмы мягких тканей.

Сепсис.

Онкологические заболевания.

Тиреотоксикоз.

Ревматические заболевания.

Сниженный синтез альбумина в печени вследствие недостаточного поступления белков с пищей (голодания, нарушения всасывания), хронических заболеваний печени, длительного лечения кортикостероидами.

Повышенная потеря альбумина (при заболеваниях почек, ожогах, экссудативных выпотах, кровотечениях, сахарном диабете, асците).

Гипергидратация.

Беременность.

Причины повышения уровня альбумина:

Обезвоживание (дегидратация).

2. Определение белковых фракций

1. Метод электрофоретического разделения на пленках целлюлозы:

Принцип метода: коллоидные частицы белка перемещаются в электрическом поле постоянного тока: в щелочной среде - к аноду, в кислой среде - к катоду. В щелочной среде в электрическом поле наиболее быстро перемещаются альбумины, затем б1-глобулины, б2-глобулины и г-глобулины.

Реактивы:

1. 5,5 Диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль (мединал).

2. Лимонная кислота.

3. Барбитал- цитратный буфер рН 8,6: 7,36 г диэтилбарбитурата натрия, 0,3 г лимонной кислоты растворяют в 700 мл воды в мерной колбе вместимостью 1 л, проверяют рН и доводят водой до метки.

4. Бромфеноловый синий водорастворимый, индикатор.

5. Уксусная кислота ледяная.

6. Трихлоруксусная кислота (5%-ный раствор).

7. Раствор для окрашивания: 0,5 г бромфенолого синего и 20 мл ледяной уксусной кислоте довести до 1 литра водой. 8. Отмывающий раствор - уксусная кислота, (5%-ный раствор).

Ход определения:

Смочить пленки из ацетата целлюлозы буферным раствором 5 минут. Удалить избыток влаги. Фильтровальной бумагой. Поместить пленки в камеру, закрыть камеру крышкой и пропустить ток напряжением 150В в течение 5 минут, после чего выключают ток. Нанести 1-4 мкл сыворотки крови узкой полосой на катодный край пленки. Провести электрофоретическое разделение сыворотки крови при напряжении 150 В и силе тока 1 мА на 1 см поперечного сечения полоски в течение 20 минут. Затем достать пленки, высушить в течение 5-10 минут в сушильном шкафу при температуре 100°С в течение 10 минут. Окрашивание проводят красителем в течение 15 минут. Избыток красителя отмывают 5%-ным раствором уксусной кислоты до исчезновения фона. Нормальные величины у взрослых:

альбумины - 58%,

б1-глобулины - 3,9%,

б2-глобулины - 8,8%,

в-глобулины - 13,0%,

г-глобулины - 18,5%.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Причины повышения фракции альбумина: беременность; дегидратация; алкоголизм.

Причины понижения фракции альбумина: острая ревматическая лихорадка; острый холецистит; сахарный диабет; воспалительные и опухолевые заболевания ЖКТ; лейкоз; хроническая сердечная недостаточность; остеомиелит; язвенная болезнь; пневмония; системная красная волчанка.

Причины повышения фракции альфа-1-глобулина: острые или хронические воспалительные заболевания; цирроз печени;язвенная болезнь; беременность; стресс; прием пероральных контрацептивов.

Причины понижения фракции альфа-1-глобулина: недостаточность альфа-1-антитрипсина; острый вирусный гепатит.

Причины повышения фракции альфа-2-глобулина: острая ревматическая лихорадка; хронический гломерулонефрит; цирроз печени; сахарный диабет; пожилой и младенческий возраст; остеомиелит; язвенная болезнь; пневмония; стресс; системная красная волчанка.

Причины понижения фракции альфа-2-глобулина: острый вирусный гепатит; гипогаптоглобинемия; гипертиреоз.

Причины повышения фракции бета-глобулина: острые воспалительные заболевания; сахарный диабет; гломерулонефрит; железодефицитная анемия; подпеченочная желтуха; нефротический синдром; беременность; прием пероральных контрацептивов.

Причины понижения фракции бета-глобулина: аутоиммунные заболевания; лейкоз; лимфома; нефротический синдром; системная красная волчанка; цирроз печени; неспецифический язвенный колит.

Причины повышения фракции гамма-глобулина: амилоидоз;цирроз печени; хронический лимфолейкоз; множественная миелома; ревматоидный артрит; системная красная волчанка.

Причины понижения фракции гамма-глобулина: острый вирусный гепатит; гломерулонефрит; лейкоз; лимфома; нефротический синдром; неспецифический язвенный колит.

3. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

4. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

5. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1. Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

6. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



6 день. Исследование белкового обмена

1. Проведение тимоловой пробы

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Сывороточные бета-глобулины, гама-глобулины и липопротеины осаждаются при pH 7,55 тимоловым реактивом. В зависимости от количества и взаимного соотношения отдельных белковых фракций при реакции возникает помутнее, интенсивность которого измеряют турбидиметрически.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ:

Сыворотка крови.

РЕАКТИВЫ:

1. Тимол, 10%-ный спиртовый раствор: 10 г очищенного тимола растворяют в 96%-ном этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл.

2. 5,5 Диэтилбарбитуровая кислота (веронал).

3. Мединал (диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль). 4. Буферный раствор: 2,76 г веронала и 2,06 г мединала растворяют и доводят до 1 л водой.

5. Тимоло-вероналовый буфер рН 7,55-7,6: в мерной колбе на 100 мл смешивают 80 мл буферного раствора и 1 мл 10%-ного спиртового раствора тимола, встряхивают и доливают буферным раствором до метки.

6. Бария хлорид.

7. Калибровочный раствор - суспензия сульфата бария: 3 мл раствора хлорида бария (1,175 г хлорида бария растворяют и доводят до 100 мл водой) наливают в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки 0,1 моль/л раствором серной кислоты.

8. Материал для исследования: сыворотка свободная от гемолиза.

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ:

К 6 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,1 мл сыворотки, оставляют на 30 минут и затем измеряют оптическую плотность при длине волны 630-690 нм против тимолово-вероналового буфера в кюветах с толщиной 1 см. Реакцию проводят при комнатной температуре. Расчет ведут по калибровочному графику. Построение калибровочного графика: из калибровочного раствора сульфата бария (суспензия) готовят разведения, соответствующие единицам помутнения. Калибровочные растворы хорошо встряхивают и при длине волны 630- 690 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см против воды измеряют.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ: 0-4 ед.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Существует 5 фракций:

- альбумины

- б1 глобулины

- б2 глобулины

- в глобулины

- г глобулины.

Снижение альбуминов:

- снижение функции печени;

- недостаточное питание;

- нарушение всасывания белков в кишечнике.

Повышение содержания глобулинов:

- заболевания печени;

- острые и хронические инфекции;

- опухолевые процессы.

2. Определение С-реактивного белка

ПРИНЦИП МЕТОДА

При смешивании латекса, сенсибилизированного антителами к СРБ человека, с образцом сыворотки крови наблюдается видимая агглютинация, если в образце присутствует СРБ.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка крови.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - СРБ-латекс Полистирольный латекс, покрытый антителами к СРБ, в фосфатносолевом буферном растворе.

Азид натрия-0,95 г/л

РЕАГЕНТ №2 - РАЗБАВИТЕЛЬ

Хлорид натрия-9 г/л

КОНТРОЛЬ (+) Положительный контроль

Сыворотка крови человека с содержанием СРБ > 15 мг/л

Азид натрия-0,95 г/л

КОНТРОЛЬ (-) отрицательный контроль

Сыворотка крови с содержанием СРБ < 1 мг/л

Азид натрия-0,95 г/л

ТЕСТ-ПЛАСТИНЫ

ОДНОРАЗОВЫЕ МЕШАЛКИ.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

I. Качественный тест:

1. Доведите реагенты и образцы до комнатной температуры (Примечание 2).

2. Осторожно перемешайте содержимое флакона с Реагентом №1, переворачивая закрытый флакон несколько раз.

3. Нанесите 1 каплю (20 мкл) анализируемой сыворотки на один из черных кругов на пластине. Внесите по 1 капле (20 мкл) положительного и отрицательного контролей в 2 других круга.

4. Добавьте по 1 капле (20 мкл) Реагента №1 в каждый круг рядом с каплей тестируемого материала.

5. Перемешайте содержимое каждого круга отдельной мешалкой, распределяя жидкость по всей поверхности круга внутри кольца. Перемешивайте каждую пробу чистым сухим концом мешалки.

6. Вращайте слайд равномерными круговыми движениями в течение 2 минут (Примечание 2).

7. Немедленно считывайте результат реакции агглютинации при достаточном освещении.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Отрицательная реакция: Однородная суспензия без видимой агглютинации, как с отрицательным контролем. Положительная реакция: Любая видимая степень агглютинации.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Концентрация С-реактивного белка в сыворотке крови взрослых здоровых людей обычно ниже 5 мг/л. При некоторых заболеваниях значения повышаются в течение 4-8 часов и в острых случаях достигают 500 мг/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня С-реактивного белка: острые вирусные и бактериальные инфекции; аутоиммунные заболевания; обострение хронических воспалительных (инфекционных и аутоиммунных) заболеваний; очаговые инфекции (например, хронический тонзиллит); повреждение тканей (травма, хирургическое вмешательство, острый инфаркт миокарда, острое нарушение мозгового кровообращения, острый панкреатит, панкреонекроз); воспалительные заболевания органов малого таза; злокачественные новообразования и метастазы; миеломная болезнь; туберкулез; ожоги; сепсис; перитонит; артериальная гипертензия, атеросклероз, сахарный диабет, избыточная масса тела (небольшое увеличение); нарушение гормонального фона (повышение содержания эстрогенов и прогестерона).

3. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

4. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

5. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

6. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



7 день. Исследование обмена небелковых азотсодержащих соединений

1. Определение мочевины

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Мочевина под действием уреазы гидролизуется с образованием карбоната аммония. Ионы аммония реагируют в присутствии нитропруссида с фенолом и гипохлоритом, образуя окрашенный комплекс. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевины в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка (плазма) крови без следов гемолиза, суточная моча. Перед проведением анализа развести мочу дистиллированной водой в 100 раз.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - РАСТВОР УРЕАЗЫ

уреаза -10 U/мл

фосфатный буфер, рН 7,0-50 ммоль/л

стабилизаторы

КАЛИБРАТОР Мочевина-5 ммоль/л (30 мг/100 мл)

РЕАГЕНТ №3 - фенол/нитропруссидный реагент

Фенол-106 ммоль/л

нитропруссид натрия-0,17 ммоль/л

РЕАГЕНТ №4 - ГИПОХЛОРИТ

гипохлорит натрия-11 ммоль/л

натрий едкий-125 ммоль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

1. Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,01 мл

Реагент №10,1 мл 0,1 мл 0,1 мл

Калибратор-0,01 мл-

Дистиллированная вода--0,01 мл

Пробы тщательно перемешать и инкубировать 5-10 мин при температуре 20-25°С.

2. Добавить в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Реагент №31 мл1 мл1 мл, Реагент №41 мл1 мл1 мл

Инкубировать 15 мин при 37 °С на водяной бане. Пробы охладить, перемешать. Фотометрировать при длине волны 540 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации мочевины (С).

В сыворотке (плазме): С = Еоп 1/Екал х 5 [ммоль/л], где: Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

5 ммоль/л - концентрация мочевины в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

- в сыворотке крови: 2,50-8,32 ммоль/л

- в моче-333-583 ммоль/сут.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня мочевины в крови: снижение функции почек, вызванное застойной сердечной недостаточностью, потерей солей и жидкости, шоком в сочетании с чрезмерным катаболизмом белка (желудочно-кишечное кровотечение, острый инфаркт миокарда, стресс, ожоги), хроническое заболевание почек (пиелонефрит, гломерулонефрит, амилоидоз, туберкулез почек и др.), кровотечение из верхних отделов ЖКТ (язвенная болезнь желудка, двенадцатиперстной кишки, рак желудка, двенадцатиперстной кишки и др.), повышенный катаболизм белка при онкологических заболеваниях, прием кортикостероидов, нефротоксичных лекарственных препаратов, тетрациклинов, избыток тироксина, питание с высоким содержанием белков (мяса, рыбы, яиц, сыра, творога).

Причины понижения уровня мочевины в крови: печеночная недостаточность, некоторые заболевания печени: гепатит, цирроз, острая гепатодистрофия, опухоли печени, печеночная кома, отравления гепатотоксичными ядами, передозировки лекарственных средств (при этом нарушается синтез мочевины), акромегалия (гормональное заболевание, характеризующееся повышенной выработкой соматотропного гормона), голодание, низкобелковая диета, нефротический синдром (повышенное выделение белка с мочой, гиперлипидемия, снижение уровня белка в крови), повышенная выработка антидиуретического гормона (АДГ) и, как следствие, патологическая гиперволемия, беременность (повышенный синтез белка и увеличение почечной фильтрации вызывают снижение количества мочевины у беременных женщин).

Причины повышения уровня мочевины в суточной моче: употребление в пищу больших количеств белка; повышенная физическая нагрузка; послеоперационный период; лихорадочные состояния; гиперфункция щитовидной железы; злокачественная анемия.

Причины понижения уровня мочевины в суточной моче: низкое содержание белков в пищевом рационе; беременность; нарушение процессов всасывания в тонком кишечнике (синдром мальабсорбции); массивные кровотечения, шок, дегидратация, ожоги, сердечная недостаточность, кишечная непроходимость; снижение выделительной функции почек при их заболеваниях (пиелонефрите, гломерулонефрите, амилоидозе, туберкулезе); острая или хроническая почечная недостаточность любого происхождения; врождённая недостаточность или отсутствие ферментов, участвующих в синтезе мочевины.

2. Определение мочевой кислоты

ПРИНЦИП МЕТОДА: Содержащаяся в пробе мочевая кислота окисляется под действием фермента уриказы с образованием перекиси водорода. В присутствии пероксидазы перекись водорода окисляет хромогены с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Сыворотка или плазма крови, суточная моча. Перед проведением анализа развести мочу физиологическим раствором в 10 раз.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - БУФЕР

Фосфат-150 ммоль/л

3,5-дихлоро-2-фенолсульфонат (ДХФС)-2,5 ммоль/л

детергенты

РЕАГЕНТ №2 - ЛИОФИЛИЗАТ концентрация в рабочем реагенте

Уриказа-300 U/л

Аскорбатоксидаза-250 U/л

Пероксидаза-250 U/л

4-аминоантипирин (ААП)-0,25 ммоль/л

КАЛИБРАТОР: мочевая кислота-357 мкмоль/л (6 мг/100 мл)

альбумин-50 г/л,

стабилизаторы.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА:

Растворить содержимое одного флакона №2 в 50 мл реагента №1. Для получения оптимальных результатов рекомендуется выдержать рабочий реагент после полного растворения лиофилизата при комнатной температуре 5-10 минут. Рабочий реагент стабилен 30 дней при температуре хранения 2-8°С.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

1. Внести в пробирки:

Опытная пробаКалибровочная пробаХолостая проба

Образец0,05 мл--

Рабочий реагент2,0 мл2,0 мл2,0 мл

Калибратор-0,05 мл-

Пробы перемешать и инкубировать 7 мин при 18-25°С или 5 мин при 37°С. Фотометрировать при длине волны 520 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации мочевой кислоты (С).

В сыворотке (плазме): С = Еоп /Екал х 357 [мкмоль/л], где: Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - адсорбция калибровочной пробы,

357 мкмоль/л-концентрация мочевой кислоты в калибраторе.

В суточной моче: С = Еоп /Екал х 3,57 х К [ммоль/сутки], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

3,57 ммоль/л- концентрация мочевой кислоты в калибраторе с учетом разведения пробы,

К - количество суточной мочи, л.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

В сыворотке крови:

Мужчины: 202-416 мкмоль/л

Женщины: 142-339 мкмоль/л.

В моче: 1,49-4,46 ммоль/сутки.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышенного уровня мочевой кислоты - злокачественные новообразования с метастазами, множественная миелома, лейкоз - почти все онкологические заболевания характеризуются бесконтрольным ростом и делением клеток, лучевая и химиотерапия неопластических процессов в организме, хроническая почечная недостаточность.

Другие, менее распространенные, причины повышения уровня мочевой кислоты: острая сердечная недостаточность, гемолитическая и серповидно-клеточная анемия, обострение псориаза, отравление свинцом, синдром Дауна, синдром Леша-Нихена.

Причины пониженного уровня мочевой кислоты: заболевания печени (нарушения процесса метаболизма мочевой кислоты из-за недостатка или снижения активности ферментов), синдром Фанкони (снижение канальцевой реабсорбции мочевой кислоты из-за дефекта развития канальцев почек), токсикоз, алкоголизм, болезнь Вильсона-Коновалова, синдром патологической секреции антидиуретического гормона.

Причины повышенной концентрации мочевой кислоты в моче: употребление большого количества пищи, богатой пуриновыми основаниями (мяса, в особенности субпродуктов), подагра (повышенное образование либо недостаточное выведение мочевой кислоты), мочекаменная болезнь, синдром Леша - Нихана (увеличение синтеза мочевой кислоты), болезнь Вильсона - Коновалова, вирусные гепатиты, злокачественные новообразования с метастазами, множественная миелома, хронический миелолейкоз (бесконтрольный рост и деление клеток), синдром Фанкони (снижение канальцевой реабсорбции мочевой кислоты из-за дефекта развития канальцев).

Причины пониженной концентрации мочевой кислоты в моче: хронические заболевания почек, например, хронический гломерулонефрит, ксантинурия (мочевой кислоты образуется мало из-за недостаточности ксантиноксидазы), свинцовая интоксикация (из-за выраженного снижения функций почек), хронический алкоголизм, дефицит фолиевой кислоты.

3. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

4. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

5. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

6. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



8 день. Исследование обмена небелковых азотсодержащих соединений

1. Определение креатинина

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Метод основан на реакции Яффе. Креатинин в щелочной среде образует с пикриновой кислотой с образованием окрашенного комплекса, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации креатинина и измеряется фотометрически при длине волны 500 нм.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ): Негемолизированная сыворотка (плазма) крови, суточная моча. Перед проведением анализа развести мочу в 100 раз бидистиллированной водой.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - ПИКРИНОВАЯ КИСЛОТА

пикриновая кислота-35 ммоль/л

РЕАГЕНТ №2 - ГИДРООКИСЬ НАТРИЯ

NaOH-0,75 моль/л

КАЛИБРАТОР

Креатинин-177 мкмоль/л

РЕАГЕНТ №4 - ТРИХЛОРУКСУСНАЯ КИСЛОТА

ТХУ-1,2 моль/л.

1. Подготовка проб к анализу:

Внести в пробирки:

Проба №1 (сыворотка, плазма)Проба №2 (моча)Раствор для холостой пробы

Сыворотка, плазма0,5 мл-

Разбавленная моча (1:99)-0,5 мл-

Дистиллированная вода 1,0 мл 0,25 мл 0,75 мл

Реагент №4 0,5 мл 0,25 мл 0,25 мл

Пробы перемешать, инкубировать 10-12 мин при 18-25 °С. Пробы №№1 и 2 центрифугировать в течение 15 мин при 900 g.

2. Определение концентрации креатинина Внести в пробирки:

Проба №1Проба №2Калиб.пробаХолостая проба

Супернатант1,0 мл1,0 мл--

Раствор для холостой пробы---1,0 мл

Калибратор--1,0 мл-

Реагент №20,5 мл0,5 мл0,5 мл0,5 мл

Реагент №10,5 мл0,5 мл0,5 мл0,5 мл

Пробы перемешать, инкубировать точно 20 мин при 25 °С. Фотометрировать при длине волны 500 нм.

РАСЧЕТЫ

Расчет концентрации креатинина (С).

В сыворотке (плазме): С = Еоп 1/Екал х 177 [мкмоль/л],

В суточной моче: С = Еоп 2/Екал х 8,85 х К [ммоль/сутки], где: Еоп- адсорбция опытной пробы,

Екал - адсорбция калибровочной пробы,

8,85 ммоль/л - концентрация креатинина в калибраторе с учетом разведения пробы,

К - количество суточной мочи, л.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

В сыворотке (плазме):

мужчины: 62-115 мкмоль/л,

женщины: 53-97 мкмоль/л.

В моче: 8,8-13,3 ммоль/сутки.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня креатинина:

Острая и хроническая почечная недостаточность (амилоидоз, поражение почек при сахарном диабете и т.д.).

Недостаточность сердечно-сосудистой системы (инфаркт миокарда, кардиогенный шок, миокардистрофия и т.д.).

Массивное разрушение мышечной ткани (краш-синдром) и выход креатинина из клеток.

Ожоги (массивный некроз клеток с выходом их содержимого в межклеточное вещество).

Акромегалия.

Гигантизм.

Гипертиреоз.

Обезвоживание.

Чрезмерные физические нагрузки.

Избыточное потребление мясных продуктов.

Лучевая болезнь.

Обструкция мочевыводящих путей.

Заболевания простаты, нефролитиаз или другие факторы, вызывающие обструкцию мочевыводящей системы.

Снижение кровотока в почках из-за шока, дегидратации, острой сердечной недостаточности, атеросклероза или осложнений диабета.

Причины снижения уровня креатинина

Голодание.

Гипергидратация (разведение крови - относительная гипокреатининемия).

Атрофия мышц.

Причины повышения уровня креатинина в суточной моче: акромегалия и гигантизм (повышенная продукция гормона роста); сахарный диабет; гипотиреоз; чрезмерное употребление в пищу животных белков; физическая нагрузка; острые инфекции; синдром длительного сдавливания тканей (краш-синдром); ожоги.

Причины понижения уровня креатинина в суточной моче: прогрессирующее заболевание почек; амилоидоз почек; гипертиреоз; анемия; мышечная дистрофия; полимиозит, нейрогенная атрофия; воспалительные заболевания мышц (миозиты); стеноз почечной артерии; лейкемия; лучевая болезнь; вегетарианское питание.

2. Расчет показателей пробы Реберга

Проведение пробы Реберга:

Обследуемый натощак выпивает 400-500 мл воды и мочится (эту порцию мочи выливают). Время мочеиспускания точно отмечают. Ровно через 1 час собирают мочу (полностью). В середине этого периода берут кровь. По объему собранной мочи устанавливают минутный диурез. В крови и моче определяют концентрацию креатинина.

Фильтрацию и ребсорбцию рассчитывают по формулам:Ф = (М / П) * dмин,где Ф - клубочковая фильтрация (мл/мин),

М и П - концентрация креатинина в моче и плазме крови (соответственно), dмин - минутный диурех (мл);

Р% = (Ф - dмин) / Ф * 100%, или

Р% = (К - 1) / К * 100%,

где Р% - реабсорбция, К - концентрационный индекс (М / П).Клубочковый клиренс (Кл) представляет собой в сущности клубочковую фильтрацию и соответствует количеству выделенной первичной мочи (мл) за 1 мин. (Ф = Кл).Полученные величины клиренса (клубочковой фильтрации) необходимо привести к стандартной площади поверхности тела взрослого человека 1,73 м2 по формуле Дюбуа:Кл * 1,73 / поверхность тела, гдеповерхность тела (м2) = 167,2 *SQRT(Масса(кг)) *SQRT(Рост(кг)) / 10000

Нормальные значения

Референсные значения пробы Реберга для детей до года составляют от 65 до 100 мл/мин. С возрастом нарастает дифференциация показателей в зависимости от пола. У пациентов от 1 года до 30 лет норма - 88-146 мл/мин для мужчин (мальчиков), 81-134 мл/мин для женщин (девочек). После 30-40 лет клиренс креатинина постепенно снижается приблизительно на 6,5 мл/мин за 10 лет. Для мужчин с 30 до 50 лет референсные значения пробы Реберга составляют 82-133 мл/мин, с 50 до 70 лет - 68-120 мл/мин, с 70 лет - 55-113 мл/мин. Для женщин с 30 до 50 лет - 75-122 мл/мин, с 50 до 70 лет - 64-110 мл/мин, с 70 лет - 52-105 мл/мин. Физиологическое повышение значений происходит при беременности, интенсивных физических нагрузках, употреблении большого количества белковых продуктов.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Повышение клубочковой фильтрации:

Повышенный сердечный выброс. Гипертоническая болезнь

Беременность

Ожоги

Белковая диета

Отравление окисью углерода

Анемия

Снижение клубочковой фильтрации:

Снижение почечного кровотока (кровотечение, шок, дегидратация, застойная сердечная недостаточность)

Врожденная патология почек

Нефротический синдром

Гломерулонефрит

Пиелонефрит

Закупорка мочевых путей

Миеломная болезнь

Малярия

Гипофункция коры надпочечников

Печеночная недостаточность

биоматериал фермент липидный билирубин холестерин



3. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

...