Проведение лабораторных биохимических исследований

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории. Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях. Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

4. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

5. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

6. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



9 день. Исследование обмена небелковых азотсодержащих соединений

1. Определение общего билирубина и его фракций

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Общий билирубин определяется на основе реакции с диазотированной сульфаниловой кислотой, после диссоциации неконъюгированного (непрямого, свободного) билирубина при участии кофеинового реагента. Для определения содержания конъюгированного (прямого, связанного) билирубина из реакционной смеси исключается кофеиновый реагент. Концентрация неконъюгированного билирубина рассчитывается по разнице концентрации между общим и конъюгированным билирубином. Интенсивность окраски при длине волны 535 нм прямо пропорциональна концентрации билирубина в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка крови без следов гемолиза

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - КОФЕИНОВЫЙ РЕАГЕНТ

Кофеин-52 ммоль/л

натрия бензоат-104 ммоль/л

натрия ацетат-184 ммоль/л

РЕАГЕНТ №2 - СУЛЬФАНИЛОВАЯ КИСЛОТА сульфаниловая кислота-29 ммоль/л, соляная кислота-170 ммоль/л

РЕАГЕНТ №3 - НАТРИЯ НИТРИТ, натрия нитрит-72 ммоль/л

РЕАГЕНТ №4 - ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ РАСТВОР, натрия хлорид-154 ммоль/л

КАЛИБРАТОР, Билирубин-171 мкмоль/л.

Проведение анализа:

Опытная проба Холостая проба

Общий бил Связанный бил

Образец 0,20 мл 0,20 мл 0,20 мл

Реагент №11,4 мл-

Реагент №4 0,20 мл 1,6 мл 1,80 мл

Дизореагент 0,20 мл 0,20 мл-

Пробы перемешать. Для определения содержания общего билирубина инкубировать 20 мин, для определения связанного (прямого) билирубина инкубировать точно 5 мин при 18-25 °С.

Фотометрировать при длине волны 535 нм.

РАСЧЕТЫ:

Общий билирубин является определяющим!

С = Еоп /Екал х 85,5 [мкмоль/л],

где: 85,5 мкмоль/л-концентрация билирубина в калибраторе с учетом разведение в реакционной смеси.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Общий билирубин: 8,5-20,5 мкмоль/л. Прямой билирубин: до 20% от общего, но не более 5,1 мкмоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня общего билирубина:

1. Преимущественно за счет непрямого билирубина (непрямая гипербилирубинемия, связанная с избыточным гемолизом или нарушением захвата и связывания свободного билирубина печенью)

Гемолитическая анемия.

Серповидно-клеточная анемия.

Эмбриональный тип кроветворения.

Синдром Жильбера.

Синдром Криглера - Найяра.

Переливание несовместимых групп крови.

Малярия.

Инфаркт миокарда.

Сепсис.

Геморрагический инфаркт легкого.

Кровоизлияние в ткани.

2. Преимущественно за счет прямого билирубина (прямая гипербилирубинемия, связанная с билиарной обструкцией или нарушением выделения связанного билирубина печенью)

Холедохолитиаз.

Желчнокаменная болезнь.

Вирусный гепатит.

Склерозирующий холангит.

Билиарный цирроз печени.

Рак головки поджелудочной железы.

Атрезия желчевыводящих путей.

Алкогольная болезнь печени.

Беременность.

3. За счет прямого и непрямого билирубина (паренхиматозная желтуха с нарушением захвата билирубина и выделения желчи)

Вирусный гепатит.Алкогольная болезнь печени.

Цирроз.

Инфекционный мононуклеоз.

Токсический гепатит.

Эхинококкоз печени.

Абсцессы печени.

Метастазы или массивные опухоли печени.

2. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

3. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

4. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

5. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



10 день. Исследование углеводного обмена

1. Определение глюкозы, проведение глюкозотолерантного теста

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Определение глюкозы ферментативным окислением в присутствии глюкозооксидазы (ГОД). Окрашенный индикатор хинонимин образуется из фенола и 4-аминоантипирина под действием пероксида водорода при каталитическом воздействии пероксидазы (ПОД).

Глюкоза+О2----Глюконовая кислота+Н2О2

2Н2О2+4-аминоантипирин+фенол-хинонимин+4Н2О

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка (плазма) крови или моча.

В моче целесообразно предварительно провести качественную реакцию, а количественные измерения проводить только в пробах, дающих положительную реакцию.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОНОРЕАГЕНТ

фосфатный буфер, рН 7,5-150 ммоль/л

фенол-10 ммоль/л

GOD-25 000 U/л

POD-1 500 U/л

хромогены и стабилизаторы

КАЛИБРАТОР

Глюкоз-10 ммоль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

1. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ Смешать 0,5 мл рабочего реагента и 0,01 мл мочи. Если через 15 мин развивается розовое окрашивание - проба считается положительной и может быть использована для количественного определения глюкозы.

2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,01 мл-

Монореагент 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Калибратор - 0,01 мл-

Пробы тщательно перемешать, инкубировать 10 мин при 37°С или 15 мин при 18-25°С.

Фотометрировать при длине волны 505 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации глюкозы (С): С = Еоп/Екал х 10 [ммоль/л], где:

Еоп - адсорбция опытной пробы,

Екал - адсорбция калибровочной пробы,

10 ммоль/л - концентрация глюкозы в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Сыворотка (плазма): 4,2-6,1 ммоль/л,

моча: до 0,8 ммоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышенного уровня глюкозы: акромегалия,

сильный стресс (реакция на травму, сердечный приступ, инсульт), хроническая почечная недостаточность, синдром гиперкортицизма (Иценко - Кушинга), прием таких лекарств, как кортикостероиды, антидепрессанты трициклического ряда, диуретики, эпинефрины, эстрогены, литий, дифенин (дилантин), салицилаты, избыточное потребление высокоуглеводной пищи, гипертиреоз, рак поджелудочной железы, панкреатит.

Причины пониженного уровня глюкозы в крови: недостаточность надпочечников, злоупотребление алкоголем, принятие таких препаратов, как ацетаминофен и анаболические стероиды, болезни печени, гипотиреоз, передозировка инсулина, голодание.

Причины повышения уровня глюкозы в моче:сахарный диабет, гипертиреоз, акромегалия, наследственная тубулопатия (синдром Фанкони), почечная недостаточность, беременность, прием кортикостероидов и АКТГ, прием некоторых лекарств (седативные и обезболивающие средства), прием большого количества богатой углеводами пищи, стресс, мышечное напряжение, в том числе судороги.

Причины понижения уровня глюкозы в моче

У здоровых людей моча содержит крайне незначительное количество глюкозы. Полное исчезновение глюкозы происходит при бактериальных инфекциях мочевыводящих путей, однако на практике этот факт не учитывается в диагностических целях.

Имеет значение снижение глюкозы на фоне предшествующего повышения, что означает нормализацию уровня глюкозы в крови или стабилизацию функции почек.

Проведение глюкозотолерантного теста:

Пероральный глюкозотолерантный тест следует проводить утром на фоне не менее чем 3-дневного неограниченного питания (более 150 г углеводов в сутки) и обычной физической активности. Тесту должно предшествовать ночное голодание в течение 8-14 часов (можно пить воду).

Последний вечерний прием пищи должен содержать 30-50 граммов углеводов.

За 10-15 часов перед тестом не употреблять алкоголь.

Ночью, перед тестом, и до его окончания не курить.

Общая информация об исследовании:

Пероральный глюкозотолерантный тест следует проводить утром на фоне не менее чем 3-дневного неограниченного питания (более 150 г углеводов в сутки) и обычной физической активности. Тесту должно предшествовать ночное голодание в течение 8-14 часов (можно пить воду). Последний вечерний прием пищи должен содержать 30-50 г углеводов. Ночью перед тестом и до его окончания не курить. После взятия крови натощак испытуемый должен не более чем за 5 минут выпить 75 г безводной глюкозы или 82,5 г моногидрата глюкозы, растворенных в 250-300 мл воды. Для детей нагрузка составляет 1,75 г безводной глюкозы (или 1,925 г моногидрата глюкозы) на кг массы тела, но не более 75 г (82,5 г), при массе ребенка 43 кг и выше дается обычная доза (75 г). В процессе теста не разрешается курение и активная физическая нагрузка. Через 2 часа осуществляется повторное взятие крови.

Следует помнить, что если уровень глюкозы крови натощак превышает 7,0 ммоль/л, то пероральный глюкозотолерантный тест не выполняется, так как такой уровень глюкозы крови сам по себе является одним из критериев постановки диагноза "сахарный диабет".

Пероральный глюкозотолерантный тест позволяет диагностировать различные нарушения углеводного обмена, такие как сахарный диабет, нарушения толерантности к глюкозе, гликемия натощак, но не может позволить уточнить тип и причины развития сахарного диабета, в связи с чем после получения любого результата перорального глюкозотолерантного теста целесообразно провести обязательную консультацию эндокринолога.

Используется:

Для диагностики: сахарного диабета; нарушения толерантности к глюкозе; гликемии натощак.

Назначается:

В случае сомнительных значений гликемии для уточнения состояния углеводного обмена; при обследовании пациентов с факторами риска развития сахарного диабета:возраст более 45 лет; ИМТ более 25 кг/м2; семейный анамнез сахарного диабета (родители или сибсы с сахарным диабетом 2-го типа); привычно низкая физическая активность; наличие гликемии натощак или нарушенная толерантность к глюкозе в анамнезе; гестационный сахарный диабет или рождение плода более 4,5 кг в анамнезе; артериальная гипертензия (любой этиологии); нарушение липидного обмена (уровень ЛПВП ниже 0,9 ммоль/л и/или уровень триглицеридов выше 2,82 ммоль/л); наличие любого заболевания сердечно-сосудистой системы.

НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ:

Время определения

Референсные значения глюкозы, венозная кровь, ммоль/л

Натощак? 6,1

Через 2 часа после ПГТТ? 7,8

Критерии определения нарушенной гликемии натощак, нарушения толерантности к глюкозе и СД при проведении ГТТ

Время определенияУровень глюкозы, венозная кровь,ммоль/л

Нарушенная гликемия натощак

Натощак? 6,1 и ? 7,0

Через 2 часа после ПГТТ (еслиопределяется)? 7,8

Нарушенная толерантность к глюкозе

Натощак (если определяется)? 7,0

Через 2 часа после ПГТТ? 7,8 и ? 11,1

Сахарный диабет

Натощак? 7,0

Через 2 часа после ПГТТ? 11,1

При любом случайном определении? 11,1

Причины повышения уровня глюкозы плазмы крови: различные нарушения углеводного обмена (сахарный диабет, нарушение толерантности к глюкозе, гликемия натощак);

ложноположительный результат - недавно перенесенное или переносимое острое заболевание, хирургические операции или какая-либо другая стрессовая ситуация, прием лекарственных препаратов, повышающих уровень гликемии (глюкокортикоиды, тиреоидные гормоны, тиазиды, бета-блокаторы, оральные контрацептивы).

Причины понижения уровня глюкозы плазмы крови: прием лекарственных препаратов, снижающих уровень гликемии (инсулин, различные сахаропонижающие препараты); чрезмерное голодание; интенсивная физическая нагрузка накануне проведения теста.

2. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

3. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

4. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1. Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

5. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



11 день. Исследование липидного обмена

1. Определение общего холестерина, холестерина липопротеинов высокой и низкой плотности

1. Определение общего холестерина:

ПРИНЦИП МЕТОДА:

При гидролизе эфиров холестерина холестеролэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся и имеющийся в пробе холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в пробе. Измеряется фотометрически при длине волны (480-520) нм.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Сыворотка или плазма крови.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОНОРЕАГЕНТ

фосфатный буфер-100 ммоль/л

фенол-20 ммоль/л

холестеролэстераза-400 U/л

холестеролоксидаза-250 U/л

пероксидаза-500 U/л

хромогены, активаторы, стабилизаторы и детергенты

КАЛИБРАТОР

холестерин-5,17 ммоль/л (200 мг/100 мл).

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,02 мл-

Бидистиллированная вода - 0,02 мл

Монореагент 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Калибратор - 0,02 мл-

Пробы перемешать и инкубировать 10 мин при 18-25 °С или 5 мин при 37 °С. Фотометрировать при длине волны (480-520) нм.

РАСЧЕТЫ: Расчет концентрации холестерина (С): С = Еоп/Екал х 5,2 [ммоль/л].

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Идеальное содержание: < 5,2 ммоль/л.

Допустимое содержание: 5,2-6,5 ммоль/л.

Патологическое содержание: > 6,5 ммоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Повышение общего холестерина: холестаз - застой желчи, который может быть вызван заболеванием печени (гепатит, цирроз) или камнями в желчном пузыре, хроническое воспаление почек, приводящее к нефротическому синдрому, хроническая почечная недостаточность, снижение функции щитовидной железы (гипотиреоз), плохо вылеченный сахарный диабет, алкоголизм, ожирение, рак простаты или поджелудочной железы.

Причины понижения уровня общего холестерина (гипохолестеринемии):

Наследственность.

Тяжелое заболевание печени.

Онкологические заболевания костного мозга.

Повышенная функция щитовидной железы (гипертиреоз).

Нарушения всасывания в кишечнике.

Фолиево- или B12-дефицитная анемия.

Распространенные ожоги.

Туберкулез.

Острые заболевания, острые инфекции.

Хроническая обструктивная болезнь легких.

2. Определение концентрации холестерина липопротеинов высокой плотности в сыворотке (плазме) крови энзиматическим методом

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Антитела против человеческих в-липопротеинов, входящие в Реагент №1, связывают все фракции липопротеинов, кроме HDL-С. Образовавшийся иммунный комплекс не взаимодействует с ферментами, содержащимися в Реагенте №2. Холестеролэстераза и холестеролоксидаза взаимодействуют только с HDL-С. При гидролизе HDL- холестерина холестеролэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации HDL-С в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка или гепаринизированная плазма. Измерять концентрацию HDL-C сразу после получения биоматериала.

СОСТАВ НАБОРА:

Реагент №1

Good's Буфер, рН 7,0-30 ммоль/л

Пероксидаза-2400 U/L

хромогенные субстраты антитела к человеческому в-липопротеину

Реагент №2 Good's Буфер, рН 7,0-30 ммоль/л холестеролоксидаза-20000 U/л

холестеролэстераза - 4000 U/л хромоген.



ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Реагент №1 0,9 мл 0,9 мл 0,9 мл

Образец0,01 мл-

Калибратор-0,01 мл-

Пробы тщательно перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С и измерить оптическую плотность Е1 (холостая проба по образцу).

Добавить в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Реагент №2 0,3 мл 0,3 мл 0,3 мл

Пробы тщательно перемешать, инкубировать 5 мин при 37 °С и измерить оптическую плотность Е2. Фотометрировать при длине волны 600 нм.

РАСЧЕТЫ:

1. Вычислить разность адсорбций ДЕ = Е2 - Е1.

2. Рассчитать концентрацию HDL в образце [С] по формуле: С = Скалиб х (ДЕобразца / ДЕкалиб) где:

Скалиб - концентрация калибратора,

Екалиб - разность оптической плотности калибратора,

Еобразца - разность оптической плотности опытной пробы.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

мг/100 мл ммоль/л

Мужчины 35,3-79,5 - 0,92-2,06

Женщины 42-88 - 1,09-2,28

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Повышение общего холестерина:

холестаз - застой желчи, который может быть вызван заболеванием печени (гепатит, цирроз) или камнями в желчном пузыре, хроническое воспаление почек, приводящее к нефротическому синдрому, хроническая почечная недостаточность, снижение функции щитовидной железы (гипотиреоз), плохо вылеченный сахарный диабет, алкоголизм, ожирение, рак простаты или поджелудочной железы.

Причины понижения уровня общего холестерина (гипохолестеринемии):

Наследственность.

Тяжелое заболевание печени.

Онкологические заболевания костного мозга.

Повышенная функция щитовидной железы (гипертиреоз).

Нарушения всасывания в кишечнике.

Фолиево- или B12-дефицитная анемия.

Распространенные ожоги.

Туберкулез.

Острые заболевания, острые инфекции.

Хроническая обструктивная болезнь легких.

3. Определение концентрации холестерина липопротеинов низкой плотности в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом

ПРИНЦИП МЕТОДА:

При добавлении к образцу реагента 1 образуется комплекс, который защищает LDL-C от ферментов - холестеролэстеразы и холестеролоксидазы, взаимодействующих с остальными фракциями липопротеинов. Образующаяся в ходе реакции перекись водорода разрушается каталазой. При добавлении реагента 2 происходит высвобождение LDL-C из комплекса, NaN3 инактивирует каталазу. При гидролизе оставшегося в растворе LDL-C холестеролэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации LDL-С в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка или гепаринизированная плазма. Образцы хранить при 4°С в течение 48 час, для более длительного хранения - заморозить при -20°С.

СОСТАВ НАБОРА:

Реагент №1 Good's Буфер, рН 6,8-25 ммоль/л холестеролэстераза-5000 U/L

Холестеролоксидаза-5000 U/L

Каталаза-1000 КU/L

хромогенные субстраты

Реагент №2 Good's Буфер, рН 7,0-25 ммоль/л

NaN3-0,09 %

Пероксидаза-2000 КU/L

Хромоген.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Реагент №1 0,9 мл 0,9 мл 0,9 мл

Образец0,01 мл-

Калибратор-0,01 мл-

Пробы тщательно перемешать, инкубировать 5 мин при 37 °С и оптическую плотность Е1 (холостая проба по образцу).

Добавить в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Реагент №2 0,3 мл 0,3 мл 0,3 мл

Пробы тщательно перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С и измерить оптическую плотность Е2.

Фотометрировать при длине волны 600 нм.

РАСЧЕТЫ:

1. Вычислить разность оптической плотности ДЕ = Е2 - Е1 2. Рассчитать концентрацию HDL в образце [С] по формуле: С = Скалиб х (ДЕобразца / ДЕкалиб) где:

Скалиб - концентрация калибратора,

Екалиб - разность оптической плотности калибратора,

Еобразца - разность оптической плотности опытной пробы.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Норма- менее 3,37 ммоль/л

Группа- риска 3,37-4,15 ммоль/л

Патология-более 4,15 ммоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Повышение общего холестерина:

холестаз - застой желчи, который может быть вызван заболеванием печени (гепатит, цирроз) или камнями в желчном пузыре,

хроническое воспаление почек, приводящее к нефротическому синдрому,

хроническая почечная недостаточность,

снижение функции щитовидной железы (гипотиреоз),

плохо вылеченный сахарный диабет,

алкоголизм,

ожирение,

рак простаты или поджелудочной железы.

Причины понижения уровня общего холестерина (гипохолестеринемии):

Наследственность.

Тяжелое заболевание печени.

Онкологические заболевания костного мозга.

Повышенная функция щитовидной железы (гипертиреоз).

Нарушения всасывания в кишечнике.

Фолиево- или B12-дефицитная анемия.

Распространенные ожоги.

Туберкулез.

Острые заболевания, острые инфекции.

Хроническая обструктивная болезнь легких.

4. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным). Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах). Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

5. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

6. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1. Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

7. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



12 день. Исследование липидного обмена

1. Определение триглицеридов

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Определение триглицеридов после ферментативного отделения от липопротеинов липазой. Окрашенный индикитор хинонимин образуется из 4-хлорфенола и 4-аминоантипирина под действием пероксида водорода при каталитическом воздействии пероксидазы.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Сыворотка и плазма крови.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОНОРЕАГЕНТ Pipes буфер, рН 7,0-30 ммоль/л

4-хлорфенол-4 ммоль/л

Mg2+-1 ммоль/л

АТФ- 2 ммоль/л

Пероксидаза-5000 ед/л

Липаза-150 ед/л

Глицерокиназа-1200 ед/л

Глицерофосфатоксидаза -4000 ед/л

4-аминоантипирин-0,4 ммоль/л

детергенты, активаторы и стабилизаторы

КАЛИБРАТОР

Триглицериды-2,85 ммоль/л (250 мг/100 мл).

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,02 мл--

Дистиллированная вода - 0,02 мл

Монореагент 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Калибратор-0,02 мл-

Пробы перемешать и инкубировать 10 мин при 18-25°С или 5 мин при 37°С.

Фотометрировать при длине волны 505 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации триглицеридов (С):

С = (Еоп/Екал х 2,85) - 0,11 [ммоль/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

2,85 ммоль/л- концентрация триглицеридов в калибраторе, 0,11 ммоль/л - поправка на содержание свободного глицерина в сыворотке (плазме) крови.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Нормальное: 0,15-1,82 ммоль/л

Группа риска: 1,82-2,28 ммоль/л

Патология: > 2,28 ммоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня триглицеридов (гипертриглицеридемии)

Гипертриглицеридемия может быть результатом наследственной предрасположенности или избыточного приема с пищей животных жиров. У большинства людей с повышенным холестерином в той или иной мере задействованы оба фактора.

Перед назначением лечения необходимо исключить другие причины повышенного содержания триглицеридов: алкоголизм, хроническое воспаление почек, приводящее к нефротическому синдрому, хроническая почечная недостаточность, снижение функции щитовидной железы (гипотиреоз), плохо вылеченный сахарный диабет, панкреатит, инфаркт миокарда - в этом случае повышенные уровни могут сохраняться до нескольких месяцев, подагра.

Пониженный уровень триглицеридов (гипотриглицеридемия) особого клинического значения не имеет. Может встречаться при следующих состояниях: наследственная гиполипропротеинемия, повышение функции щитовидной железы (гипертиреоз), нарушения всасывания в кишечнике, хроническая обструктивная болезнь легких, инфаркт мозга.

2. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

3. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

4. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

5. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



13 день. Исследование обмена минеральных веществ

1. Определение натрия, калия, кальция, магния

1. Определение натрия:

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Ион натрия активирует Na-зависимую в-галактозидазу. Активированный фермент расщепляет ONPG (о-нитрофенил-в,D- галактопиранозид) до галактозы и окрашенного о-нитрофенола. Интенсивность окраски после окончания инкубации пропорциональна активности фермента и, соответственно, концентрации натрия в исследуемом образце. Скорость расщепления ONPG пропорциональна концентрации натрия в пробе, что позволяет производить измерения псевдокинетическим двухточечным методом по увеличению оптической плотности образца.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ): Сыворотка крови.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - БУФЕР

Трис-300 ммоль/л

криптанд -8,4 ммоль/л

активаторы и хелаторы

РЕАГЕНТ №2 - СТАРТОВЫЙ РЕАГЕНТ

ONPG-1,5 ммоль/л

РЕАГЕНТ №3 - ЛИОФИЛИЗАТ концентрация в рабочем реагенте

В-галактозидаза-0,8 КU/л

КАЛИБРАТОР натрий хлористый-150 ммоль/л

РЕАГЕНТ №5 - STOP-РЕАГЕНТ

гуанидин гидрохлорид -2,25 моль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба Контроль образца

Рабочий реагент 0,3 мл 0,3 мл 0,3 мл 0,3 мл

Образец0,01 мл-

Калибр.-0,01 мл-

Деон.в--0,01 мл-

При внесении сыворотки обтереть наконечник пипетки фильтровальной бумагой, внести образец в рабочий реагент и дважды ополоснуть наконечник в рабочем реагенте. Пробы перемешать и инкубировать 2 мин при 37°С.

Добавить в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба Контроль образца

Реагент №2 0,015 мл 0,015 мл 0,015 мл 0,015 мл

Пробы перемешать и инкубировать точно 15 минут при 37°С.

Добавить в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба Контроль образца

Реагент №5 1,7 мл 1,7 мл 1,7 мл 1,7 мл

Образец - 0,01 мл

Пробы тщательно перемешать.

Фотометрировать при длине волны 420 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации натрия (С): С = Еоп/Екал х 150 [ммоль/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

150 ммоль/л - концентрация натрия в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

136-145 ммоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Снижение уровня натрия свидетельствует чаще о переизбытке жидкости, чем о нехватке натрия. Оно может быть вызвано: застойной сердечной недостаточностью (отеками нижних конечностей и скоплением жидкости в естественных полостях организма), чрезмерной потерей жидкости (тяжелой диареей, рвотой, сильным потоотделением), введением гипертонического раствора глюкозы (накоплением жидкости в кровяном русле для разбавления получившегося состава крови), тяжелым нефритом, непроходимостью пилорического отдела желудка (рвотой желудочным содержимым с высоким содержанием электролитов), мальабсорбцией - нарушением первичного всасывания натрия, поступающего с пищей, и адсорбцией натрия, выделившегося в просвет ЖКТ, передозировкой лекарственных препаратов, например диуретиков (повышенным выделением электролита с мочой), отеками, большим поступлением жидкости, ожоговой болезнью (разбавлением крови за счет межклеточной жидкости).

Уровень натрия повышается при следующих состояниях: обезвоживание, синдром и болезнь Кушинга (чрезмерная выработка кортикостероидов, повышающих содержание натрия в организме), первичный и вторичный гиперальдостеронизм, кома, несахарный диабет (недостаток выработки антидиуретического гормона), трахеобронхит.

2. Определение калия

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Ионы калия, введенные в реакционную смесь, образуют стабильную суспензию. Мутность суспензии пропорциональна концентрации ионов калия.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка или плазма крови без следов гемолиза.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОНОРЕАГЕНТ

NaOH-500 ммоль/л

Тетрафенилборат-260 ммоль/л

детергенты и стабилизаторы

КАЛИБРАТОР

Калий-5,0 ммоль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец0,05 мл-

Бидистил. вода - 0,05 мл

Калибратор - 0,05 мл-

Реагент 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Пробы перемешать и инкубировать 5 мин при 18-25°С или при 37°С.

Фотометрировать при длине волны 590 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации калия (С): С = Еоп/Екал х 5,0 [ммоль/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

5,0 ммоль/л - концентрация калия в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Сыворотка крови: 3,6-5,5 ммоль/л,

плазма крови: 4,0-4,8 ммоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Повышенный уровень калия - гиперкалиемия - может указывать на: острую или хроническую почечную недостаточность (нарушение концентрационной и выделительной функции почек), болезнь Аддисона (недостаточную выработку минералкортикоидов, отвечающих за гормональную регуляцию уровня калия), гипоальдостеронизм (альдостерон отвечает за выведение калия из организма), обширное повреждение ткани (массивный выход калия из клетки), инфекционные заболевания, сахарный диабет, дегидратацию (происходит сгущение крови), большое поступление калия с пищей, например с фруктами и овощами.

Понижение концентрации калия встречается при таких патологических состояниях, как: проблемы с ЖКТ (рвота, понос, передозировка слабительными, фистулы, синдром мальабсорбции), ведущие к потере из организма жидкости, богатой электролитами, диабетический кетоацидоз, синдром Барттера, синдром Кушинга (повышенная выработка глюкокортикоидов, тормозящих реабсорбцию калия в почках), недостаток поступления калия с пищей (редко).

3. Определение кальция

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Кальций в щелочной среде образует окрашенный комплекс с о-крезолфталеинкомплексоном. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации кальция в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка или плазма крови (без ЭДТА), суточная моча. Перед проведением анализа развести мочу в 2 раза деионизированной или бидистиллированной водой.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - БУФЕР

боратный буфер, рН 10,7-80 ммоль/л

глицин-20 ммоль/л

РЕАГЕНТ №2 - ХРОМОГЕН

О-крезолфталеинкомплексон-0,26 ммоль/л

8-гидроксихинолин-8,96 ммоль/л

КАЛИБРАТОР

Кальций-2,5 ммоль/л (10 мг/100 мл).

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,05 мл-

Бидист. Вода - 0,05 мл

Реагент №1 1,0 мл 1,0 мл 1,0 мл

Регент №2 1,0 мл 1,0 мл 1,0 мл

Калибратор-0,05 мл

Пробы тщательно перемешать и инкубировать 5 мин при 18-25°С или 37°С.

Фотометрировать при длине волны 570 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации кальция (С): В сыворотке (плазме) крови: С = Еоп/Екал х 2,5 [ммоль/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - адсорбция калибровочной пробы,

2,5 ммоль/л- концентрация кальция в калибраторе;

В моче: С = Еоп / Екал х 2,5 х K х 2 [ммоль/сут], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал -оптическая плотность калибровочной пробы,

2,5 ммоль/л- концентрация кальция в калибраторе;

K - количество суточной мочи;

2 - фактор разведения мочи.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

В сыворотке (плазме): 2,02-2,60 ммоль/л

В моче: до 7,5 ммоль/сутки.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышенного уровня кальция:

...