Проведение лабораторных биохимических исследований

Повышение уровня общего кальция - это гиперкальциемия. Две ее самые распространенные причины - гиперпаратиреоз (увеличение паращитовидных желез) и злокачественные новообразования.

Гиперпаратиреоз обычно вызван доброкачественной опухолью паращитовидных желез.

Некоторые другие причины гиперкальциемии: гипертиреоз, туберкулез, продолжительная неподвижность, переизбыток витамина D, заболевания системы крови (лимфома, лейкоз, миеломная болезнь, истинная полицитемия), пересадка почки, дегидратация, болезнь Аддисона, болезнь Педжета.

Причины пониженного уровня кальция:

Самая частая причина гипокальциемии, уменьшения количества общего кальция, - снижение содержания белков в крови, особенно альбуминов. При этом снижен только уровень связанного кальция, ионизированный остается в норме и обмен кальция продолжает регулироваться паратиреоидным гормоном и кальцитонином.

Некоторые другие причины гипокальциемии: гипопаратиреоз (снижение функции паращитовидных желез), врождённая устойчивость к воздействию паратиреоидного гормона (от паратгормона нет эффекта, или он значительно снижен), недостаток кальция в рационе, недостаток магния (гипомагниемия), недостаток витамина D, повышение концентрации фосфора, спру, острый панкреатит, алкоголизм (нарушение всасывания нутриентов и, как следствие, недостаток ферментов и субстратов для многих видов обмена), хроническая почечная недостаточность.

4. Определение магния

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Магний образует с ксилидиловым синим окрашенный комплекс, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации магния и измеряется фотометрически.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка (плазма) крови без следов гемолиза, суточная моча. Мочу подкислить несколькими каплями соляной кислоты до рН 3-4 и развести дистиллированной водой в 4 раза.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОНОРЕАГЕНТ

трис буфер-200 ммоль/л

ксилидиловый синий-0,1 ммоль/л

ГДТА-0,04 ммоль/л

детергенты и стабилизаторы

КАЛИБРАТОР: Магний- 0,82 ммоль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,02 мл-

Деониз.вода - 0,02 мл

Калибратор - 0,02 мл

Реагент №12,0 мл2,0 мл2,0 мл

Пробы перемешать и инкубировать 10 мин при 18-25 °С. Фотометрировать при длине волны 520 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации магния (С).

В сыворотке (плазме): С = Еоп/Екал х 0,82 [ммоль/л].

В моче: С = Еоп/Екал х 0,82 х 4 [ммоль/л].

В суточной моче: С = Еоп/Екал х 0,82 х 4 х К [ммоль/сутки], где:

Еоп -оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

0,82 ммоль/л - концентрация магния в калибраторе,

4 - фактор разведения мочи,

К - количество суточной мочи, л.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

В сыворотке (плазме) крови: 0,8-1,0 ммоль/л.

В моче: 0,4-4,1 ммоль/л.

В суточной моче: 2,0-6,3 ммоль/сутки.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Низкий уровень магния указывает на то, что человек недополучает магний с пищей, микроэлемент всасывается в недостаточном количестве либо выделяется в избытке с мочой. Это может быть связано с патологиями желудочно-кишечного тракта, вызывающими нарушение всасывания (например, болезнью Крона), неконтролируемым сахарным диабетом, гипопаратиреоидизмом, гипертиреозом, длительной диареей, послеоперационным периодом, длительным применением диуретиков, ожоговой болезнью, токсикозом, любым хроническим повышением образования альдостерона.

Высокий уровень магния редко связан с его избыточным употреблением с пищей, обычно он является результатом почечной недостаточности (нарушения механизмов выделения), гиперпаратиреоидизма (высвобождения магния из костей), гипотиреоза (недостатком кальцитонина), дегидратацией (сгущением крови), диабетическим кетоацидозом, болезнью Аддисона (недостатком минералкортикоидов), применением антацидов, содержащих соединения магния.

2. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

3. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.



4. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1. Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

5. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



14 день. Исследование обмена минеральных веществ

1. Определение неорганического фосфора, хлоридов

1. Определение неорганического фосфора:

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Неорганический фосфор при взаимодействии с молибдатом аммония образует в растворе серной кислоты фосфомолибдатный комплекс. Концентрация фосфора в пробе пропорциональна оптической плотности, измеряемой при 340 нм.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ): Негемолизированная, нелипидемичная сыворотка крови.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОЛИБДЕНОВЫЙ РЕАГЕНТ

серная кислота-380 ммоль/л

натрий хлористый-150 ммоль/л

молибдат аммония-1,9 ммоль/л

РЕАГЕНТ №2 - ДЕТЕРГЕНТ

КАЛИБРАТОР

Фосфат-1,615 ммоль/л (5 мг/100 мл).

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Рабочий реагент 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Образец 0,02 мл

Калибратор-0,02 мл

Пробы тщательно перемешать и инкубировать 5 мин при 18-25°С или 37°С.

Фотометрировать при длине волны 340 нм.



РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации фосфора (С): С = Еоп/Екал х 1,615 [ммоль/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

1,615 ммоль/л- концентрация фосфора в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ: 0,87-1,45 ммоль/л).

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Низкий уровень фосфора может быть вызван: передозировкой диуретиков (бесконтрольной потерей фосфатов с мочой), недостаточным поступлением фосфора с пищей, алкоголизмом (чаще всего при этом есть еще ферментная недостаточность, нарушения питания и всасывания), ожоговой болезнью (соответственно, нарушением баланса многих видов обмена и излишней потерей электролитов и жидкости с пораженной поверхности), диабетическим кетоацидозом (из-за усиления метаболизма углеводов), гипер- или гипотиреозом, рахитом (у детей) и остеомаляцией (у взрослых), гиперинсулинизмом (инсулин участвует в транспорте глюкозы в клетки, невозможном без фосфатов), заболеваниями печени, сильной рвотой и/или диареей.

Высокий уровень фосфора (гиперфосфатемия) чаще всего связан с нарушением функции почек и уремией. Его причинами могут быть: почечная недостаточность, любой тяжелый нефрит (с повышением уровня креатинина и мочевины), гипопаратиреоз, остеосаркомы, метастатическое поражение костей и миеломная болезнь, передозировка фосфоросодержащими препаратами, переломы в стадии заживления, передозировка витамина D, болезнь Аддисона (недостаточная выработка гормонов надпочечниками).

2. Определение хлоридов

ПРИНЦИП МЕТОДА:

В присутствии ионов хлора в кислой среде тиоцианат ртути образует тиоцианат-ионы, образующие окрашенный комплекс с Fe3+. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации хлорид-ионов в пробе.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Сыворотка (плазма) крови без следов гемолиза, суточная моча. Перед проведением анализа развести мочу в 2 раза бидистиллированной или деионизированной водой.

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1 - МОНОРЕАГЕНТ

Hg(SCN)2-2 ммоль/л

Fe(NO3 ) 3-30 ммоль/л

HNO3-4 ммоль/л

КАЛИБРАТОР

Хлорид-ионы-100 ммоль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец0,01 мл

Реагент №1 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Калибратор-0,01 мл-

Пробы тщательно перемешать и инкубировать 5 мин при 18-25 °С или при 37°С.

Фотометрировать при длине волны 490 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации хлоридов (С).

В сыворотке (плазме): С = Еоп/Екал x 100 [ммоль/л].

В суточной моче: С = Еоп/Екал х 100 х 2 х К [ммоль/сут], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы,

2 - фактор разведения мочи,

100 ммоль/л- концентрация хлоридов в калибраторе,

К - количество суточной мочи, л.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

В сыворотке (плазме): взрослые: 97-108 ммоль/л.

дети: 95-112 ммоль/л.

В моче: 120-240 ммоль/24 часа.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины повышения уровня хлоридов в сыворотке: обезвоживание или другие состояния, отличительной чертой которых является повышение уровня натрия, например синдром Кушинга, заболевания почек, эклампсия, большая потеря щелочей из организма (при метаболическом ацидозе) или гипервентиляционные нарушения, вызывающие респираторный алкалоз, продолжительная рвота или нарушение всасывания в желудке, диарея, обширный ожог, тепловой удар, эмфизема и другие хронические заболевания легких, вызывающие респираторный ацидоз, излишняя потеря кислот из организма (метаболический алкалоз), первичный гиперпаратиреоидизм, некоторые почечные нарушения (ацидоз почечных канальцев), несахарный диабет (недостаток выработки АДГ), травма головы с поражением гипоталамуса (нарушение общего гормонального статуса).

Причины понижения уровня хлоридов в сыворотке: тяжелая многократная рвота (потеря хлоридов, продуцируемых в составе соляной кислоты), нарушение всасывания в желудке, хронический респираторный ацидоз, обширные ожоги (разбавление крови за счет межклеточной жидкости), метаболический алкалоз, застойная сердечная недостаточность (отеки нижних конечностей и скопление жидкости в естественных полостях организма), болезнь Аддисона (недостаточная выработка альдостерона, отвечающего за обратное всасывание хлора в почках), язвенный колит (чрезмерная потеря жидкости с электролитами), синдром неадекватной секреции антидиуретического гормона, гипергидратация, большое поступление жидкости (водная интоксикация), воспалительные заболевания почек с потерей солей.

3. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным).

Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

4. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

5. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

6. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



15 день. Исследование обмена минеральных веществ

1. Определение железа и общей железосвязывающей способности сыворотки

1. Определение железа

ПРИНЦИП МЕТОДА:

В кислой среде белковые комплексы, связывающие железо, диссоциируют, и железо восстанавливается до Fe++. Ион двухвалентного железа связывается с хромогеном, образуя окрашенный комплекс, концентрация которого пропорциональна концентрации железа в образце и измеряется фотометрически. Комплексы хромогена с ионами цинка и меди маскируются, образуя неокрашиваемые комплексы с хелатором, что обеспечивает более точное определение концентрации железа, свободное от интерференций.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ):

Свежая сыворотка или плазма крови (без цитрата, оксалата, ЭДТА).

СОСТАВ НАБОРА:

РЕАГЕНТ №1: гуанидин гидрохлорид -2,5 моль/л

Nitro-PAP-3,6 ммоль/л

детергенты и стабилизаторы

РЕАГЕНТ №2: Хелатор-40 ммоль/л

ацетатный буфер-30 ммоль/л

КАЛИБРАТОР: Железо-30 мкмоль/л.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Внести в пробирки:

Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба

Образец 0,10 мл-

Бидист.вода-0,10 мл

Рабочий реагент 2,0 мл 2,0 мл 2,0 мл

Калибратор-0,10 мл-

Пробы перемешать и инкубировать точно 10 мин при 18-25 °С.

Фотометрировать при длине волны 600 нм.

РАСЧЕТЫ:

Расчет концентрации железа (С): С = Еоп/Екал х 17,9 [мкмоль/л], где:

Еоп - оптическая плотность опытной пробы,

Екал - оптическая плотность калибровочной пробы;

17,9 мкмоль/л- концентрация железа в калибраторе.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ:

Женщины 8,8-27 мкмоль/л

Мужчины 9,5-30 мкмоль/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Причины понижения уровня железа в сыворотке

Чаще всего железодефицитная анемия. Она обычно вызвана хронической кровопотерей или недостаточным употреблением мясных продуктов.

Хронические заболевания, такие как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, туберкулез, бактериальный эндокардит, болезнь Крона и др.

Третий триместр беременности - снижение железа в этом случае является нормальным явлением из-за повышения потребности в нем.

Нарушение всасывания железа при различных заболеваниях кишечника, а также после удаления желудка.

Гемолитические анемии - связанные с разрушением эритроцитов.

Ранняя стадия лечения B12-дефицитной анемии.

Инфаркт миокарда.

Причины повышения уровня железа в сыворотке

Талассемия - наследственное заболевание, при котором изменена структура гемоглобина.

B12-дефицитная анемия.

Наследственный гемохроматоз. При этом заболевании из пищи всасывается повышенное количество железа, которое откладывается в различных органах, вызывая их повреждение.

Множественные переливания крови, введение железа внутримышечно, неадекватное назначение препаратов железа.

Острое отравление препаратами железа (у детей).

Острый гепатит.

Гломерулонефрит - воспаление ткани почек.

2. Определение общей железосвязывающей способности сыворотки

ПРИНЦИП МЕТОДА

Железосвязывающий белок сыворотки-трансферин, насыщается при избытке ионов Fe3+ в среде. Не связавшиеся ионы Fe адсорбируются на оксиде алюминия и осаждаются. Затем в супернатанте проводят определение ионов железа, связанные с трансферрином.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ: 45-72 мкмоль/л

ВЫПОЛНЕНИЕ АНАЛИЗА:

1 пробирка-раствор железа 1 мл и исследуемый раствор 0,5 мл-перемешиваем, через 3-5 мин добавить мерную ложку оскида Al. Интенсивно смешивать в течение 10 мин, центрифугируем 1 мин при 5000 оборотах.

РАСЧЕТЫ: С железа*3

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Повышение:

Острый гепатит, цирроз

Чрезмерное получение железа

Частые переливания крови.

Снижение:

Острые и хронические инфекции

Болезни, связанные с новообразованиями

Ревматическое воспаление суставов.

3. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным). Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

4. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

5. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1.Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

6. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4. Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.

16 день. Исследование гемостаза

1. Определение протромбинового времени

Принцип метода.

Определяется время свертывания бедной тромбоцитами цитратной плазмы в присутствии йонов кальция и избытка тканевого тромбопластина. В этих условиях время образования сгустка фибрина зависит только от активности факторов протромбинового комплекса.

Протромбиновое время (протромбиновый индекс). Метод представляет собой еще одну модификацию определения времени рекальцификации плазмы при добавлении в нее тканевого тромбопластина человека или кролика, что приводит к “запуску” свертывания по внешнему механизму. Тканевой тромбопластин в комплексе с фактором VII и ионом Са2+ активирует фактор X, входящий в состав “проактиватора протромбина”.

ХОД РАБОТЫ:

В пробирку с 0,1 мл плазмы и 0,1 мл раствора тромбопластина, установленную в водяной бане при температуре 37°С, добавляют 0,1 мл раствора кальция хлорида и по секундомеру определяют время образования сгустка. В норме протромбиновое время составляет 12-18 с и во многом зависит от активности тканевого тромбопластина, использованного при исследовании. Поэтому в большинстве случаев для определения этого показателя одновременно по той же методике исследуют плазму донора и вычисляют так называемый протромбиновый индекс:

ПИ = (ПBд/ ПВб )*100%

где ПИ - протромбиновый индекс, ПBд и ПВб - протромбиновое время донора и больного, соответственно.

В норме протромбиновый индекс составляет 90-100%. Чем больше протромбиновое время, свидетельствующее о гипокоагуляции крови, тем меньше значения протромбинового индекса.

Удлинение протромбинового времени (уменьшение протромбинового индекса) интегрально отражает недостаточность плазменных факторов, участвующих во внешнем механизме свертывания и в активации протромбина (VII, X, V), а также на конечных этапах коагуляции (I и II).

Наиболее частыми причинами такого изменения являются: 1. Прием непрямых антикоагулянтов (фенилин, синкумор, неодикумарин и др.).

2. Дефицит соответствующих витамин К-зависимых факторов свертывания (факторы II, VII, IХ, X) при тяжелых поражениях паренхимы печени (гепатит, цирроз, рак) и недостаточности витамина К (механическая желтуха, нарушения всасывания в кишечнике, дисбактериоз кишечника и т. п.).

3. Дефицит фибриногена (гипофибриногенемия), являющегося Кнезависимым фактором свертывания (тяжелые поражения паренхимы печени и др.).

4. Наличие феномена паракоагуляции, в частности, при ДВСсиндроме.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Повышение уровня: склонность к тромбозу: тромбоэмболические состояния, инфаркт миокарда, предынфарктные состояния, гипогидратации вследствие увеличения вязкости крови, гиперглобулинемия;

лекарственные средства, тормозящие действие кумарина (барбитураты, витамин К) или способные его тормозить (кортикостероиды, пероральные контрацептивные средства, мепробамат);

антигистаминные вещества;

полицитемия;

злокачественные опухоли.

Понижение уровня:

наследственный или приобретённый дефицит I, II, V, VII и X факторов;

приобретённая и наследственная гипофибриногенемия;

дефицит витамина К в диете (II, VII, X факторы образуются в гепатоцитах в присутствии витамина К);

дефицит витамина К у матери (геморрагический диатез у новорождённого);

лекарственные средства - антагонисты витамина К (антикоагулянты - фенилин и др., кумарины и усиливающие их действие препараты: анаболические стероиды, клофибрат, глюкагон, тироксин, индометацин, неомицин, оксифенбутазон, салицилаты; гепарин, урокиназа/стрептокиназа).

2. Определение активированного парциального тромбопластинового времени

Принцип метода

Определяется время свертывания плазмы крови человека в условиях стандартизированной контактной и фосфолипидной активации процесса в системе in vitro. В этих условиях время образования сгустка фибрина зависит только от активности факторов внутреннего и общего путей свертывания.

Тест АЧТВ является одним из самых информативных и самых распространенных скрининговых тестов, который чувствителен к дефициту всех факторов свертывания крови (кроме ф. VII), к гепарину, к специфическим ингибиторам (антитела к ф. VIII и IX) и к неспецифическим ингибиторам (системная красная волчанка).

Метод моделирования процесса внутреннего свертывания в системе in vitro был предложен в 1953 г. (Langdell, Wagner, Brinhous) и первоначально осуществлялся на стеклянной поверхности. Однако стекло активировало процесс по-разному в зависимости от марки, методов обработки, применяемого моющего средства. С целью стандартизации в качестве активатора (отрицательно заряженной поверхности) стали использовать каолин, целит, бентонит и ряд других веществ с отрицательно заряженной поверхностью, в последние годы - растворимую в воде эллаговую кислоту. При проведении теста используют также фосфолипиды растительного и животного происхождения или их смесь и ионы кальция для рекальцификации плазмы после действия цитрата. С целью стандартизации реакцию проводят при постоянной температуре (37°С).

Тест АЧТВ не имеет стандарта ВОЗ, так как для его проведения применяют различные реагенты. В качестве заменителя тромбоцитарного фактора 3 используют тромбоциты, фосфолипиды животного происхождения (мозг кроликов, быка или человека), растительные фосфолипиды (сои), смесь растительных и животных фосфолипидов, фосфолипиды из мембран эритроцитов человека: эрилид, эритрофосфатид. АЧТВ-реагенты различаются также по типу и концентрации активатора, типу буфера, присутствию защитных добавок. Было установлено, что именно фосфолипидные реагенты являются тем компонентом, который преимущественно влияет на результаты АЧТВ-теста, и оптимальными являются те реагенты, в которых соотношение фосфатидил-серина и фосфатидил-холина такое же, как в факторе 3 тромбоцитов. Учитывая, что главная функция теста АЧТВ - провести скрининг нарушений внутреннего пути свертывания, предпочтение следует отдавать реагентам, наиболее чувствительным ко многим нарушениям в системе гемостаза, в том числе к дефициту активности факторов внутреннего пути свертывания, к присутствию в плазме крови волчаночного антикоагулянта и гепарина. Компания РЕНАМ разработала оригинальный фосфолипидный реагент эрилид для проведения АЧТВ (патент РФ № 1790604 от 22.09.1992). Эрилид представляет собой очищенный от гемоглобина компонент мембран эритроцитов человека, аналогичный по фосфолипидному составу импортному кефалину. Эрилид включен в наборы реагентов для исследования АЧТВ.

Интерпретация результатов:

По результатам теста АЧТВ определяют дефицит факторов внутреннего пути свертывания, наличие в крови ингибиторов этих факторов и антикоагулянтов. Тест 8 используется для диагностики и дифференциальной диагностики гемофилии, для выявления волчаночного антикоагулянта, при выборе антикоагулянта и для контроля за лечением больных с коронарной недостаточностью. Тест не улавливает нарушения в тромбоцитах, недостаточность проконвертина, фибринстабилизирующего фактора и недостаток кальция в системе.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Удлинение теста АЧТВ может быть вызвано:

? синдромом диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС);

? заболеванием печени, где синтезируются почти все факторы свертывания крови;

? массивными гемотрансфузиями;

? введением гепарина;

? дефицитом факторов внутреннего пути свертывания;

? дефицитом витамина К;

? присутствием ингибиторов свертывания, как специфических, так и неспецифических;

? наличием волчаночного антикоагулянта;

? наличием гемофилии.

Укорочение теста АЧТВ свидетельствует о гиперкоагуляции и опасности возникновения тромбозов.

Нормальные значения АЧТВ:

? Коагуло-тест - 35-45 сек

? АЧТВ-тест - 25-35 сек

? Коагуло-экспресс - 35-45 сек.

3. Определение тромбинового времени

Принцип метода: Метод основан на определении времени образования фибринового сгустка при добавлении к плазме раствора тромбина необходимой активности.

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ:

Коагулометр любого типа с набором пластиковых кювет; центрифуга лабораторная;

пипетки полуавтоматические одноканальные переменного объема, 50-200 мкл и 200-1000 мкл;

термобаня на 37°С и секундомер (для ручного определения);

пробирки пластиковые вместимостью 10 мл и 3,8% 3-х замещенный цитрат натрия 5,5-водный (0,109 М);

вакуумные системы для взятия крови с 3,2% 3-х замещенным цитратом натрия 2-водным (0,109 моль/л);

вода дистиллированная;

физиологический раствор (0,9% раствор натрия хлорида); перчатки медицинские диагностические одноразовые.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ:

Вид анализируемого биологического материала Набор реагентов Тромбин-тест предназначен для определения тромбинового времени в плазме человеческой крови. Образцы плазмы крови для анализа не должны быть гемолизированы, содержать сгустки, примесь эритроцитов, не должны контактировать со стеклянной поверхностью.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ Стабилизированный раствор тромбина Тромбин человека, лиофильно высушенный с активностью около 100 МЕ/мл. Внести во флакон с лиофильно высушенным тромбином 1,0 мл дистиллированной воды и 0,2 мл стабилизатора, растворить содержимое при осторожном покачивании. Рабочий раствор тромбина В зависимости от необходимой активности приготовить рабочий раствор тромбина по следующей схеме:

Активность

МЕ/млРазведение стабилизирова нного раствора тромбина, в разКоличество стабилизирова нного раствора тромбина, млКоличество физиологиче ского раствора, мл

970, 10,6

6100, 10,9

3200, 11,9

Рабочий раствор тромбина готов к проведению анализа через 15 мин после приготовления. Рабочий раствор тромбина перед анализом не прогревать при температуре 37С.

ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Проведение анализа на автоматическом коагулометре

Выбрать на коагулометре программу для определения тромбинового времени.

Поместить флаконы с приготовленными реагентами в соответствующие ячейки коагулометра.

Поместить контрольные и исследуемые образцы плазмы в соответствующие ячейки коагулометра.

Запустить программу измерения.

Считать результаты. Проведение анализа на полуавтоматическом коагулометре и ручным методом на термобане.

НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ: 14-21 сек.

Причины увеличения тромбинового времени:

цирроз печени, хронический активный гепатит, гепатома;

ДВС-синдром;

наследственные гипо(а)фибриногенемия и дисфибриногенемия;

острый лейкоз, истинная полицитемия;

амилоидоз;

осложнения беременности и родов (эклампсия, преждевременная отслойка плаценты);

лекарственные взаимодействия: L-аспарагиназа, гепарин, стрептокиназа, урокиназа.

Причины понижения тромбинового времени: тромбоцитоз.

4. Определение гепаринового времени

К общим коагулологическим методам определения активности гепарина относятся методы измерения времени свертывания 23 цельной крови, времени свертывания после рекальцификации и активированное время свертывания крови. Принцип данных методов заключается в регистрации удлинения времени образования сгустка под действие АТ III, способного инактивировать в комплексе с гепарином активность сериновых протеаз каскада свертывания крови. Хронологически эти методы были применены в клинической лабораторной практике первыми; их общеизвестность и простота обуславливает их преимущества. Однако все эти методы не специфичны, так как на их результаты влияет не только наличие гепарина, но и состояние отдельных звеньев каскада свертывания крови. Более специфичными скрининговыми тестами для определения гепарина являются тромбиновое время и АЧТВ. Необходимо отметить, что эти методы существенно различаются по своей чувствительности к гепарину. Из них наиболее распространен метод АЧТВ, так как его чувствительность практически подчиняется линейной зависимости в пределах активностей гепарина, характерных для терапевтической области.

Принцип метода. При добавлении стандартной дозы гепарина к плазме крови тромбиновое время удлиняется в зависимости от содержания в ней антитромбина III и компонентов, блокирующих действие гепарина (белки "острой фазы", фосфолипидные мембраны и др.). По степени удлинения тромбинового времени рассчитывают антитромбиновый резерв плазмы (АРП) судят об индивидуальной достаточности антикоагулянтного эффекта гепарина.

Состав набора:

1. Тромбин человека (активность 500 NIH ед) - 1 фл.

2. Гепарин (сухой) - 1 фл.

3. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл - 1 фл.

Набор рассчитан на проведение 100 определений.

Нормативные показатели: В норме АРП составляет 80-120%.

5. Участие в контроле качества

Точность техники анализа можно контролировать, исследуя пробы специального контрольного материала. Контрольный материал может быть изготовлен в относительно больших количествах, что позволяет применять его сразу во многих лабораториях, обеспечивая в течение длительного времени единство измерения. Образцы контрольного материала готовятся идентичными определяемым веществам, что уменьшает погрешности, обусловленные несоответствием образцов и анализируемых проб.

Виды контрольных материалов

Водные стандарты.

Слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Сыворотка, приготовленная промышленным путем с неисследованным и исследованным содержанием компонентов.

Для контроля сходимости и воспроизводимости не нужно знать номинальные величины компонентов в контрольном материале. Поэтому используют сыворотку с неисследованным содержанием компонентов. Это может быть сыворотка, изготовленная промышленным путем или слитая сыворотка, приготовленная в лаборатории.

Под контролем качества работы клинико-диагностических лабораторий понимают систему мер, направленных на количественную оценку точности, воспроизводимости, правильности определений параметров метаболизма в организме. Сущность контроля качества лабораторных исследований состоит в сопоставлении результатов диагностических исследований проб биологических жидкостей, производимых в лаборатории, с результатами исследований контрольных материалов и в измерении величины отклонения.

Цель контроля качества работы лабораторий

Устранение систематических ошибок и сведении до минимума случайных ошибок внутри лаборатории.

Достижение оптимальных стандартных условий исследования биологических жидкостей во всех лабораториях.

Для этого контроль качества должен:

Быть систематическим (по единым правилам, повседневным, объективным). Охватывать все области измерения (норма, патология).

Производиться в реальных условиях работы клинико-диагностических лабораторий.

Критерии контроля качества измерений:

Воспроизводимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполненных в различных условиях (в разное время, в разных местах).

Точность - качество измерения, отражающее близость результатов к истинному значению измеренной величины.

Правильность - качество измерения, отражающее близость к нулю систематических погрешностей в их результатах, т.е. соответствие среднего значения результатов измерений истинной величине измеряемого компонента.

Сходимость - качество измерения, отражающее близость друг к другу результатов измерений, выполняемых в одинаковых условиях (параллельные пробы).

6. Утилизация отработанного материала

Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов используют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью: «Опасные отходы - «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.

7. Оформление документации

В биохимической лаборатории обязательному заполнению подлежат:

1. Журнал приема биоматериала.

2. Журнал учета количества выполненных анализов в лаборатории

3. Журнал регистрации результатов исследования.

4. Журнал учета спирта.

5. Журнал учета сильнодействующих и ядовитых веществ.

6. Журнал учета проведения внутрилабораторного контроля качества.

8. Анализ результатов

В полученном анализе результатов должны быть указаны:

1. ФИО пациента

2. Дата рождения, возраст

3. Дата проведения анализа

4.Результаты исследования биохимического анализа крови, мочи, СМЖ.

5. ФИО и подпись МЛТ, печать.



17 день. Исследование гемостаза

1. Определение фибриногена

Принцип метода

Измеряется время свертывания разбавленной в 10 раз цитратной плазмы крови при добавлении избытка тромбина. В этой системе время образования сгустка фибрина зависит только от концентрации в плазме фибриногена, определяемой по калибровочному графику разведений плазмы-калибратора с установленным содержанием фибриногена.

Состав набора

1. Тромбин человека, лиофильно высушенный (2 мл) - 8 флаконов;

2. Плазма-калибратор, лиофильно высушенная (1 мл) - 1 флакон;

3. Буфер имидазоловый концентрированный (5 мл) - 1 флакон.

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

Коагулометр любого типа с набором пластиковых кювет; центрифуга лабораторная;

пипетки полуавтоматические одноканальные переменного объема, 50-200 мкл и 200-1000 мкл;

пробирки пластиковые вместимостью 10 мл и 3,8% 3-х замещенный цитрат натрия 5,5-водный (0,109 М) или

вакуумные системы для взятия крови с 3,2% 3-х замещенным цитратом натрия 2-водным (0,109 моль/л);

вода дистиллированная;

мерный цилиндр;

перчатки медицинские диагностические одноразовые.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Вид анализируемого биологического материала Набор реагентов Фибриноген-тест предназначен для определения концентрации фибриногена в плазме человеческой крови. Образцы плазмы крови для анализа не должны быть гемолизированы, содержать сгустки, примесь эритроцитов, не должны контактировать со стеклянной поверхностью. Процедура получения биологического материала Венозную кровь отобрать в пластиковую пробирку с 3,8% (0,109 моль/л) цитратом натрия в соотношении 9:1 или в вакуумные системы для взятия крови с 3,2% (0,109 моль/л) цитратом натрия, центрифугировать при комнатной температуре (18-25С) в течение 15 мин при 3000 об/мин (1200 g). Плазму крови непосредственно после получения или анализируют сразу, или помещают во флаконы с плотно закрывающимися крышками и замораживают при температуре не выше -20°С.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

Рабочий буферный раствор. Буфер имидазоловый концентрированный развести в 20 раз (содержимое флакона перенести в мерную емкость, довести до 100 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать). Рабочий буферный раствор хранить при температуре +2-8С не более 1 месяца. Тромбин для определения фибриногена. Тромбин человека, лиофильно высушенный с активностью около 50 МЕ/мл. Внести во флакон с лиофильно высушенным тромбином 2 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при покачивании. Реагент готов к проведению анализа через 20 минут после разведения. Для работы на автоматических коагулометрах IL, серий АСL, внести во флакон с тромбином 2 мл физиологического раствора.Раствор плазмы-калибратора. Во флакон с плазмой-калибратором внести 1 мл дистиллированной воды, растворить при осторожном покачивании. Раствор готов к проведению анализа через 20 минут после разведения.

ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведение анализа на автоматическом коагулометре

Выбрать на коагулометре программу для определения фибриногена по методу Клаусса.

Поместить флаконы с приготовленными реагентами в соответствующие ячейки коагулометра.

Поместить контрольные и исследуемые образцы плазмы в соответствующие ячейки коагулометра.

Запустить программу измерения.

Считать результаты.

Приготовить следующие разведения плазмы-калибратора:

Пробирка, №1234

Содержание фибриногена в плазме-калибраторе, г/л

2АА 0,5А 0,25А

Рабочий буферный раствор, мл 0,8 0,5 0,5 0,5

Раствор плазмы-калибратора, мл 0,2

Перемешать и перенести в пробирку, мл 0,5 - 0,5 - 0,5

*А - содержание фибриногена в плазме-калибраторе указано в паспорте на набор. Проведение анализа Исследуемую плазму больного развести рабочим буферным раствором в 10 раз.

Внести в кювету анализатора:Объем

Разведенная плазма-калибратор (исследуемая), мкл100

Инкубировать при 37°С точно 2 минуты

Тромбин для определения фибриногена, мкл50

НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ

1,8- ,5 г/л

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

Снижение концентрации фибриногена наблюдается при:

- врожденном дефиците фибриногена (афибриногенемия, гипофибриногенемия, дисфибриногенемия),

- при ДВСсиндроме,

- тяжелых поражениях печени,

- острых фибринолитических состояниях,

- злокачественных опухолях и при лечении фибринолитиками.

Повышение концентрации фибриногена наблюдается при-гиперфибриногенемии,

- инфекционных заболеваниях,

- при тромбозах и тромбоэмболиях, в том числе у больных инфарктом миокарда,

- ишемическим инсультом,

- в последние месяцы беременности,

- после хирургических операций,

- при воспалительных процессах,

- при заболеваниях почек.

2. Определение растворимых фибринмономерных комплексов

Принцип метода Тест основан на оценке времени появления в исследуемой плазме хлопьев фибрина после добавления в нее о-фенантролина. Скорость их образования зависит от концентрации РФМК.

Состав набора О-фенантролин - 100мг/флакон - 4 флакона Положительный контроль - 1 мл/флакон - 1флакон Отрицательный контроль - 1 мл/флакон - 1флакон.

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

Центрифуга лабораторная;

секундомер;

осветитель для микроскопа;

лупа;

пипетки вместимостью 0,1; 1,0 и 10,0 мл;

пробирки пластиковые или стеклянные;

вакуумные системы для взятия крови с 3,2% 3-х замещенным цитратом натрия 2-водным (0,109 моль/л);

вода дистиллированная;

перчатки резиновые хирургические.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Вид анализируемого биологического материала Набор реагентов РФМК-тест предназначен для определения концентрации растворимых фибрин-мономерных комплексов в плазме крови человека. Образцы плазмы крови для анализа не должны быть гемолизированы, содержать сгустки, примесь эритроцитов, не должны контактировать со стеклянной поверхностью.

Процедура получения биологического материала:

Венозную кровь отобрать в пластиковую пробирку с 3,8% (0,109 моль/л) цитратом натрия в соотношении 9:1 или в вакуумные системы для взятия крови с 3,2% (0,109 моль/л) цитратом натрия, центрифугировать при комнатной температуре от плюс 18 до плюс 25С в течение 15 минут при 3000 об/мин (1200g).

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

Рабочий 0,78%-ый раствор о-фенантролина. Взвесить на аналитических или торсионных весах 78 мг о-фенантролина и растворить в 10 мл дистиллированной воды при осторожном покачивании. Перед использованием раствор с о-фенантролином нужно выдержать при комнатной температуре в течение 20 минут. Положительный контроль. Внести во флакон 1,0 мл дистиллированной воды, слегка покачивая в течение 5 минут до полного растворения. Готов к проведению анализа через 15 минут после приготовления. Использовать в течение 4 часов. Возможно однократное замораживание при -200С и хранение в течение 2 месяцев. Отрицательный контроль. Внести во флакон 1,0 мл дистиллированной воды, слегка покачивая в течение 5 минут до полного растворения. Готов к проведению анализа через 15 минут после приготовления. Использовать в течение 4 часов. Возможно однократное замораживание при -200С и хранение в течение 2 месяцев.

...