Применение прогестагенов и их сочетаний при гипофункции яичников у коров-первотелок

Оральное введение прогестагенов имеет ряд недостатков, связанных с неудобством дозировки препарата, трудоемкостью ежедневного введения в корм и затрудненным контролем за обработкой.

Кроме того, было установлено, что длительная обработка прогестероном приводит к уменьшению процента стельности ввиду неблагоприятных изменений во внутривлагалищной среде, которая затрудняет транспорт спермы (Smith J. F., Allison A. J., 1971), снижает число сокращений миометрия в направлении яйцеводов (Hawk H. W., Есhternkamp S. E., 1973). У ряда животных не сразу понижался уровень прогестерона в крови, возможно, из-за накопления экзогенного гестагена в организме, что также приводило к снижению оплодотворяемости (Hansel W. et al, 1978).

Выше перечисленные причины побудили к поиску других способов введения прогестагенов в организм. Норгестомет является одним из синтетических аналогов прогестерона, его вводят с подкожными силастиковами имплантантами. Имплантант помещают под кожу уха на 9 дней. Во время имплантации делают внутримышечную инъекцию 5 мг эстрадиола валериата, действующего как лютеолизин, в комбинации с введением 3 мг норгестомета (Mauleon P., 1974; Wiltbank J. N., Gonzalez-Padilla E., 1975).

Имплантанты норгестомета также используют в комбинации с ПГ F2 (De La Sota R. L. et at., 1993). За рубежом широкое распространение получила схема для синхронизации и стимуляции охоты «Synchrо-Mate B», включающая комбинированное применение ушного имплантанта норгестомета (6 мг) и после его удаления на девятый день введение 5 мг эстрадиола валериата. Приход в охоту при этом колеблется от 77 до 100% при оплодотворяемости от 33 до 68% (Wiltbank J. N. and Gonzalez-Padilla E., 1975; Odde K. G., 1990).

Интересно использование внутривагинального устройства выделяющего прогестерон (ПРИД) (Roche J. F., 1975; Webel S. K., 1976). ПРИД оставляется и находится внутри влагалища коровы в течение 7-12 дней. Он представляет собой спираль из нержавеющей стали, покрытую слоем инертного силастика, который пропитан 1,55 мг прогестерона. Желатиновая капсула, содержащая 10 мг эстрадиола бензоата помещена с внутренней стороны спирали ПРИД. Эстрадиол бензоат в желатиновой капсуле быстро всасывается через стенку влагалища в кровь и воздействует как лютеолитическое вещество. Прогестерон выделяется из силастика в течение всего периода обработки.

Удаление устройства через 7-12 дней приводит к падению концентрации прогестерона, как при естественном лютеолизе, и корова приходит в охоту 48-72 часами позже и осеменяется в фиксированное время.

В настоящее время для интравагинального введения прогестерона используются устройства, состоящие из нейлонового основания и силиконового эластомера включающего в себя 1,9 г прогестерона. (Macmillan K. L., Peterson A. J., 1993)

Lynch P. R. et al. (1999) добивались повышения оплодотворяемости используя интравагинальные введения прогестерона в течении 10 дней начиная со второго - третьего дня полового цикла в комбинации с инъекцией Гн-РГ на 12 - 13 день.

Применение внутривлагалищных устройств имеет свои неудобства, связанные с трудоемкостью введения и удаления. Кроме того, часть животных теряет эти устройства, что снижает эффективность их применения.

В связи с этим, возникла необходимость поиска других способов его введения в организм и создания синтетических препаратов со сходными свойствами. Хорошие результаты были получены при внутримышечном и подкожном введении различных прогестагенов.

В научно-производственных опытах Bush W. и др., (1972) изучалось применение хлормадинона на 4100 половозрелых телках. Хлормадинон вводили животным в масляном растворе в дозе 20 мг в течение 18 дней. В период дачи прогестагена проявления охоты у животных не наблюдали, а на 4 - 5-й день после прекращения дачи препарата у всех телок отмечена охота, а в течение 5 - 7-го дней происходила овуляция, которую выявили ректальной пальпацией яичников. Оплодотворяемость составила в среднем 60%.

Исследователи пытались удлинить действие прогестерона и его производных, используя различные пролонгаторы. В экспериментах Wagner J. F. и др. (I960) в масляный раствор прогестерона добавляли 0,3%-ный раствор крахмала, что увеличивало время всасывания гормона на 13-18 суток.

Логинова Н.В. и др. (1966) установили, что добавка к 2%-ному масляному раствору прогестерона сыворотки крови овец или коровьего молока удлиняет период всасывания гормона до 6-дней.

В нашей стране синтезированы прогестагены, которые при парентеральном введении обладают пролонгированным действием, например, 17-КОП, диамол (Прокофьев М. И., 1983).

Продление действия стероидных производных осуществляется превращением (ацетилированием) гидроксистероидов в эфиры жирных кислот (уксусной и особенно капроновой). Препараты этого типа проявляют прогестагенное действие в течение 10 или более суток после однократного парентерального введения. Это позволяет вводить их более редко.

Например, в опытах Прокофьева М. И. (1977) был испытан 17- оксипрогестерон-капронат (17-КОП), которым можно вызывать удовлетворительную синхронизацию охоты путем однократного парентерального введения 1500 мг препарата. Им был предложен для практического применения метод контролирования половой функции основанный на однократном подкожном введении эмульсии оксипрогестерона капроната. Эмульсия создает в месте инъекции депо прогестагена, который медленно всасываясь ингибирует циклическую секрецию гонадотропинов и предотвращает овуляцию в течение 12-17 дней после инъекций.

Применение прогестерона создает эффект лютеальной фазы полового цикла (Ramirez-Godinez J. A. et al, 1981) и вызывает изменение частоты импульсов ЛГ способствующее сохранению фолликулов (Bergfeld E. G. et al., 1996; Taft R. A. et al.,1996). Вместе с тем, методы регуляции половой функции только с помощью прогестагенов имели существенный недостаток, после осеменения в синхронизированную охоту наблюдали значительные изменения оплодотворяемости (Hansel W., 1967). Как правило, в синхронизированную охоту беременными становилось на 10 - 15% животных меньше, чем в спонтанную.

Применение прогестагенов для индуцирования овуляции после отела приводило к различным результатам. Некоторые авторы сообщали о задержке наступления овариальных циклов, а у других применение прогестагенов, с или без эстрогенов, сокращали период до первой овуляции. Однако оплодотворяемость в индуцированный эструс была неизменно ниже, чем в спонтанную (Foote, Hunter, 1964; Saiduddin S. et al., 1968; Patterson D. J. et al., 1989).

2.3.3 Комплексное применение прогестагенов с другими гормональными препаратами

С целью индукции овуляции и овариального цикла у коров после отела наряду с прогестагенами использовались экзогенные гонадотропины, эстрогены, простагландины и гонадотропный рилизинг-гормон.

Результаты были очень различны, например, было установлено, что инъекция одного миллиграмма эстрадиола может индуцировать эструс у нециклирующих коров. Однако, использование эстрогенов для этой цели не было успешным, так как часто можно было наблюдать ановуляторный эструс. По данным Peters A. R. (1984), низкие дозы экзогенного эстрадиола способны вызвать предовуляторный пик подъема ЛГ и ФСГ в ранний послеотельный период, но наступление овуляции и последующих половых циклов не гарантировано.

За рубежом широкое распространение получили методы синхронизации охоты у коров и телок с использованием интравагинальных устройств выделяющих прогестерон или норгестомет. Так, применяя интравагинальные прогестерон - выделяющие устройства у коров (Fike K. E. et al., 1997) и телок (Johnson S. K. et al., 1997) в комбинации с введением эстрадиола-бензоата спустя 24 - 30 часов после удаления устройств (через 7 дней), авторы добились более высокого прихода в охоту и оплодотворяемости, чем при использовании этих устройств без эстрадиола. Их данные были подтверждены Lammoglia M. A. et al. (1998).

Lemaster J. W. et al., (1999) испытали несколько схем синхронизации и стимуляции охоты с использованием прогестаген - выделяющих устройств. В контроле эти устройства применялись в комбинации с простагландином (2 мг после выведения устройства), а в двух опытных - к этой комбинации добавляли эстрадиол (через 24 и 48 часов соответственно). Приход в охоту был выше в группах получавших эстрадиол, а наибольший - в группе получавшей эстрадиол через 24 часов после удаления прогестерон - выделяющих устройств.

Более успешные результаты были получены при использовании прогестагенов и простагландина F2. Lamb G. S. et al. (1997) при синхронизации охоты у телок с применением МГА и простагландина F2 получили 58,4% стельных животных после первого осеменения.

Forbes W. L. et al. (1997) для повышения оплодотворяемости и прихода животных в индуцированную охоту испытали два варианта комплексного применения Гн-РГ в дозе 100мг: в первом случае с Гн-РГ применялись ушные имплантанты норгестомета по 6 мг их удаляли через семь дней и вводили 25 мг простагландина F2, а во втором - через семь дней после введения Гн-РГ вводился только простагландин (25 мг). В группе получавшей норгестомет приход в охоту был больше на 22%, а стельность - на 9%.

Thompson K. E. et al. (1997) применяя норгестомет по такой же схеме получили в разных стадах от 51,5% до 72,2% стельных коров после осеменения в индуцированную охоту.

Doherty D. R. et al., (1998) сравнивали эффективность применения Гн-РГ и сочетания МГА с простагландином F2 на телках. Стельность после применения Гн-РГ составила 47%, а после применения МГА в сочетании с простагландином - 58%.

2.4. Гипофункция яичников. Причины возникновения

Гипофункция яичников является обратимым эндокринным заболеванием, которое внешне проявляется отсутствием половой цикличности. При пальпации яичники мелкие, однородной плотной консистенции, с гладкой или шероховатой поверхностью, лишенной фолликулов и желтых тел. Ригидность матки выражена слабо (Шипилов В.С., Семиволос А.М., 1986; Власов С.А., 1991; Клинский Ю.Д., Чомаев А.М., 1999). По степени развития различают начальную, среднюю и глубокую формы гипофункции яичников.

При гистологическом исследовании наблюдаются запустевшие кровеносные и лимфатические сосуды с гофрирообразными просветами. Большая часть граафовых пузырьков, преимущественно мелких и средних размеров, находится в состоянии облитерационной атрезии. (Шипилов В.С., Семиволос А.М.,1986).

Долженков В. М. (1983) исследовал кровь коров с гипофункцией яичников в течение 20-ти дней. Концентрация прогестерона, эстрадиола-17 и ЛГ в течение исследования не изменялись и находились на уровне их минимальных значений характерных для полового цикла.

Гипофункция сопровождается снижением уровня гематологических и биохимических показателей крови. Так, количество эритроцитов ниже нормы на 1,54 млн/мм3, гемоглобина - на 2,33 г%, общего белка - на 1,50 г%, нуклеиновых кислот - на 31,09 мг %, неорганического фосфора - на 0,44 мг%. Гипофункция сопровождалась достоверным снижением концентрации витаминов, активности каталазы, альдолазы, щелочной и кислотной фосфотазы, повышением аминотрансферазной активности (Воробьев Н. Н., 1980; Власов С. А., 1991; Леонов К., 2002).

Увеличение соотношения альбуминов и гаммаглобулинов к -глобулинам свидетельствует о напряженном состоянии иммунореактивной системы организма (Власов С. А., 1991). У коров в пробах крови при гипофункции яичников отмечают изменения характерные для стресса (Преображенский О. Н., 1993).

Большее количество животных с гипофункцией яичников в зимне-весенний период связано с воздействием стресс-факторов обуславливаемых технологией содержания (ограниченный моцион, сниженный уровень кормления, неудовлетворительные параметры микроклимата и др.). Кроме того, большое значение имеют индивидуальные параметры животного (продуктивность, возраст, упитанность). Кроме того, на функциональное состояние яичников большое влияние оказывают послеродовые эндометриты (Бахитов К. И., 1998).

Возникновение гипофункции в результате неудовлетворительного кормления обуславливается нарушением гормональной регуляции функции яичников. При низкой упитанности и вызванном этим кормовом анэструсе, концентрация ЛГ в крови снижена, хотя способность гипофиза выделять ЛГ в ответ на экзогенный Гн-РГ остается высокой. (Whisnant C. S. et al., 1985), что доказывает возможность применения гормональных способов регуляции функции яичников.

2.5. Применение прогестагенов при гипофункции яичников

По данным лаборатории эндокринологии ВГНИИЖа гипофункция яичников является самой распространенной причиной нарушения воспроизводительной функции коров. При беспривязном содержании коров гипофункция обнаруживается у 24% коров, а при привязном и беспрогулочном - до 63% (Клинский Ю. Д., Чомаев А. М., 1999).

Для восстановления функциональной активности яичников предлагалось множество методов как физиологического так и фармакологического воздействия. Физиологические методы включают активный моцион, массаж матки и яичников, использование быков-пробников и другие. Но все они эффективны лишь при начальной форме гипофункции поэтому их целесообразно применять в сочетании с гормональными методами регуляции (Шепилов В. С., Семиолос А. М., 1986; Чомаев А. М., 1990).

Одним из первых препаратов применявшихся для лечения гипофункции яичников был ГСЖК. Гонадотропин активирует морфогенную и сосудистую реакцию в соединительнотканной оболочке фолликула и вызывает гиперсекрецию гранулезы, обеспечивая созревание и овуляцию (Черемисинов Г. А., 1974). Рекомендованная доза ГСЖК для КРС по разным данным составляет 6 - 9 ИЕ на 1 кг массы тела. Наиболее часто однократная инъекция содержит 3 - 5 тысяч ИЕ. Приход в охоту при этом колеблется от 40 до 86%, при оплодотворяемости в индуцированную охоту 7 - 45,1% (Бахитов К. И., 1998; Воробьев Н. Н., 1980; Прокофьев М. И. и др., 1983; Власов С. А., 1991). Но при применении только ГСЖК часто приводило к образованию фолликулярных кист (Шипилов В. С., Семиволос А. М., 1986). Применение ГСЖК оправдано при начальной форме гипофункции, а при глубокой гипофункции, когда анафродизия наблюдается в течение 132 - 181 дня оно малоэффективно (Васин, 1978)

Наряду с ГСЖК был испытан ряд других биологически активных веществ, такие как витамины А, Е, тривит, гравогормон, ГН-РГ, карбохолин, а также их сочетания. Но, как правило, показатели прихода в охоту и оплодотворяемости были ниже, чем при комплексном применении этих веществ с гестагенами (Валюшкин К. Д., Гудков Ф. Д., 1978, 1980; Гавриков А. М., Калягин А., 1995; Абилов А. И. и др., 1995; Грига Э. Н., 1997).

Например, введение ГСЖК в дозе 3000 МЕ вызывало охоту у 44% животных, а при трехкратной инъекции прогестерона и последующем введении ГСЖК (3000 МЕ) охота наступала у 59,1% коров, а плодотворное осеменение наступало на 9,7 дня раньше. Когда вместо прогестерона применяли его синтетический аналог - амол, в охоту приходило 87,0%, а плодотворное осеменение наступало на 16,2 и 25,9 дня раньше, чем при комплексном применении прогестерона и ГСЖК или только ГСЖК, соответственно (Прокофьев М. И. и др, 1983).

Начало изучения влияния прогестерона у овец (Dutt R. H., Casida L. E., 1948) и коров (Ulberg L. C. et al., 1951) показало, что низкие дозы прогестерона увеличивают число зрелых фолликулов и повышают оплодотворяемость. При изучении биологического действия прогестерона выяснилось, что он не только подготавливает условия в матке для развития эмбрионов и регулирует продолжительность полового цикла, но и сенсибилизирует нервные центры к действию эстрогенов (Лопырин А. И., Логинова Н. В., 1948; Лопырин А. И., Логинова Н. В., 1956). Или, другими словами, стимулирующее действие эстрогенов на систему гипоталамус - гипофиз осуществляется на фоне предварительного действия прогестерона. Поэтому у нециклирующих животных, анэстральных овец и подсосных коров можно вызвать полноценный половой цикл только в том случае, если в применяемом методе предусмотрено введение прогестерона (Лопырин А. И., Логинова Н. В., 1956).

Бахитов К. И. (1998) для стимуляции функции яичников параэнтерально вводил 200 мг амола, на восьмой день обработки - 3000 ИЕ ГСЖК, а на 20-й день от начала стимуляции - дозу простагландина (эстуфалан). Приход в охоту составил 64,9 %, при стельности после первого осеменения 51,3%.

Схема обработки, сочетающая действие прогестагена, гонадотропина и простагландина, в настоящее время получила широкое распространение, так как обеспечивает наиболее физиологически полноценное действие. (Клинский Ю. Д., Чомаев А. М., 1999; Чомаев А. М. и др., 2002).

2.6. Роль матки в регуляции полового цикла

Матка имеет большое значение в нейрогуморальной регуляции процессов размножения. Раздражение матки вызывает сокращение или удлинение полового цикла в зависимости от стадии цикла в момент нанесения раздражения. (Hansel W., 1976)

После удаления матки (эктомии) вместе с шейкой у коров происходила персистенция желтого тела, но если были оставлены шейка и часть тела матки или часть одного из рогов, то циклирование не прекращалось, хотя наблюдались нарушения регулярности циклов (Ginther O. J., 1968).

Разрушая эндометрий у свиней и морских свинок, многие авторы добивались продления существования циклического желтого тела, также как и при полном удалении матки (Anderson L. L. и др., 1963; Awy L. и др., 1965). В 1930 году Kurzrok R. и Lieb C. C. установили, что семенная жидкость человека способствует попеременному сокращению или расслаблению миометрия в зависимости от времени физиологического цикла матки.

В 1935 г. Эйлер обнаружил интенсивное стимулирующее влияние семенной жидкости мужчины на сократительную способность гладкой мускулатуры. В последующих опытах он получил данные указывающие на принадлежность неизвестных биологически активных веществ к кислотам жирного ряда. Так как, по его предположению, они вырабатывались простатой, он назвал их простагландинами. Позднее они были выделены из различных тканей человека и животных.

В настоящее время различают шесть классов простагландинов (A, B, С, D, E, F), они имеют в своей структурной основе двадцать углеродных атомов и различаются положением гидроксильных остатков и кетогрупп, а также числом двойных связей в молекулах, обозначаясь по этому признаку цифрами 1, 2, 3. Различают еще и - по конфигурации девятой гидроксильной группы (Pace-Asciak С. и др., 1967; Carli S., Rudelli G., 1978)

Простагландины обнаружены практически во всех тканях человека и животных. Они оказывают влияние на эндокринную, репродуктивную, нервную, пищеварительную, дыхательную, сердечно-сосудистую и выделительную системы (Higgina C. B., Braunwald E., 1972). Механизм их действия на уровне клетки заключается в изменении секреции циклического аденозинмонофосфата на уровне мембран с одновременным освобождением Ca2+ из клеточных мембран и поступлением натрия внутрь клетки. Предшественниками простагландинов в биосинтезе являются жирные кислоты: арахидоновая, декосатетраэнолатовая, декосапентаэнолатовая. Hansel и соавторы установили, что лютеальная и фолликулярная ткани содержат ПГ-синтетазный ферментный комплекс, а арахидоновая кислота стимулирует синтез ПГF in vitro при инкубации срезов этих тканей (Hansel W. Et al., 1976).

Наиболее важным этапом в синтезе простагландинов является высвобождение жирных кислот из связанного состояния - из фосфоглицеридов и эфиров холестерина под действием фосфолипаз и ацилгидралаз. Продолжительность существования вновь синтезированных молекул простагландинов кратковременна, продукты обмена простагландинов выделяются из организма в основном с мочей и калом.

В 1966 году Babcock J. С. было установлено, что концентрация простагландина F2 увеличивается в матке к концу полового цикла и вызывает лютеолиз желтого тела. Это в последствии было подтверждено многими исследователями.

Pharris B. B. (1970) установил, что лютеолитическим действием обладают простагландины типа F2. Эти вещества секретируются тканями матки и через кровеносную систему яичников могут оказывать влияние на кровоснабжение желтых тел, что подтверждается инъекциями простагландина F2 крысам и кроликам, которые значительно уменьшали кровоснабжение матки и яичников. Такие же инъекции беременным овцематкам снижают лютеальную функцию яичников и плаценты, вызывая аборт. Позднее эти сведения подтвердили многие авторы (Ряженов В. В. и др., 1974; Sokolowski J. H., 1980).

Инъекция 500 мкг синтетического аналога ПГ F2 - эстрофана пяти телкам в середине лютеиновой фазы полового цикла приводила к снижению уровня прогестерона в сыворотке крови. Через 24 часа он снизился на 5,742,93 нг/мл до 0,160,36 нг/мл, через 72 часа - до 0,060,13 нг/мл (Kudlac E. et al., 1981). Известно, что простагландины воздействуют на вазоконстрикторы яичниковой артерии и непосредственно на клетки желтого тела, нарушая их питание. В последствие дегенеративные лютеальные клетки расплавляются протеолитическими ферментами лейкоцитов и рассасываются (Дьяконов Е. В. и др, 1982).

Ряженов В. В. с сотрудниками (1974) вводили ПГ F2 в вену крыс в дозе 2 мкг/кг, при этом наблюдалось снижение артериального давления на 10,2%, в дозе 5 мкг/кг - на 19,8%. При этом, снижение давления наступало сразу после введения ПГ F2 и продолжалось 40 - 50 секунд. В дозе 10 мкг/кг ПГ F2 вызывал двухфазный эффект - сначала снижал артериальное давление на 20,6%, а затем повышал на 12,1%.

Исследования Wilson L. R. и др. (1972) показали, что простагландины появляются в крови маточных вен в период регрессии желтого тела. Значительное увеличение концентрации простагландина F2 на 14-й день цикла по сравнению с другими днями подтверждает ключевое значение матки в регрессии желтого тела.

В конце эстрального цикла увеличивается выделение основного метаболита ПГ F2 - 15-кето, 13, 14-дегидро-ПГ F2 (Kindachl H. et al., 1981), это говорит о большой роли прогестерона в регуляции выделения ПГ F2, так как снижение концентрации прогестерона в крови в конце цикла является сигналом для начала секреции маточного ПГ F2. Добавление ПГ F2 к среде, перфузируемой через яичники человека, оказывало сосудосуживающий эффект. (Varda B. et al., 1982).

Вызывая регрессию желтого тела и снижая концентрацию прогестерона в крови, ПГ F2 разблокирует гипоталамо-гипофизарную систему и, тем самым, способствует увеличению концентрации гонадотропных гормонов в крови. Влияние простагландинов на гипоталамо-гипофизарную систему и функцию яичников доказано многими исследователями (Behrman H., 1979; Ford S. P. et al., 1981; Schamps D., Karg H., 1982).

В исследованиях Tam W. N. et al. (1980), на морских свинках установлено, что в фолликулах присутствуют рецепторы ПГ F2, которые участвуют в развитии фолликулов яичника. Кроме того, простагландины участвуют в транспорте яйцеклетки в яйцеводе (Verdugo P. et al., 1980).

На положительную роль простагландинов в механизме оплодотворения указывают также Darlinfg M. R. N. et al., (1982) и Rustichelli S. et al., (1982). Доказано участие простагландинов в стероидогенезе и передаче действия гормонов на клеточном уровне (Чомаев А. М. и др., 2002).

Простагландин F2 используется во многих схемах синхронизации охоты и индукции овариальной функции, но применение только простагландинов нецелесообразно, так как он воздействует только на животных имеющих желтые тела и оплодотворяемость при этом не превышает 50% (Lycy M. C. et al., ; Чомаев А. М., 1986; Larson L. L. and Ball P. J. H., 1992; Stevenson J. S. and Pursley J. R., 1994; Чомаев А. М. и др., 1997 и другие).

2.7. Заключение к обзору литературы

У нормально циклирующих коров яичники постоянно претерпевают циклические изменения. Фолликулы, которые достигают антральной стадии, т.е. содержат жидкость в своей полости, могут увеличиваться до созревания яйцеклетки и овуляции, или, как происходит в большинстве случаев рост их спонтанно прекращается и они регрессируют. Систему нейрогуморальной регуляции репродуктивных процессов схематично можно представить четырьмя уровнями: ЦНС (гипоталамус), гипофиз, яичники и матка. Их взаимодействие позволяет поддерживать гормональный баланс и циклическую активность яичников. Развитие фолликулов в частности и функция яичников в общем зависят от различных факторов окружающей среды способных влиять на гормональный фон организма. В любом случае, регуляция функции яичников осуществляется с участием гипоталамо-гипофизарной системы.

По данным многих авторов, функция яичников (особенно коров-первотелок) напрямую зависит от уровня молочной продуктивности и кормления. При повышении продуктивности происходит снижение оплодотворяемости. Установлена прямая корреляция между уровнем продуктивности в течение 120 суток после отела и сроками до первого эструса и овуляции (Бахитов К. И., Калашник Л. А., 1999 и др.).

Отрицательное влияние лактации на оплодотворяемость многие авторы объясняют отрицательным балансом энергии в рационе. Коровы - первотелки в большей степени чем многотельные зависимы от уровня кормления, так как их потребность в питательных веществах и энергии выше. Кроме того, на функцию яичников влияет воздействие стресс-факторов.

Ключевое значение при нарушении функции яичников играют гормоны гипофиза - ФСГ и ЛГ, а также эстрогены и прогестерон. Взаимоотношения гормонов гипофиза и гонад в регуляции полового цикла протекают по принципу “плюс-минус” взаимодействия (Завадовский М. М., 1939). Если гормон одной железы стимулирует другую, то гормон последней угнетает гормонообразование в первой. Нарушение соотношения этих гормонов может привести к дисфункции яичников, одной из разновидностей которой является гипофункция яичников. Наибольшее распространение она имеет в зимне-весенний период, особенно среди коров-первотелок. Это обусловлено особенностями их обмена веществ и реактивности.

Для лечения гипофункции яичников было испытано множество методов, но наиболее эффективными были методики с применением прогестерона и его синтетических аналогов - прогестагенов. Недостатком применения прогестагенов является низкая оплодотворяемость в индуцированную охоту. С целью ее повышения прогестагены применяются в комплексе с другими биологически активными веществами воздействующими на разные уровни регуляции воспроизводительной функции. Эффективность применения этих сочетаний значительно варьирует. Применение прогестагенов в разных дозах также дает разную результативность восстановления репродуктивной функции.

Поэтому, разработка оптимальных схем применения гормональных препаратов при лечении гипофункции яичников является важной задачей, позволяющей повысить рентабельность молочного животноводства за счет сокращения сервис-периода, увеличения выхода молока и телят в течение года и сокращения расхода кормов за дни бесплодия.

III. Собственные исследования

3.1. Материалы и методика исследований

Исследования проводили в Московской области на базе ГПЗ «Большое Алексеевское» Ступинского района и Белгородской области на базе колхоза - племзавода имени Фрунзе. Опыты проводились в пастбищный и зимне-стойловый периоды с декабря 2000 г. по июль 2003 года. Всего за этот период в опытах было задействовано 670 коров-первотелок.

3.1.2 Характеристика колхоза - племзавода имени Фрунзе

Колхоз организован в 1931 году. Центральная усадьба хозяйства находится в селе Бессоновка, расположенном в 32 км от районного и областного центра - г. Белгорода, в юго-западной части Белгородской области. Хозяйство является многоотраслевым. Климатические условия позволяют выращивать все основные, возделываемые в области, кормовые культуры. Имеется хорошо развитая сеть дорог с асфальтовым покрытием внутрихозяйственного и районного значения. В 7 км от центральной усадьбы расположена железнодорожная станция Долбино.

Климат умеренно континентальный, среднегодовая температура находится в пределах +6 - +7°С. Средняя температура в январе составляет -8°С, в июле - плюс 20°С. Среднегодовое количество осадков 500-510 мм. Засухи и суховейные явления 2 - 3 года в десятилетие. Почвы, в основном, представляют собой типичные и выщелоченные чернозёмами.

Общая площадь землепользования 16848 га. Из них сельхозугодия составляют 15449 га, в т.ч. пашня - 14043 га, сенокосы - 52 га, пастбища - 35 га. Кормовые угодья расположены преимущественно на землях с уклоном 1° и более. В культурно-техническом отношении площадь сенокосов и пастбищ распределяется следующим образом: чистые - 69%, заросшие лесом и кустарником - 18%. Животноводство представлено свиноводством и молочным скотоводством.

В 2002 г. всего в хозяйстве имелось 2600 коров черно-пестрой породы со средним удоем 5000 кг молока в год. Поголовье размещается на 3-х комплексах: Бессоновский - 1060 голов, Щетиновский - 785 голова и Салахинский - 755 голов.

Технология содержания - беспривязная боксовая. Доение осуществляют в доильном зале на установках типа “Тандем”. К 2002 году продуктивность коров, в сравнении с 1999 годом, увеличилась на 14,4%, составив 5595 кг. Содержание жира в молоке находится на уровне 3,73 - 3,81%. В 2001 - 2002 года выход телят на 100 коров составил 91 и 92 головы, соответственно.

Сохранность молодняка довольно высокая - падёж молодняка составляет 5-8%. Среднесуточный привес по КРС в 2002 году составил 622 г. (в 2001 году - 597 г.).

Ввод первотёлок в стадо находится на уровне около 30% в год т.е., практически каждые три года стад обновляется, что не позволяет полностью проявить генетически заложенный потенциал продуктивности.

Таблица 2. Ввод первотелок в течение года (2002 г.)

Комплекс	Всего коров, гол.	Ввод первотелок, гол.	% к общему поголовью
Бессоновка	1060	307	29
Щетиновка	785	235	30
Салахи	755	249	33
Всего по хозяйству	2600	791	30,4

Потребность скотоводческой отрасли колхоза в производственных площадях удовлетворена полностью. Бессоновский и Щетиновский комплексы работают по технологии ВГНИИЖа - щелевые полы, подпольное хранение навоза, доение в доильном зале на установке “Тандем”, ленточная раздача кормов, отёлы проводят в родильных отделениях.

На Салахинском комплексе - применялась павильонная застройка из лёгких конструкций, покрытых двумя слоями полиэтиленовой плёнки, раздача кормов мобильная, уборка навоза мобильная, корма готовят в кормоцехе. Доение в родильном зале на установке “Тандем”.

Рационы кормления на всех трех комплексах разработаны с учетом требований ВГНИИЖа (табл.2):

Таблица 3. Рационы дойных коров

Наименование корма	Кол-во кормов, кг	Корм. ед.	Сухое вещ-во	Перева-римый протеин	Сахар г	Са, г	Р, г	Каро-тин, мг
Норма	-	13,1	17,5	1310	1180	94	86	590
Силос кукурузный	20	4,2	4,6	280	100	28	8	400
Свекла кормовая	15	1,8	1,8	90	840	6	4	-
Солома ячменная	4	1,2	3,3	50	9	13	3	-
Сено люцерновое	1	0,4	0,8	100	20	15	4	50
Комбикорм	3,5	3,5	3,1	386	70	12	31	-
Патока	0,5	0,3	0,4	3	270	1	1	-
Диамоний фосфат	0,05	-	-	-	-	12	-	-
Соль поваренная	0,07	-	-	-	-	-	-	-
ИТОГО		11,4	14,0	909	1309	75	63	450
% ОБЕСПЕЧ.	-	87	80	69	110	80	95	76
Разница	-	-13	-20	31	+10	-20	-5	-23

3.1.3 ГПЗ «Большое Алексеевское»

ГПЗ «Большое Алексеевское» основан в 1918г., расположен в Ступинском районе Московской области, в 45 км от районного центра - г. Ступино и в 100 км от г. Москвы.

Хозяйство имеет достаточно развитую сеть дорог с асфальтовым покрытием местного и федерального значения, круглогодично обеспечивающими связь с пунктами сдачи с/х продукции и административными центрами.

Среднегодовая температура находится в пределах 3 - 5°С. средняя температура в январе - минус 11°С, в июле - плюс 17°С. Количество осадков в среднем за год составляет 600 - 650 мм. На 1. 01. 2002 г. хозяйство имело 1200 коров черно-пестрой породы. Дойное поголовье крупного рогатого скота размещено в четырехрядных типовых коровниках, рассчитанных каждый на 400 голов.

Молодняк крупного рогатого скота размещается в помещениях не соответствующим зоогигиеническим нормативам содержания молодняка. Все технологические процессы (удаление навоза, раздача кормов, доение, поение) механизированы.

Среднесуточные рационы кормления коров представлены в таблице 4:

Таблица 4. Рацион дойных коров ГПЗ «Большое Алексеевское»

Наименование корма	Количество кормов, кг	Корм. ед	Сухое вещество	Переваримый протеин	Сахар, г	Са, г	Р, г	Каротин, мг
Норма	-	13,1	17,5	1310	1180	94	86	590
Силос кукурузн.	35	6	8,75	490	210	49	14	700
Сено люцерновое	3	1,2	2,4	300	60	51	6	147
Жмых	1	1,1	-	396	-	-	-	-
Комбикорм	3	3,06	2,52	375	78	23,4	30	-
Патока	1,5	0,9	1,2	90	810	4,8	0,3	-
Соль поваренная	0,1	-	-	-	-	-	-	-
Итого	-	12,26	14,87	1651	1158	128,2	50,3	847
% обеспеч.	-	94	85	126	98	136	58	144
Разница	-	-6	-15	+26	-2	+36	-42	+44

3.1.4 Исследование крови

Пробы крови для исследований у коров брали путем пункции из яремной вены. Концентрацию гормонов в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для получения сыворотки, в центрифужную пробирку брали 1 мл крови, прогревали кровь 1 час при температуре 37°С, для образования сгустка, полученную сыворотку центрифугировали в течение 10 мин при 1500-3000 об/мин. Сыворотку крови получали в лаборатории эндокринологии ВИЖа. Концентрацию прогестерона определяли в ГУ Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории Департамента ветеринарии МСХ РФ.

В основе определения прогестерона в биологических жидкостях животных лежит конкурентный вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Принцип метода основан на конкуренции между адсорбированным на поверхности лунок планшета прогестероном и свободным прогестероном (в калибровочной пробе или анализируемом образце) за активные центры связывания меченых пероксидазой антител к прогестерону. В результате иммуноспецифической реакции между антителами к прогестерону и самим прогестероном, содержащихся в пробах (стандарты и образцы) и на поверхности лунок планшета образуются комплексы антитело-прогестерон. Комплекс антиген-антитело, не связанный с поверхностью планшета, удаляют путем промывки.

В результате ферментативной реакции пероксидазы с перекисью водорода субстратного раствора происходит окрашивание 3,3',5,5'-тетраметилбенэидина (ТМВ) в синий цвет. Интенсивность окраски обратно пропорциональна содержанию прогестерона в анализируемом образце.

В набор для определения концентрации прогестерона (ИФА-ПРОГ.б.) входят следующие компоненты:

Планшет плоскодонный из прозрачного пластика для иммуноферментного анализа цельный (96-луночный) или стриповый (6 стрипов по 16 лунок каждый или 12 стрипов по 8 лунок каждый) с адсорбированным конъюгатом -1,2 или 5 шт.

Стандарты прогестерона калиброванные, лиофилизированная аморфная масса желтого цвета (сыворотка):

а) стандарт, содержащий 0 нМ/л - 1 (2) фл.

б) стандарт, содержащий 0,3 нМ/л -1 (2) фл.

в) стандарт, содержащий 1,0 нМ/л - 1 (2) фл.

г) стандарт, содержащий 3,0 нМ/л -1 (2) фл.

д) стандарт, содержащий 10,0 нМ/л - 1 (2) фл.

е) стандарт, содержащий 30,0 нМ/л - 1 (2) фл.

ж) образец контрольный, содержащий 7,0 нМ/л прогестерона -1,2 или 5 фл.

3. Конъюгат антител к прогестерону и пероксидазы из корня хрена (жидкость красного, желтоватого цвета или бесцветная - 0,3 - 15 мл ). - 1 фл.

4. Буфер №1, бесцветная жидкость - 0,3, 0,6 или 1,5 мл (сыворотка крови) - 1 фл

5. Буфер №2, жидкость красного, желтоватого цвета или бесцветная - 0.3 - 15 мл - 1 фл.

6. Фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБР) - натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный; калий фосфорнокислый однозамещенный; натрий хлористый (рН 7,3 ±0,1); 20-кратный концентрат с детер-гентом, бесцветная жидкость- 15, 30 или 75 мл. - 1 фл.

7. Тетраметилбензидин (ТМБ) - бесцветная прозрачная жидкость - 2,2, 4,4 или 11мл. - 1 фл.

8. Субстратный раствор, бесцветная прозрачная жидкость-8,8, 17,6 или 44 мл - 1 фл.

9. Стоп-реагент (4-х нормальная серная кислота), бесцветная прозрачная жидкость - 12, 24 или 60 мл - 1 фл..

Для постановки ИФА использовались:

Одно- и многоканальные автоматические пипетки со сменными наконечниками разных объемов;

Вибротермостат с температурой нагрева от 20°С до 45°С;

Холодильную камеру с температурой -18°С;

Промывающее автоматическое устройство;

Спектрофотометр с вертикальным лучом и длиной волны 450 нм;

Водяная баня;

Оптическую плотность (ОП) растворов в лунках с контрольным и анализируемыми образцами после остановки ферментативной реакции измеряли на спектрофотометре «Униплан» фирмы ЗАО «ПИКОН» при длине волны 450 нм.

Расчет конечной концентрации гормона проводится с учетом степени концентрирования анализируемого образца в процессе подготовки проб. Для сыворотки крови коров и нетелей результат, полученный методом ИФА, является окончательным.

3.1.5. Описание применявшихся препаратов

В научно-производственных опытах использовали следующие препараты:

1. Фоллигон - в его состав входит гонадотропин сыворотки крови жеребых кобыл. Выпускается в лиофилизированном виде. Представляет собой белый кристаллический порошок, расфасованный во флаконы по 1000, 5000 и 6000 МЕ. Производится в Голландии. Для приготовления раствора препарата применяется растворитель во флаконах.

Действующим началом является комплексный гликопротеин - гонадотропин, получаемый из сыворотки крови жеребых кобыл. Гонадотропин сыворотки крови жеребых кобыл проявляет активность фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов. У самок гонадотропин сыворотки крови жеребых кобыл стимулирует рост и созревание фолликулов яичников. У самцов - стимулирует развитие интерстициальной ткани тестикулов и спермиогенез.

2. Фоллимаг - гонадотропин сыворотки крови жеребых кобыл. Представляет собой очищенную фракцию крови, обладающую гонадотропной фолликулостимулирующей и лютеинизирующей активностью. У самок гонадотропин сыворотки крови жеребых кобыл стимулирует рост и созревание фолликулов яичников. У самцов - стимулирует развитие интерстициальной ткани тестикулов и спермиогенез.

Готовится из крови клинически здоровых жеребых кобыл 3 - 12 летнего возраста. Представляет собой стерильный аморфный порошок серовато-кремового или серовато-желтого цвета, без запаха. Хорошо растворим в физиологическом растворе или воде для инъекций с образованием светло-желтого раствора. Препарат выпускается расфасованным во флаконы вместимостью 5, 10 см3, закрытые резиновыми пробками и закатанные алюминиевыми колпачками. Гормональная активность препарата во флаконе 500 ИЕ и 1000 ИЕ (ИЕ - интернациональная единица), что соответствует 1000 МЕ и 2000 МЕ (МЕ - мышиная единица). Каждый флакон снабжен этикеткой в соответствии с ТУ. Флаконы упакованы в картонные коробочки. Каждая упаковка маркирована согласно нормативной документации и снабжена наставлением по применению препарата. По согласованию в установленном порядке допускаются другие виды фасовки, обеспечивающие сохранность и качество препарата. Препарат производит ЗАО «Мосагроген», Россия.

3. Эстрофан - препарат содержит 0,25 мг клопростенола (в виде натриевой соли) в 1 мл раствора. Клопростенол является синтетическим функциональным аналогом простагландина F2, обладает специфическим лютеолитическим действием. Его аппликация в лютеальной фазе эстрального цикла вызывает исчезновение желтого тела и, таким образом, создает предпосылки для наступления течки и овуляции. Наиболее пригодное время для искусственного осеменения составляет около 76 часов после введения. Производится в Чехии.

4. Сурфагон - синтетический нанапептид, аналог гонадотропин-рилизинг гормона ЛГ-РГ-люлиберина. Выпускают в виде стерильного раствора в 0,9% растворе хлорида натрия с консервантом нипагином. В 1 мл препарата содержится 5 мкг действующего вещества. Флаконы по 10 мл.

Сурфагон стимулирует выделение гонадотропинов гипофиза в кровь с максимумом через 2 -3 часа после введения. Повышенное содержание гонадотропинов в крови сохраняется в течение 4 - 5 часов после введения. В отличие от естественного люлиберина биологическая активность сурфагона в 50 раз выше, что позволяет использовать этот препарат в микродозах и краткими курсами. Сурфагон более медленно, чем естественный люлиберин разрушается под действием ферментов, что обеспечивает его более сильное биологическое действие на гонадотропную функцию гипофиза. В течение 3 часов после введения пептид распадается на аминокислоты и выводится из организма.

6. В опытах использовались 4 прогестагена: диамол, бутагест, ипогест и ипогестрол. Структурные формулы использованных прогестагенов и их предшественников представлены ниже:

Все прогестагены применялись в виде масляного раствора. Применявшиеся дозы зависели от вида прогестагена и конкретного опыта. Диамол применялся по 20, 30, 50, 70 и 100 мг; бутагест, ипогест и ипогестрол - по 10, 15, 20, 25 и 30 мг на голову, однократно. Способ введения - внутримышечно в область крупа.

3.2. Результаты собственных исследований

Комплексное применение прогестагенов с гонадотропином СЖК и

простагландином при гипофункции яичников.

Нашей задачей было изучение применения прогестагенов в сочетании с гонадотропином СЖК и простагландином (эстрофан), а также изучение сравнительной эффективности действия одинаковых доз прогестагенов между собой.

Исследования проводились на базе молочного комплекса Бессоновка к-за им. Фрунзе Белгородского р-на Белгородской обл. Для исследования было взято четыре прогестагена: ипогест, бутагест, ипогестрол и диамол. Гипофункцию яичников выявляли путем неоднократного ректального исследования первотелок с длительной анафродизией. По мере выявления животных формировались четыре опытных группы по числу исследуемых препаратов.

Группы формировались из первотелок живой массой 470 - 500 кг, средней упитанности и примерно одинаковой продуктивности. Так как за короткий промежуток времени выявить гипофункцию яичников у достаточного для формирования четырех опытных групп количества кров - первотелок не представлялось методически возможным, а чистота эксперимента требует, чтобы промежуток времени между формированием сравниваемых групп был как можно меньше, то вначале сформировали две группы которым ввели ипогест и диамол, а позднее еще две группы которым ввели бутагест и ипогестрол. В качестве контроля служили животные - аналоги (по возрасту, живой массе, продуктивности и условиям содержания) со спонтанной охотой не подвергавшиеся обработке.

Все прогестагены применяли в дозе 20 мг в 5 мл масляного раствора однократно. Через 168 часов после введения прогестагена внутримышечно одновременно в разные стороны крупа вводились 2 мл эстрофана и 1000 ИЕ ГСЖК. Затем проводили выборку коров в охоте и осеменяли однократно.

В течение 168 часов после применения прогестагенов приход животных в охоту не наблюдался, что обусловлено блокирующим действием прогестагенов на гипофиз. Через 24-48 часов после введения СЖК и эстрофана животные стали приходить в охоту.

При применении ипогеста пик охоты приходился на 10-12 сутки после инъекции прогестагена - 13 голов (43,3 %) животных (табл. 5). Всего пришло в охоту 28 голов (93,3 %), из них в течение 5 дней пришло в охоту 20 голов (66,6 %). Из пришедших в охоту стали стельными после первого осеменения 15 голов (53,5 %), после второго - 5 гол (17,8 %). Всего стельных за два осеменения 20 голов (71,4 %). Сервис период составил 99 дней, индекс осеменения - 1,3. В контрольной группе всего пришло в охоту 30 голов (100 %), из них стали стельными после первого осеменения 13 гол (43,3 %), после второго - 8 голов (26,6 %). Всего стало стельных за два осеменения 21 голова (70,0 %). Сервис период составил 97,8 дней, индекс осеменения - 1,9.

При применении диамола пик охоты приходился на 8-11 дни с максимумом на 10 день, всего пришло в охоту 29 голов (96,6 %). Из них в течение 5 дней пришла в охоту 21 голова (70,0 %). Из пришедших в охоту стали стельными после первого осеменения 9 голов (31,0 %), после второго - 8 гол (27,5 %). Всего стало стельных за два осеменения 17 голов (58,6 %). Сервис период составил 88,3 дней, индекс осеменения - 1,75. В контрольной группе всего пришло в охоту 30 голов (100 %), из них стали стельными после первого осеменения 8 гол (26,6 %), после второго - 18 голов (60,0 %). Всего стало стельных за два осеменения 26 голов (86,6 %). Сервис период составил 85,5 дней, индекс осеменения - 1,96.

В группах получавших ипогест и диамол наибольший синхронизирующий эффект был получен при применении диамола (70 % при 66,6 % у ипогеста). Стельность после первого осеменения при использовании ипогеста была на 22,5 % выше, чем при использовании диамола (Р 0,1). В контроле стельность после первого осеменения была меньше на 10,2 % и 4,4 %, соответственно. За два цикла при применении диамола стельность была ниже контрольной на 28 %, а при использовании ипогеста она осталась выше на 1,4 %. Сервис - период в обеих опытных группах был больше контрольного на 2,8 и 1,2 дня соответственно, но эта разница не существенна. (Табл.5)

При применении бутагеста пик охоты приходился на 10-12 дни с максимумом на 10 день, всего пришло в охоту 26 голов (86,6 %) группы. Из них в течение 5 дней пришло в охоту 18 голов (60,0 %). Из пришедших в охоту стали стельными после первого осеменения 16 голов (61,5) %, после второго - 4 головы (15,3 %). Всего стало стельных за два осеменения 20 голов (76,9 %). Сервис период составил 78,6 дней, индекс осеменения - 1,4. В контрольной группе всего пришло в охоту 30 голов (100 %), из них стали стельными после первого осеменения 8 гол (26,6 %), после второго - 10 голов (33,3 %). Всего стало стельных за два осеменения 18 голова (60,0 %). Сервис период составил 101,2 дней, индекс осеменения - 2,24.

При применении ипогестрола пик охоты приходился на 10-11 дни с максимумом на 10 день, всего пришло в охоту 28 голов (93,3 %). Из них в течение 5 дней пришло в охоту 25 голов (83,3 %). Из пришедших в охоту стали стельными после первого осеменения 7 голов (25,0 %), после второго - 11 гол (39,2 %). Всего стало стельными за два осеменения 18 голов (64,2 %). Сервис период составил 86,1 дней, индекс осеменения - 1,8. В контрольной группе всего пришло в охоту 30 голов (100 %), из них стали стельными после первого осеменения 8 гол (26,6 %), после второго - 10 голов (33,3 %). Всего стельных за два осеменения 18 голов (60,3 %). Сервис период составил 88,8 дней, индекс осеменения - 2,2.

В группах получавших бутагест и ипогестрол более высокий синхронизирующий эффект был получен при использовании ипогестрола (83,3 % при 60,0 % у бутагеста). Несмотря на это, стельность после первого осеменения при использовании бутагеста была на 36,5 % выше, чем при использовании ипогестрола (Р 0,001). По сравнению с контрольной группой, стельность после первого осеменения при использовании бутагеста была выше на 34,9 % (Р 0,05). В сумме за два цикла стельность при использовании бутагеста превысила контрольную на 16,9 %. Сервис - период был меньше контрольного на 22,6 дня (Р 0,05).

При применении ипогестрола стельность после первого осеменения была ниже контрольной на 1,6 %, а в сумме за два цикла - на 3,9 %. Сервис - период был меньше контрольного на 2,7 дня. (табл. 6).

Все испытанные прогестагены позволяют привести в охоту от 86,6 до 96,6 % животных, из них в течение 5 дней от 60 до 83,3 %. При этом стельность за два цикла составляет 58,6 - 76,9 %. Во всех группах пик охоты приходился на десятый день после введения прогестагена, это обусловлено действием простагландина, позволяющего снизить концентрацию эндогенного прогестерона спустя 48-76 часов после введения. Более ранний приход в охоту, скорее всего, наблюдался у животных не имевших желтых тел и обусловлен Ребаунд-эффектом после введения прогестагенов в сочетании с воздействием гормонов СЖК. В зависимости от группы, процент пришедших в охоту на 8-9 сутки после введения прогестагенов колеблется от 10 до 34 %.

Результаты проведенных опытов приведены в таблицах №№ 5 и 6:

Таблица 5

Сравнительная эффективность применения ипогеста и диамола при гипофункции яичников у первотелок

Группы	Число коров	Пришло в охоту после обработки	Стельных после первого осеменения	Стельных после второго осеменения	Всего стельных за два цикла	Сервис- период М m	Индекс осеменения
		гол	% M m	гол	% M m	гол	% M m	гол	% M m
Опыт № 1
Ипогест 20 мг в 5мл.	30	28	93,3 4,6	15	53,5 9,4*	5	17,8 7,2	20	71,4 8,5	99,0 8,8	1,3
Контроль (спонтанная охота)	30	30	100	13	43,3 9,0	8	26,6 8,1	21	70,0 8,3	97,8 8,7	1,9
Опыт № 2
Диамол 20 мг в 5 мл	30	29	96,6 3,1	9	31,0 8,6*	8	27,5 8,3	17	58,6 9,1	88,3 3,0	1,7
Контроль (спонтанная охота)	30	30	100	8	26,6 8,1	18	60,0 8,9	26	86,6 6,1	85,52,28	1,9

Таблица 6

Сравнительная эффективность применения бутагеста и ипогестрола при гипофункции яичников

Группы	Число коров	Пришло в охоту после обработки	Стельных после первого осеменения	Стельных после второго осеменения	Всего стельных за два цикла	Сервис- Период Мm	Индекс осеменения
		гол	% M m	гол	% M m	гол	% M m	гол	% M m
Опыт №3
Бутагест 20мг в 5 мл.	30	26	86,6 6,1	16	61,5 5,0*	4	15,3 7,0	20	76,9 8,2	78,6 2,9**	1,4
Контроль (спонтанная охота)	30	30	100	8	26,6 8,1**	10	33,3 8,5	18	60,0 8,9	101,211,8	2,2
Опыт № 4
Ипогестрол 20 мг в 5 мл.	30	28	93,3 4,6	7	25,0 8,2*	11	39,2 9,2	18	64,2 9,0	86,12,19	1,8
Контроль (спонтанная охота)	30	30	100	8	26,6 8,1	10	33,3 8,5	18	60,3 8,9	88,8 4,4**	2,2

* Р 0,001

** Р 0,05

3.2.2 Определение оптимальной дозы бутагеста, ипогеста, ипогестрола и диамола в комплексе с ГСЖК и магэстрофаном при гипофункции яичников у коров-первотелок.

Так как приход животных в охоту и оплодотворяемость при использовании различных прогестагенов сильно варьирует, возникает необходимость определения оптимальной дозировки для каждого из них.

С этой целью была проведена серия опытов на базе ГПЗ «Большое Алексеевское» Ступинского района Московской области. Для исследования были взяты те же препараты что и в предыдущем опыте. Гипофункцию яичников выявляли путем многократного ректального исследования коров-первотелок не проявляющих половой цикличности длительное время (анафродизия). После постановки диагноза - гипофункция яичников, для каждого исследуемого препарата формировали пять опытных групп по десять голов в каждой и контрольная группа, сформированная из животных - аналогов по возрасту, живой массе и продуктивности со спонтанной охотой. Группы формировались из первотелок с живой массой 480 - 500 кг, средней упитанности и одинаковой продуктивности.

Так как в короткий промежуток времени сформировать группы для исследования всех препаратов было невозможно, для чистоты эксперимента опыты проводились поэтапно, с октября 2001 года по май 2002 года. Бутагест применяли в период с октября по ноябрь 2001 г.; диамол - с декабря 2001г. по январь 2002 г.; ипогест - с февраля по март 2002 г.; ипогестрол - с апреля по май 2002 г.

Бутагест, ипогест и ипогестрол применяли в дозе 10, 15, 20, 25 и 30 мг внутримышечно в пяти мл масляного раствора. Диамол вводился в дозах 20, 30, 50, 70 и 100 мг внутримышечно в пяти мл масляного раствора, так как в проведенных ранее исследованиях он применялся в дозе 100 мг. Через 168 часов после введения прогестагенов внутримышечно одновременно в разные стороны крупа вводилось по 1000 ИЕ ГСЖК и 3 мл магэстрофана. Для чистоты эксперимента животным контрольных групп вн...