Разработка состава и технологии мази с эфирным маслом иссопа для лечения простудных заболеваний

При аптечном изготовлении, согласно приказу МЗ Украины 17.10.2012 № 812 «Про затвердження Правил виробництва (виготовлення) та контролю якості лікарських засобів в аптеках» отклонения, допустимые в общей массе составляют ± 8 %. ГФУ регламентирует этот показатель: масса содержимого контейнеров должна быть не менее указанной на этикетке. По результатам анализа масса содержимого контейнеров находилась в пределах 20,0-20,6 г.

Результаты определения герметичности контейнера показали, что все образцы туб выдержали испытание, подтеканий не наблюдали.

Выводы

1. Разработан оптимальный состав мази для лечения простудных заболеваний с эфирным маслом иссопа зеравшанского, камфорой и метилсалицилатом на гидрофобной основе, обеспечивающий интенсивное высвобождение действующего вещества и обладающий высокими фармакотехнологическими, биофармацевтическими и консистентными свойствами.

2. Выявлено, что мазевая основа, состоящая из 36,0 г изопропилмиристата, 8,0 г твердого жира и 32,0 г воска пчелиного, имеет температуру каплепадения 37,3 єС, что обеспечивает максимальный уровень высвобождения фармакологически активных веществ из мазевой композиции.

3. Обоснован состав вспомогательных веществ в разработанной мази, который представлен жировой композицией (твердый жир, изопропилмиристат, воск пчелиный), использование которых обеспечивает получение стабильной при длительном хранении мази с необходимыми физико-химическими и структурно-механическими показателями.

4. Реологические свойства разработанной мягкой лекарственной формы на основе спала жировых компонентов характеризуют ее как тиксотропную систему, в структуре которой доминируют коагуляционные связи, обеспечивающие ее полное восстановление после снятия напряжений. Консистентные свойства композиции находятся в пределах реологического оптимума мазей. Незначительные расхождения между реологическими показателями разработанной мази и ее основы указывают на отсутствие взаимодействия между действующими веществами и носителем.

5. С учетом особенностей изготовления мягких лекарственных форм для назального применения, а также физико-химических и технологических свойств игредиентов разработана технологическая схема производства препарата мазь «Иссопол» в промышленных условиях и представлено научно обоснованное изложение технологического процесса изготовления. Установлены контрольные параметры технологического процесса изготовления геля. Также предложена удобная технология экстемпорального производства мази в условиях аптек.

РАЗДЕЛ 5. ВЫБОР МЕТОДОВ КОРОЛЯ КАЧЕСТВА И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ МАЗИ

5.1 Обоснование методов контроля качества мази

Важным этапом при разработке новых лекарственных средств является определение качественного и количественного содержимого ингредиентов, которые входят в их состав. Для осуществления контроля за качеством мази и количественным содержимым в ней действующих веществ нами разработаны методики качественного и количественного анализа мягкой лекарственной формы.

По требованиям ГФУ мягкие лекарственные средства контролируют по таким показателям качества: описание, идентификация, однородность, масса содержимого контейнера, микробиологическая чистота, количественное определение. При необходимости дополнительно контролируют размер частей, рН, кислотное и перекисное числа, характерные свойства основы, посторонние примеси, герметичность контейнера.

Исходя из этого, мы пришли к заключению, что в МКК ЛС на мазь для лечения простудных заболеваний, в качестве мазевой основы которой является смесь природных и полусинтетических жировых компонентов необходимо включить следующие показатели:

- описание;

- идентификация;

- однородность;

- герметичность контейнера;

- кислотное число;

- масса содержимого упаковки;

- микробиологическая чистота;

- количественное определение.

Дополнительно в МКК ЛС необходимо включать требования к упаковке, маркировке, транспортированию, условия хранения и срок годности.

Описание. Мазь от светло желтого до желтого цвета, однородной консистенции. Должно быть отсутствующие признаков физической нестабильности (расслоение, коалесценция, коагуляция, агрегация частиц). Запах присущий запаху эфирного масла иссопа. Не должна иметь запаха прогоркшего масла.

Идентификация. По требованиям ГФУ проводят определение идентификации всех действующих веществ, которые входят в состав препарата. При необходимости определяют идентификацию вспомогательных веществ, что в нашем случае ненужно.

Идентификацию эфирного масла иссопа зеравшанского, камфоры, метилсалицилата проводят с помощью метода ГЖХ одновременно с количественным определением.

2 г препарата помещают в колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл 95 % спирта, нагревают на водяной бане до расплавления, взбалтывают 3 мин, охлаждают на льду и фильтруют. 5 мл фильтрата помещают в фарфоровую чашку и нагревают на водяной бане до удаления растворителя. К остатку прибавляют 2 мл ацетона, 5 мл кислоты хлороводородной и 0,1 г аммония ваналата; появляется зеленое окрашивание.

Однородность. Мазь должна быть однородной. Определение проводят по методике ГФУ (раздел 2).

Герметичность контейнера. Необходимость включения теста на герметичность контейнера в МКК ЛС на разработанный препарат основывается на важности недопущения кислорода в внутрь упаковки, который может способствовать как микробной контаминации препарата, так и нежелательным химическим превращениям некоторых компонентов лекарственного средства. В данном случае это, в первую очередь, компоненты жировой мазевой основы, которые имеют склонность к окислению. Принимая во внимание это, нами предложено включить в МКК ЛС тест на герметичность тубы с препаратом, который заключается в следующем.

Берут 10 туб с препаратом и тщательно вытирают внешние поверхности фильтровальной бумагой. Тубы помещают на лист фильтровальной бумаги в горизонтальном положении в термостат и выдерживают при температуре (60 ± 3) °С в течение 8 часов.

На фильтровальной бумаге не должно быть потеков препарата ни из одной тубы. Если потеки наблюдаются лишь из одной тубы, то испытания проводят дополнительно еще с 20 тубами. Если потеки наблюдаются больше как из одной тубы, результаты испытания считают неудовлетворительными.

Кислотное число. Кислотным числом называют количество калия гидроксида, в миллиграммах, необходимое для нейтрализации свободных кислот, которые содержатся в 1 г испытуемого вещества.

Нами был избран фармакопейный метод определения кислотного числа (ГФУ І изд., стр. 94).

Масса содержимого упаковки. ГФУ рекомендует фасовать мягкие лекарственные средства в металлические необоротные сжимаемые тубы с внутренним лаковым покрытием, защитной мембраной и латексным кольцом, которое обеспечивает ограничение контакта содержимого с окружающей средой. Учитывая особенности применения, масса содержимого тубы должна быть не менее 15,0 г. При таком номинальном наполнении, согласно ОСТ 64-492-85 «Средства лекарственные. Допустимые отклонения на промышленную фасовку», масса содержимого должна быть от 28,8 г до 31,2 г (±4 %, допустимые пределы). Средняя масса содержимого десяти туб должна быть от 29,61 г до 30,39 г (±1,3 %). Испытания проводят с десятью упаковками. Упаковки вместе с содержимым взвешивают, каждую порознь, с точностью до 0,01 г, освобождают от содержимого, сделав на тубах продольный разрез, промывают каждую горячей водой, тщательным образом удаляют остатки воды фильтровальной бумагой и опять взвешивают. По разнице полученных значений определяют соответствие массы содержимого упаковки.

Микробиологическая чистота. Результаты представлены в п. 5.3.

Количественное определение. Около 1 г (точная навеска) препарата растворяют в 8 мл эфира в мерной колбе вместимостью 10 мл и доводят объем раствора в колбе тем же растворителем до метки. 1 мкл полученного раствора вводят микрошприцем в испаритель газожидкосгного хроматографа с пламенно-ионизационным детектором. Анализ проводят на колонке стеклянной размером 200 х 0,3 см, заполненная сорбентом - 3 % НПГС (неопентилгликольсукцинат) на хроматоне N-AW-DMCS, зернение 0,16-0,20 мм.

Приготовление модельной смеси. Около 0,25 г (точная навеска) камфоры, 0,20 г (точная навеска) метилсалицилата. 0,075 г (точная навеска) масла иссопа растворяют в эфире в мерной колбе вместимостью 25 мл и доводят объем тем же растворителем до метки.

В модельной смеси камфора, метилсалицилат, масло иссопа используются для количественного и качественного определений.

Условия разделения:

- программированный режим термостата колонок от 60 до 130 °С со скоростью 2 єС/мин, после завершения программы режим изотермический (130 °С) в течение 10 минут;

- температура испарителей 180 °С;

- скорость газа-носителя: гелия и водорода 30 см³/мин, воздуха - 300 см³/мин;

- скорость диаграммной ленты 240 мм/час.

Параллельно проводят анализ модельной смеси 2.

Количественное определение анализируемых компонентов мази проводят методом абсолютной градуировки.

Содержание определяемого компонента (масло иссопа, камфора, метилсалицилат) в процентах в препарате вычисляют по формуле:



где S - площадь пика определяемого компонента;

S₀ - площадь пика стандартного образца;

m₀ - навеска определяемого компонента в модельной смеси, г;

m - навеска препарата, г.

Результаты анализа разработанной мази приведены на рисунке 5.1.

5.2 Определение стабильности и сроков годности

Важным показателем качества лекарственных средств является срок пригодности, то есть, временя, в течение которого не наблюдается негативных изменений физико-химических, фармакологических и потребительских характеристик препарата. При разработке состава нового лекарственного препарата срок пригодности определяют экспериментально, путем периодической оценки всех заложенных в МКЯ ЛС показателей качества [195].

Из всех видов упаковки, применяемых для мягких лекарственных форм в фармацевтической промышленности, алюминиевая туба с мембраной обеспечивает герметичность в процессе длительного хранения. Алюминиевые тубы являются наиболее распространенным видом тары для хранения мазей. Тубы стойкие к жирам, не пропускают влагу, служат преградой для кислорода воздуха и УФ-излучения, препятствуют микробной контаминации в п

роцессе применения. Тубы из алюминия имеют также большие преимущества, связанные с конструкцией (формой): процесс производства, наполнения и закупоривания туб, возможность механизации и автоматизации, мазь полностью заполняет их объем и по мере ее использования в тубы не проникает воздух, который дает возможность использовать содержимое тубы после ее разгерметизации не сразу, а по мере необходимости.

Рис. 5.1. Хроматограмма разработанной мази

Стеклянная тара также доныне не потеряла свою актуальность. Она проницательна для жидкостей, пару, газов и микроорганизмов, что выгодно отличает стекло от полимеров и позволяет применять его для хранения большинства лекарственных средств.

Изучения стабильности мази проводили на шести сериях каждого препарата, расфасованного в тубы алюминиевые по 30 г (ТУ У 25463020-01-98) с внутренним лаковым покрытием Расіас 11015-000, а также в банки из дрота оранжевого стекла типа БДС-10-27,5-ОС-1 или БДС-20-27,5-ОС-1 (ТУ 64-2-239-79) с натягиваемыми крышками типа 1,2 (ОСТ 64-2-87-81).

Срок хранения мази определяли при двух температурных режимах - в комнатных условиях (20±5) °С и в прохладном месте при (12,5±2,5) °С.

Сразу после приготовления и через каждые 6 месяцев в течение 2,5 лет хранения стабильность мази оценивали по следующим показателям: органолептические и физико-химические свойства (внешний вид, цвет, запах), идентификация и количественное определение действующих веществ, средняя масса содержимого упаковки, однородность, кислотное число.

Методики определения показателей и их характеристики (пределы значений) регламентируются ГФУ и другими нормативными документами.

Результаты экспериментального исследования стабильности препарата при разных условиях хранения приведены в табл. 5.1. Данные стабильности препарата других исследуемых серий были идентичными.

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что образцы мази, которые хранились при условиях прохладной температуры, выдерживали тесты по всем показателям МКК ЛС, а образцы, которые хранились при условиях комнатной температуры, после 24 месяцев хранения приобрели запах прогоркшего масла, которое свидетельствует о наличии окислительных процессов в мазевой основе, это подтверждают и значения кислотного числа.

Таблица 5.1 Результаты изучения стабильности мази в процессе хранения в тубах алюминиевых и банках оранжевого стекла

Наименование показателей по МКК

Строк хранения, мес.

в тубах алюминиевых

в банках оранжевого стекла

Данные МКК

6

12

18

24

27

6

12

18

24

27

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

Образцы, хранившиеся в прохладном месте (8-15) єС

Описание

Мазь от светло желтого до желтого цвета, однородной консистенции. Должно быть отсутствующие признаков физической нестабильности (расслоение, коалесценция, коагуляция, агрегация частиц). Запах присущий запаху эфирного масла иссопа. Не должна иметь запаха прогоркшего масла

Идентификация

Метода ГЖХ одновременно с количественным определением

Метода ГЖХ одновременно с количественным определением

Эфирное масло иссопа

Соответствует

Соответствует

Камфора

Соответствует

Соответствует

Метилсалицилат

Соответствует

Соответствует

Масса содержимого упаковки

28,8 г до 31,2 г

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

Однородность

Должна быть однородной

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Кислотное число

Не > 8,0

5,3±0,1

5,5±0,1

5,1±0,2

5,5±0,1

5,2±0,2

5,6±0,2

5,7±0,1

5,9±0,2

5,8±0,1

5,8±0,1

Микробиологи-ческая чистота

Общее число аэробных микроорганизмов (TAMC) не более 102 КОЕ/г; общее число дрожжевых и плесневых грибов (TYMC) не более 101 КУО/г; S. aureus и P. aeruginosa не допускается в 1 г.

Соответствует

Соответствует

Содержание камфоры

0,045-0,055 в 1 г мази

0,048± 0,002

0,048± 0,001

0,050± 0,002

0,052± 0,001

0,050± 0,002

0,048± 0,002

0,050± 0,001

0,048± 0,002

0,052± 0,001

0,050± 0,002

Содержание эфирного масла иссопа (в-пинен)

0,0035-0,0045 в 1 г мази

0,0038± 0,0002

0,0040± 0,0004

0,0038± 0,0002

0,0040± 0,0002

0,0042± 0,0001

0,0041± 0,0002

0,0040± 0,0001

0,0042± 0,0002

0,0040± 0,0001

0,0041± 0,0001

Содержание метилсалицилата

0,145-0,155 в 1 г мази

0,151± 0,001

0,149± 0,003

0,148± 0,002

0,151± 0,001

0,152± 0,001

0,148± 0,002

0,149± 0,002

0,150± 0,001

0,150± 0,001

0,148± 0,002

Описание

Мазь от светло желтого до желтого цвета, однородной консистенции. Должно быть отсутствующие признаков физической нестабильности (расслоение, коалесценция, коагуляция, агрегация частиц). Запах присущий запаху эфирного масла иссопа. Не должна иметь запаха прогоркшего масла

Идентификация

Метода ГЖХ одновременно с количественным определением

Метода ГЖХ одновременно с количественным определением

Эфирное масло иссопа

Соответствует

Соответствует

Камфора

Соответствует

Соответствует

Метилсалицилат

Соответствует

Соответствует

Масса содержимого упаковки

28,8 г до 31,2 г

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

30,0

Однородность

Должна быть однородной

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Соответ.

Кислотное число

Не > 8,0

5,8±0,1

6,0±0,1

6,4±0,2

7,6±0,1

8,5±0,2

5,7±0,2

6,2±0,1

6,9±0,2

7,8±0,1

8,8±0,1

Микробиологи-ческая чистота

Общее число аэробных микроорганизмов (TAMC) не более 102 КОЕ/г; общее число дрожжевых и плесневых грибов (TYMC) не более 101 КУО/г; S. aureus и P. aeruginosa не допускается в 1 г.

Соответствует

Соответствует

Содержание камфоры

0,045-0,055 в 1 г мази

0,050± 0,001

0,052± 0,001

0,052± 0,002

0,048± 0,002

0,050± 0,001

0,052± 0,002

0,050± 0,002

0,048± 0,001

0,052± 0,001

0,050± 0,002

Содержание эфирного масла иссопа, в пересчета на в-пинен

0,0035-0,0045 в 1 г мази

0,0039± 0,0001

0,0038± 0,0001

0,0042± 0,0001

0,0042± 0,0002

0,0040± 0,0002

0,0040± 0,0002

0,0038± 0,0002

0,0037± 0,0001

0,0036± 0,0002

0,0035± 0,0001

Содержание метилсалицилата

0,145-0,155 в 1 г мази

0,150± 0,001

0,148± 0,002

0,147± 0,001

0,152± 0,002

0,150± 0,001

0,149± 0,002

0,148± 0,001

0,152± 0,002

0,151± 0,002

0,149± 0,001

Колебания количественного содержимого действующих веществ не превышал предел ошибки методики жидкостной хроматографии.

5.3 Определение микробиологической чистоты разработанной мази

При исследовании разработанного препарата одним из важных показателей качества является его микробиологическая чистота. Почти все лекарственные средства, не подвергнутые стерилизации, могут в разной степени загрязняться микроорганизмами. Несмотря на то что, микробы в вязких средах развиваются значительно медленнее, чем в жидких, однако они могут длительное время выживать в самом лекарственном средстве и размножаться в нем.

Готовые лекарственные препараты могут содержать определенное количество разных микроорганизмов, которые попадают в препарат в процессе приготовления - первичная контаминация. Источниками микробного загрязнения могут быть сырье, вода, воздух, упаковка, оборудование и т.д.

Одним из важных аспектов при разработке новых препаратов является их стандартизация и всесторонняя оценка показателей качества лекарств, которое гарантирует их безопасность и стабильность в течение всего срока годности. Наравне с позитивными сторонами мягких лекарственных форм, существует большая вероятность развития посторонней микрофлоры в благоприятной дисперсионной среде и появление токсичных продуктов метаболизма микроорганизмов. Невзирая на достаточно широкий ассортимент импортных средств для лечения простудных заболеваний, поиск новых и оптимизация состава существующих лекарственных средств в первую очередь за счет выбора оптимальной основы, расширения спектра фармакологического действия является актуальной задачей фармации.

Учитывая гидрофобные свойства лекарственных субстанций, а также метод приготовления и нанесения мази, безводность мазевой основы, и невозможность применения стерильных или асептических условий производства, нами была проведенная оценка микробиологической чистоты нестерильного мягкого лекарственного средства с эфирным маслом иссопа заравшанского, камфорой и метилсалицилатом под условным названием «Иссопол» в течение 27 месяцев, что превышает запланированный срок пригодности препарата (2 года).

Микробиологическую чистоту выбранных образцов определяли сразу после приготовления, через каждые 6 месяцы хранение в условиях холодильника (температура от 2 до 8 °С) и при температуре от 15 до 25 °С, в течение 27 месяцев.

При анализе микробиологической чистоты использовались методы, предлагаемые ГФУ: определение общего числа жизнеспособных аэробных мезофильных бактерий и грибов - метод глубинного посева, метод поверхностного посева (европейская часть ГФУ), метод двухслойного посева (национальная часть ГФУ), определения наличия бактерий Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.

Для проверки пригодности методик определения общего числа жизнеспособных аэробных микроорганизмов в качестве тестовых штаммов использовали такие микроорганизмы из американской коллекции культур: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Bacillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404.

В соответствии с рекомендациями использовали следующие плотные и жидкие питательные среды: соево-казеиновый агар (для определения количества живых бактерий), Сабуро-декстрозний агар (для определения количества грибов), соево-казеиновый бульон (для предварительного инкубирования при определении наличия определенных видов микроорганизмов), манито-солевой агар (для идентификации Staphylococcus aureus), цетримидный агар (для идентификации Pseudomonas aeruginosa). При исследовании использовали не менее 6 чашек Петри с каждой питательной средой, и результат определяли как среднее арифметическое значение числа колоний, которые выросли на всех параллельных чашках. Чашки с соево-казеиновым агаром инкубировали при температуре 30-35 °С 5 суток, чашки из Сабуро-декстрозним агаром - при температуре от 20 до 25 °С - 7 суток.

Отобранную пробу мази (10 г) растворяли в изопропилмиристате (рекомендации ГФУ), стерилизованном путем фильтрации, смешивали с минимальным количеством стерильного полисорбата-80. Пробу подогревали до температуры не больше 40 °С и тщательным образом перемешивали, поддерживая температуру на водяной бане. Добавляли необходимое количество заранее подогретого растворителя для получения разведения испытуемого образца 1:10. Тщательным образом перемешивали, поддерживая температуру, в течение минимального времени, необходимого для образования эмульсии.

В соответствии с требованиями ГФУ 1 изд., 1 г мази для наружного применения должен содержать не больше 102 аэробных микроорганизмов (TAMC) и 101 дрожжевых и плесневых грибов (TYMC), а также должны отсутствовать Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa. С целью предупреждения ошибок, возможных при проявлении антимикробной активности препарата, предыдущими исследованиями было установлено, что данную мазь можно охарактеризовать как «мазь, не проявляющая антимикробного действия». Инкубация подготовленных образцов мази (разведение 1:10) на манито-солевом агаре (температура 30-35 єС - 72 часа) и цетримидном агаре (температура 30-35 єС - 72 часы) показала отсутствие колоний, которое отвечает результату - «отсутствие бактерий Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa в 1 г исследуемой мази».

Результаты определения микробиологической чистоты образцов мази «Иссопол» сразу после приготовления и через каждые 6 месяцы в процессе хранения при разных температурных режимах представлены в таблице.

Полученные результаты (табл. 5.2) показывают отсутствие в анализируемом препарате «Иссопол» грамположительных кокков Staphylococcus aureus и грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosa при хранение в течение 27 месяцев в диапазоне температур от 2 до 25 °С. Определение микробиологической чистоты методами поверхностного и глубинного посева показало содержание бактерий (TAMC) - 20 колониеобразующих единиц в 1 г (КУО/г), грибов (TYMC) - 10 КУО/г. При определении микробиологической чистоты методом двухслойного посева было установлено, что содержание жизнеспособных аэробных бактерий и грибов в 1 г препарата после 27 месяцев хранения при температуре от 2 до 25 °С не превышает 20 КОЕ/г.

С целью стандартизации показателей качества разработанной мягкой лекарственной формы с эфирным маслом иссопа заравшанского, камфорой и метилсалицилатом под условным названием «Иссопол» проведено определение микробиологической чистоты в течение 27 месяцев при разных условиях хранения. Использовали методы, предлагаемые ГФУ: определение общего числа жизнеспособных аэробных мезофильных бактерий и грибов - метод глубинного посева, метод поверхностного посева (европейская часть ГФУ), метод двухслойного посева (национальная часть ГФУ), определение наличия бактерий Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. Экспериментально установлено отсутствие бактерий Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. Содержание жизнеспособных аэробных бактерий (TAMC), дрожжеподобных и плесневых грибов (TYMC) соответствует требованиям ГФУ по количеству при хранении лекарственного средства в течение 27 месяцев в диапазоне температур от 2 до 25 °С. Таким образом, проведенные исследования микробиологической чистоты мази «Исопол» показали микробиологическую стабильность в течение всего срока хранения [196].

Таблица 5.2Результаты контроля микробиологической чистоты мази «Иссопол» при хранении

Показатель	Срок хранения, месяц
	Температура от 2 до 8 °С	Температура от 15 до 25 °С
	0	6	12	18	24	27	0	6	12	18	24	27
ТАМС, КУО/г	Метод глубинного посева	До 10	До 10	10	20	20	20	До 10	До 10	20	20	20	20
	Метод поверхностного посева	До 10	До 10	10	10	20	20	До 10	До 10	20	20	20	20
	Метод двухслойного посева	До 10	До 10	10	10	10	10	До 10	До 10	До 10	10	10	20
TYMC, КУО/г	Метод глубинного посева	До 10	До 10	До 10	До 10	10	10	До 10	До 10	До 10	До 10	10	10
	Метод поверхностного посева	До 10	До 10	До 10	До 10	10	10	До 10	До 10	До 10	10	10	10
	Метод двухслойного посева	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10	До 10
Наличие бактерий	Staphylococcus aureus	Отсутствует
	Pseudomonas aeraginosa	Отсутствует

Примечание: КУО/г - число колониеобразующих единиц в 1 г препарата.

ТАМС - общее число аэробных микроорганизмов

TYMC - общее число дрожжевых и плесневых грибов

5.4 Обсуждение фармакологических результатов

Фармакологическое изучение разработанной мази было проведено на кафедре клинической фармакологии ИПКСФ НФаУ проф. Зайченко A.В. [197]

Изучение местнораздражающего действия мази проводилось на белых нелинейных крысах обоего пола, выращенных в виварии НФаУ. Как препарат сравнения использовали мазь «Доктор МОМ» (Юник Фармасьютикал Лабораториз, Индия), которая близка по содержанию действующих веществ новой изучаемой мази (табл. 5.3), имеет аналогичные фармакологические свойства и показания к применению, зарегистрирована в Украине. Исследуемые мази наносили на выстриженный участок кожи 2х2 см, что составляет 5 % от общей площади тела, в количестве 0,5 г на животное. Контролем служили группы животных, которым на выстриженный участок кожи размером 2х2 см наносили мазевую основу. Изучаемые мази и мазевую основу наносили животным однократно, наблюдение проводили в течение 16-ти часов.

Таблица 5.3 Сравнительный анализ состава мази с эфирным маслом иссопа заравшанского и препарата сравнения мази «Доктор МОМ»

Мазь с ЭМИЗ, на 20,0 г	Мазь «Доктор МОМ», на 20,0 г
Эфирное масло иссопа	0,8 г	Ореха мускатного масло	0,11 мл
Метилсалицилат	3,0 г	Левоментол	0,61 г
Камфора	1,0 г	Камфора	1,05 г
		Эвкалиптовое масло	0,30 мл
	Скипидарное масло	1,11 мл
	Тимол	0,02 г
Вспомогательные вещества
Изопропилмиристат	7,2 г	Белый мягкий парафин	до 20,0 г
Твердый жир	6,4 г
Воск пчелиный	1,6 г

Эффективность лечебного действия оценивали по развитию гиперемии кожных покровов на месте нанесения (локальная сосудистая реакция) и частоте дыхания у животных (рефлекторная стимуляция дыхательного центра).

Оценку эритемы проводили через 1, 2, 4, 8, 16 часов после нанесения мазей и оценивали в баллах (от 0 до 4) при помощи колориметрической линейки Суворова С.В.

Критерии оценки эритемы:

0 - отсутствие эритемы

1 - слабая (розовый тон)

2 - умеренно выраженная (розово-красный тон)

3 - выраженная (красный тон)

4 - резко выраженная (ярко-красный тон).

Для получения статистически значимых выводов использовали непараметрический критерий Крускала-Уолиса, Манна-Уитни и точный метод Фишера. Альтернативную гипотезу во всех вышеприведенных критериях принимали при р 0,05. При сравнении выборок, после того как ANOVA или ANOVA RM выявляли расхождения между экспериментальными группами, применяли критерий Ньюмана-Кейлса. После того как однофакторный дисперсионный анализ (или критерий Крускала-Уолиса для данных, которые не подлежат нормальному закону распределения) не устанавливал отличий между исследуемыми группами, использовали критерий Ньюмана-Кейлса, критерий Стьюдента, а для множественных сравнений - критерий Манна-Уитни. Уровень значимости равнялся р 0,05. Для проведения математических расчетов использовали стандартный пакет программ «Statistica 6.0».

При нанесении исследуемой мази на освобожденные от шерсти участки кожи у животных развивалась гиперемия, обусловленная рефлекторным расширением кровеносных сосудов кожи. Прилив крови к месту нанесения мази с ЭМИЗ начал появляться на 20-30 мин. наблюдения, постепенно нарастал и достигал своего максимума на второй час наблюдения, тогда как в группе животных, которым наносили препарат сравнения - мазь «Доктор МОМ», этот процесс начинался в эти же сроки, своего апогея этот показатель достигал к третьему часу опыта. Продолжительность гиперемии в группе животных, получавших мазь с ЭМИЗ составила 9-11 часов, а у некоторых животных она сохранялась до 16-го часа наблюдения. В группе животных, которым наносили мазь «Доктор МОМ» гиперемия у всех крыс исчезала к 10-му часу эксперимента (табл. 5.4).

Таблица 5.4 Влияние мази с эфирным маслом иссопа на развитие гиперемии кожных покровов у крыс, Me (LQ;UQ)

Группа животных, n=6	Время наблюдения
	Исход	1-й час	2-й час	4-й час	8-й час	16-й час
Интактный контроль	0	0	0	0	0	0
Мазь с ЭМИЗ	0	1,0 (1;1)1/2	2,0 (1;2)1/2	2,0 (1;3)1/2	1,0 (1;1)1/2	1,0 (0;1)2
Мазь «Доктор МОМ»	0	1,0 (1;0)2	1,5 (1;2)1/2	2,0 (2;2)1/2	1,0 (1;1)1/2	0 (0;0)

Примечания:

1 - отклонения достоверны относительно исходных показателей, р0,05;

2 - отклонения достоверны относительно показателя животных группы интактного контроля, р 0,05.

Таким образом, обе изучаемые мази проявили способность усиливать приток крови и одинаковую по степени выраженности локальную гиперемию, однако по времени наступления и продолжительности местнораздражающего действия, мазь с ЭМИЗ несколько превосходила препарат сравнения мазь «Доктор МОМ».

Ингаляция смеси эфирных масел приводит к рефлекторному возбуждению дыхательного центра, что приводит к усилению частоты и глубины дыхательных движений. В нашем исследовании изучаемые мази проявили подобное действие на 15-ой минуте наблюдения. К концу первого часа эксперимента частота дыхания (ЧД) у животных первой группы на 27 % превышала аналогичные показатели у животных группы интактного контроля и на 28 % - исходные показатели внешнего дыхания у данной группы крыс.

Во второй экспериментальной группе ЧД повысилась на 17 % относительно исходных данных и аналогичного показателя у интактных крыс. Однако, достоверных различий на 1-й и последующие часы наблюдения между исследуемыми группами не наблюдалось (табл. 5.5).

Таблица 5.5.Влияние мази с эфирным маслом иссопа на частоту дыхания у крыс, дых. дв./мин, SX

Группа животных, n=6	Время наблюдения
	0-й час (исход-ные данные)	1-й час	2-й час	4-й час	8-й час	16-й час
Интактный контроль	83,2± 0,9	82,3± 1,4	81,1± 1,1	81,0± 1,5	79,3±1,5	80,5± 1,8
Мазь с ЭМИЗ	81,8± 0,7	104,8± 2,11/2	103,8± 1,61/2	107,1± 2,51/2	92,7 ± 3,11/2	82,5± 2,3
Мазь «Доктор МОМ»	82,5± 1,0	96,7± 1,61/2	105,3± 1,61/2	109,1± 1,21/2	93,8± 3,21/2	83,6± 1,6

Примечания:

1 - отклонения достоверны относительно исходных показателей, р0,05;

2 - отклонения достоверны относительно показателя животных группы интактного контроля, р 0,05.

Максимальное увеличение частоты дыхательных движений (на 30 %) в первой группе было зафиксировано на 4-й час опыта. У животных, которым наносили препарат сравнения ЧД также сохранялась стабильно повышенной, но при этом не превышала 27 % от исходных данных в первые четыре часа наблюдения. К 8-у часу эксперимента ЧД в обоих группах снижалась, однако, и первой и во второй группе животных оставалась на 13 % выше исходных данных.

К 16-му часу эксперимента показатели внешнего дыхания у животных двух исследуемых групп вернулись к исходным данным, рефлекторная стимуляция дыхательного центра отсутствовала.

Полученные результаты свидетельствуют о наличии умеренно выраженного стимулирующего влияния мазей на дыхательный центр. Этот эффект, как и способность, вызывать прилив крови и местное согревающее действие у мази «Доктор МОМ» продолжается не более 8-ми часов, тогда как у мази с ЭМИЗ гиперемия длится до 16 часов.

Способность препаратов, содержащих эфирные масла, вызывать раздражение афферентных нервов и расширение сосудов, способствует притоку крови к органам в области их нанесения. Интегральное местное и рефлекторное действие раздражающих веществ сопровождается расширением сосудов (улучшается трофика тканей и отток жидкости) в области аппликации и сегментарно расположенных внутренних органах и мышцах («разрешающее» действие на патологические процессы в этих органах), ослаблением болевых ощущений, исходящих из этих же органов («отвлекающее» действие). При воздействии раздражающих средств на здоровые участки кожи, имеющие сопряженную иннервацию с пораженными органами или тканями, раздражающие средства оказывают так называемое отвлекающее действие - в результате уменьшается ощущение боли. Отвлекающий эффект объясняют взаимодействием возбуждения, поступившего в ЦНС с пораженных органов, и возбуждения, поступающего с чувствительных рецепторов кожи при действии на них раздражающих веществ. При это снижается восприятие афферентной импульсации с патологически измененных органов и тканей. Также происходит улучшение трофики органов и тканей, вовлеченных в патологический процесс. Трофическое действие раздражающих веществ объясняется активацией симпатической иннервации пораженных органов и тканей при возбуждении чувствительных рецепторов кожи. В случаях применения местораздражающих лекарственных средств при простудных заболеваниях и катаре верхних дыхательных путей это действие сопровождается усилением кровообращения в легких, улучшением кровоснабжения и трофики тканей, ослаблению болей и др. В механизме действия играет роль локальное освобождение биологически активных веществ-аутакоидов - кининов, гистамина, простагландинов и др. Раздражение рецепторов слизистых оболочек, кожи и подкожных образований сопровождается образованием и высвобождением энкефалинов, эндорфинов и других пептидов, имеющих важное значение для восприятия болевых ощущений, изменением проницаемости сосудов, клеточной и тканевой реактивности и т.д. Некоторые местнораздражающие средства в той или иной степени всасываются и могут вызывать системный эффект и оказать влияние на различные регуляторные процессы, включая нейромедиаторные, иммунные и др.

Поскольку в состав мази с ЭМИЗ, также входят метилсалицилат и камфора, наблюдаемые эффекты комбинированного препарата во многом поясняются суммирующим однонаправленным и взаимодополняющим действием компонентов.

Метилсалицилат - производное салициловой кислоты, оказывает противовоспалительное, отвлекающее действие и применяется для временного облегчения глубокой боли. При местном нанесении быстро проникает в глубокие слои кожи, абсорбируется, гидролизуется и превращается в анион салициловой кислоты. Последний не селективно ингибирует циклооксигеназу в тканях, что приводит к снижению синтеза медиаторов воспаления - простагландинов; улучшает процессы микроциркуляции, уменьшает отек и инфильтрацию воспаленных тканей. В ходе двойного слепого клинического испытания при местном применении метилсалицилата, эффект у больных с артритом умеренно выраженной степени активности значительно превышал эффект от применения плацебо. Установлено, что хроническая боль в мышцах вследствие их продолжительного гипертонуса является составляющей болевого синдрома у пациентов с артритом. Нанесение мази, содержащей метилсалицилат, на пораженные артритом суставы приводило к значительному снижению напряжения мышц, в то время как применение плацебо не вызвало существенного лечебного действия. Уменьшение выраженности болевого синдрома при спазме мышц обусловлено, также, согревающим эффектом метисалицилата.

Камфора - вещество растительного происхождения. При наружном применении оказывает противомикробное, местнораздражающее, анальгезирующее и противовоспалительное действие; при парентеральном введении - аналептическое, кардиотоническое, сосудосуживающее и отхаркивающее действие. Возбуждая чувствительные нервные окончания кожи, рефлекторно улучшает трофику органов и тканей. Препараты, содержащие камфору, показаны при простудных заболеваниях, артралгии, миалгии, ишиасе, радикулите, для профилактики развития пролежней.

Подводя итоги выше сказанному, можно сделать такие выводы:

1. Новая комбинированная мазь, содержащая эфирное масло иссопа заравшанского, метилсалицилат и камфору обладает антимикробной активностью по отношению к бактериальным грамположительным (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Bacillus subtilis), грамотрицательным (Esherichia colli) культурам, а также по отношению к дрожжеподобному грибу рода кандида - Сandida albicans.

2. При однократном нанесении на кожу исследуемая мазь через 20-30 мин начинает оказывать местнораздражающее действие, проявляющееся гиперемией, которая сохраняется на протяжении 9-11, а у некоторых животных до 16 часов.

3. Местнораздражающее действие мази сопровождается развитием умеренно выраженного стимулирующего влияния на дыхательный центр.

4. По выраженности местнораздражающего действия мазь с эфирным маслом иссопа не уступает, а по продолжительности превосходит препарат сравнения - мазь «Доктор МОМ».

1. Изучены критерии стандартизации разработанной мази, предложены методики качественного и количественного определения действующих веществ. Для количественного определения содержания эфирного масла иссопа зеравшанского, камфоры и метилсалицилата в мазе был использован хроматографический метод.

2. На основании изучения основных параметров качества разработан проект МКК ЛС на мазь с эфирным маслом иссопа зеравшанского, камфорой и метилсалицилатом под условным названием «Иссопол».

3. Проведенными исследованиями стабильности разработанного препарата в процессе хранения выбраны вид упаковки для мази, температурные режимы хранения и срок годности.

4. Фармакологическими исследованиями установлено высокое местнораздражающее действие мази, сопровождается развитием умеренно выраженного стимулирующего влияния на дыхательный центр. По выраженности местнораздражающего действия мазь «Иссопол» не уступает, а по продолжительности превосходит препарат сравнения - мазь «Доктор МОМ».

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

На основании проведенных исследований разработан и научно обоснован состав, технология и методы контроля качества новой мази с эфирным маслом иссопа, камфорой и метилсалицилатом под условным названием «Иссопол» для местного лечения простудных заболеваний, которая имеет высокую биодоступность и выраженные местнораздражающие свойства.

1. Проанализированы и обобщены данные литературы относительно лечения заболеваний верхних дыхательных путей. Исходя из анализа изученного ассортимента лекарственных препаратов местного действия для лечения данной патологии, установленная необходимость расширения ассортимента отечественных препаратов мягкой формы выпуска. Теоретически обоснован методический подход к разработке мазей для лечения простудных заболеваний.

2. Изучено количественное содержимое эфирного масла у разных представителей флоры Таджикистана и Украины, полученных методом дистилляции. Наибольший выход среди представителей показал иссоп зеравшанский - выход масла составил 0,9-1,0 %. Результаты, полученные по выходу эфирного масла иссопа зеравшанского в 2009-2011 годах, позволяют считать, что существует корреляция между выходом эфирного масла и временем сбора. Выход эфирного масла иссопа зеравшанского колеблется от 0,4 до 1,6 %. Наибольший выход масла наблюдается из надземной части растения в период бутонизации и цветения.

3. Методом газовой хроматографии было идентифицировано тридцать девять компонентов эфирного масла. Главными компонентами ЭМИЗ являются изопинокамфон (55,44 %), в-пинен (10,55 %), пинокамфон (7,0 %), миртенил ацетат (4,11 %%), эвкалиптол (2,9 %), б-феландрен (2,6 %), и m-цимен (1,98 %).

4. Впервые изучены физические, физико-химические и структурно-механические свойства мазевых композиций на основе сочетания твердого жира, изопропилмиристата (изопропилпальмитата) и воска пчелиного, что позволило прогнозировать реологическое поведение системы, в структуре которой доминируют коагуляционные связи, что обеспечивает основе полное возобновление после снятия напряжения. Консистентные свойства композиции находятся в пределах реологического оптимума мазей.

5. Обоснован состав вспомогательных веществ в разработанной мази, который представлен жировой композицией (твердый жир, изопропилмиристат, воск пчелиный), использование которых обеспечивает получение стабильной при длительном хранении мази с необходимыми физико-химическими и структурно-механическими показателями.

6. Разработана и обоснована технология получения мази, которая предусматривает определенный температурный режим приготовления, порядок введения действующих и вспомогательных веществ, скорость и длительность перемешивания. Предложенная технология апробирована в условиях аптечного и промышленного производства.

7. Проведено исследование относительно выбора основных показателей качества разработанного препарата, а также методов их контроля. Разработаны проекты технологического регламента и МКК ЛС, которые апробированы в промышленных условиях ПАТ «Химико-фармацевтический завод «Красная Звезда» (акт внедрения от 02.06.2015 г.).

8. Обоснован тип упаковки, определены условия и срок хранения препарата, который составляет 2 годы в прохладном месте.

9. Фармакологическими исследованиями установлено высокое местнораздражающее действие мази, которое сопровождается развитием умеренно выраженного стимулирующего влияния на дыхательный центр. По выраженности местнораздражающего действия мазь «Иссопол» не уступает, а по продолжительности действия превосходит препарат сравнения - мазь «Доктор МОМ».

10. Фрагменты диссертационной работы внедрены в учебный процесс ряда ВУЗ Украины и стран СНГ.

СПИСОК ИСТОЧНИКОВ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Таточенко В. К. Практическая пульмонология детского возраста: справочник / В. К. Таточенко. ? 3-е изд. - М. : Медицина, 2006. - 250 с.

2. Милькаманович В. К. Диагностика и лечение болезней органов дыхания: прак. рук. / В. К. Милькаманович.- Мн. : ООО «Полифакт-Альфа», 1997. - 360 с.

3. Баженов Е. Е. Клинико-фармакологические основы современной пульмонологии / Е. Е. Баженов, В. А. Ахмедов, В. А. Остапенко. - М. : Бином, 2010. - 359 с.

4. Бэйкер Э. Респираторная медицина. Секреты клинических разборов / Э. Бэйкер, Д. Лай. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 464 с.

5. Челенкова И. Н. Острые и хронические воспалительные заболевания верхних дыхательных путей / И. Н. Челенкова, Д. Б. Утешев, Н. Д. Бунятян // Русский медицинский журнал. - Т. 18, № 30. - С. 44-48.

6. Инфекционная заболеваемость в РФ за 2006 год // Детские инфекции. - 2007. - № 6 (1). - С. 17.

7. Самсыгина Г. А. О рецидивирующих инфекциях респираторного тракта и диспансерной группе часто болеющих детей / Г. А. Самсыгина // Детские инфекции. - 2012. - № 11 (3). - C. 52-53.

8. Лечение и профилактика острых респираторных инфекций у часто болеющих детей, проживающих в мегаполисах / Л. С. Намазова, В. В. Ботвиньева, Р. М. Торшхоева и др. // Детские инфекции. - 2007. - № 6 (2). - С. 49-52.

9. Баранов А. А. Острые респираторные заболевания у детей : лечение и профилактика : науч.-прак. программа Союза педиатров России / А. А. Баранов. - М. : Союз педиатров России, 2002. - 69 с.

10. Симованьян Э. Н. Часто болеющие дети: оптимизация программы лечения / Э. Н. Симованьян, В. Б. Денисенко, А. В. Григорян // Педиатрия. - 2007. - № 86 (4). - С. 79-85.

11. Коровина Н. А. Острые респираторные вирусные инфекции в амбулаторной практике врача-педиатра / Н. А. Коровина, А. Л. Заплатников. - М. : Медпрактика, 2004. - 64 с.

12. Сенцова Т. Б. Респираторные вирусные инфекции / Т. Б. Сенцова // Consiliummedicum. - 2008. - № 1. - С. 72-75.

13. Взаимосвязь возрастных особенностей строения слизистой оболочки полости носа и способов введения препаратов для лечения острого инфекционного ринита у детей и подростков / Е. Ю. Радциг, М. Р. Богомильский, Е. Л. Лаберко, Н. В. Ермилова // Педиатрия. - 2012. - № 4. - С. 83-88.

14. Пискунов С. З. Диагностика и лечение воспалительных процессов слизистой оболочки носа и околоносовых пазух / С. З.Пискунов, Г. З. Пискунов. - Воронеж : Изд-во Воронежского Университета, 1991. - 182с.

15. Альтернатива топическимдеконгестантам при симптоматическом лечении острого ринита у детей / Е. Ю. Радциг, Н. В. Ермилова, Н. В. Сапаева и др. // Вопросы современной педиатрии. - 2007. - № 6 (5). - С. 92-95.

16. Харкевич Д. А. Фармакология / Д. А. Харкевич. - 10-е изд. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 908 с.

17. Крыжановский С. А. Фармакология : учеб. для студ. сред. проф. учеб. заведений : в 2 т. / С. А. Крыжановский. - М. : Издательский центр «Академия», 2007. - Т. 1. - 496 с.

18. Фармакология / под ред. Р. Н. Аляутдина. - 2-е изд., испр. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2004. - 592 с.

19. Михайлов И. Б. Клиническая фармакология : учеб. для студ. педиатр. и лечеб. фак. мед. высш. учеб. заведений / И. Б. Михайлов. - 2-е изд., перераб. и доп. - СПб. : Фолиант, 2000. - 524 с.

20. Чучалина А. Г. Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система) / А. Г. Чучалина, Ю. Б. Белоусова, В. В. Яснецова // - М. : Эхо, 2009. - Вып. Х. ? 896 с.

21. Клиническая фармакология : учеб. / под ред. В. Г. Кукеса. - 3-е изд., перераб. и доп. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 944 с.

22. Катцунг Б. Г. Базисная и клиническая фармакология : в 2-х т. / Б. Г. Катцунг;. пер. с англ. - СПб. : Бином-Невский диалект, 2007. - Т. 1. - 648 с.

23. Зубков М. Н. Алгоритм терапии острых и хронических инфекций верхних и нижних дыхательных путей / М. Н. Зубков // Русский медицинский журнал. - 2009. - Т.17, № 2.- С. 123-131.

24. Рациональнаяфармакотерапия заболеваний органов дыхания: рук-во дляпрактикующих врачей / А. Г.Чучалин, С. Н.Авдеев, В. В. Архипов и др. - М. : Литтерра, 2004. - 874 с.

25. Тарасова Г. Д. Современные тенденции терапии заболеваний верхних дыхательных путей / Г. Д. Тарасова // Фарматека. - 2011. - № 18 (231). - С. 53-58.

26. Зайцев А. А. Актуальные вопросы фармакотерапии острых респираторных вирусных инфекций / А. А. Зайцев, А. В. Власова // Фарматека. - 2015. - № 4 (297). - С. 31-35.

27. Казюкова Т. В. Лечение и профилактика острых респираторных заболеваний: тактика выбора лекарственных средств / Т. В. Казюкова, В. К. Котлуков // Фарматека. - 2014. - № 15 (288). - С. 78-83.

28. Зайцев А. А. Симптоматические средства для лечения острых респираторных вирусных инфекций / А. А. Зайцев, И.Ц. Кулагина // Фарматека. - 2013. - № 4 (257). - С. 79-82.

29. Карпищенко С. А. Хронический тонзиллит: представление о микробном пейзаже небных миндалин / С. А. Карпищенко, О. М. Колесникова // Фарматека. - 2015. - № 4 (297). - С. 13-17.

30. Жуховицкий В. Г. Бактериологическое обоснование рациональной антибактериальной терапии в оториноларингологии / В. Г. Жуховицкий // Вестник оториноларингологии. - 2004. - № 1. - С. 5-15.

31. Каманин Е. И. Инфекции верхних дыхательных путей и ЛОР-органов: практ. рук. по антиинфекционной химиотерапии / Е. И. Каманин, О. У. Стецюк; под ред. Л. С. Страчунского, Ю. Б. Белоусова, С. Н. Козлова. - Смоленск : МАКМАХ, 2007. ? 465 с.

32. Лисовская Т. Л. Местное применение препарата циклоферон в профилактике обострений хронического тонзиллита и синусита / Т. Л. Лисовская, С. В. Рязанцев // Новости оторинолар. и логопатологии. - 2001. - № 3. - С. 107-108.

33. Чесноков А. А. Лекарственные желатиновые пленки в лечении воспалительных заболеваний ЛОР-органов / А. А. Чесноков, Л. И. Верховцева // Новости оторинолар. и логопатологии. - 2001. - № 2. - С. 63-64.

34. Шеврыгин Б. В. Консервативное лечение хронического тонзиллита препаратами растительного происхождения / Б. В. Шеврыгин, В. М. Мануйлов, Е. Н. Демина // Новости оторинолар. и логопатологии. - 2001. - № 2. - С. 184-185.

35. Мубаракшина О. А. Современные возможности фармакотерапии острых респираторных вирусных инфекций / О. А. Мубаракшина // Фарматека. - 2014. - № 3 (276). - С. 19-22.

36. Полякова А. С. Антибактериальная терапия острых заболеваний ЛОР-органов у детей, современные позиции / А. С. Полякова, В. К. Таточенко // Фарматека. - 2014. - № 3 (276). - С. 53-58.

37. Носуля Е. В. Эффективность комбинированных препаратов в терапии острых воспалительных заболеваний ЛОР-органов / Е. В. Носуля // Фарматека. - 2014. - № 15 (288). - С. 64-68.

38. КняжескаяН.П. Применение амброксола в терапии респираторных заболеваний / Н.П. Княжеская// Фарматека. - 2014. - №3 (276). - С. 76-80.

39. Заплатников А. Л. Рациональная терапия кашля при инфекционно-воспалительных заболеваниях органов дыхания у детей / А. Л. Заплатников, А. А. Гирина // Фарматека. - 2013. - № 4 (257). - С. 74-78.

40. Симонова О. И. Алгоритм муколитической терапии: что должен учитывать педиатр / О. И. Симонова, Ю. В. Горинова // Фарматека. - 2015. - № 4 (297). - С. 49-54.

41. Терапиякашля у детей раннего возраста / К. С. Волков, Е. А. Вишнева, А. А. Алексеева и др. // Педиатрическая фармакология. - 2010. - № 7. - C. 95-100.

42. Компендиум 2013 - лекарственные препараты / под ред. В. Н. Коваленко. - К. : Морион, 2013. - 1408 с.

43. Машковский М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М. : Новая волна, 2012. - 1216 с.

44. Профилактика и терапия острых респираторных заболеваний с использованием гомеопатических средств / Г. А. Самсыгина, М. Р. Богомильский, Т. В. Казюкова, Е. Ю. Радциг // Педиатрия. - 2008. - Т. 87, № 6. - C. 92-96.

45. Учайкин В. Ф. Рецидивирующие респираторные инфекции у детей: применение иммуномодуляторов для лечения и профилактики / В. Ф. Учайкин // Педиатрия. - 2009. - № 88 (1). - С. 127-132.

46. Радциг Е. Ю. Эффективность комплексных гомеопатических препаратов в период сезонного всплеска заболеваемости / Е. Ю. Радциг, Е. П. Селькова, М. Р. Богомильский // Consiliummedicum. - 2007. - № 2. - С. 17-22.

47. Неспецифическая профилактика гриппа и ОРВИ в эпидемиологически...