Биохимические исследования при заболеваниях печени

Размещено на http://www.allbest.ru/

«Биохимические исследования при заболеваниях печени»



Содержание

Введение

Глава 1. Основные биохимические методы диагностики заболеваний печени

1.1 Использование показателей активности индикаторных ферментов при заболеваниях печени

1.2 Особенности липидного и пигментного видов обмена при заболеваниях печени

1.3 Особенности белкового и углеводного видов обмена при заболеваниях печени

1.4 Гематологические аспекты заболеваний печени

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Материалы исследования

2.2 Методы исследования

Глава 3. Результаты и их обсуждение

Заключение

Список литературы



ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Одним из актуальных вопросов современной медицины является определение активности и характера эволюции патологического процесса при заболеваниях печени. Печень является уникальным органом человеческого организма. Её называют центральной биохимической лабораторией человека. Печень выполняет множество важнейших функций в организме: участвует во всех видах обмена (белковом, жировом, углеводном), синтезирует факторы свертывания крови, синтезирует и выводит желчь, активирует и разрушает ряд гормонов (альдостерон, ГКС, эстрогены, тиреоидные и др.), обезвреживает ксенобиотики (цитохром Р450) и аммиак, является депо железа и витаминов (В12, жирорастворимых А, D, E, K) и др.

Клинические и биохимические изменения организма только косвенно отражают активность патологического процесса и соответствующие молекулярно-клеточные нарушения в печени. Клиническая ценность ферментных исследований и правильность интерпретации результатов лабораторных исследований по-прежнему зависит во многом от объема и качества клинических и инструментальных обследований больных. Диагностическое значение лабораторно-биохимических тестов существенно возрастает при затруднениях клинического разграничения заболеваний печени и ограниченной возможности использования ряда дополнительных методов обследования вследствие, например, высоких показателей уровня билирубина, холемии и частого присоединения холангиогенного гепатита.

В повседневной практике используются общепринятые клинические и биохимические тесты первой необходимости, такие как содержание билирубина, активность аминотрансфераз, щелочной фосфатазы и др.

Традиционно эти тесты объединяются в так называемые клинико- биохимические синдромы (цитолиза, холестаза, печёночно-клеточной недостаточности, мезенхимального воспаления). Важная роль при биохимических исследованиях болезней печени принадлежит лабораторному медицинскому технику.

Цель данной работы - изучить особенности биохимических исследований при заболеваниях печени, а также определить роль лабораторного медицинского техника при проведении этих исследований.

Объект исследования - биохимические исследования для диагностики заболеваний печени.

Предмет исследования - роль лабораторного медицинского техника при проведении биохимических исследований для диагностики заболеваний печени.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

Изучить основные биохимические методы при диагностике заболеваний печени.

Изучить особенности липидного, белкового, пигментного и углеводного видов обмена при заболеваниях печени

Определить основные обязанности, а также особенности организации рабочего места лабораторного медицинского техника

Определить основные требования к профессиональным навыкам и умениям медицинского лабораторного техника при проведении биохимических исследований для диагностики заболеваний печени.

Основные методы исследования: анализ научной литературы (преимущественно по медицине и биохимии).

Структура дипломной работы: дипломная работа состоит из введения, основной части (глава 1 и 2), заключения и списка литературных источников.



ГЛАВА 1. ОСНОВНЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ

1.1 Использование показателей активности индикаторных ферментов при заболеваниях печени

Биохимический анализ крови -- это лабораторный метод исследования, который отражает функциональное состояние органов и систем организма человека. При заболеваниях печени и желчевыводящих путей данный анализ проводят для определения функции печени.

Многие заболевания печени приводят к выраженным нарушениям некоторых функций печени при нормальном состоянии остальных функций. Поэтому точно поставить диагноз на основании результатов только одного теста, используемого в качестве надежного способа оценки общей функции печени, невозможно. Каждому больному нужно отбирать наиболее подходящие наборы тестов, оценивать их потенциальные возможности и интерпретировать результаты в зависимости от клинических проявлений болезни. Отобранные тесты должны помочь врачу оценить различные функции печени, их динамику в течении заболевания при серийном исследовании. Следует учитывать при интерпретации полученных результатов возможность их ошибочности.

Билирубин образуется в процессе катаболизма небелковой части гемоглобина (гема) из дегенерирующих эритроцитов в клетках ретикулоэндотелиальной системы (70-80%). Другим источником остальных 20- 30% билирубина являются гемопротеины, локализованные преимущественно в костном мозге и печени. Билирубин из-за внутренних водородных связей не растворяется в воде. Неконъюгированный (свободный) билирубин транспортируется в плазме в виде соединения с альбумином, не проходит гломерулярную мембрану и поэтому не появляется в моче.

Билирубин поглощается печенью, в клетках которой соединяется с глюкуроновой кислотой. Образуется диглюкоронид билирубина, или конъюгированный (связанный) билирубин. Он водорастворим и через мембрану гепатоцита путем экскрекции попадает в желчные капилляры. Таким образом, в норме транспорт билирубина через гепатоцит происходит только в одном направлении - от кровеносного к желчному капилляру.

Конъюгированный билирубин секретируется в желчные канальцы вместе с другими составными частями желчи. В кишечнике под действием кишечной флоры билирубин деконъюгируется и восстанавливается до стеркобилиногена и уробилиногена. Стеркобилиноген превращается в стеркобилин, выделяется с фекалиями, придавая стулу коричневый цвет. Уробилиноген всасывается в кровь, поступает в печень и повторно экскретируется с желчью.

Билирубин в крови обычно определяется методом Ендрашека, по которому в норме:

концентрация общего билирубина равна 6,8-21,0 мкмоль/л,

концентрация свободного билирубина равна 1,8-17,1 мкмоль/л (75% и более общего),

концентрация связанного билирубина равна 0,86-4,3 мкмоль/л (не более 25% общего).

Определение сывороточных ферментов проводят с целью выявления степени повреждения клеток печени, в первую очередь цитоплазмы и органоидов клетки, с нарушением проницаемости мембран, характеризующей цитолитический синдром, относящийся к основным показателям активности патологического процесса в печени, включая острый гепатит и активную фазу хронического гепатита и цирроза печени. Активность ферментов исследуют и при обструкции желчных путей. Следует помнить, что чувствительность и специфичность всех проб ограничена, а иногда активность ферментов повышается при внепеченочных процессах.

АСТ и АЛТ. Аспартатаминотрансфераза (АСТ, оксалатная трансаминаза) и аланинаминотрансфераза (АЛТ, пировиноградная трансаминаза) - самые информативные индикаторы гепатоцеллюлярных нарушений.

АСТ в норме: 7-40 усл. ед., 0,1-0,45 мкмоль/л АЛТ в норме: 7-40 усл. ед., 0,1-0,68 мкмоль/л

Аланинаминотрансфераза в гепатоцитах находится исключительно в цитозоле, аспартатаминотрансфераза - в митохондриях и в цитозоле. Уровень этих ферментов резко повышен при массивном некрозе, тяжелом вирусном гепатите, токсическом повреждении печени, диффузном и очаговом хроническом активном гепатите. При обструкции желчных путей уровень ферментов повышается минимально.

Обычно уровень АСТ параллелен уровню АЛТ, за исключением алкогольного гепатита, при котором отношение АСТ/АЛТ может увеличиться в два раза в результате уменьшения количества АЛТ вследствие дефицита кофактора пиридоксин-S-фосфата. Но гиперферметемия (АСТ и АЛТ) развивается не только при повреждении печени, но и при патологии мышц, иногда при остром нефрите, тяжелых гемолитических заболеваниях и др.

Щелочная фосфатаза (ЩФ) в норме (в зависимости от метода исследования):

при стандартном исследовании 25-85 МЕ,

при исследовании по Боденскому - 1,4-4,5 усл. ед.,

при исследовании в единицах Кинга-Армстронга - 1,5-4,5 усл. ед.

Щелочная фосфатаза отражает нарушение функции желчных путей, усиление синтеза фермента гепатоцитами и эпителием желчных путей. Активность фермента чаще всего повышается при обструкции желчных путей, холестазе, объемных образованиях и диффузных поражениях печени. Для установления причины повышенной активности щелочной фосфатазы, которая может быть связана с патологией костной ткани, кишечника и других тканей, используют тепловое фракционирование. Щелочная печеночная фосфатаза стабильна при воздействии тепла (56 °С в течение 15 мин).

Гаммаглутамилтрансфераза (ГГТФ) в норме: у мужчин 15-106 усл. ед., 250-1770 нмоль/л;

у женщин 10-66 усл. ед., 167-1100 нмоль/л.

Гаммаглутамилтрансфераза катализирует перенос глутаминовой группы на другие аминокислоты, содержится в гепатобилиарной системе и в других тканях и представляет собой наиболее чувствительный индикатор желчных путей. Уровень ГГТФ повышается при болезнях поджелудочной железы, сердца, почек и легких, диабете и алкоголизме. Метод неспецифичен, что снижает его диагностическую ценность для клиники.

Глутаматдегидрогеназа (ГДГ) в норме: 0-0,9 усл. ед., 0-15 нмоль/л. Уровень ГДГ повышается при острой интоксикации алкоголем и лекарствами, при остром холестазе и опухолях печени.

5'-нуклеотидаза в норме: 2-17 усл. ед., 11-12 нмоль/л. Повышается при тех же заболеваниях печени, которые сопровождаются повышением ГГТФ и ЩФ. При обструкции желчных путей, холестазе и диффузных заболеваниях печени диагностическое значение изменений активности 5'-нуклеотидазы и щелочной фосфатазы примерно одинаково.

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) в норме: 100-340 усл. ед., 0,8-4 мкмоль/л. Лактатдегидрогеназа определяется во всех тканях и ее измерение обычно не помогает в диагностике болезней печени. Уровень ЛДГ умеренно повышается при остром вирусном гепатите, циррозе, метастазах рака в печени и иногда при болезнях желчных путей.

Белки сыворотки отражают синтезирующую функцию печени. Они не относятся ни к ранним признакам, ни к чувствительным индикаторам болезней печени и поэтому не имеют большой ценности для дифференциальной диагностики.

Альбумин - основной белок, синтезируемый печенью (норма в сыворотке 35-50 г/л). Снижение его уровня в сыворотке отражает тяжелые заболевания, например, циррозы печени.

Глобулины сыворотки (норма в сыворотке 20-35 г/л) представлены альфа- глобулинами и бета-глобулинами, включающими гамма-фракцию и иммуноглобулины A, G, M:

- Гамма-глобулины сыворотки крови (норма 8-17 г/л или 14-21,5% от общего количества белка);

- Ig A: норма 97-213 ед., 90-450 мг/мл;

- Ig G: норма 70-236 ед., 565-1765 мг/10 мл;

- Ig М: норма 105-207 ед., мужчины - 60-250 мг/100 мл, женщины 70-280 мг/100 мл.

Выраженное повышение гамма-глобулина и иммуноглобулинов выявляется при активном хроническом гепатите и активных формах цирроза печени.

Факторы свертывания крови, за исключением фактора VIII, синтезируются в печени. Период полувыведения большинства из них составляет несколько часов или суток. Синтез факторов II, VII, IX и X зависит от витамина К. Способность печени синтезировать факторы свертываемости крови оценивают путем определения протромбинового времени (норма 11-16 с), отражающего взаимодействие этих факторов (скорость превращения протромбина в тромбин в присутствии тромбопластина и кальция). Большинство факторов свертывания зависит от витамина К. Тяжелые острые или хронические паренхиматозные болезни печени сопровождаются удлинением протромбинового времени, свидетельствующем о неблагоприятном прогнозе. Протромбиновое время увеличивается также при дефиците витамина К. О его дефиците свидетельствуют уменьшение протромбинового времени после парентерального назначения витамина К. Частичное тромбопластиновое время, отражающее активность фибриногена, протромбина и факторов V, VIII, IX, X, XI и XII при тяжелых болезнях печени также может удлиняться.

Холестерин, липиды и липопротеиды синтезируются в печени. Изменения их содержания в сыворотке крови относятся к чувствительным, но не специфическим индикаторам болезней печени. У больных с тяжелыми паренхиматозными поражениями печени уровень холестерина бывает обычно низким, снижается уровень липопротеидов. Внутри- и внепеченочный холестаз сопровождается повышением в сыворотке уровней неэстерифицированного холестерина и фосфолипидов.

Желчные кислоты образуются в печени и участвуют в расщеплении и всасывании жиров. Из крови воротной вены поступают в печень, но при повреждении паренхимы и портокавального шунтирования возможен возврат желчных кислот в кровь. Определение желчных кислот в сыворотке крови пока не получило широкого применения в клинической практике.

Аммиак крови (норма 19-43 мкмоль/л) повышается при некоторых острых и хронических болезнях печени вследствие нарушения цикла мочевины, которой печень детоксицирует аминогруппы. Однако абсолютное значение этого показателя не коррелирует с тяжестью клинических проявлений.

Бромсульфалеиновая проба позволяет оценить экскреторную функцию печени. После внутривенного введения 5% стерильного раствора бромсульфалеина из расчета 5 мг/кг его уровень в сыворотке в течение 45 минут снижается и в норме остается не более 5%, а затем в течение 2 ч возрастает, что отражает процесс поглощения бромсульфалеина печенью, его конъюгацию и возвращение в кровь. Но при использовании бромсульфалеина возможны токсические реакции, что ограничивает использование этой пробы.

б-фетопротеин (альфа-фетопротеин). Индикатор регенерации и опухолевого роста печени - б-фетопротеин - в сыворотке или отсутствует, или определяется в минимальных концентрациях - менее 15- 25 нг/мл. Значительное (пяти-восьмикратное) увеличение б-фетопротеина в сыворотке крови является характерным признаком гепатоцеллюлярной карциномы. При возникновении регенераторных процессов в печени при тяжелых формах гепатитов концентрация б-фетопротеина повышается в 1,5-4 раза. В клинике определение б-фетопротеина используют как скрининговый тест.

Вирусные антигены и антитела имеют важное диагностическое значение:

При вирусном гепатите В в крови определяются:

- HВs Ag - поверхностный антиген;

- HВe Ag - антиген, свидетельствующий о репликации вируса;

- HBc Ag - антиген сердцевины ("коровский");

- анти-HBs - антитела к поверхностному антигену;

- анти-HBс - антитела к коровскому антигену.

При вирусном гепатите D в крови определяются анти-HDV (антитела к вирусу D) класса IgM, HВs Ag, являющегося оболочкой вируса D, и другие маркеры ВГВ.

При вирусном гепатите С в крови циркулируют анти-HCV IgM и G и РНК HCV, являющегося показателем репликации вируса.

Антитела к митохондриям имеют важное диагностическое значение. Они выявляются в высоких титрах у 95% больных с первичным билиарным циррозом печени, у 30% больных с хроническим аутоиммунным гепатитом и у некоторых больных коллагенозами. Эти антитела отсутствуют у больных с механической обструкцией желчных путей и первичным склерозирующим холангитом. У 70% больных хроническим гепатитом в крови выявляют антитела к гладким мышечным волокнам и антинуклеарные антитела к двухцепочечной ДНК.

1.2 Особенности липидного и пигментного видов обмена при заболеваниях печени

Печень является основным органом метаболизма липидов (холестерин, фосфолипиды, триглицериды и др.) и липопротеинов (ЛП). Холестерин (ХС) обнаруживается в мембранах и является предшественником желчных кислот и стероидных гормонов. Он синтезируется в печени, тонкой кишке и других органах. Часть холестерина абсорбируется вкишечнике и достигает печени в связанном с хиломикронами состоянии. ХС образуется в основном из ацетил- КоА в микросомальной фракции и в цитозоле[15]. Его синтез в печени подавляется высокохолестериновой диетой и голоданием и усиливается при наложении билиарной фистулы или перевязке желчного протока, а также при образовании лимфатической фистулы. ХС, содержащийся в мембранах и в желчи, представлен преимущественно свободной фракцией. Основной путь выведения ХС - его экскреция с желчью. В плазме и некоторых органах, например в печени, надпочечниках и коже, также обнаруживают эфиры ХС, которые являются менее полярными, чем ХС, и поэтому еще менее растворимыми в воде. Этерификация происходит в плазме под действием синтезируемого в печени фермента лецитинхолестиринацилтрансферазы (ЛХАТ). Фосфолипиды (Ф) - гетерогенная группа веществ, состоящих из одного или более остатков фосфорной кислоты и азотистых оснований (холин, этаноламин, серин). В состав Ф входят остатки высших жирных кислот. Ф являются важной составной частью клеточных мембран и участвуют во многих химических реакциях. Из Ф плазмы и клеточных мембран наибольшая часть приходится на фосфатидилхолин (лецитин). Триглицериды (ТГ) - имеют более простое строение и состоят из глицерина, гидроксильные группы которого этерифицированы жирными кислотами. Содержащиеся в организме человека ТГ характеризуются значительным разнообразием входящих в их состав жирных кислот. ТГ служат энергетическим депо и средством переноса энергии от кишечника и печени к тканям.

Липопротеины (ЛП) - необходимы для транспорта и метаболизма липидов. ЛП - различные по плотности частицы, что лежит в основе их классификации. Поверхностные слои ЛП состоят из нескольких типов аполипопротеинов, свободного ХС и Ф. Внутренняя часть ЛП представлена эфирами ХС, ТГ и жирорастворимыми витаминами. Существует несколько путей метаболизма ЛП, среди которых ведущая роль принадлежит двум. Первый из них участвует в трансформации жиров, абсорбированных в кишечнике, а второй - в переработке эндогенных липидов. Эти пути имеют общие звенья[5].

Пищевые жиры всасываются в тонкой кишке и включаются в состав хиломикронов. Последние проникают в кровоток (через грудной лимфатический проток), где ТГ удаляются при участии фермента липопротеинлипазы. ТГ утилизируются или накапливаются в тканях. Остатки хиломикронов захватываются печенью, а ХС метаболизируется, включается в состав плазматических мембран либо выводится с желчью. При втором пути метаболизма ТГ включаются в образуемые в печени ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП). В крови под действием липопротеинлипазы ТГ отщепляются от Л ПОПП. При этом частицы ЛПОНП уменьшаются в размерах и образуют ЛП промежуточной плотности (ЛППП), а затем - ЛП низкой плотности (ЛПНП), являющиеся основными переносчиками ХС. ЛПНП преимущественно удаляются посредством специфических рецепторов на поверхности гепатоцитов. На других клетках также имеются подобные рецепторы, играющие важную роль в образовании атеросклеротических бляшек.

ЛП высокой плотности (ЛПВП) ускоряют удаление ХС из тканей. ХС, содержащийся в ЛПВП захватывается печенью либо включается в состав ЛППП, приводя к образованию зрелых ЛПНП. Удаление ХС из тканей посредством ЛПВП играет важную роль, так как предотвращает развитие ишемической болезни сердца.

Большинство аполипопротеинов образуется в печени, часть из них синтезируется также в кишечнике. Некоторые аполипопротеины, будучи структурным компонентом ЛП, выполняют также и другие функции:

a по А-1 активирует ЛЧАТ в плазме, С-Н активирует липопротеинлипазу.

Метаболизм липидов при болезнях печени Холестаз

При холестазе повышается уровень общего и свободного ХС в сыворотке. Механизм этого повышения неизвестен. Тем не менее это не просто следствие задержки ХС, в норме выделяемого с желчью. В повышении уровня ХС в сыворотке участвуют 4 фактора: заброс ХС из желчи в кровоток, повышение образования ХС в печени, снижение активности ЛХАТ, регургитация содержащегося в желчи лецитина, что способствует переходу в плазму тканевого холестерина. В то время как при остром холестазе иногда отмечается незначительное (в 1.52 раза) повышение уровня ХС, при хронических заболеваниях, особенно при послеоперационных стриктурах и первичном билиарном циррозе, этот показатель достигает очень больших значений. При пятикратном повышении уровня ХС в сыворотке отмечается появление кожных ксантом. Недостаточное питание приводит к снижению уровня ХС в сыворотке, что объясняет нормальное содержание ХС у части больных с механической обструкцией желчных путей злокачественной опухолью.

Содержание эфиров ХС при холестазе снижается вследствие дефицита ЛХАТ, тогда как уровень ТГ повышается. В сыворотке выявляется аномальный липопротеин X, который содержит большое количество свободного ХС и лецитина и при электронно-микроскопическом исследовании имеет вид двухслойных дисков. Изменения эритроцитов при холестазе связаны с нарушением содержания ХС и ЛП[17, c.30].

Печеночноклеточное поражение.

При повреждении гепатоцитов уровень ТГ в сыворотке повышается в связи с накоплением ЛПНП, которые богаты ТГ, а концентрация эфиров хо- лестерина снижается вследствие низкой активности фермента ЛХАТ. При циррозе печени уровень общего ХС в сыворотке обычно нормальный. Его снижение свидетельствует о нарушении питания и декомпенсации цирроза. При жировой печени алкогольной этиологии наряду с увеличением содержания ТГ повышается уровень ЛПОНП. При поражении печени гепатотоксичными препаратами нарушение синтеза апопротеинов приводит к нарушению выведения ТГ с ЛПОНП и развитию в последующем жировой печени.

Анализ крови на содержание в сыворотке эфиров ХС, ЛП, липопротеина X и активность ЛХАТ при обычном исследовании не выполняют. Эти показатели не играют существенной роли в диагностике или оценке функции печени, хотя низкая активность ЛХАТ в раннем периоде после трансплантации печени может свидетельствовать о нарушении функции трансплантата.

Желчные кислоты

Желчные кислоты (ЖК) образуются исключительно в печени. Ежедневно 250-500 мг ЖК синтезируется и теряется с калом. Синтез ЖК регулируется по принципу отрицательной обратной связи количеством ЖК, которые возвращаются в печень в процессе энтерогепатической циркуляции. Под действием бактерий кишечника первичные ЖК подвергаются 7а-дегидроксилированию с образованием вторичных ЖК: дезоксихолевой и небольшого количества литохолевой. Третичные ЖК, в основном, урсо- дезоксихолевая, образуются в печени путем изомеризации вторичных ЖК. ЖК соединяются в печени с аминокислотами глицином и таурином, что предотвращает их всасывание в желчных путях и тонкой кишке, но непредотвращает всасывание в терминальном отделе подвздошной кишки. Сульфатирование и глюкуронирование могут усиливаться при циррозе или холестазе, при которых в моче и желчи обнаруживают избыток этих коньюгатов.

Соли ЖК экскретируются из гепатоцитов в желчные канальцы против градиента концентрации за счет потенциалзависимой и опосредованной переносчиком - гликопротеином процесса диффузии. ЖК, соединяясь с ХС и фософолипидами, образуют взвесь мицелл и способствуют эмульгированию и всасыванию жиров. Снижение секреции ЖК вызывает стеаторрею. Абсорбированные соли ЖК попадают в систему воротной вены и в печень, где интенсивно захватываются гепато- цитами благодаря наличию градиента концентраций ионов (Naи Cl) и путем простой диффузии («флип-флоп») через липидную мембрану. Нарушение внутрипеченочного метаболизма ЖК играет важную роль в патогенезе холестаза. Попадание ЖК в кровь у больных с желтухой приводит к образованию мишеневидных клеток в периферической крови и выведению коныогированного билирубина с мочой.

Общий уровень ЖК в сыворотке отражает реабсорбцию из кишечника тех ЖК, которые не экстрагировались при первом прохождении через печень и служит критерием оценки взаимодействия между двумя процессами: всасыванием в кишечнике и захватом в печени. Уровень ЖК в сыворотке в большей степени зависит от абсорбции в кишечнике, чем от их экстракции печенью. Повышение уровня ЖК в сыворотке свидетельствует о гепатобилиарном заболевании. Диагностическая ценность уровня ЖК при вирусном гепатите и хронических заболеваниях печени оказалась ниже, чем предполагалось ранее. Тем не менее, этот показатель более ценен, чем концентрация альбумина в сыворотке и протромбиновое время, так как он не только подтверждает поражение печени, но и позволяет оценить её выделительную функцию и наличие портосистемного шунтирования крови. Уровень ЖК имеет также прогностическое значение, так как при синдроме Жильбера их концентрация остается в пределах нормы. Определение уровня отдельных фракций ЖК в сыворотке не представляет диагностической ценности. Отмечено лишь, что при холестазе повышается соотношение тригидрокси- и дигидроксикислот. У больных с печеночноклеточной недостаточностью это соотношение невысокое. Коньюгация аминокислот не нарушается даже при тяжелых поражениях печени(Ройтберг, 2011).

Уровень билирубина в сыворотке повышается как при холестатиче- ских, так и при печеночноклеточных поражениях. При этом билирубин находится преимущественно в связанном состоянии. Изолированное повышение уровня билирубина в сыворотке (без повышения активности ферментов) может носить семейный характер или быть следствием гемолиза. При остром вирусном гепатите билирубин обнаруживается в моче до появления уробилиногена или развития желтухи. При лихорадке неясной этиологии наличие билирубина свидетельствует в пользу гепатита. В качестве скринингового исследования определение билирубина в моче представляет определенную ценность в диагностике преджелтушного периода гепатита. Под влиянием бактерий билирубин в кишечнике превращается в бесцветные тетрапиррольные соединения, которые называют общим термином «уробилиноген». Приблизительно 20% от его общего количества абсорбируется в кишечнике и затем вновь экс- кретируется печенью с желчью. Небольшая часть уробилиногена выделяется с мочой. При полной обструкции желчного протока уробилиноген в моче может отсутствовать. Более чувствительные тесты, позволяющие определить уровень уробилиногена в сыворотке, а также визуализационные методы диагностики вытеснили метод определения концентрации уробилиногена в моче. Исследование содержания уробилиногена и билирубина в моче часто дает ложноотрицательные результаты и поэтому не играет существенной роли в диагностике заболеваний печени[21].

Для оценки функции печени при отсутствии желтухи в некоторых случаях прибегают к внутривенному введению бромсульфалеина, который быстро выводится печенью и экскретируется с желчыо. Однако высокая стоимость, возможные побочные эффекты, и неудобства, присущие этому исследованию, обусловливают редкое его применение в настоящее время. Проба с индоцианином зеленым (ИЗ) основана на том, что ИЗ удаляется из сосудистого русла печенью и внепеченочного пути экскреции препарата не существует. ИЗ находится в неконьюгированном состоянии и не участвует в энетерогепатической циркуляции. По сравнению с бромсульфалеином этот метод более безопасный и специфичный, хотя и более дорогой. Иногда его применяют для оценки печеночного кровотока.

Особенности белкового и углеводного видов обмена при заболеваниях печени Белки плазмы крови синтезируются на полирибосомах шероховатой эндоплазматической сети гепатоцитов и снижение их уровня обычно отражает нарушение синтеза белков в печени, хотя может быть вызвано также изменением объема циркулирующей крови и потерей белка через кишечник или с мочой. Некоторые образующиеся в печени белки (фибриноген, гаптоглобин, альфа-1-антитрипсин, компонент СЗ комплемента и церулоплазмин) относят к белкам острой фазы, так как их уровень в плазме повышается в ответ на повреждение ткани, например, при воспалении. Механизм ответа острой фазы сложный; показана роль в его реализации цитокинов: интерлейкина-1, интерлейкина-6, фактора некроза опухоли и др. Интерлейкин-6 связывается с рецептором на поверхности гепатоцита, что стимулирует передачу сигнала от мембраны гепатоцита к ядру. В ядре происходит индукция синтеза специфических ядерных факторов с промоторными локусами генов некоторых белков острой фазы. Существуют также постртранскрипционные и траскрипционные механизмы регуляции. Цитокины могут также подавлять образование альбумина, трансферррина и ряда других белков.

У здорового человека в печени ежедневно образуется Юг альбумина, в то время как при циррозе печени - 4г. При болезнях печени уровень альбумина в сыворотке снижается медленно, так как период его полураспада составляет 22 дня, поэтому у больных, умирающих от фульминантной печеночной недостаточности, концентрация альбумина в сыворотке может быть нормальной[26].

Гаптоглобин представляет собой гликопротеин, состоящий из полипептидных цепей а и р, которые ковалентно соединены между собой дисульфидными связями. Низкий уровень этого белка наблюдается при тяжелом хроническом заболевании печени и гемолитическом кризе. Церулоплазмин - основной медьсодержащий белок плазмы, определяющий её оксидазную активность. У 95% гомозигот и у 10% гетерозигот по болезни Вильсона уровень этого белка снижен. У всех больных с хроническим гепатитом необходимо исследовать уровень церулоплазмина для исключения болезни Вильсона, при которой показано лечение пеницилламином. 11изкая концентрация Ц наблюдается при тяжелом декомпенсированном циррозе печени другой этиолгии, не связанной с болезнью Вильсона. Трансферрин - белок, участвующий в транспорте железа. При идиопатическом гемохроматозе у нелеченныхбольных трансферрин более чем на 90% насыщен железом. При циррозе печени уровень трансферрина может снижаться.

Альфа-Фетопротеин (АФП) является нормальной составной частью спектра плазменных белков у плода после 6 недели развития. Его уровень достигает максимума на 12-14 неделе. Через несколько недель после рождения белок исчезает из крови, однако вновь может появиться в крови больных первичным раком печени и выявляется в опухолевой ткани методом непрямой иммунофлуоресценции. Повышение уровня этого белка выявляется при эмбриональных опухолях яичников и яичек и при эмбриональной гепатобластоме. Концентрация белка может повышаться при раке ЖКТ с метастазами в печень. Повышение содержания А-ФП выявляют при хроническом HbsAg-отрицательном гепатите и при остром вирусном гепатите, что отражает процесс регенерации гепатоцитов. Очень высокое содержание А- ФП является признаком первичного рака печени. У больных с хроническим HbsAg- положительным гепатитом повышение содержания А-ФП имеет особо важное значение, свидетельствуя о развитии гепатоцеллюлярной карциномы.

Определенную ценность для диагностики и оценки степени повреждения печени имеют результаты разделения белков с помощью электрофореза. При циррозе печени содержание альбумина снижено. При остром гепатите эти изменения выражены значительно меньше. Уровень преальбумина плазмы может быть также чувствительным показателем функционального состояния печени.

Фракция альфа-1-глобулинов состоит из гликопротеинов и связывающих гормоны глобулиновых белков. Их уровень снижается при диффузных заболеваниях печени параллельно с уменьшением содержания альбумина в сыворотке. Острые лихорадочные состояния и злокачественные опухоли сопровождаются повышением концентрации альфа-1-глобулинов. На 90% эти белки состоят из альфа-1-антитрипсина[17].

В состав альфа-2 и бета-глобулинов входят ЛП. При холестазе повышение уровня этих белков коррелирует с количеством липидов в сыворотке. Определение уровня этих глобулинов может помочь в дифференциальной диагностике билиарного и небилиарного цирроза печени. Высокое содержание ЛП при этом свидетельствует в пользу билиарного цирроза.

При циррозе печени повышается и концентрация гамма- глобулинов вследствие увеличения их синтеза. Источником этих белков являются плазматические клетки, число которых в костном мозге и печени возрастает. При болезнях печени концентрация их максимальна, причем увеличение этой фракции глобулинов носит поликлональный характер (поликлональная гаммапатия). Моноклональная гаммапатия встречается редко и может быть связана с возрастом больного, а не с хроническим заболеванием печени.

Иммуноглобулины синтезируются В-лимфоцитами. При хроническом гепатите и криптогенном циррозе печени существенно повышается уровень IgG. У больных с аутоиммунным гепатитом его уровень снижается при лечении кортикостероидами. Медленный неуклонный рост его уровня наблюдается при вирусном гепатите и алкогольном циррозе печени. Содержание IgMзначительно увеличивается при первичном билиарном циррозе и в меньшей степени при вирусном гепатите и циррозе другой этиологии. Концентрация IgAсущественно возрастает у больных с алкогольным циррозом, а также при первичном билиарном и криптогенном циррозе. Повышение концентрации секреторной формы IgA(s-IgA) в сыворотке, которая является основной иммуноглобулиновой фракцией желчи, может быть обусловлено проникновением желчи из желчных протоков в систему воротной вены. При хроническом активном гепатите и криптогенном циррозе изменение уровня иммуноглобулинов носит одинаковый характер (т.е. повышена концентрация IgGи IgMи в меньшей степени IgA). Приблизительно у 10% больных с хрониче- ским холестазом вследствие обструкции желчного протока повышен уровень иммуноглобулинов всех трех основных классов. Изменение уровня иммуноглобулинов в крови не является патогномоничным для заболеваний печени, но в совокупности с другими данными может помочь их диагностике [29].

Печень играет основную роль в обмене углеводов. Механизмы его нарушения при заболеваниях печени сложны и раскрыты не полностью.

При фульминантном остром некрозе печени содержание глюкозы в сыворотке может быть низким. При хронических заболеваниях печени это встречается редко. У больных циррозом печени при исследовании натощак уменьшается роль углеводов как источника энергии (2% у больных циррозом печени и 38% у здоровых людей) и увеличивается доля жиров (соответственно 86 и 45%). Это может быть обусловлено уменьшением образования глюкозы печенью или снижением запаса гликогена в печеночной ткани. После приема пищи у больных циррозом печени, как и у здоровых людей, отмечается быстрая утилизация пищевых углеводов, которая выражена даже в большей степени из- за нарушения способности печени к их депонированию. Это сопровождается мобилизацией триглицеридов в качестве источника энергии. При циррозе пече- ни нарушается толерантность к глюкозе при её пероральном или внутривенном введении и развивается относительная резистентность к инсулину[14].

Толерантность к галактозе при заболеваниях печени также нарушена. Для её оценки разработаны пробы с пероральным приемом галактозы или её внутривенным введением. Результаты пробы не зависят от секреции инсулина. Выведение галактозы печенью легло в основу метода исследования печеночного кровотока.



1.4 Гематологические аспекты заболеваний печени

Печень занимает центральное место в обмене веществ. Она обладает многочисленными функциями, важнейшими из которых являются:

1. Биосинтез белка и липопротеидов крови.

2. Образование желчи.

3. Метаболизм лекарств.

4. Метаболизм гормонов.

5. Депонирование железа.

6. Обмен витаминов (В12, В9).

7. Мочевинообразующая функция.

8. Участвует в обмене аминокислот.

Печень обеспечивает нормальное функционирование для других органов. В каждой печёночной клетке находятся несколько тысяч ферментов, частично они содержатся в плазме крови. При повреждении печени уровень этих ферментов в крови увеличивается или уменьшается. Возникающий ферментный спектр позволяет судить о виде и степени поражения органа, т.е. по совокупности нескольких специально выбранных ферментов можно сделать заключение о больном органе и о характере заболевания. Кроме этого, исследование желчных кислот и детоксицирующей системы печени также позволяет судить о патологии печени.

Печень состоит на 80% из паренхиматозных клеток, 16% - ретикулоэндотелиальные элементы, 4% - эндотелий кровеносных сосудов.

Гепатопатии могут быть обусловлены.

1. Нарушением проницаемости мембран печёночных клеток. При этом развивается „серозный гепатит”, и растворённые в цитозоле вещества поступают в плазму крови. В сыворотке крови увеличивается содержание ферритина, В12, наблюдается повышение активности ЛАП (лейцинаминопептидазы), АЛТ, частично АСТ, ГОТ (глутаматоксалоацетаттрансаминазы).

2. Некрозом печёночных клеток. Повышается активность митохондриальных ферментов АСТ (она на 1/3 находится в митохондриях), ГДГ (глутаматдегидрогеназа), ЛДГ5, лизосомальных ферментов - КФ (кислая фосфатаза), в-глюкоронидаза.

Причины некроза - инфекция (вирус, бактерии, простейшие), гипоксия - (ток, острая сердечная недостаточность), интоксикация неорганическими веществами (Р, Hg, Au, мышьяк), органическими веществами (CCI4, хлороформ), медикаментами, растительными ядами, метаболические факторы - белковая недостаточность, действие антиметаболитов, застой желчных кислот.

3. Нарушением обмена веществ в гепатоцитах. Это, в первую очередь, относится к белкам, поступающим в плазму крови. Диагностически важным является снижение трансферрина, альбуминов, ХЭ (холинэстеразы), протромбина, факторов свёртывания крови.

Печень играет важную роль в обмене аминокислот (трансаминирование, декарбоксилирование, глюконеогенез, синтез мочевины) и в поддержании пула аминокислоты. При тяжёлых поражениях печени (острый некроз), способность к ассимиляции аминокислот и синтезу мочевины снижается, увеличивается активность протеолитических ферментов, результатом этого является гипераминоацидемия, гипераминоацидурия (увеличение азота в крови и моче - аминный азот).

Большое значение имеет печень в обмене липидов. В N печени содержится 2-4% липидов, из них 5-50% ТАГ. Велика роль печени в обмене холестерина (из холестерина образуются желчные кислоты, стероидные гормоны, предшественники ?). в печени образуются липопротеиды плазмы крови.

Можно выделить четыре сывороточно-биохимических печёночных синдрома.

1. Синдром нарушения целостности гепатоцита (цитолиз, нарушение проницаемости мембран гепатоцита).

a) повышение активности АСТ, АЛТ, ЛДГ, изоформ ЛДГ4, ЛДГ5, СДГ, ОКТФ, альдолазы, ГДГ.

b) гипербилирубинемия (главным образом прямой билирубин).

c) повышение в сыворотке витамина В12, железа.

2. Синдром холестаза (экскреторно-билиарный).

a) повышение ГГТП, щелочной фосфатазы.

b) гипербилирубинемия.

c) гиперхолистеринемия.

3. Синдром гепатоцеллюлярной недостаточности как результат нарушения метаболизма гепатоцитов.

a) понижение активности ХГ.

b) понижение содержания протромбина, альбуминов, холестерина.

c) гипербилирубинемия.

4. Синдром раздражения печёночного ретикулоэндотелия в результате воспаления.

a) повышение содержания глобулинов в крови.

b) изменение ряда белково-осадочных проб: сулемовой, тимоловой и др., являющихся реакций на воспалительный процесс.

Таким образом, при острых паренхиматозных повреждениях ведущим является повышение цитозольных ферментов. Повышение активности этих ферментов находят даже при клинически бессимптомных формах заболеваний.

Хронические заболевания (хронический гепатит, цирроз) характеризуются высокой активностью митохондриальных ферментов и снижением содержания плазмоспецифических белков и ферментов.

Основные клинико-биохимические синдромы при заболеваниях печени представлены в таблице 1.



Таблица 1 Основные клинико-биохимические синдромы при заболеваниях печени

Синдром	Изменение биохимических показателей сыворотки крови	Клинические проявления
Синдром цитолиза	Повышение активности АЛТ, ACT, ЛДГ, ГДГ	Интоксикация печеночноклеточная
Синдром холестаза	Повышение конъюгиро- ванной фракции билирубина, ЩФ, ГГТП, ЛАП, 5-нуклеотидазы, холестерина в сыворотке крови, выявление желчных пигментов в моче, исчезновение стеркоби- лина в кале, исчезновение уробилина в моче	Желтуха, кожный зуд
Синдром поликло- нальной гаммапатии (мезенхимально- воспалительный синдром)	Повышение общего бел- ка, глобулинов, бета- и гамма - глобулинов, IgA, IgG, IgM, изменение показателей осадочных коллоидных проб (увеличение тимоловой пробы)	Г епатомегалия, спленомегалия, неспецифическая интоксикация
Недостаточность белковосинтетической функции печени	Снижение общего белка, альбумина, протромбинового ингдекса, холинэстеразы, холестерина, фибриногена А	Геморрагический син- дром, отечно-асцитический синдром

Источник:[2]

Ингибиторы, влияющие на каскад свертывания, также синтезируются печенью. К ним относятся антитромбин III, белки С и S, кофактор II гепарина. У больных циррозом печени отмечается уменьшение количества антигена ингибитора тканевого активатора плазминогена (ТАП-1) даже без признаков активации свертывания. Считается, что повышение активности ТАП-1 и осгантиплазмина ведет к повышению фибринолиза.

Болезни печени могут сопровождаться образованием структурно и функционально неполноценных белков и факторов свертывания. Особенно часто при циррозе, хроническом гепатите и острой печеночной недостаточности обнаруживается дисфибриногенемия, связанная с нарушением полимеризации фибриновых мономеров. Конечным результатом многих нарушений, несмотря на всю их сложность, становится гипокоагуляция, что требует терапевтического вмешательства в случае кровотечения или при планировании проведения какой- либо процедуры, чреватой кровотечением.



ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы исследования

Работа основана на результатах анализа клинико-лабораторных показателей, полученных при обследовании больных с заболеваниями печени, в клинико-диагностической лаборатории ФГБУЗ КБ 85 ФМБА России, на базе терапевтического отделения, кафедры терапии №2 ФПДО Московского государственного медико-стоматологического университета. Средний возраст пациентов и их количество в группах представлены в таблице 2. Выделение в соответствующие группы проводилось с помощью стандартов (протоколов) диагностики и лечения больных с заболеваниями органов пищеварения по международной классификации болезней (МКБ-10). Среди обследованных пациентов преобладали мужчины (68,4%).

Сыворотку венозной крови и плазму капиллярной крови получали путем центрифугирования при 2300 об/мин в течение 15 минут, с момента получения до анализа сыворотку хранили при температуре -2-8° С.

Этиологическая связь с соответствующей вирусной инфекцией во всех случаях документирована на основании выявления HBsAgи/или HBeAg, а также НВсАв класса иммуноглобулинов М и /или общих НВсАв, общих антител к вирусу гепатита С (HCVAB).Иная этиология заболевания исключалась при получении отрицательных результатов обследования на наличие антител к дельта-вирусу (8-ABlgM), общих антител к вирусу гепатита Е (НЕУАв), антител к вирусу гепатита A (HAVAelgM). Эти исследования проводились в сыворотке крови с использованием иммуноферментного метода.



Группы пациентов, их количество и средний возраст

Таблица 2

№ п/п	Группы пациентов	Кол-во	Средний возраст
1.	Хронический вирусный гепатит В (ХВГ-В)	63	38,6 ±5,6
2.	Хронический вирусный гепатит С (ХВГ-С)	96	43,0 ±4,2
3.	Хронический гепатит неясной этиологии (ХГНЭ)	54	46,6 ± 4,4
4.	Токсический гепатит (ТПП)	14	50,2 ± 3,8
5.	Первичный билиарный цирроз (ПБЦП)	23	47,4 ± 2,4
6.	Криптогенный цирроз (КЦП)	20	66,6 ± 2,6

Источник: составлено автором

Морфологическое обследование заключалось в проведении пункционной биопсии печени и последующем микроскопическом исследовании гистологических препаратов, которые окрашивались гематоксилином и эозином. Оценка структурных изменений печеночной ткани проводилась полуколичественным методом с использованием шкалы Knodell и вычислением индекса гистологической активности, на основе чего определялась степень активности заболевания и степень фиброза. Оценка степени активности патологического процесса у больных с гепатитами проводилась также с помощью измерения уровня активности ферментов АЛТ и ACT.

Основной контингент исследуемых больных с HBV-инфекцией характеризовался повышением активности АЛТ и ACTболее чем в 10 раз, что свидетельствовало о высокой активности процесса и степени поражения гепатоцитов. Группа больных с HCV-инфекцией имела превышение активности трансаминаз в 4-6 раз по сравнению с нормальными показателями и характеризовалось в соответствии с этим умеренной активностью патологического процесса. Больные с циррозом печени по прогностическим критериям Чайльда-Пью были отнесены к классам А, В и С. При поступлении больным проводили также диагностические обследования, включающие УЗИ органов брюшной полости с допплерографией и фиброгастроскопию. Помимо общеклинических исследований у больных проводилась оценка стандартных биохимических проб печени.

2.2 Методы исследования

Оборудование:

Автоматический настольный биохимический анализатор с

произвольным доступом FurunoСА-180

Область применения

Клиническая химия (ферменты, субстраты, липиды, электролиты) Иммунотурбидиметрия

Специфические белки Электролиты (K+, Na+, Cl-)

Мониторинг лекарственных препаратов и наркотических веществ

Производительность

180 тестов/час (450 тестов в час с ISE-модулем) Полностью открытая система

Методы

по конечной точке (в т. ч. двухточечной), кинетика (в т.ч. двухточечная), иммунотурбидиметрия, потенциометрия, дифференциальные методы, бихроматические методы в фотометрии

Линейные и нелинейные калибровки Автоматическое повторение исследования Автоматическое разведение образца Моющая станция на борту

Охлаждаемая карусель для реактивов Программа контроля качества Режимы измерения и методы

По конечной точке (в т.ч. двухточечная) Кинетика (в т.ч. двухточечная) Иммунотурбидиметрия Ионоселективная потенциометрия

Электролиты

Моно- и бихроматические режимы

Проведение анализа пациент-за-пациентом, произвольный доступ

Автоматический биохимический анализатор Cobas c произвольного доступа (Random Access).

· Предназначен для лабораторий, выполняющих 50-200 образцов в день;

· Более 100 тестов в меню клинической химии;

· Жидкие, готовые к использованию реагенты в упаковках cobas c pack легко устанавливаются на борт анализатора;

· Каждая кассета содержит все необходимые для анализа реагенты, что упрощает хранение и логистику;

· Объемы упаковок обеспечивают экономное использование при определении как рутинных, так и специфических параметров;

· Высокая стабильность калибровки уменьшает расход реагентов;

· 73% тестов требуют менее 5 мкл образца, что удобно для педиатрических образцов;

· Бесконтактное ультразвуковое перемешивание в реакционном кювете исключает возможность кросc-контаминации.

Производительность

· До 300 фотометрических тестов/час

Реагенты

· cobas c packs

· До 45 тестов на борту анализатора (42 охлаждаемые позиции для cobas c packs и 3 ISE теста)

· Объем реагента: 10-250 мкл/тест

· Автономное охлаждение реагентов

Пробы

· 108 позиций для проб, калибраторов, контролей и STAT-образцов)

· Объем пробы: 1,0-35 мкл/тест

· Материал: плазма, сыворотка, цельная кровь (для HbA1c), моча, спинномозговая жидкость

Измерение

· 66 многоразовых измерительных кювет, моющихся на борту анализатора

ISE модуль:

· Na+, K+, Cl-

· 450 ISE тестов/час

При участии аминотрансфераз в организме человека осуществляются процессы межмолекулярного переноса аминогрупп с донорской гамма- аминокислоты на акцептор - альфа-кетокислоту без промежуточного об- разования аммония. Эти процессы играют ключевую роль в синтезе и трансформации отдельных амино- и кетокислот в организме, а продукты метаболизма этих реакций принимают участие практически во всех видах обмена веществ [6, 105].

Аспартатаминотрансфераза [ACT] (К.Ф. 2.6.1.1)

Аспартатаминотрансфераза (ACT) катализирует обратимый перенос аминогруппы с L-аспарагиновой кислоты на а-кетоглутаровую и активность этого фермента определяют согласно рекомендациям IFCC(Международной федерации по клинической химии):

ACT

L-аспартат + б-кетоглутарат -L-глутамат + оксалоацетат Оксалоацетат + NADH+Н+-L-малат + NAD+

Принцип метода заключается в различии поглощения при длине волны

340 нм восстановленной (НАДН) и окисленной (НАД) форм пиридиновых нуклеотидов [44, 74]. Определение активности ACT проводилось с помощью реагентов фирмы «HUMAN»(Германия).

ACT представлена отдельными изоферментами, составляющими две основные формы фермента - митохондриальную (81 % от общей активности) и растворимую, содержащуюся как в митохондриях, так и в цитоплазме. Фермент обнаруживается во многих органах и тканях, но наибольшая активность отмечается в сердце, печени, скелетных мышцах, нервной ткани и почках.

Аланинаминотрансфераза [АЛТ] (К.Ф. 2.6.1.2)

Активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) определяли с помощью кинетического метода согласно рекомендациям IFCC:

АЛТ

L-аланин + б-кетоглутарат -пируват + L-глутамат лдг

Пируват + NADH+H-L-лактат + NAD+

Метод основан на проведении сопряженных ферментных реакций, в ходе которых пируват восстанавливается в лактат с одновременным окислением НАДН, катализируемым ЛДГ. Преимущество метода состоит в его высокой специфичности, возможности использования для расчета ак- тивности коэффициента молярной экстинции НАДН, «постоянной» пре- вращения пирувата в лактат при накоплении его в инкубационной среде [49, 74]. Как и ACT, этот фермент присутствует во многих тканях, невысокая активность отмечена также в плазме. В клетках находится в виде двух изоферментов - цитозольного и митохондриального, но содержание последней формы достаточно низкое. Наибольшее количество фермента содержится в печени. Учитывая, что активность АЛТ в эритроцитах в 6 раз превышает таковую в сыворотке (плазме) крови, необходимо с особой осторожностью анализировать и интерпретировать пробы с гемолизом.

Щелочная фосфатаза [ЩФ] (К.Ф. 3.1.3.1)

Активность щелочной фосфатазы (ЩФ) определяется с помощью унифицированного метода, основанного на учете количества образовавшегося в результате ферментативного расщепления р-нитрофенилфосфата до р-нитрофенола, дающего в щелочной среде желтое окрашивание [4, 87]:

ЩФ

р-нитрофенилфосфат + НгО >фосфат + р-нитрофенол

Фермент содержится практически во всех тканях, но наибольшее количество его сосредоточено в костной ткани, слизистой оболочке кишечника и печени. Повышение активности ЩФ в сыворотке крови не всегда позволяет с достаточной степенью достоверности составить представление об органотипической патологии. Активность ЩФ сыворотки крови часто повышена при обструктивных заболеваниях печени, холестазе, гепатитах, остеомаляции, новообразованиях.

Лактатдегидрогеназа [ЛДГ] (К.Ф. 1.1.1.27)

Активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) определяли согласно моди- фицированному методу, рекомендованному Скандинавским Комитетом по Ферментам (SCE) с помощью реагентов фирмы «HUMAN»(Германия):

ЛДГ

Пируват + NADH+H-Лактат + NAD+

ЛДГ является цитоплазматическим ферментом, обратимо катализи- рующим реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную. При использовании в качестве субстрата пирувата регистрируется уменьшение оптической плотности при длине волны 340 нм за счет снижения концентрации NADH[74, 87].

...