Изучение реакции специфической иммунной системы на вирусный гепатит В и С

Состав тест-системы:

1.Иммуносорбент - планшет полистироловый, в лунках которого србированны моноклональные антитела мыши к HCV.

2. Положительный контрольный образец (ПК).

3. Отрицательный контроль (ОК).

4.Конъюгат - антитела диагностические против Ig M и IgG человека с пероксидазой хрена.

5. Раствор для разведения конъюгата (РРК).

6. Раствор для разведения образцов.

7.ТМБ-3,3-тетрометилбензидин.

8.Цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБР).

9. Стоп-реагент.

Тест-система предназначена для серологической диагностики вирусного гепатита С - выявления суммарных антител к вирусному гепатиту С (total) у заболевших, либо перенесших гепатит пациентов. Используется для первичного (скринингового) исследования сывороток и плазмы крови пациентов с подозрением на вирусный гепатит С. Набор рассчитан на проведение 90 анализов, исключая контроли. Для исследования небольших партий проб возможны 12 независимых постановок ИФА по 4 анализа, исключая контроли.

Принцип действия

Основой тест-системы являются полипептиды, содержащие антигенные детерминанты белков, кодируемых структурой (сor) и неструктурной (NS3,NS4,NS5) областями генома С, сорбированные на поверхности лунок полистироловых планшетов. При наличии в образце, внесенном в лунку планшета, антител к H оно образуют комплекс антиген-антитело, который при внесении в лунку конъюгата-антител против иммуноглобулинов человека, меченных пероксидазой хрена, щбразует комплекс антитело-конъюгат, выявляемый по цветной реакции с ТМБ.

Ход исследования

В каждую лунку внести па 80 мкл раствора для разведения образцов. Затем внести по 20 мкл контрольных и исследуемых образцов согласно карте. Содержимое лунок изменяет свой цвет

Покрытый липкой лентой или крышкой планшет выдержать в инкубаторе в течение 60 минут при температуре 37,0°С.

По окончании инкубации промыть лунки планшета четыре раза. Полностью удалить влагу из лунок и внести в каждую лунку по 100 мкл рабочего раствора коньюгата. Планшет закрыть крышкой и инкубировать 30 минут при температуре 37,0°С. По окончании инкубации промыть лунки планшета пять раз. В каждую лунку внести по 100мкл хромогена, выдержать 30 минут при температуре от 18 до 25° С в защищенном от света месте, и промыть планшет 5 раз рабочим отмывающим раствором.

Реакцию остановить добавлением во все лунки по 150 мкл стоп-реагента и через 2-3 минуты провести учет результатов.

Учет результатов

Фотометрию проб проводят при следующих условиях: длина волны измерения-450 нм, фоновой волны-620-680 нм. Присутствие или отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита HBs-Ag определяется отношением оптической плотности.

Результаты ИФА регистрировать спектрометрически, измеряя оптическую плотность при двух длинах волн- 450 нми 620-650 нм. Результаты учитывают при соблюдении следующих условий:

оптическая плотность в лунках с ОП_к+-не менее 1,0;

оптическая плотность в лунках с ОП_к-не более 0,25.

Рассчитать критическое значение оптической плотность по формуле: ОП_крит= ОПк- +0,200

Где 0,200 - коэффициент, определяемый методом статистической обработки результатов постановки ИФА на предприятии-изготовителе. Если значение оптической плотности с образцом выше или равно ОП _крит., образец должен быть исследован повторно в данном тесте не менее чем в двух лунках. Если при повторном исследовании величина ОП образца в обеих лунках меньше ОПкрит., то образец учитывается как отрицательный. Все повторно положительные образцы должны быть протестированы в подтверждающем конфирматорном - тесте [7,11].

Набор реагентов для подтверждения наличия поверхностного антигена вируса гепатита В в сыворотке или плазме крови человека методом иммуно-ферментного анализа - ИФА- анти HCV - П

Набор предназначен для подтверждения наличия антител к различным детерминантам вируса гепатита С в сыворотке крови или плазме крови человека «in vitro» методом непрямого и конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа.

Состав тест-системы:

1. Иммуносорбент - планшет полистироловый, в лунках которого србированны моноклональные антитела мыши к HBs-Ag.

2. Отрицательный контроль коньюгат

3. Положительный контроль.

4. Раствор для разведения коньюгата.

5. Раствор для разведения сывороток.

6 Буферный раствор для субстрата.

7 Хромоген.

8. Субстратный буферный раствор.

9 Фосфотно-солевой твиносодержащий буферный раствор.

10. Стоп-реагент.

Ход исследования

I - внесение исследуемых образцов и контролей в планшет согласно карте (таблица 1).

II - инкубация образцов сыворотки (плазмы) крови человека с белками иммуносорбента и подтверждающим агентом при температуре (37±1) °С в течение 30 минут.

III - промывка планшета, внесение коньюгата, инкубация с конъюгатом при температуре (37±1) °Св течение 30 минут.

IV - промывка планшета, внесение рабочего раствора субстрата, инкубация в темном месте в течение 15 минут.

V - остановка реакции и учет результатов.

VI - обработка полученных результатов.

Таблица 1 - Схема внесения образцов в лунки планшета

Номер лунки	Номер стрипа	Вид антитела
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	К+	К+	3	7	11	15	19	23	27	31	35	39	core*
B	К+	К+	3	7	11	15	19	23	27	31	35	39	NK*
C	К-*	К-	4	8	12	16	20	24	28	32	36	40	core
D	К-	К-	4	8	12	16	20	24	28	32	36	40	NK
E	К-	К-	5	9	13	17	21	25	29	33	37	41	core
F	К-	К-	5	9	13	17	21	25	29	33	37	41	NK
G	1*	2	6	10	14	18	22	26	30	34	38	42	core
H	1	2	6	10	14	18	22	26	30	34	38	42	NK

Примечания: К+* - положительный контроль; К-* - отрицательный контроль; 1* - номер пробы; core* - это специфические антитела к отдельным структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С; NK* - неструктурные антителавыявляются на самых ранних этапах сероконверсии.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерной программы «Excel».

3. Результаты исследований и их обсуждение

Информация, полученная в результате изучения литературных источников, свидетельствует о том, что вирус гепатита при попадании в организм человека вызывает иммунную реакцию в виде специфического и неспецифического иммунного ответа. Диагностика вирусной инфекции осуществляется в несколько этапов, включающих первичный сбор данных и лабораторные исследования по определению антигенов вируса или антител в организме человека.

Скрининговому обследованию на наличие HBsAg и HCV(total) в периферической крови предшествовало первичное эпидемиологическое тестирование на базе учреждений здравоохранения, представленных в таблице 2.

Таблица 2 - Количество обследованных на ВГ в городе Светлогорске в IV квартале 2014 года

Учреждение или группа пациентов	Пол	Месяц	Всего
		октябрь	ноябрь	декабрь
Поликлиника (кабинет инфекционных заболеваний)	м	110	107	102	319
	ж	86	86	70	242
Кожно-венерологический диспансер	м	7	2	2	11
	ж	2	1	1	4
Наркологический диспансер	м	52	38	34	124
	ж	17	24	8	49
Медицинские работники	м	11	7	6	24
	ж	71	32	62	165
Всего	м	180	154	144	478
	ж	176	143	141	460
		356	297	285	938

Согласно Постановлению Санитарных норм и правил «Требования к организации и проведению санитарно-противоэпидемических мероприятий, направленных на предупреждение возникновения и распространения вирусных гепатитов» и признании утратившим силу постановления Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 14 ноября 2011 г. № 112. В группу повышенного риска инфицирования ПВГ входят следующие лица: потребляющие наркотические средства и их аналоги; имеющие беспорядочные половые связи; проживающие совместно с пациентами, инфицированными вирусами ПВГ; регулярно получающие кровь и ее компоненты, имеющие в анамнезе трансплантацию органов и (или) тканей, биологических материалов человека, другие инвазивные медицинские вмешательства; дети, рожденные от инфицированных матерей. В группу риска профессионального заражения входят: обучающиеся в учреждениях среднего специального образования, учреждениях высшего образования по профилю образования «Здравоохранение»; медицинские работники, работники других специальностей, которые в процессе своей деятельности имеют контакт с кровью и ее компонентами или другими биологическими материалами человека. При выявлении у пациентов двух и более критических анкетных признаков, например, контакт и др. их включали в группу риска.

При первичном скрининговом лабораторном обследовании на наличие специфических серологических маркеров ВГ было обследовано 938 человек, 478 мужчин и 460 женщин, представляющих пациентов кабинета инфекционных заболеваний (319 и 242), кожно-венерологического кабинета (11 и 4), наркологического диспансера (124 и 49 соответственно). Медицинские работники составили 189 человек, в том числе 24 мужчин и 165 женщин. Таким образом, обследовано примерно одинаковое количество мужчин и женщин, в то время как среди медицинских работников женщины составили 87 %, так в этой сфере деятельности они преобладают. Ежемесячно обследовано примерно одинаковое количество человек: 356, 297, 285 в октябре, ноябре и декабре, соответственно.

Экспериментальные исследования по изучению показателей специфической ИС на наличие или отсутствие антител к поверхностному антигену вируса гепатита В и антител ВГС (total) методом ИФА в сыворотке крови 938 пациентов были выполнены в лаборатории серодиагностики инфекционных заболеваний УЗ «Светлогорская ЦРБ» в IV квартале 2014 года.

В результате скринингового обследования получены данные оптической плотности образцов сыворотки крови пациентов на наличие поверхностного антигена к вирусам ВГ, представленные в виде протоколов №№ 1 - 10 (таблицы 3 57) по ВГВ

Результаты обследования по ВГВ

В таблице приведена оптическая плотность ? десятичный логарифм непрозрачности или взятый с обратным знаком логарифм коэффициента пропускания пучка света через исследуемый в разной степени окрашенный раствор в зависимости от наличия антигена (таблица).

Таблица 3 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 1

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,100	0,011	0,040	0,035	2,110	0,022	0,034	0,020	0,019	0,031	0,031	0,031
B	3,170	0,034	0,020	0,015	0,020	0,045	0,028	0,011	0,026	0,012	0,020	0,035
C	3,060	0,038	0,700	0,020	0,013	0,010	0,011	0,032	0,011	0,011	0,014	0,023
D	0,009	0,020	0,022	0,048	0,030	0,016	0,010	0,016	0,013	0,331	0,031	0,031
E	0,012	0,011	2,900	0,342	0,034	0,020	0,016	0,035	0,035	0,011	0,020	0,018
F	0,010	0,020	0,011	0,040	0,011	0,015	0,020	0,060	0,011	0,034	0,021	0,016
G	0,012	0,015	0,015	0,020	0,014	0,032	0,020	0,033	0,030	0,038	0,031	0,022
H	0,011	0,037	0,046	0,011	0,020	0,015	0,037	3,110	0,056	0,011	0,037	0,011
Примечания 1 красным отмечены лунки где внесен положительный контроль. 2 зеленым отмечены лунки где внесен отрицательный контроль. 3 исследуемые образцы ? G1 ? H12.

ОП критическая для данного исследования составила 0,070. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (0,700; 0,331; 2,900; 0,342; 2,110; 3,110) являются положительными и указанные 6 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 4 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,060	3,111	3,170	0,060
Отрицательный контроль	0,009	0,010	0,012	0,001
Исследуемые образцы	0,011	0,164	3,100	0,259
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,012	0,024	0,060	0,010
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,331	1,582	3,110	1,124

Таблица 5? Серологический протокол скринингового обследования на Наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 2

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	2,988	0,012	0,040	0,015	0,020	2,020	0,034	0,030	0,015	0,010	0,011	0,015
B	3,004	0,014	0,028	0,015	0,020	0,027	0,015	0,009	0,026	0,012	0,015	0,025
C	3,034	0,018	0,022	0,020	0,008	0,440	0,035	0,032	0,034	0,035	0,014	0,043
D	0,015	0,020	0,022	0,032	0,020	0,008	0,010	0,016	0,009	1,050	0,020	0,015
E	0,013	0,024	0,014	0,012	0,034	0,020	0,016	0,038	0,035	0,011	0,009	0,009
F	0,018	0,020	0,024	0,010	0,510	0,035	0,020	0,035	0,008	0,034	0,021	0,016
G	0,012	0,015	0,015	0,009	0,014	0,032	0,010	0,033	0,030	0,038	0,031	0,027
H	0,043	0,014	0,036	0,012	0,020	0,008	0,037	0,019	2,056	0,028	0,017	0,026

ОП критическая для данного исследования составила 0,075. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (0,51; 0,44; 2,02; 2,056; 1,05) являются положительными и указанные 6 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 6 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,988	3,008	3,034	0,016
Отрицательный контроль	0,013	0,015	0,018	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,089	2,056	0,127
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,021	0,043	0,008
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,440	1,215	2,056	1,124

Таблица 7 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 3

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
A	3,156	0,026	0,040	0,015	0,010	0,020	0,024	0,010	0,045	0,017	0,011
B	3,090	0,014	0,021	0,013	0,020	0,017	0,015	1,530	0,026	0,012	0,009
C	3,140	0,038	0,012	0,020	0,020	0,030	0,035	0,009	0,024	0,015	0,014
D	0,010	0, 013	0,022	0,019	0,021	0,035	0,010	2,120	0,033	0,010	0,010
E	0,012	0,018	0,014	0,009	0,014	0,020	0,016	0,010	0,009	0,011	0,016
F	0,010	0,010	0,024	0,010	0,010	0,009	0,020	0,035	0,010	0,014	0,021
G	0,012	0,013	0,015	0,010	0,016	0,032	0,020	0,033	0,010	0,018	0,009
H	0,223	0,014	0,009	0,012	0,020	0,009	0,017	0,019	0,016	0,028	0,037

ОП критическая для данного исследования составила 0,071. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (0,223; 1,53; 2,12) являются положительными и указанные 3 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Обработка результатов анализа:

Расчет для прямого и конкурентного ИФА средне значение ОП для лунок с К^- (не должно превышать 0,2 ОЕ), ОП_ср К^-, для лунок с К⁺ср( не должно быть меньше 1,0).

Таблица 8 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,090	3,128	3,156	0,025
Отрицательный контроль	0,010	0,011	0,018	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,089	2,056	0,127
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,021	0,043	0,006
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,223	1,291	2,120	0,712

Таблица 9 ? Серологический протокол ИФА конфирматорного теста №1

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
А	3,350	0,633	1,800	0,064	3,293	3,464	3,16	3,081	3,221	3,097	3,635	2,028
B	3,341	0,565	2,596	2,467	3,522	3,392	3,592	2,809	2,809	3,106	1,933	0,498
C	0,023	0,016	3,376	3,297	3,528	3,047	3,356	2,250	2,25	2,542	1,373	0,493
D	0,018	0,019	3,417	3,059	3,351	1,093	1,670	0,616	0,616	0,755	0,333	0,428
E	0,019	0,019	3,276	1,015	1,069	0,916	0,018	0,017	0,017	3,220	0,008	0,017
F	0,255	0,326	0,162	2,010	0,226	0,345	0,057	0,278	0,278	2.522	0,006	0,018
G	0,212	0,317	0,117	0,020	0,183	0,329	0,078	0,260	0,26	1,778	0,075	0,013
H	0,165	0,344	0,134	0,116	0,197	0,325	0,067	0,399	0,399	0,610	0,011	0,010

1 Положительные контроли ? А1, В1.

2 Отрицательные контроли ? С1,D1, E1.

3 Исследуемые образцы ? F1 ? H12

4 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в пр. анализе 0,020;

5 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в кон. анализе 0,018;

6 Среднее значение положительных проб в пр. анализе - 3,345;

7 Среднее значение положительных проб в кон. анализе - 0,599;

8 Минимальное значение оптической плотности пробы ? 0,02;

9 Максимальное значение оптической плотности пробы ? 3,635;

10 Среднее значение оптической плотности пробы ? 1,3;

11 Стандартное отклонение ? 1,24.

Расчет проводим по формуле:

- для прямого ИФА ОП_крит.= ОП_ср К^-+0,06;

- для каждого образца исследуемой сыворотки в конкурентном ИФА

К_{подавления =} (ОП _{прям.ИФА} - Оп_конк._ИФА) / (ОП_{прям.ИФА} - ОП_ср К-)

Результаты расчёта представлены в таблице(10).

Таблица 10 - Результаты конфирматорного теста ИФА №1

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подаления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

Коэффициент подавления

Результат

0,82

пол

0,98

пол

-0,05

отр

0,03

неопр

-0,13

отр.

неопр

0,84

пол

0,05

неопр.

0,04

отр

0,22

неопр

0,31

неопр

отр

-

отр

0,02

неопр

0,14

неопр

0,33

неопр

0,39

неопр

отр

-

отр

0,11

неопр

0,68

пол

0,64

пол

0,48

неопр

отр

-

отр

0,69

пол

0,15

отр

-

отр

отр

отр

-0,30

отр

-13,04-

отр

-0,58

отр

отр

1,06

пол

отр

-0,55

отр

1,0-

пол

-0,90

отр

отр

0,77

пол

отр

-1,24

отр

0,16

отр

-0,72

отр

отр

1,02

пол

отр

При проведении конфирматорного теста 16 образцов сывороток крови человека в 5 было подтверждено наличие HBsAg.

Таблица 11 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 4

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	2,960	0,009	0,020	0,025	0,020	2,024	0,034	0,030	0,009	0,020	0,031	0,015
B	2,910	0,034	0,028	0,015	0,020	0,027	0,015	0,011	0,026	0,012	0,035	0,025
C	2,930	0,028	1,215	0,020	0,012	0,022	0,025	0,032	0,009	0,035	0,014	0,009
D	0,013	0,020	0,022	0,032	0,020	0,035	0,009	0,016	0,033	0,014	0,020	0,015
E	0,012	0,024	0,014	0,014	0,034	0,020	0,016	0,038	0,035	0,011	0,450	0,018
F	0,009	2,720	0,024	0,010	0,009	0,035	0,020	0,014	0,010	0,014	0,021	0,016
G	0,012	0,010	0,015	0,020	0,014	0,032	0,020	0,033	0,030	0,018	0,016	0,027
H	0,023	0,014	0,056	0,014	0,020	0,840	0,027	0,019	0,009	0,028	0,037	0,026

ОП критическая для данного исследования составила 0,071. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (2,72; 1,215; 2,024; 0,840; 0,450) являются положительными и указанные 5 проб подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 12 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	2,910	2,933	2,960	0,017
Отрицательный контроль	0,009	0,011	0,013	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,102	2,720	0,152
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,021	0,056	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,450	1,449	2,720	0,736

Таблица 13 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 5

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,210	0,009	0,020	0,035	0,012	1,821	0,034	0,030	0,009	0,010	0,022	0,014
B	3,195	0,012	0,028	0,015	0,020	0,017	0,015	0,011	0,026	0,012	0,035	0,019
C	3,230	0,028	0,014	0,020	0,012	0,020	0,035	0,032	0,009	0,035	0,014	0,009
D	0,012	0,020	0,022	0,022	3,120	0,035	0,009	0,016	0,033	0,014	0,020	0,015
E	0,012	0,024	0,014	0,014	0,034	0,012	0,016	0,038	0,014	0,011	0,009	0,014
F	0,010	0,020	0,024	0,010	0,009	0,035	0,020	0,014	0,040	0,024	0,021	0,016
G	0,012	0,015	0,015	0,008	0,014	0,032	0,020	0,033	0,030	0,012	0,016	0,027
H	0,019	0,014	0,056	0,014	0,020	0,009	0,037	0,014	0,009	0,028	0,037	0,016

ОП критическая для данного исследования составила 0,071. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (3,12; 1,821) являются положительными и указанные 2 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 14? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,195	3,117	3,230	0,012
Отрицательный контроль	0,010	0,011	0,012	0,001
Исследуемые образцы	0,009	0,076	3,120	0,109
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,009	0,020	0,051	0,008
Исследуемые образцы с > ОПкрит	1,821	2,470	3,120	0,650

Таблица 15 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 6

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
A	3,140	0,016	0,020	0,014	0,009	0,020	0,014	0,010	0,015	0,008	0,031
B	3,060	0,014	2,730	0,015	0,020	0,027	0,015	1,563	0,014	0,012	0,035
C	3,120	0,018	0,012	0,020	0,014	0,030	0,014	0,009	0,024	0,014	0,014
D	0,016	0, 008	0,022	0,019	0,021	0,015	0,010	0,316	0,033	0,010	0,020
E	0,014	0,028	0,014	0,012	0,014	1,420	0,016	0,010	0,035	0,011	0,016
F	0,014	0,020	0,024	0,010	0,010	0,035	0,020	0,035	0,940	0,014	0,021
G	0,012	0,008	0,015	0,010	0,019	0,032	0,020	0,033	0,030	0,018	0,021
H	0,013	0,014	0,016	0,042	0,020	0,040	0,017	0,019	0,016	0,008	0,027

ОП критическая для данного исследования составила 0,074. Таким образом, по данным анализа 90 пробы и 6 контрольных проб все оптические плотности выше критической (2,73; 1,42; 1,563; 0,316) являются положительными и указанные 4 пробы подлежат дальнейшему исследованию на конфирматорном тесте, результаты которого приводятся ниже.

Таблица 16 ? Результаты статистической обработки оптической плотности образцов

Проба	Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	Стандартное отклонение
Положительный контроль	3,060	3,117	3,140	0,031
Отрицательный контроль	0,014	0,014	0,016	0,001
Исследуемые образцы	0,008	0,093	2,730	0,139
Исследуемые образцы с < ОПкрит	0,008	0,019	0,052	0,007
Исследуемые образцы с > ОПкрит	0,316	1,494	2,73	0,623

Таблица 17 ? Серологический протокол ИФА конфирматорного теста №2

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
А	3,121	0,736	1,362	0,528	0,763	0,212	1,391	0,407	1,782	1,648
B	3,154	0,701	0,644	0,153	0,319	0,172	0,310	0,376	1,947	0,973
C	0,012	0,010	0,262	0,028	0,072	0,016	2,683	0,495	1,275	0,586
D	0,015	0,012	2,160	0,0517	2,985	2,869	1,713	0,378	0,749	0,215
E	0,015	0,011	1,092	0,286	3,467	3,281	0,958	0,219	0,280	0,244
F	3,065	3,004	0,338	0,089	3,268	1,088	1,603	1,584	0,063	0,159
G	2,581	2,181	0,326	0,381	1,073	0,302	1,384	1,486	0,057	0,171
H	1,338	0,913	0,208	0,267	1,987	0,541	1,007	1,068	0,048	0,163

1 Положительные контроли ? А1, В1.

2 Отрицательные контроли ? С1,D1, E1.

3 Исследуемые образцы ? F1 ? H12

4 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в пр. анализе 0,014;

5 Среднее значение отрицательных проб ? ОП в кон. анализе 0,011;

6 Среднее значение положительных проб в пр. анализе - 3,137;

7 Среднее значение положительных проб в кон. анализе - 0,718;

8 Минимальное значение оптической плотности пробы ? 0,010;

9 Максимальное значение оптической плотности пробы ? 3,467;

10 Среднее значение оптической плотности пробы ? 0,986;

11 Стандартное отклонение - 0,827.

Из полученных данных произведены расчёты, результаты которых представлены в таблице(18).

Таблица 18 - Результаты конфирматорного теста ИФА № 2

Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подаления	Результат	Коэффициент подавления	Результат	Коэффициент подавления	Результат
0,81	пол	-0,22	отр	0,50	пол	1,10	пол	1,09	пол
0,78	пол	0,78	пол	0.47	отр		отр	1.0	пол
-	отр	0,94	пол		отр	0,82	пол	0,55	пол
-	отр	0,98	пол	0,04	отр	0,79	пол	0,73	пол
	отр	0,75	пол		отр		отр	0,14	отр
0,02	неопр.	0,77	пол	0,05	отр	0,78	пол		отр
0,16	неопр.	-0,18-	отр	0,67	пол	0,01	отр		отр
0,32	неопр.	-0,30	отр	0,73	пол	-0,06	отр		отр

При проведении конфирматорного теста 11 образцов сывороток крови человека в 4 было подтверждено наличие HBsAg.

Таблица 19 ? Серологический протокол скринингового обследования на наличие поверхностного антигена к вирусу гепатита В № 7

...

№стрипа №ряда	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	3,178	0,015	0,015	0,009	0,014	0,012	0,010	0,015	0,030	0,014	0,009	0,011
B	3,224	0,026	0,018	0,015	2,910	0,027	0,015	0,011	0,026	0,012	0,035	0,019
C	3,010	0,011	0,034	0,020	0,012	0,012	0,025	0,032	0,009	0,035	0,014	0,008
D

Подобные документы

• Характеристика и прогноз хронического вирусного гепатита В в зависимости от генотипа вируса

  Географическое распределение генотипов вируса гепатита В. Мутантные формы вируса. Методы современной диагностики инфекции. Выявление клинико-биохимических, иммунологических особенностей хронического вирусного гепатита В у детей с различными генотипами.
  
  магистерская работа [121,5 K], добавлен 31.07.2015
  

• Распространение, развитие и течение гепатита В

  Изучение особенностей распространения вируса гепатита В, его устойчивости во внешней среде. Исследование механизма развития инфекции, обусловленной вирусом гепатита. Характеристика общих симптомов заболевания, методов профилактики и защиты от вируса.
  
  презентация [1022,5 K], добавлен 22.05.2012
  

• Вирусный гепатит С

  Определение вирусного гепатита. Его возбудитель. Источник инфекции и механизм ее передачи. Распространенность заболевания в популяции. Роль половых контактов в передаче вируса. Клиническое течение и симптомы развивающегося гепатита. Диагностика и лечение.
  
  презентация [2,1 M], добавлен 26.10.2014
  

• Возбудители вирусных гепатитов

  История открытия вирусного гепатита. Резистентность к физическим и химическим факторам. Культивирование и механизм передачи возбудителя. Патогенез, диагностика, методы лечения и профилактики гепатита. Характерные особенности вируса гепатита В, С, Д, Е.
  
  курсовая работа [51,0 K], добавлен 24.06.2011
  

• Вирусный гепатит С

  Проблема вирусного гепатита C, ее актуальность для Абхазии. Строение и свойства вируса, его жизненный цикл. Источник возбудителя и заражения. Условия вирусного гепатита С. Иммунная система микроорганизма. Клиническая картина хронического заболевания.
  
  курсовая работа [1,5 M], добавлен 03.05.2013
  

• Вирусный гепатит А, типичный, легкой формы

  Этиология, эпидемиология, патогенез и источник инфекции гепатита А. Особенности лечения больного. Дифференциальная диагностика вирусного гепатита с лептоспирозом и псевдотуберкулезом. Исследование органов дыхания, кровообращения и пищеварения больного.
  
  история болезни [26,6 K], добавлен 24.09.2012
  

• Фармакотерапия вирусного гепатита B и C

  Описания воспалительного заболевания печени, возбудителем которого является вирус гепатита C. Исследование источников вируса, инкубационного периода. Клинические особенности гепатита. Лабораторная диагностика. Лечение и профилактика вирусных гепатитов.
  
  презентация [61,8 K], добавлен 19.11.2014
  

• Невосприимчивость к болезням (иммунитет)

  Основные группы факторов, обеспечивающие невосприимчивость человека к возбудителям инфекции. Неспецифическая физическая резистентность, специфическая невосприимчивость (иммунитет). Неспецифические защитные механизмы. Гуморальный и клеточный иммунитет.
  
  контрольная работа [26,2 K], добавлен 18.02.2013
  

• Система гуморального иммунитета. Роль системы комплемента в иммунном ответе

  Гуморальный иммунитет как один из механизмов реализации защитных свойств организма в жидкой среде. Неспецифические и специфические факторы гуморального иммунитета. Формирование антител. Иммунный ответ. Система комплемента, ее роль в заболеваниях.
  
  презентация [1,2 M], добавлен 08.10.2017
  

• Противовирусный иммунитет

  Врожденный антивирусный иммунитет. Типы интерферонов и механизмы антивирусного действия интерферонов. Способность антител и комплементов ограничить распространение вируса и предотвратить повторную инфекцию. Обход вирусами иммунологического контроля.
  
  реферат [17,4 K], добавлен 27.09.2009
  

• Профилактика ВИЧ-инфекции и гепатита В у медработников

  Знакомство с основными причинами развития гепатита В. Характеристика вируса иммунодефицита человека. Рассмотрение особенностей профилактики ВИЧ-инфекции и гепатита В у медработников. Красная ленточка как символ осознания людьми важности проблемы СПИДа.
  
  презентация [945,7 K], добавлен 03.06.2013
  

• Цитомегаловирусная инфекция. Клиника, диагностика, лечение

  Изучение особенностей цитомегаловирусной инфекции. Пути распространения вируса. Клеточный и гуморальный иммунитет. Воспалительные процессы в зараженных органах. Лабораторная диагностика, методы лечения и специальные способы профилактики цитомегаловируса.
  
  презентация [1,5 M], добавлен 01.11.2014
  

• Иммунитет, виды и формы. Структура иммунной системы. Факторы неспецифической защиты

  Классификация видов иммунитета: видовой (врожденный) и приобретенный (естественный, искусственный, активный, пассивный, стерильный, не стерильный, гуморальный, клеточный). Механизмы естественной неспецифической резистентности. Основные стадии фагоцитоза.
  
  презентация [1,8 M], добавлен 16.10.2014
  

• Вирус иммунодефицита человека

  Риск поражения иммунной системы человека. Симптомы, профилактика и лечение болезни. Состояние ВИЧ-инфицированного больного. Обнаружение ВИЧ-инфекции с помощью анализа крови на наличие антител. Влияние вируса на иммунную систему. СПИД и его стадии.
  
  реферат [21,3 K], добавлен 24.01.2012
  

• Особенность вируса гепатита С

  Варианты событий развития гепатита С и последствия. Эффективность лечения и профилактика заболевания. Использование современных схем противовирусной терапии. Разработка в современной медицине профилактической вакцины против инфекционного заболевания.
  
  реферат [22,5 K], добавлен 23.01.2017
  

• Вирус герпеса – безмолвный сожитель нашего организма

  Паразиты в белковой оболочке клеток и вирус герпеса, распространение вирусных инфекций человека. Эпидемиологические исследования и серологические реакции, гуморальный иммунный ответ и выработка антител к антигенам, вирусный капсид в форме икосаэдра.
  
  презентация [2,4 M], добавлен 16.05.2012
  

• Вирус гепатита С

  Понятие и причины гепатита С как наиболее тяжелой формы вирусного гепатита, которую называют еще посттрансфузионным гепатитом, морфология и этиология вируса-возбудителя, его патогенез и этапы развития заболевания. Диагностика и лечение гепатита С.
  
  реферат [27,3 K], добавлен 19.04.2014
  

• Генетические аспекты изменчивости вируса гепатита С: подходы к диагностике и лечению

  Схема организации генома вируса гепатита С. Структурные и неструктурные белки. Диагностика заболевания по специфическим антителам и РНК. Полиморфные локусы core-Ag. Встречаемость естественных мутаций. Варианты терапии больных. Перелечивание генотипа 1.
  
  презентация [1,2 M], добавлен 06.03.2016
  

• Герпес.Этиология и патогенез

  Общая характеристика герпетической инфекции. Классификация вирусной инфекции. Патогенез острой герпетической инфекции. Репликативный цикл вирусов простого герпеса. Механизмы распространения вируса в организме. Иммунная защита от герпетической инфекции.
  
  реферат [66,8 K], добавлен 27.03.2009
  

• Биохимия иммунной системы

  Органы иммунной системы. Клетки и медиаторы иммунной системы. Иммунный ответ как основная реакция иммунной системы. Возрастные особенности иммунитета. Критические периоды становления иммунной системы. Иммунная компетентность и аутоиммунные заболевания.
  
  курсовая работа [1,4 M], добавлен 19.05.2016
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам