61,4±2,2

62,1±2,3

62,2±2,6

62,5±2,6

62,3±2,7

62,1±2,5

Б (22)

62,3±2,3

64,3±2,4

66,1±1,5

68,2±2,1

72,2±1,7

69,2±2,4

В(17)

68,2±2,4

68,3±2,7

69,3±2,3

68,3±1,5

67,0±2,3

68,2±1,9

Г(13)

69,4±2,2

69,2±2,7

69,2±2,5

69,3±2,3

68,1±2,7

69,0±2,3

3.1.8 Результаты показателей клеточного иммунитета в процессе лечения длительно незаживающих ран

После выявления снижения процентного содержания лимфоцитов периферической крови у больных всех групп. Вторым этапом исследовали абсолютное количество лимфоцитов периферической крови и выявили их снижение от 6% до 12%. Третьим этапом выявления нарушения клеточного иммунитета исследовали Т клеточные популяции и выявили их нарушение у 24% больных. Общее количество Т- популяций во всех группах до начала лечения было нормальным или незначительно сниженным (1 группа). Т- лимфациты хелперно /индукторного типа во всех группах были снижены от 14 до 40% от нормы и пришли к норме в опытных группах: на 5 сутки при лечении цитокинами, на 7 сутки при лечении фибробластами и на 10 сутки при лечении эмбриональными клетками кожи. В контрольной группе они оставались незначительно пониженными до 15 суток от начала лечения. При исследовании эффекторно/супрессорной популяции Т - лимфацитов, имеется повышение их от 4% до 44% до начала лечения. В процессе лечения Т - лимфоциты эффекторно/супрессорной популяции постепенно к 10 суткам приходили к норме в опытных группах. В контрольной группе показатель данной популяции оставася незначительно повышенным до 14 дня лечения. Во всех группах соотношение Т-лимфоцитов хелперно/индукторного типа к Т-лимфацитам эффекторно/супрессорной популяции оставалось низким и приходило к норме в разных группах только к 10 - 15 суткам после начала лечения. По нашим данным иммунный статус у больных с длительно незаживаюшими ранами характеризуется дисбалансом иммунорегуляторных клеток с пареобладанием супрессии почти при нормальном содержании Т-хелперов. Такой тип иммунограмм характерен для локальных гнойных ран. Во второй и четвертой группах наиболее преобладает супрессорный тип иммунограммы, где на фоне снижения Т-хелперов, в два раза повышены Т- супрессеры. В данном случае иммунограммы характерны как для распространенного, так и локального воспалительного процесса (табл. 3.10).

Таблица № 3.10

Показатели клеточного иммунитета у больных с ранами в процессе в процессе лечения

Методы лечения	Контроль	1 сутки	3 сутки	5 сутки	7 сутки	10 сутки
(А) абс. Кол-во лимфоцитов Р-РОК Т-РОК В-РОК Р-РОК/В-РОК	1,6±0,1 27,1±1,3 52,2±2,03 28,0±1,2 0,9±0,1	1,6±0,11 29,2±1,6 57,0±2,03 28,1±1,2 1,1±0,2	1,6±0,11 29,2±1,7 57,3±2,03 29,2±1,2 1,0±0,2	1,5±0,12 31,0±1,7 60,1±2,01 28,3±1,3 1,1±0,3	1,6±0,1 29,4±1,2 55,3±2,1 28,0±1,4 1,1±0,4	1,6±0,11 28,1±1,3 58,2±2,01 28,3±1,2 1,1±0,2
(Б) абс. Кол-во лимфоцитов Р-РОК Т-РОК В-РОК Р-РОК/В-РОК	1,6±0,12 35,4±1,5 55,3±2,3 34,0±1,7 1,0±0,11	1,7±0,12 36,3±1,7 55,4±2,2 32,3±1,8 1,1±0,09	1,7±0,12 37,2±1,9 58,0±2,6 30,3±2,1 1,2±0,11	1,8±0,13 40,2±2,5 60,3±2,7 28,1±1,7 1,4±0,12	1,8±0,14 47,2±2,3 66,1±2,4 20,3±1,5 2,3±0,13	1,8±0,12 50,1±3,4 68,3±2,6 20,1±1,4 2,5±0,15
(В) абс. Кол-во лимфоцитов Р-РОК Т-РОК В-РОК Р-РОК/В-РОК	1,6±0,14 36,4±1,6 65,3±3,9 28,2±1,3 1,2±0,1	1,6±0,12 36,2±1,7 68,1±3,9 26,3±2,1 1,3±0,12	1,6±0,13 37,2±2,7 68,3±2,9 27,3±1,7 1,4±0,11	1,7±0,13 38,2±2,6 66,1±2,8 28,1±2,3 1,4±0,11	1,8±0,14 40,2±2,7 67,3±2,9 26,2±1,4 1,5±0,12	1,9±0,12 45,3±2,1 68,1±2,8 24,3±1,3 1,8±0,2
(Г) абс. Кол-во лимфоцитов Р-РОК Т-РОК В-РОК Р-РОК/В-РОК	1,6±0,1 39,2±2,2 66,3±3,8 38»±2,6 1,0±0,07	1,8±0,12 41,1±3,2 68,0±3,8 34,1±2,6 1,2±0,09	1,8±0,13 44,4±2,2 64,0±3,3 34,2±2,6 1,2±0,08	1,9±0,12 53,0±3,3 65,3±2,9 32,1±3,7 1,6±0,11	1,9±0,15 50,3±2,3 66,1±3,5 28,0±2,7 1,7±0,1	1,9±0,11 48,2±2,2 70,1±3,8 22,3±1,6 2,1±0,12

Примечание: абсолютное количество Т- лимфоцитов исследовалось (х 10⁹/л), Т- РОК, Р- РОК, В- РОК в %.

3.1.9 Результаты исследования лактат катионных белков нейтрофилов в процессе лечения длительно незаживающих ран

При исследовании функциональной активности нейтрофилов, определяли лактат катионные белки (ЛКТ). Выявили, что исходные показатели ЛКТ при длительно незаживающих ранах низкое. При лечении традиционными методами данный показатель приходил к норме на 12 сутки, тогда, как при лечении фибробластами на 5 сутки, при применении эмбриональными клетками кожи и цитокинов на 3 сутки. Достоверного повышения лактат катионного белка у больных в опытных группах по отношению к контрольной не наблюдали (табл. 3.11).

Таблица № 3.11

Содержание лактат катионных белков (ЛКТ) нейтрофилов в процессе лечения (y.e)

Методы лечения	Сутки лечения
	Исходн.	1 сутки	3 сутки	5 сутки	7 сутки	10 сутки
А (74)	1,08±0,1	1,11±0,1	1,1±0,11	1,1±0,1	1,1±0,09	1,12±0,1
Б (22)	1,09±0,1	1,08±0,1	1,12±0,1	1,24±0,12	1,27±0,1	1,4±0,12
В(17)	1,08±0,1	1,09±0,1	1,26±0,12	1,36±0,12	1,38±0,13	1,42±0,1
Г(13)	1,09±0,1	1,11±0,1	1,2±0,11	1,25±0,11	1,26±0,12	1,31±0,1

3.2 Цитологическое исследование ран у больных в процессе лечения

В мазках-отпечатках, взятых до лечения, преобладает детрит, большое количество до 50 -70% разрушенных нейтрофилов (рисунок 4) и обильная микрофлора, преимущественно внеклеточно. Содержание клеток крови составляло: полинуклеарных лейкоцитов - 79-95%, лимфоцитов - до 2%, макрофагов 1%. Такой характер цитограммы характерезуется по Кузину (1990) как дегенеративно - воспалительный.

На третьи сутки после трансплантации фибробластов в мазке отпечатке отмечалось снижение содержания нейтрофильных лейкоцитов до 56-75% (рисунок 5), лизис нейтрофилов значительно уменьшился и составлял 28-30%, появились полибласты до 3-7%, фибробласты и макрофаги 8-9%.

На 5 сутки в мазках отпечатках уменьшилось количество нейтрофилов, процент разрушенных уменьшился до 17 -21%, увеличилось количество фибробластов и эпителиальных клеток Клеточный состав мазков отпечатков характеризовался как воспалительно - регенеративного типа. (рисунок 6).

Таблица 3.12

Цитологическая картина мазков отпечатков с ран при лечении в различные сроки лечения (%).

Метод лечения	Клетки крови и ткани	1 сутки	3 сутки	5 сутки	7 сутки	10 сутки
(А)	Нейтрофилы Лимфоциты Макрофаги Фибробласты Эпителиальные клетки	79% 2% 0,5% - -	80% 1% 1% -	78% 3% 1% - -	89% 2% - - -	87% 2% 1% - -
(Б)	Нейтрофилы Лимфоциты Макрофаги Фибробласты Эпителиальные клетки	78% 2% - - -	72% 4% 2% 2% 1%	54% 7% 3% 3% 4%	52% 6% 4% 5% 3%	46% 6% 4% 4% 3%
(В)	Нейтрофилы Лимфоциты Макрофаги Фибробласты Эпителиальные клетки	79% 2% 1% - -	73% 4% 2% 1% 1%	58% 6% 3% 2% 3%	49% 6% 4% 2% 2%	45% 6% 8% 6% группы
(Г)	Нейтрофилы Лимфоциты Макрофаги Фибробласты Эпителиальные клетки	78% 1% 0,5% - -	76% 4% 1% 2% -	60% 10% 2% 2% 3%	54% 11% 3% 5% 10%	48% 10% 6% 6% группы

3.3 Результаты гистологического исследования грануляционной ткани ран у больных в процессе лечения

При гистологическом исследовании грануляционной ткани взятой в разные сроки лечения выявлено: в начале процесса лечения у всех групп больных в ране определяется некротический детрит, фиброзная ткань с обильной нейтрофильной инфильтрацией (рисунок 7).

На третьи сутки после применения фибробластов и эмбриональных клеток увеличивается количество молодых сосудов (рисунок 8), некробиотические процессы уменьшались, на 10-12 сутки нейтрофильная инфильтрация исчезает, микрофлора не определяется, сосудистая сеть запустевает, и появляются пласты эпителия (рисунок 9).

3.4 Результаты показателей скорости эпителизации ран в процессе лечения

Объективным критерием заживления раны является суточное сокращение площади раны. Измерения площади раны проводили через 5 -10 дней и вычисляли процент уменьшения площади раневой поверхности за сутки по формуле. При нормальном течении заживления суточное уменьшение площади раны составляет 4%.

При применении фибробластов в лечении длительно незаживающих ран после вскрытия флегмон без применения аутодермопластики суточная эпителизация составила 3%. Лечение эмбриональными клетками ран после вскрытия флегмон позволило эпителизировать рану в сутки до 2%, трофическую язву до 1,5% в сутки. При лечении цитокинами суточная эпителизация длительно незаживающих ран составила в среднем 1%. При лечении ран традиционными методами суточная эпителизация раны составила 0,4%.

3.5 Лечение ран культивированными фибробластами

Лечение ран культивированными фибробластами провели у 22 больных. Из них у 8 пострадавших после ожогов и 19 человек после вскрытия флегмон. Перед пересадкой фибробластов рана или ожоговая поверхность не имела выраженного гнойного отделяемого, сухого или влажного струпа, имела мелкие грануляции покрытые фибрином. Площадь ран при трансплантации составляла от 50 см² до 200см². Давность лечения раны составляла от 2 недель до 2-х месяцев. Фибробласты на микроносителях, на подложке или в геле наносили на подготовленную раневую поверхность. Рану закрывали асептической повязкой с антисептиком или нейтральной мазью. Первую перевязку делали на второй день, рану обрабатывали антисептиком, при необходимости вновь наносили культуру фибробластов и рану закрывали асептической повязкой. Последующие перевязки проводили через день, рану закрывали с антисептиком или с нейтральной мазью.

При наблюдении за больным, отмечено: улучшение аппетита, нормализация сна и температуры тела, исчезали боли в ране, уменьшался отек окружающих тканей. При визуальном контроле раны, на третьи сутки на поверхности раны появлялась «нитеобразная» пленка, усиливалась краевая эпителизация в виде белой каймы, на 7 -10 сутки в отдалении от края раны появлялись отдельные островки эпителизации. При необходимости у 6-и пострадавших после ожогов проводилась аутодермопластика расщепленным кожным лоскутом. Приживление кожного лоскута 85 - 90%. На 5 сутки активная эпителизация в ячейках перфорированного лоскута. При проведении лабораторных исследований выявлено: количество лейкоцитов в периферической крови с 11,5 х 10⁹/л., к 5 суткам лечения приходило к норме, лимфоциты и моноциты так же к 5 суткам нормализовались. Значительного колебания содержания белка в сыворотке крови не наблюдали, местное лечение не влияло на данный показатель. Показатели клеточного иммунитета при лечении фибробластами к седьмым суткам нормализовались. Скорость эпителизации раны в сутки составила 3%.

В качестве примера можно привести результат лечения обширной раны после вскрытия флегмоны у больного С., история болезни № 9091 Окружной военный клинический госпиталь. Больной поступил в стационар с флегмоной средней и нижней трети правой голени, 19.11.1996 года больному выполнена операция - вскрытие и дренирование флегмоны. После операции произошел некроз краев раны и образовался дефект кожи 18 х 6,0 см. В течение двух месяцев больной лечился консервативными и оперативными методами (аутодермопластика расщепленным лоскутом), эффекта от лечения не наступило. Пересаженный кожный лоскут лизировался.

Бактериологическое обследование 22.11.96г. золотистый стафилококк чувствительный к антибиотикам. Бактериологическое обследование 27.11.96г. золотистый стафилококк чувствительные к антибиотикам. Бактериологическое обследование 30.11.96г. энтеробактер чувствительный к канамицину, гентамицину. Бактериологическое обследование 4.12.96г. энтерококк фекальный чувствительный к ампициллину, карбенициллину. Бактериологическое обследование 12.12.96г. стафилококк чувствительный к антибиотикам. Бактериологическое обследование 25.12.96г. Эпидермальный стафилококк чувствительный к антибиотикам. Бактериологическое обследование 19.01.97г. золотистый стафилококк не чувствительный к антибиотикам.

Анализы крови на момент начала лечения фибробластами: гем. - 131 г/л, эрит. - 4,2*10.12/л, СОЭ - 19 мм/час., лейк. - 10,7 * 10⁹/л, э -1%, лим.- 18%. м- 9%, п-8%, с-48%. Иммунограмма 28.01.1997г. Абсолютное количество лимфоцитов -1,6 (норма -1,8 и более). Ранние РОК -36%, тотальные РОК - 63%, восстановленные РОК - 29%, Тр/Тв - 1,2. Иммунограмма супрессорного типа с понижением хелперов. После начатого лечения культивированными фибробластами количество хелперов повысилось до нормальных цифр, а супрессоры снизились до нормы. Динамика изменений лейкоцитов периферической крови, СОЭ и Т- клеточного иммунитета показана на рисунках (рисунок 10,11,12).

28.1. 1997 года проведена трансплантация фибробластов легочной ткани эмбриона (10 дисков по 5см. в диаметре). Рана закрыта повязкой с 1% раствором борной кислоты к ране подведен хлорвиниловый дренаж для постоянного орошения области раны 1% раствором борной кислоты. На вторые сутки исчез отек мягких тканей правой голени, под дисками с фибробластами белая «паутина». Диски удалены на 3 сутки. На 6 сутки активная краевая эпителизация, Ph раны - 7, появились островки эпителизации. На 10 сутки рана активно покрывается белой пленкой как с краев так и от островков (рис. 13). На 14 сутки рана закрылась плотной эпителиальной тканью (рис. 14). Восстановленный кожный покров взят на гистологию. При гистологическом исследовании - выявлен пласт многослойного плоского эпителия, фибробласты не выявлены. Гистология № 602 от 17.2.1997г.

В результате проведенного лечения, рана за 14 суток эпителизировалась. Больной осмотрен через год, в области раны восстановленный кожный покров, плотный, беловатый, волосяной покров отсутствует (рис. 15). При гистологическом исследовании за № 4565 от 18.11. 97г. - пласт многослойного плоского эпителия.

Пример 2. Больной Ш. История болезни № 3349 - 1997г. (333 Окружной военный клинический госпиталь) 1920 года рождения (врач - терапевт), поступил в отделение 25.3. 1997г. с рожей стопы и нижней трети голени, некротическая форма, прегангрена левой стопы. Сахарный диабет II тип. Общее состояние расценено как тяжелое. Анализ крови 25.3.97г. гемоглобин - 93 г/л, эритроциты 3,1 х 10¹²/л., лейкоциты 5,6 х 10⁹/л., эозинофилы -4%, лимфоциты 17%, моноциты - 5%, палочкоядерные - 10%, сегментоядерные -64%, СОЭ -40 мм/час. Общий белок -56 г/л, альбумин - 19 г/л, АЛТ 2,28 ммоль/л, сахар крови 15,8 ммоль/л. Иммунограмма 27.3.97г. Абсолютное количество лимфоцитов 0,9 х 10⁹/л, ранние 43%, тотальные -72%, восстановленные -34%, Тр/Тв = 1,3. Заключение - выраженная абсолютная лимфопения. Супрессорный тип. В анализах крови анемия, гипопротеинэмия, абсолютная лимфопения. Был собран консилиум и больному предложена ампутация нижней конечности с уровня верхней трети левой голени, от которой больной категорически отказался. В течение недели сахар крови удалось скоррегировать. В течение месяца проводилось комбинированное патогенетическое, интенсивное лечение основного заболевания. Несмотря на проводимое лечение, оставалась анемия, гипопротеинемия, абсолютная лимфопения. Анализ крови 22.4.97г. гемоглобин - 101 г/л, эритроциты 3,3 х 10¹²/л., лейкоциты 10,2 х 10⁹/л., эозинофилы -1%, лимфоциты 19%, моноциты - 7%, палочкоядерные - 1%, сегментоядерные -50%, плазматические клетки 2%, СОЭ -50 мм/час. Общий белок -60 г/л, альбумин - 24 г/л. Сахар крови 6,5 миллимоль/л. Иммунограмма 8.5.97г. Абсолютное количество лимфоцитов 1,2 х 10⁹/л, ранние 56%, тотальные -77%, восстановленные -41%, Тр/Тв = 1,4. Заключение - выраженная абсолютная лимфопения. Супресорный тип иммунограммы. Больному была проведена химическая и ферментативная некрэктомия сухого и влажного некроза на ранах стопы и голени (рисунок 19). 19.5.1997 года на раны голени были трансплантированы культивированные фибробласты 4 диска по 3 см в диаметре, на вторые сутки в ранах появились грануляции. 22.5.1997 года на участки гранулирующих ран были года пересажены марки аутокожи забранной с передней поверхности средней трети правого бедра (рисунок 20). Пересаженные кожные лоскуты прижились, 30.5.1997 года повторно выполнена операция аутодермопластика кожным лоскутом 60см². Пересаженные кожные лоскуты прижились раны левой стопы и голени 12.6.97г. эпителизировались. Больной выписан домой в удовлетворительном состоянии. Анализ крови 2.6. 97г. гемоглобин - 110 г/л, эритроциты 3,5 х 10¹²/л., лейкоциты 9,8 х 10⁹/л., эозинофилы -2%, лимфоциты 34%, моноциты - 3%, палочкоядерные - 2%, сегментоядерные -39%, СОЭ -27 мм/час. Общий белок -66 г/л, альбумин - 29 г/л. Сахар крови 4,2 миллимоль/л. Иммунограмма 30.5.97г. Абсолютное количество лимфоцитов 1,8 х 10⁹/л, ранние 58%, тотальные -76%, восстановленные -36%, Тр/Тв = 1,6. Анализ крови 12.6.97г. гемоглобин - 110 г/л, эритроциты 3,5 х 10¹²/л., лейкоциты 8,2 х 10⁹/л., эозинофилы -1%, лимфоциты 42%, моноциты - 2%, палочкоядерные - 2%, сегментоядерные -46%. СОЭ -20 мм/час. Общий белок -64 г/л, альбумин - 42 г/л. Сахар крови 5,6 миллимоль/л.

Бак. анализ 26.3.97г. выделен из раны сапрофитный стафилококк не чувствительный к антибиотикам. Бак. анализ 14.4.97г. выделен из раны золотистый стафилококк не чувствительный к антибиотикам. Бак. анализ 21.4.97г. выделен из раны сапрофитный стафилококк чувствительный только к оксациллину и гентамицину. Бак. анализ 5.5.97г. выделен из раны золотистый стафилококк чувствительный к антибиотикам. Бак. анализ 12.5.97г. выделена из раны грамотрицательная бактерия - Serratia не чувствительная к антибиотикам. Бак. анализ 2.6.97г. роста микробов нет.

3.6 Лечение больных эмбриональными клетками кожи

Тестированные клетки кожи 12-18 недельного эмбриона получали из лаборатории в виде геля, в запаянных стерильных флаконах.

Клетки кожи эмбриона трансплантировали на раны: после ожогов, вскрытия флегмон, трофические язвы. Всего пролечено 17 пациентов в возрасте от 18 до 50 лет. Два, пострадавших после ожога Шб ст., у которых раны не заживали в течение 3 месяцев лечения, несмотря на интенсивную терапию и аутодермопластику. У 10-и пациентов трансплантацию проводили на длительно незаживающие раны различной площади после вскрытия флегмон. У 5 больных трансплантацию проводили на трофические язвы голеней, длительность которых превышала 3 года.

Клетки в гелеобразном состоянии наносили на раны, рану закрывали перфорированным целлофаном и асептической повязкой. Первую перевязку проводили на следующий день. При отсутствии гнойного отделяемого вновь проводили трансплантацию клеток кожи. Последующие перевязки осуществляли через день. Во время перевязки на рану наносили клетки кожи эмбриона.

В первые сутки больные отмечали исчезновение болей в ране, улучшение сна, особенно, у больных с трофическими язвами. На вторые сутки видна краевая эпителизация в виде белой полоски шириной от 2 до 4 мм. На 5-7 сутки появляется рост островков эпителия. Но следует заметить, что они также быстро могут исчезнуть - лизироваться. На 10 сутки наблюдали явную эпителизацию от островков, которая в дальнейшем разрасталась, восстанавливая кожный покров. В сутки раневая поверхность эпителизировалась на 1-2 см²., что составляло 1-2% к площади раны. Отмечали так же выраженную пролиферацию грануляционной ткани, рана за 3 суток превращалась из кратерообразной в плоскую. У двух пациентов после трехкратной трансплантации клеток кожи эмбриона, выполнили аутодермопластику расщепленным кожным лоскутом, приживление полное. Длительно незаживающие раны площадью 25-100см² эпителизировались за 12 дней. Трофические язвы двухлетней давности за 21 день, язва 3 летней давности за 45 суток.

Пример. Больной Л. 1978 года рождения, история болезни № 5217 (Окружной военный клинический госпиталь) находился на лечении с 31.5.97 г. по поводу ожога пламенем туловища, конечностей общей площадью 30%, глубокого 12%, I - IIIб степени, ожоговой болезни (рисунок 24). Больному проводилось патогенетическое лечение ожоговой болезни (переливание кровезаменителей, препаратов крови, детоксикационная терапия, физиолечение, ГБО и местное лечение ожоговых ран). После химической, хирургической и ферментативной некрэктомии были выполнены (27.6.97г. и 2.7.97г.) две операции - аутодермопластики свободными расщепленными кожными лоскутами общей площадь 800 и 600 см². Приживление кожных трансплантатов до 80%, между пересаженными кожными лоскутами остались гранулирующие раны общей площадью до 1,5 % поверхности тела больного. Проводилось консервативное лечение оставшихся ран, эффекта не получено. Через три месяца после последней операции (8.10.1997г.) на раневые поверхности левой нижней конечности нанесены эмбриональные клетки кожи и закрыты асептическими повязками. Последующие трансплантации проводили ежедневно в течение 8 дней. После первой трансплантации эмбриональных клеток больной отметил улучшение сна, аппетита, исчезла боль в области ран, грануляции очистились от некротических тканей, стали сочными, розовыми. На третий день появилась краевая эпителизация в виде белой каймы до 2-х - 4-х мм (рисунок 25). В течение 13 суток раны левой нижней конечности эпителизировались.

Анализ крови 23.6.97г. гемоглобин - 112 г/л, эритроциты 4,0 х 10¹²/л., лейкоциты 18,5 х 10⁹/л., эозинофилы -2%, базофилы -1% лимфоциты 8%, моноциты - 12%, палочкоядерные - 21%, сегментоядерные -53%, плазматические клетки 1%, СОЭ -53 мм/час. Общий белок -59 г/л, альбумин - 24 г/л. Сахар крови 11,8 миллимоль/л. Иммунограмма 23.6.97г. в норме. Анализ крови 4.7.97г. гемоглобин - 120 г/л, эритроциты 4,3 х 10¹²/л., лейкоциты 11,8 х 10⁹/л., эозинофилы -0%, лимфоциты 10%, моноциты - 13%, палочкоядерные - 7%, сегментоядерные -70%, плазматические клетки 0%, СОЭ -35 мм/час. Общий белок -69 г/л, альбумин - 43,8 г/л. Сахар крови 5,5 миллимоль/л. Иммунограмма 4.7.97г. Абсолютное количество лимфоцитов 1,2 х 10⁹/л, ранние 56%, тотальные -77%, восстановленные -60%, Тр/Тв = 0,9. Заключение - выраженная абсолютная лимфопения, супрессорный тип. Анализ крови 24.9.97г. гемоглобин - 118 г/л, эритроциты 3,9 х 10¹²/л., лейкоциты 10,1 х 10⁹/л., эозинофилы -8%, лимфоциты 15%, моноциты - 10%, палочкоядерные - 2%, сегментоядерные -30%, плазматические клетки 0%, СОЭ -29 мм/час. Общий белок -73 г/л, альбумин - 39 г/л. Сахар крови 4,5 миллимоль/л. Иммунограмма 23.9.97г. Абсолютное количество лимфоцитов 0,9 х 10⁹/л, ранние 44%, тотальные -62%, восстановленные -26%, Тр/Тв = 1,6. Незначительно выраженная супрессия.

Анализ крови 13.10.97г. гемоглобин - 116 г/л, эритроциты 3,7 х 10¹²/л., лейкоциты 12,1 х 10⁹/л., эозинофилы -5%, лимфоциты 23%, моноциты - 7%, палочкоядерные - 4%, сегментоядерные -49%, плазматические клетки 0%, СОЭ -10 мм/час. Иммунограмма 13.10.97г. Абсолютное количество лимфоцитов 2,5 х 10⁹/л, ранние 42%, тотальные -70%, восстановленные -30%, Тр/Тв = 1,4. Незначительно выраженная супрессия.

Пример. Больной Г. история болезни № 5811 (Окружной военный клинический госпиталь), 49 лет находился на лечении с 24.6.1997г. по поводу облитерирующего атеросклероза сосудов нижних конечностей, множественных трофических язв голеней. Болен 4 года, неоднократно лечился амбулаторно и стационарно, значительного эффекта от лечения не получено. При поступлении в стационар, на голенях 18 трофических язв различной величены и давности. В течение 4 месяцев проводилось лечение всеми возможными методами, в том числе и оперативными. 17.9.97г. выполнена операция - аутодермопластика расщепленным кожным лоскутом площадью 60см² гранулирующих ран голени. Пересаженные кожные лоскуты в послеоперационном периоде лизировались. 23.10.1997 года на левой голени пять язв 5 х 3; 3 х 2,5; 2,5 х 1,5 и 1 х 1 (2) см. с подрытыми краями покрытые фибрином, грануляций нет, вокруг ран умеренная инфильтрация и отек мягких тканей (рисунок 29). На правой нижней конечности две трофических язвы 2х3 см. с подрытыми краями, покрытые фибрином, грануляций нет. На трофические язвы левой голени нанесены клетки кожи эмбриона, раны закрыты перфорированным целлофаном и асептической повязкой. В первые сутки больной отметил значительное облегчение, исчезла боль в области язв, улучшился сон, аппетит. На третьи сутки раны-язвы очистились от фибрина, появились грануляции, краевая эпителизация в виде белой каймы до 0,3 мм (рисунок 30). На а 5-7 сутки выраженный рост грануляций. На 10-12 сутки язвы из кратерообразных превратились в плоские и шла активная краевая эпителизация. В сутки раневая поверхность эпителизировалась до 1% к площади раны. Замечено, что язвы с длительным сроком сосуществования эпителизируются медленнее, язвы более «молодые» эпителизируюся быстрее. У пациента Г. трофические язвы двухлетней давности эпителизировались за 21 день (рисунок 31), язва 3 летней давности за 45 суток (рисунок 32). Следует заметить, что после трансплантации эмбриональных клеток на гипертрофические рубцы находящиеся рядом с язвой, последние исчезают и кожный покров становится ровным, чистым и нежным. Трофическая язва на правой голени леченная традиционными способами - ферментами, мазями, антисептиками за период наблюдения осталась прежних размеров.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Длительно незаживающие раны и трофические язвы являются распространенным заболеванием. Отмечается увеличение числа больных с данной патологией. Большинство из них неоднократно лечилось в условиях стационара и в амбулаторном режиме. Значительное число способов лечения длительно незаживающих ран и трофических язв нижних конечностей свидетельствуют о том, что в настоящее время не существует эффективного способа лечения, позволяющего получить стойкий положительный результат. Причиной стойкого хронического воспаления в длительно незаживающей ране является первичная или вторичная иммунодепрессия. Функциональная неполноценность макрофагальных клеток не может ликвидировать патоген, а медиаторы воспаления распадающихся клеток продолжают поддерживать хроническое воспаление длительное время. Применяемые способы лечения не позволяют разорвать круг хронического воспаления. Все это обуславливает актуальность поиска новых методов лечения больных с данной патологией.

Целью работы явилось изучение новых технологий: трансплантации культур клеток кожи и цитокинов в лечении больных с длительно незаживающими ранами и трофическими язвами.

Для достижения цели настоящего исследования были созданы методы лечения больных с длительно незаживающими ранами: лечение культивированными фибробластами, лечение эмбриональными клетками кожи и местным аппликационным применением цитокинов.

Основным патогенетическим механизмом воздействия предложенных способов лечения является активация макрофагальных клеток в области раны.

Основными классическими симптомами заболевания являлись наличие у больных раневых поверхностей, часто с гнойным отделяемым, не склонных к заживлению, боли в области раны, мацерация кожи вокруг язвы, отек конечности или наоборот наличие фибрина в ране, омозолелость краев раны и отсутствие грануляционной ткани.

У половины больных длительность существования язв составляла от 1 месяца до 3 месяцев. У 10,6% больных длительность болезни была более 1 года.

По данным бактериологических исследований раневого отделяемого чаще всего из ран высеивались Staph. аureus и Ps. aeruginosa.

При проведении исследования общего иммунного статуса были выявлены характерные изменения клеточного иммунитета 24 % больных, с нарушением соотношения иммунорегуляторных клеток. Выявлено процентное содержание лимфоцитов периферической крови во всех группа на 42-62%. При лечении предложенными методами данный показатель приходил к норме на 10 сутки после лечения, в контрольной группе он оставался до 13 суток. При исследовании абсолютного количества лимфоцитов периферической крови выявили снижение лимфоцитов у больных по группам от 6% до 35%. При исследовании Т клеточных популяций выявлено повышенное содержание Т-лимфоцитов эффекторно/супрессорной популяции при нормальных показателях общего количества Т-лимфоцитов и Т- лимфоцитов хелперно/индукторного типа. У обследованных больных преобладали иммунограммы с супрессивным типом, что характерно для локальных гнойных ран. При лечении предложенными новыми технологиями данные показатели приходили к норме в течение 10 суток с начала лечения. В контрольной группе больных показатели клеточного иммунитета приходили к норме на 15 сутки лечения.

Для лечения больных с ранами разного генеза нами предложены разные методы лечения с целью оценить их эффективность. Так, у больных с трофическими язвами нами использовались все три предложенные способа лечения. Для лечения больных с обширными ожогами только культивированные фибробласты на целлофановой подложке, так как этот материал можно получить за короткий период времени (три дня) и в большом количестве. Фибробласты в геле применяли на ограниченных ранах как после ожогов, вскрытия флегмон, так и на трофические язвы. Эмбриональные клетки кожи в виду исключительности материала применяли только на ранах до 100см². Аутологичные и донорские кондиционные среды применяли также на ограниченные по размерам раны в виде аппликаций.

При трансплантации культивированных фибробластов, клеток кожи эмбриона и аппликации цитокинов происходит активация иммунокомпетентных клеток в ране и выработка биологически активных веществ - медиаторов воспаления и цитокинов которые, и стимулируют ангиогенез, миграцию эпителиоцитов от края раны. При местном применение культивированных фибробластов, клеток кожи эмбриона и цитокинов, в результате контактного воздействия с аутолимфоцитами и макрофагами проиcходит экспрессия новых рецепторов на мембранах данных клеток, что имеет значение для их активации.

В результате проведенного лечения в разных группах были обнаружены характерные различия: исчезновение перифокального отека, боли, появление грануляций, краевой и островковой эпителизации, полной эпителизации раны, нормализации количества лейкоцитов в периферической крови и т. д.

Показатели температуры у обследуемых больных, как по группам, так и в процессе лечения предложенными способами лечения значительно не изменялись. Это связано с тем, что больные предложенными методами начинали лечиться на 30,60, 90 сутки после нахождения в стационаре и имели негенерализованнные воспалительные явления. Отсутствие повышения температуры в процессе лечения доказывает отсутствие осложнений при применении предложенных способов лечения. При исследовании температуры раневой поверхности, мы не наблюдали значительных колебаний ее в процессе лечения предложенными технологиями.

Суммируя выше сказанное можно сделать вывод, что длительно незаживающая рана - хронический процесс с местной воспалительной реакцией, а местная трансплантация культивированных клеток кожи и аппликация цитокинов не вызывают осложнений со стороны организма.

При анализе динамики показателей лейкоцитов периферической крови у больных в процессе лечения, отмечено незначительное повышение данного показателя в начале предложенных способов лечения и быстрое снижение его в опытных группах. В контрольной группе данный показатель нормализовался в 2,9 раза позже. Наиболее быстрое снижение данного показателя произошло в группе, где лечение проводили цитокинами. Он нормализовался в 4 раза быстрее по сравнению с опытными группами. Это можно объяснить не только эффективностью, но и меньшей обширностью ран леченных данным способом.

При исследовании динамики изменения моноцитов периферической крови в процессе лечения, которые отражают характер воспалительной реакции, отмечено значительное повышение их у больных во второй группе, где преобладали более тяжелые больные после ожогов и обширных ран после вскрытия флегмон. В процессе лечения предложенными новыми способами данный показатель приходил к норме на 5 сутки лечения. Повышенное содержание моноцитов оставалось в контрольной группе в процессе нашего наблюдения. Не нашли мы и коррелирующего колебания моноцитов в мазках отпечатках с раневой поверхности и моноцитами периферической крови.

При исследовании белка крови, который значительно влияет на репаративные процессы в ране у наших больных, мы не выявили значительных изменений в процессе лечения данного показателя. Обосновано тем, что до нашего лечения у некоторых больных уже была проведена коррекция белка, а наше лечения не повлияло на данный показатель.

При исследования функциональной активности нейтрофилов (определение лактат катионных белков) выявлено, что у 24% больных имеется снижение функциональной активности нейтрофилов на 10%. При применении предложенных новых технологий в лечении длительно незаживающих ран данный показатель приходит к норме в третьей, четвертой группах на третьи сутки во второй на 5 сутки, в контрольной он остается сниженным в процессе всего наблюдения. Следует сделать вывод, что данный показатель является хорошим критерием определения течения раневого процесса и зная функциональную активность нейтрофилов можно корригировать дальнейшее течение воспалительного процесса применением предложенных способов лечения.

При оценке общего иммунного статуса в динамике до и после лечения, различия были выявлены лишь у больных опытных групп. Причем, положительные изменения касались только клеточного звена иммунитета и были более выражены в группе с применением культивированных фибробластов. В контрольной группе с применением традиционного метода лечения изменений иммунологических показателей отмечено не было. Следовательно, культивированные фибробласты, эмбриональные клетки кожи при местном применении, за счет продукции цитокинов вызывают иммуностимулирующее действие, направленное на клеточное звено. Местное применение цитокинов также сопровождается изменениями в общем иммунном статусе. Последние, всасываясь с раневой поверхности, обладают непосредственным иммуностимулирующим воздействием на иммунокомпетентные клетки. Закономерно не обнаруживается изменений в общем иммунном статусе и при использовании традиционного метода лечения больных с трофическими язвами.

При исследовании возбудителя в ране выявили, что наибольшей местной бактерицидной активностью обладали фибробласты, с третьих суток применения последних посевы с раны становятся стерильными. В группе с применением кондиционных сред возбудитель не определяется с пятых суток, а при применении эмбриональных клеток кожи только на седьмые сутки. В группе с применением традиционного способа лечения возбудители продолжали выделять в процессе всего наблюдения. Исходя из вышесказанного, можно сделать вывод о том, что наибольшей бактерицидностью обладают фибробласты. В 1,6 раза быстрее, посевы с ран становятся стерильными по сравнению с лечением цитокинами и в 2,5 раза быстрее по сравнению с лечением эмбриональными клетками. Следует заметить, что в двух случаях у больных при применении цитокинов было отмечено обильное гнойное отделяемое, которое связываем с выраженным бактерицидным действием и стимуляцией макрофагальных клеток. На третьи сутки гнойного отделяемого не стало и появилась выраженная краевая эпителизация.

Оценивая цитологическую характеристику сравниваемых групп, можно предположить, что исходное состояние пациентов было в группах одинаковое, преобладал воспалительно - дегенеративный тип воспаления. Наилучшие результаты получены при использовании кондиционных сред и эмбриональных клеток кожи. Уже в первые сутки после лечения в грануляционной ткани появляются лимфоциты и макрофаги, с третьих суток в этих группах появляются фибробласты и эпителиальные клетки. При лечении культивированными фибробластами процесс миграции эпителиальных клеток начинается на пятые сутки. На седьмые, десятые сутки лечения во всех опытных группах начинается активная миграция эпителиальных клеток в центр раны и они определяются уже группами. Оценивая цитологические показатели мазков-отпечатков у больных опытных и контрольной групп, отмечается снижение дегенеративных форм в опытных группах в процессе лечения и они оставались на прежнем уровне в контрольной группе. В начале лечения количество нейтрофилов составляло до 95% из них дегенеративных форм в мазках отпечатках всех групп составляло до 70%. На третьи сутки после начала предложенными методами нейтрофилы составляли 75%, дегенеративные формы до 30%. На пятые сутки лечения процент дегенеративных форм сократился до 21%. В контрольной группе цитограммы оставались с дегенеративно - воспалительным типом.

При изучении гистологических срезов грануляционной ткани выявлено, что до лечения предложенными способами лечения грануляционная ткань представлена с некротическим детритом, с крупными очагами склероза, единичными очагами молодой грануляционной ткани, выраженным отеком стромы, лимфостазом и выраженной нейтрофильной инфильтрацией. В мазках определяется микрофлора как внутриклеточно, так и внеклеточно. На третьи сутки после начала лечения предложенными новыми способами нейтрофильная инфильтрация уменьшилась, появились мелкие капилляры, небольшое количество фибробластов. Микрофлора определяется единично внеклеточно.

На 10 - 12 сутки нейтрофильная инфильтрация значительно уменьшилась, микрофлора не определяется, появляются пласты эпителия. Приведенные гистологические данные полностью коррелируют с цитологическими и клиническими показателями активизации репаративной регенерации при лечении предложенными новыми способами лечения длительно незаживающих ран.

При исследовании репаративных процессов в ране изучали динамику исчезновения боли в ране и выявили, что при применении эмбриональных клеток кожи боль в ране исчезает в первые сутки и у больного улучшается сон и аппетит. При лечении больных культивированными фибробластами и цитокинами исчезновение боли наступает на третьи сутки. Исчезновение боли в ране можно связать лишь с уменьшением отека и инфильтрации мягких тканей вокруг раны, а также и непосредственного анальгезирующего действия эмбриональных клеток и самих цитокинов.

Купирование отека мягких тканей при лечении предложенными методами произошло на третьи сутки при использовании эмбриональных клеток кожи и на пятые сутки при использовании фибробластов и цитокинов. Особенно, больные отмечают положительный эффект в исчезновении боли и отека мягких тканей при применении эмбриональных клеток кожи. Видимо эмбриональные клетки кожи обладают более выраженным лимфостимулирующим действием, чем и достигается быстрое уменьшение отека мягких тканей и боли.

Время появления грануляций в опытных группах произошло при трансплантации эмбриональных клеток в первые сутки. Следует заметить, что они наиболее сильно влияют на ангиогенез, выражено стимулируя разрастание грануляционной ткани. При лечении трофических язв с применением эмбриональных клеток кожи за пять суток язва из кратерообразной превращалась в плоскую, за счет быстрого разрастания грануляционной ткани. Замечено, что при множественных трофических язвах, аппликация клеток кожи эмбриона на одну из них стимулирует репаративные процессы на соседних. Исчезает гнойное отделяемое, появляются молодые мелкие грануляции, начинается краевая эпителизация. После эпителизации раны с применением эмбриональных клеток, образуется нежный, розовый, гладкий восстановленный кожный покров. В участках, где имелись грубые гипертрофические рубцы, после применения эмбриональных клеток они исчезают, кожный покров выравнивается.

При трансплантации культивированных фибробластов и аппликации цитокинов грануляционная ткань в ране у наших больных появлялась на третьи сутки и не была такой выраженной как при трансплантации эмбриональных клеток кожи.

При исследовании появления краевой эпителизации выявлено появление ее после первых суток в виде белой полоски по краю раны при трансплантации эмбриональных клеток кожи и появление после третьих суток при применении цитокинов и фибробластов. Экспериментальные исследования гистологов доказывают, что цитокины, фибробласты и эмбриональные клетки уменьшают поверхностное клеточное натяжение в ране и усиливают миграцию краевого эпителия к центру раны. По заключению комбустиологов и нашему личному опыту рана самостоятельно может эпителизироваться только до 5 см в диаметре, свыше же 5 см в диаметре, в центре раны будет соединительнотканный рубец без эпителия. Подобную картину можно наблюдать и при небольших по размеру ранах у больных с тяжелым эндотоксикозом, когда небольшая рана закрывается соединительной тканью, но не эпителием. Применение культивированных клеток кожи и аппликации цитокинов нам позволили эпителизировать раны 10 х 10 и даже 12 х 20 см без аутодермопластики.

Интересные результаты получены при исследовании появления островковой эпителизации. Следует сразу оговориться, что все больные лечились с полным поражением кожного покрова. И никаких придатков кожи в данной ране не оставалось, потому рассчитывать на появление островковой эпителизации мы не могли. Но при применении эмбриональных клеток кожи она появилась на пятые сутки после аппликации в виде отдельных островков эпителия, до 3 - 5 мм в диаметре, при применении культивированных фибробластов островковая эпителизация появлялась на седьмые сутки после трансплантации. Островки эпителизации могли находиться как в одном сантиметре от края раны, так и в трех сантиметрах от края раны. Следует отметить, что некоторые из них в последующем могли лизироваться. Что позволяет заключить, что островковая эпителизация могла появиться как за счет клеток краевого эпителия, так и живой эпителиальной клетки эмбриона. Есть экспериментальные доказательства, что, если трансплантировать фибробласты дермы, то они могут давать полноценную репаративную регенерацию кожи, вплоть до восстановления волос. При аппликационном лечении ран цитокинами островковой эпителизации не наблюдали. В контрольной группе вышеописанных изменений в ране в процессе лечения не наблюдали. Сравнивать время появления краевой, островковой эпителизации трудно, ее не было месяцами, годами и вдруг рана эпителизируеся за 12 - 25 суток.

Время полной эпителизации ран при применении культивированных фибробластов наступило в среднем на 15 сутки после начала лечения. При применении клеток кожи эмбриона и аппликациионого применения цитокинов в среднем на 12 сутки после начала лечения. При трофических язвах средние сроки эпителизации одно и двух годичных язв произошло на 21 - 25 сутки. Самое скромное сравнение методов лечения всех четырех групп, позволяет заключить, что репаративные процессы в кожной ране при применении предложенных новых технологий происходят в 2 - 3 раз быстрее.

Таким образом, проведенное исследование свидетельствует о том, что местное применение культивированных фибробластов, клеток кожи эмбрионов и цитокинов является патогенетически обоснованным и эффективным методом лечения длительно незаживающих ран и трофических язв нижних конечностей. Обладая иммуномодулирующей активностью культивированные клетки, клетки кожи эмбриона и цитокины снижают активность воспаления в ране и окружающих тканях, что сопровождается уменьшением отека и инфильтрации ткани, повышением миграции краевого эпителия к центру раны. Внедрение предложенных способов лечения этой сложной патологии в клиническую практику позволит оптимизировать результаты лечения больных. Дальнейшее изучение методов культивирования клеток кожи и их применения в медицине позволят наладить производство ауто- и алло кожи в лабораторных условиях пригодной для закрытия обширных раневых поверхностей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди хирургической патологии раны и гнойные осложнения их занимают третье место среди всех хирургических больных. При эндотоксикозе происходит угнетение как клеточного, так и гуморального иммунитета. А это приводит к нарушению местных репаративных процессов. Нарушение процессов тканевой репарации, особенно у лиц пожилого возраста, ослабленных, имеющих иммунные нарушения, часто замедляет заживление ран.

Большую проблему составляют больные с обширными и глубокими ожогами, поскольку существует дефицит донорской кожи.

Много исследований проводится по выяснению причин хронизации воспалительных явлений. Одни считают причиной хронического длительного течения микроорганизмы их вирулентность. Другие первичную или вторичную недостаточность фагоцитов. Большое значение в хроническом воспалении и длительном заживлении ран отводится иммунной системе. Одним словом, проблема регуляции воспалительных и репаративных процессов весьма актуальна в современной хирургии.

В последние годы появилось много сообщений по лечению ожогов с использованием кожи выращенной в искусственных условиях, использование клеток кожи для закрытия ожоговых ран. Применение клеток кожи эмбриона открывает новые перспективные направления в лечении ран, так как они обладают большим пролиферативным потенциалом. Совершенно новое направление в лечении больных с хирургической инфекцией открывает применение естественного комплекса цитокинов. Цитокины формируют способность, интенсивность и направленность ответа фагоцитарных клеток на патоген.

Все выше сказанное и побудило нас провести исследования влияния на репаративные процессы в ране культивированных фибробластов, эмбриональных клеток кожи и местном применении цитокинов. Сравнить полученные результаты и выработать практические рекомендации по применению предложенных способов в лечении длительно незаживающих ран.

В лабораторных условиях были проведены исследования по возможностям получения культивированных клеток от разных по возрасту больных, в разные периоды воспалительной реакции, с разных участков кожного покрова. Изучались также влияние условий транспортировки, время длительности хранения исходного материала. Проводили исследования по влиянию различных ферментов на жизнеспособность клеток кожи.

Немало важным условием являлась и форма фасовки клеточного материала, который может доставляться быстро до больного или наоборот будет доставлен на длительное расстояние. В результате проведенных исследований доказано, что наибольшей пролиферативной активностью обладает эмбриональная ткань. Стали применять клетки кожи эмбриона. Выяснили, что они выделяют ряд противовоспалительных цитокинов, стали применять и кондиционные среды с естественным комплексом цитокинов.

В процессе исследования, выявили, что основным возбудителем, который поддерживает процесс хронического воспаления, является - стафилококк и палочка сине-зеленого гноя. В 25 - 32% случаев посевы ран, стерильные. Доказано, что культивированные клетки и цитокины обладают выраженной бактерицидностью, по сравнению с антисептиками и мазями на водорастворимой основе. При проведении лабораторных исследований у больных всех групп вывялены: незначительные воспалительные явления в целом организме в виде повышения лейкоцитов и моноцитов крови, повышения СОЭ.

При иммунологических исследованиях выявлено снижение процентного содержания лимфоцитов, абсолютного количества лимфоцитов в периферической крови. При исследовании клеточного звена Т- лимфоцитов, выявлено повышение Т- лимфоцитов супрессоров, при нормальных показателей общих популяций Т- лимфоцитов и Т-хелперов. При исследовании функциональной активности нейтрофилов, выявлено снижение ее на 10%. Недостаточность фагоцитарных и иммунокомпетентных клеток и способствует развитию хронического воспаления в длительно незаживающих ранах.

Применение новых предложенных технологий в лечении длительно незаживающих ран, позволило быстро активизировать макрофагальные и иммунокомпетентные клетки и разорвать патогенез хронического воспаления. Ускорить репаративные процессы в ране по сравнению с традиционными методами в 2 - 3 раза.

Характерно, что во время лечения не отмечено ни одного осложнения.

Особый интерес представляет появление островковой эпителизации в 1 - 3 см от края раны, что никогда не наблюдается при лечении традиционными методами. Считаем что, островковая эпителизация появляется за счет краевого эпителия, который быстро перемещается к центру раны и за счет эпителиальных клеток при пересадки клеток кожи эмбриона. Появление эпителия за счет трансформации фибробластов требуется доказать.

Предложенные новые технологии обладают не только местным эффектом, но и выраженным общим иммунокоррегирующим, дезинтоксикационным действием. Что проявляется в нормализации показателей лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов, Т- клеточных популяций.

Преимуществами предложенных технологий являются:

1. Выраженное антимикробное действие. 2. Иммуномодулирующим действием 3. Наличие дегидратационного эффекта. 4. Повышенной стимуляцией ангиогенеза. 5. Повышением миграции эпителиальных клеток к центру раны.

Выводы

1. При заборе и транспортировке донорской кожи существует высокая вероятность контаминации ткани микроорганизмами. Транспортировку и временное хранение донорской кожи целесообразно проводить в физиологическом растворе с добавлением антибиотика в дозе 200 -500 мкг/мл.

2. Фибробласты взрослого человека обладают недостаточной пролиферативной активностью и малым сроком жизни (до 20 - 25 пассажей in vitro), поэтому, их следует использовать только для аутотрансплантации. Фибробласты эмбриона обладают высокой жизнеспособностью и высокой пролиферативной активностью (до 45 - 50 пассажей), что позволяет хранить их в банке клеток кожи в режиме “до востребования”.

3. Разработан метод получения и культивирования клеток кожи (кератиноцитов, фибробластов) в лабораторных условиях на микроносителях, на целлофановой подложке и в геле, что позволяет их использовать в условиях длительной транспортировки и поздних сроков трансплантации.

4. При исследовании длительно незаживающих ран у 24 % больных наблюдается снижение функциональной активности нейтрофилов в зоне воспаления, что способствует хронизации раневого процесса.

5. Культивированные фибробласты кожи человека обладают выраженной бактерицидностью, активируют ангиогенез, стимулируют миграцию краевых эпителиоцитов к центру раны, тем самым усиливают репаративную регенерацию кожной раны в 2 раза по сравнению с лечением традиционными методами.

6. Применение клеток кожи эмбриона в лечении длительно незаживающих ран, вызывает выраженную стимуляцию процессов ангиогенеза, появлений краевой и островковой эпителизации в 2,6 раза по сравнению с контрольной группой.

7. Использование цитокинов при лечении больных с длительно незаживающими ранами позволяет усилить явление краевой эпителизации и заживление раны в 2,6 раза быстрее чем в контрольной группе.

8. Применение новых технологий в лечении ран позволяет в 2,4 раза быстрее корригировать нарушения общего иммунного статуса и восстановление функциональной активности нейтрофилов в незаживающей ране, чем при лечении традиционными методами.

9. Использование разработанного способа местного лечения ран с применением культивированных ауто - и аллофибробластов, клеток кожи эмбриона и цитокинов позволяет более эффективно стимулировать репаративные процессы в ране, ускорить (в 2 - 3 раз) процессы регенерации и на 50 % увеличить эффективность лечения больных с длительно незаживающими ранами.

Размещено на Allbest.ru

...