Полногеномное сравнение распределения ретроэлементов в ДНК человека и шимпанзе

HERV-S. Представители этого семейства имеют размер 6,7 т.п.н. и фланкированы LTR по 317 п.н. [158, 289]. Полноразмерный провирус HERV-S включает в себя гены gag, pol и env. PBS комплементарен тРНК серина. Всего в геноме человека содержится примерно 70 копий HERV-S. По-видимому, основное количество HERV-S элементов интегрировало в геномы приматов 32-55 млн. лет назад, во время дивергенции обезьян Старого Света от обезьян Нового Света. Наиболее близкородственными семействами к HERV-S являются HERV-L и MuERV-L [289].

Эндогенные ретровирусы группы II.

HERV-H. Семейство эндогенных ретровирусов HERV-H (или RTVL-H - ReTroVirus-Like element-H) гомологично вирусу HTLV [19]. PBS HERV-H комплиментарен тРНК гистидина. Полноразмерный представитель этого семейства имеет геном длиной 8,7 т.п.н. с LTR в среднем по 415 п.н. [297, 301]. Всего в геноме человека содержится около 100 полноразмерных провирусов, 900 копий делетированных по гену env и 1000 одиночных LTR.

Представители HERV-H присутствуют в геномах всех приматов, начиная с обезьян Нового Света, количество их копий сильно варьирует в зависимости от вида. По-видимому, первые интеграции прародителей этого семейства в геномы приматов произошли на уровне дивергенции обезьян Нового Света от полуобезьян, т.е. примерно 55-70 млн. лет назад [19, 297]. Вместе с тем, большинство ретротранспозиций HERV-H произошли примерно 30-35 млн. лет назад, т.е. уже после расхождения человекообразных обезьян от обезьян Старого Света [297].

HERV-F. Это семейство объединяет эндогенные ретровирусы, PBS которых комологичен тРНК фенилаланина. Количество их в геноме человека не велико: всего около 40 копий, это как правило содержащие обширные делеции вирусы. В геноме HERV-F содержатся гены gag, prt, pol и env [289, 296, 302]. По структуре LTR HERV-F (длиной по 450 п.н.) сильно отличаются от других LTR, но наиболее близкородственные к ним группы - HERV-Н и ERV9. Вероятное время первой интеграции экзогенного предшественника HERV-F в геном приматов - 60 млн. лет назад [296].

IAP. IAP (Intracisternal A-type Particles) присутствуют исключительно в геноме подсемейства мышиных (примерно 1000 копий на гаплоидный геном мыши) [52, 303]. Полноразмерные IAP элементы имеют gag, pol и env гены. IAP могут собираться на мембранах ЭПР и отпочковываться внутрь его пузырьков (отсюда и пошло их название). Часть этих элементов транспозиционно активна и способна перемещаться по геному. Экспрессия IAP наблюдается во многих тканях представителей мышиных [52, 303].

Недавно показали, что при собирании VLP, где осуществляется обратная транскрипция, вместе с РНК IAP может происходить упаковка РНК и других содержащих LTR элементов. В результате, в принципе возможен межмолекулярный перенос “+” стронг-стоп ДНК и, следовательно, образование элемента, содержащего не идентичные LTR. Наиболее близкородственные к IAP группы: MMTV и JSRV [52].

HERV-K. На описании этой довольно гетерогенной группы остановимся подробнее, так как полногеномное сравнение распределения в ДНК человека и шимпанзе элементов HERV-K (HML2) является одним из предметов практической части представляемой работы. Замечу, что сказанные в начале раздела “Эндогенные ретровирусы” слова о недостаточной стройности классификации ERV в полной мере применимы к группе HERV-K.

Представители HERV-K присутствуют исключительно в геномах приматов. PBS HERV-K комплиментарен тРНК лизина. Различные методы использовали для выявления в геноме человека представителей семейства HERV-К. 9 групп выявили при помощи гибридизации gag-pol пробы вируса MMTV с геномной библиотекой клеток рака молочной железы (группы NMWV1-9) [304]. Затем еще 6 MMTV-подобных групп (от HML-1 до HML-6) обнаружили в ДНК и РНК нормальных лейкоцитов с помощью ПЦР и RT-ПЦР, используя праймеры на консервативные участки гена pol [305].

На основе сравнения нуклеотидных последовательностей в районе гена обратной транскриптазы клонов NMWV и HML между собой, а также с HERV-K10, HERV-K(C4), MMTV, JSRV (Jaagsiekte Sheep RetroVirus) и с другими HERV-K-подобными элементами создали новую систематику данной группы [306]. Все известные представители семейства НERV-K отнесли к тем или иным десяти подсемействам HML. Ранее охарактеризованные HML клоны (от HML-1 до HML-6) остались под своими прежними номерами, и четыре подсемейства HML - новые (от HML-7 до HML-10). Группы HERV-K10 и HERV-K(C4) включили в подсемейства HML-2 и HML-10, соответственно [306]. Стоит оговориться, что некоторые исследователи не приняли новую классификацию и продолжают пользоваться старыми вариантами систематики.

Подсемейство HML-2 - одно из наиболее полно исследованных среди HERV-K. Все провирусы этого подсемейства разделяется на 2 большие подгруппы, представители одной из которых содержат делецию 292 п.н. на границе генов pol и env (куда входит часть гена corf), а другие - нет [307-309]. Эти варианты представлены практически в равных количествах в геноме человека. В геноме человека присутствуют около 150 полноразмерных провирусов HERV-K (HML-2) и примерно 1.500-2.000 одиночных LTR [Т. Городенцева; неопубликованные данные]. В отличие от других семейств ERV, провирусы HERV-K(HML-2) довольно часто имеют неповрежденные ORF. Геном HERV-K (HML-2) имеет длину около 9,5 т.п.н., с LTR примерно по 970 п.н. [217, 307, 309].

Именно представители HML-2 обладают регуляторным геном corf (альтернативное название этого гена - rec [279]). Во многих тканях человека обнаруживали не только вирусные транскрипты генов gag, pol и env, но и сами белки, кодируемые этими генами [19, 217, 307, 308, 310, 311]. В некоторых линиях тератокарциномы синтезируются коровые вирусные белки, которые связываются с РНК и формируют неинфекционные VLP [217, 270].

Основная масса внедрений представителей семейства в геномы приматов произошла после дивергенции линий обезьян Старого Света и Нового Света [20]; более того, существуют интеграции HERV-K(HML-2), специфичные для генома человека [20, 311-314], такие интеграции составляют около 10% от общей численности подсемейства (найдено в данной работе). Три внедрения представителей подсемейства HML-2 в геном человека - 1 одиночный LTR и 2 провируса- даже полиморфны в человеческой популяции [314, 315], что свидетельствует о сохранившейся ретропозиционной активности представителей HERV-K (HML-2) не только после разделения предковых линий человека и шимпанзе, но и после образования вида Homo sapiens.

На основе сравнения нуклеотидных последовательностей LTR HERV-K (HML-2) была построена классификация, разделившая подсемейство на 2 основных группы - I (эволюционно более старая) и II (более молодая) [313, 316]. Далее каждая из этих групп была разбита на подгруппы.

Интересно, что расчётный возраст представителей таких подгрупп, вычисленный путём сравнения последовательности LTR с консенсусной для данной подгруппы, совпадает с таковым, полученным с помощью ПЦР-анализа геномных ДНК различных приматов. Это свидетельствует о достоверности упомянутой классификации.

Подсемейство HERV-K(C4.HML-10). Члены подсемейства HERV-K(C4.HML-10) довольно сильно отличаются от представителей других подсемейств HERV-K. Геном HERV-K(C4.HML-10) имеет длину всего 6,4 т.п.н., а длина его LTR составляет около 550 п.н. [19, 317]. Всего в геноме человека присутствует 10-50 представителей данного подсемейства. HERV-K(C4.HML-10) элементы обнаружены во всех обезьянах Старого Света, но ни в одном из видов обезьян Нового Света [19, 318].

Подсемейство HERV-K(HML-4). В его состав входит HERV-K-T47D (известный также, как ERV-MLN) [319-321]. Полноразмерный провирус имеет длину 9,315 т.п.н., причем у него укорочен 3' LTR. Размер его 5' LTR - 943 п.н. [320]. В геноме человека найдено еще 5 провирусов HERV-K-T47D, содержащих неукороченные LTR с обоих концов, и несколько сотен одиночных LTR. HERV-K-T47D-подобные последовательности выявили в геномах высших обезьян и обезьян Старого Света, но не у обезьян Нового Света [320]. Высокий уровень транскрипции HERV-K-T47D обнаружен в плаценте человека, где даже были обнаружены VLP, образованные белками данного HERV-K [320, 321].

Подсемейство HML-6 представлено в геноме человека 30 полноразмерными провирусами и примерно 50 LTR [305, 309]. Длина HERV-K(HML-6) составляет 6,9 т.п.н. с LTR по 680 п.н., причем часть гена env у него - делетирована [305]. PBS комплиментарен 3' концу тРНК лизина, с антикодоном UUU, а не CUU, как для большинства HERV-K. Все найденные провирусы содержат различные нонсенс-мутации в ORF и не способны кодировать какие-либо вирусные белки [309]. Возраст этого подсемейства можно оценить приблизительно в 30 млн. лет. Как и для большинства других ERV, транскрипты представителей подсемейства HML-6 обнаружены в плаценте и в линиях раковых клеток (например, T47D) [309].

Подсемейство HML-5. ERV этого подсемейства имеют длину 7,8 т.п.н., а LTR - около 490 п.н. [289, 305]. Показали, что PBS HML5 праймируется не лизиновой тРНК, а изолейциновой тРНК [289] (sic!). С другой стороны, хотя PBS HML5 и комплиментарен тРНК изолейцина, по остальным последовательностям (консервативные участки генов pol, gag) эта группа входит в состав семейства HERV-K [289, 305].

Эндогенные ретровирусы группы III.

HERV-E. Семейство HERV-E принадлежит к классу MLV, который включает в себя множество экзогенных и эндогенных ретровирусов. Представители данного класса найдены в геномах млекопитающих, птиц, рептилий и амфибий [19, 322, 323]. Семейство HERV-E состоит из 50-100 полноразмерных провирусов. ДНК полноразмерного провируса составляет 8,8 т.п.н. в длину, а LTR - 450 п.н. [322, 323]. Последовательность gag-pol идентична на 40% gag-pol MLV. В качестве PBS присутствует последовательность, комплиментарная тРНК глутаминовой кислоты. В некоторых тканях происходит транскрипция дефектных провирусов [324].

HERV-I. HERV-I-подобные последовательности выявлены во многих видах позвоночных, от млекопитающих до рыб [325]. Полноразмерный провирус представителя этого семейства составляет около 9 т.п.н. и содержит PBS комплиментарный тРНК изолейцина [19, 325-327]. Общее количество полноразмерных HERV-I составляет около 15-30 на гаплоидный геном, хотя большинство из них сильно укорочены - всего 3,36 т.п.н. Показали, что транскрипционная активность HERV-I стимулируется ретиноевой кислотой [327]. Наиболее близкое семейство к HERV-I - ERV3 [19].

HERV-IP-T47D. Представителей данного семейства выявили при исследовании ретровирус-подобных частиц, полученных из клеток линии T47D рака молочной железы человека (изначальное название группы - ERV-FTD) [321]. Приблизительно 35 полноразмерных провирусов и 2000 одиночных LTR семейства HERV-IP-T47D находятся в геноме человека [319, 321, 328]. Длина LTR составляет 230-500 п.н.). PBS комплиментарен тРНК пролина. Как и большинство остальных ERV, в связи с наличием большого количества мутаций в ORF это семейство не имеет ни одного представителя, который способен осуществлять экспрессию вирусных белков [328]. Возраст семейства оценивается в 40 млн. лет.

Сравнивая консервативные участки гена pol различных представителей ERV, обнаружили, что семейства HERV-IP-T47D и RTVL-I обладают значительной гомологией (идентичны 74% предсказанной аминокислотной последовательности Pol). В результате семейства ERV-FTD и RTVL-I объединили в суперсемейство HERV-IP [328].

HERV-ADP. Впервые провирус этого семейства обнаружили как вставку в псевдоген АДФ-рибозилтрансферазы, отсюда и произошло название семейства [289]. В геноме человека находится примерно 60 копий HERV-ADP. Длина полноразмерного провируса составляет 8,4 т.п.н. Во внутренней последовательности провирусов идентифицировали все 3 основных гена - gag, pol и env, но их ORF прерваны многочисленными стоп-кодонами. Основные интеграции элементов HERV-ADP в геном приматов датируются как 30-48 млн. лет назад [289]. Представители HERV-ADP сильно схожи с другим семейством ERV - HERV-I, и, возможно, HERV-ADP входят в состав HERV-I, хотя PBS HERV-ADP комплиментарен тРНК треонина, а PBS HERV-I - тРНК изолейцина [289].

HERV-P. Первоначальное название этого семейства было HuERS - Human Endogenous Retroviral Sequences, затем другие авторы дали ему название HuRRS-P - Human Retrovirus-Related Sequence-Proline [329]. По нынешней систематике ERV данное семейство называют HERV-P [19]. Оно представляет собой группу ERV человека, PBS которых комплиментарен тРНК пролина. Обнаружили HERV-P элемент длиной в 8,1 т.п.н., с LTR по 631 п.н. [329]. Данное семейство представлено 20-40 копиями на гаплоидный геном человека [19]. HERV-P не имеют значительной гомологии ни с одним другим семейством ERV. Представители HERV-P выявлены также в геномах обезьян Старого и Нового Света. Время интеграции экзогенного предшественника HERV-P элементов в геном приматов оценивается как 45 млн. лет назад [329].

HERV-HS49C23. Данное семейство насчитывает приблизительно 70 копий в геноме человека [289]. Семейство содержит сильно дефектные провирусы, т.к. пока не обнаружено ни одного HERV-HS49C23 элемента, который содержал бы на своих концах оба LTR. Геном таких провирусов составляет около 6 т.п.н. На основе гомологии с различными ретровирусами позвоночных, HERV-HS49C23 отнесли к ретровирусам группы III [289], но для более точной классификации подобных ретровирусов пока недостаточно данных.

HERV-R. Первая группа семейства HERV-R - ERV-3 - представлена всего одним элементом, расположенным в прицентромерном участке хромосомы 7. Он встречается в геномах многих приматов, включая один из видов обезьян Нового Света [19, 330]. PBS ERV-3 комплиментарен аргининовой тРНК. Полноразмерный ERV-3 имеет длину 9,9 т.п.н., с LTR по 590 п.н.; последовательности gag и pol генов похожи на аналогичные гены MLV [19, 331]. Транскрипты ERV-3 обнаружены в плаценте человека. Возможно, экспрессия ERV-3 регулируется стероидными гормонами [332]. ORF gag и pol прерваны многочисленными стоп-кодонами, тогда как ORF env - неповрежденная. Более того, показано, что ERV-3 способен экспрессировать ген env, образуя белок с молекулярной массой 65 кД. Примерно 1% европеоидов имеют большую делецию в env и у них образуется укороченный белок - всего 25 кД. [330].

Следующий представитель семейства HERV-R - это эндогенный ретровирус ERV-1 [19]. ERV-1 - это дефектный провирус длиной около 8 т.п.н., у которого отсутствует ген env и 5' LTR [333]. Единственная копия ERV-1 находится на 18 хромосоме [19]. ERV-1 и ERV-3 идентичны на 83%. Поскольку оба типа вышеописанных представителей семейства HERV-R находятся в геноме человека в единичных копиях, они являются одними из самых малопредставленных видов ERV человека.

Недавно обнаружили еще одно подсемейство HERV-R - HERV-R (type b) [289]. Единственный представитель его имеет длину 8,7 т.п.н., с LTR около 650 п.н. Он содержит гены gag, pol и env, ORF которых прерваны многочисленными стоп-кодонами. Дивергенция между двумя его LTR составляет 12,4%, а интеграция этого элемента датируется как 30-47 млн. лет назад.

HERV-Z69907. Всего в геноме человека находится до 30 представителей HERV-Z69907. Данное семейство одно из самых дивергировавших среди ERV, поскольку у таких элементов полностью делетирован 5' LTR с PBS. Кроме того, большие делеции присутствуют и во всех основных генах HERV-Z69907. В связи с такой своеобразной структурой, пока не ясно, является ли HERV-Z69907 отдельным семейством или может быть включен в какое-либо другое семейство ERV. Филогенетический анализ, проведенный на основе консервативных последовательностей гена pol, показал, что HERV-R (type 2) и HERV-FRD это самые близкородственные семейства для HERV-Z69907 [289].

ERV-9. Последовательности, гомологичные ERV-9, первоначально идентифицировали в клетках тератокарциномы [334]. В составе провируса ERV-9 имеется потенциальный PBS, комплиментарный тРНК аргинина [27] и, следовательно, этот тип эндогенных ретровирусов можно бы назвать HERV-R2.

Полноразмерный провирус семейства ERV-9 имеет длину порядка 8 т.п.н. и фланкирован LTR по 1,8 т.п.н., которые являются наиболее длинными из ретровирусных LTR [335-337]. В состав этих LTR входят 2 субъэлемента: в U3 области до 12 повторов фрагмента в 41 п.н., а в U5 области до 4 повторов 72 п.н. фрагмента. В геноме человека находятся примерно 30-40 полноразмерных провирусов ERV-9 и около 4000 одиночных LTR [335-337]. Транскрипты ERV-9 обнаружили в некоторых тканях [335, 336]. Расчетный возраст отдельных подсемейств ERV-9 варьирует от 13 до 38 млн. лет [337].

HERV-FRD. Возможно, это одно из самых древних семейств HERV, т.к. его возраст насчитывает 53-87 млн. лет. Пока найден лишь 1 полноразмерный провирус, длина которого составляет 10,8 т.п.н., а LTR - примерно по 710 п.н. [289, 321]. PBS комплиметарен тРНК гистидина. Приблизительно 15 копий HERV-FRD присутствуют в геноме человека, большинство из которых не содержат каких-либо протяженных ORF (хотя наблюдаются мотивы, характерные для всех трех основных генов) [289, 321].

Анализируя консервативные последовательности гена pol, обнаружили, что семейство HERV-FRD родственно семействам HERV-R (type b) и HERV-Z69907, а также экзогенному ретровирусу GaLV (Great ape Leukemia Virus) [289].

HERV-S71. Известны всего 2 представителя данного семейства [289, 299, 338]. Больший из них имеет длину 6,5 т.п.н., а меньший - 5,5 т.п.н. Оба они представляют собой сильно дефектные провирусы, у которых отсутствует 5' LTR и делетирован ген env, а у одного из них и часть гена pol. Последовательность HERV-S71 элементов гомологична MLV [289, 299, 338]. Возможно, HERV-S71 содержат PBS, комплиментарный тРНК треонина, и, следовательно, их можно называть HERV-T [319].

Химерные семейства ERV.

Существуют некоторые ERV, которые нельзя отнести ни к первой, ни ко второй, ни к третьей группе. Здесь они названы химерными семействами. Геном полноразмерных ретровирусов подобного типа имеет в своем составе последовательности от представителей разных групп ERV. Такая структура провируса предполагается для семейства HERV-W [298, 339], а также для HERV-E.PTN [340, 341] и некоторых других элементов [19, 289, 292, 342]. Возможно, провирусы данного типа возникли в результате рекомбинации между различными ERV. Для HERV-W это HERV-H и ERV-9 [298], а для HERV-E.PTN - HERV-E и HERV-I [340].

Происхождение в результате рекомбинации доказано для одного из эндогенных ретровирусов обезьян - BaEV [292]. Гены gag и pol BaEV родственны эндогенному ретровирусу типа С - PcEV (Papio cynocephalus Endogenous Retrovirus), а ген env - Simian Endogenous RetroVirus (SERV) - эндогенному ретровирусу типа D.

Семейство HERV-W. Полноразмерный провирус имеет длину 10,2 т.п.н., с LTR по 450 п.н. [298, 339]. На данный момент в геноме человека выявили 12 представителей HERV-W, содержащих, по крайней мере, часть внутренней последовательности, и 23 одиночных LTR [298, 339]. Кроме того, найдено множество псевдогенов для различных транскриптов HERV-W. Псевдогены, по-видимому, образованы ретропозиционной системой LINE человека [343].

PBS HERV-W комплементарен тРНК триптофана. В плаценте человека обнаружили транскрипты HERV-W длиной 9 т.п.н. - с РНК организацией RU5gag-pol-envU3R, а также сплайсированные мРНК в 7,6, 3,1 и 1,3 т.п.н. [298, 339, 344]. Там же нашли полную ORF для гена env, а также его белковый продукт (размером приблизительно 80 кД) [345, 346], но гены gag и pol прерваны сдвигами рамок считывания и стоп-кодонами. Подобные транскрипты выявили и в плацентах других приматов [298].

Гомология последовательностей генов pol и env HERV-W с аналогичными генами MLV - C типа ретровирусов - и SERV - D типа ретровирусов, соответственно, предполагает химерную геномную организацию представителей данного семейства [298]. Это семейство близко к ERV-9 и RTLV-H [298, 339]. По всей видимости, семейство ERV-W эволюционировало независимо в различных видах приматов (параллельная эволюция). Возраст наиболее молодых представителей ERV-W cоставляет 9 миллионов лет [298].

Провирус HERV-E.PTN. Длина HERV-E.PTN составляет 6340 п.н. с LTR в 502 и 495 п.н. (5' и 3', соответственно). Интересно, что HERV-E.PTN фланкирован прямыми повторами в 123 п.н. (в отличие от других ERV, у которых прямые повторы обычно 4-6 п.н.) [347]. Последовательность данного ERV совпадает с другими HERV-E на 70%, а с RTVL-I (HERV-I) - на 86%. По-видимому, HERV-E.PTN произошел в результате рекомбинации HERV-E и HERV-I элементов.

Его структура очень необычна - он содержит гены gag, pol и env HERV-E, причем между генами gag и pol последнего вставлены гены pol и env HERV-I [347]. Подобные элементы обнаружили в нескольких сайтах генома. Возраст HERV-E.PTN составляет приблизительно 25 млн. лет, т.к. он впервые появляется в геноме гориллы (в геномах обезьян Старого Света в сайте HERV-E.PTN находится полноразмерный HERV-I) [347].

Ретровирусы и геном человека.

Транскрипты эндогенных ретровирусов обнаружены во многих тканях человека, здоровых и опухолевых, см. ссылки [217, 269, 291, 301, 303, 304, 307, 310, 324, 328, 335, 339, 348-353]. Как уже было сказано ранее, LTR ERV содержат различные регуляторные последовательности (см. Рис.1.7.4), которые могут оказывать воздействие на расположенные неподалёку клеточные гены. Экспрессию ERV активируют совершенно различные факторы. Показана активация транскрипции для провируса Mo-MuSV (Moloney-Murine Sarcoma Virus) под действием УФ- или рентгеновского излучения, а также при обработке форболовым эфиром, различными канцерогенами и мутагенами [354].

В состав LTR входят последовательности, связывающие рецепторы гормонов и факторы транскрипции, такие, как рецептор ретиноевой кислоты (Retinoic Acid - RA), глюкокортикоидный и прогестиновый рецепторы (GRE и PRE, соответственно), NF-B, NFOC-1, YY1, SATB1, BMP, Oct-1, Myb, Sp1, Sp3 и др. Действительно, многими исследователями выявлено увеличение или уменьшение экспрессии генов ERV в ответ на воздействие этих белков и гормонов [271, 272, 348, 349, 355-359]. Например, транскрипционным фактором YY1 (Yin Yang-1), который обычно выступает как репрессор, специфически активируется транскрипция ретровируса HTDV/HERV-K в клетках тератокарциномы [272]. Другой пример - усиление транскрипции ретровируса HERV-H в клетках тератокарциномы человека в ответ на взаимодействие с белком Myb [357].

Многие ERV in vivo экспрессируются ткане-специфически в различных эмбриональных тканях [279]. Показана ткане-специфическая активация экспрессии HERV-K в клетках эмбриональной карциномы человека NT2D1 с помощью RA и BMP (Bone Morphogenic Proteins) [356]. Одиночный LTR семейства ERV-9 расположен в 5` районе локуса бета-глобина человека. Энхансерный элемент этого LTR определяет предпочтительную транскрипцию гена бета глобина в эритроидных клетках [336].

Транскрипты ERV могут регулировать генную экспресию и путем антисмыслового ингибирования [360]. Может осуществляться экспрессия клеточных генов с промотора LTR [52]. Подобный эффект обнаружили в процессе исследования генов аполипопротеина C-I (apoC-I) и рецептора эндотелина В (EBR) [361]. В обоих случаях используется промотор LTR HERV-E, причем и тот и другой гены имеют альтернативные промоторы (не LTR-промоторы). При этом промотор LTR EBR используется чаще, чем альтернативный промотор. Более того, под воздействием энхансера, входящего в состав промотора LTR EBR, происходит усиление экспрессии данного гена в плаценте. Промотор LTR apoC-I слабее альтернативного, тем не менее около 15% транскриптов мРНК ароС-I инициируются с него.

Последовательности ERV могут обеспечивать альтернативный сплайсинг для некоторых клеточных генов [19, 47, 52, 362, 363]. Описаны случаи, когда последовательности ERV включаются в экзоны различных генов и даже транслируются [19, 47, 52, 364]. В результате альтернативного сплайсинга гена рецептора лептина человека (OBR) с LTR HERV-K, 67 последних аминокислот данного белка кодируются LTR [364]. Следующий пример: ген OBR кодирует трансмембранный белок и состоит из 20 экзонов, в последний из которых входит внутриклеточный домен OBR. Этот внутриклеточный домен участвует в трансдукции сигнала, связываясь с JAK киназами. Возможно, с помощью сплайсинга LTR и 19-го экзона осуществляется регуляция экспрессии двух форм OBR, поскольку 20-й экзон не включается в альтернативный продукт. Есть и другие примеры, когда часть последовательности ERV входит в состав экзона (например, 5' экзон гена ароматазы у цыпленка) [47].

Одиночный LTR семейства HERV-H обеспечивает сигнал полиаденилирования для двух генов человека: HHLA2 и HHLA3 [365]. Интересно, что анализ РНК бабуина выявил отсутствие LTR в этом районе; его гены HHLA2 и HHLA3 использовали другие сигналы полиаденилирования. Сигналы полиаденилирования элементов другой группы ERV - HERV-K-T47D - используется для терминации транскрипции трех генов человека, функции 2 двух из которых пока не известны, а третий кодирует тирозиновую фосфотазу 1 [366]. Другие примеры см. в [19, 47, 52].

В большинстве своем обнаруженные транскрипты ERV содержат ORF, нарушенные множеством стоп-кодонов и, следовательно, не кодируют каких-либо белков. Вместе с тем некоторые эндогенные провирусы способны кодировать белки, т.е. имеют неповрежденные ORF. Недавно показали, что белок Env HERV-W принимает участие в образовании синцитиотрофобласта в процессе развития плаценты [345, 346, 367, 368]. Этот белок назвали синцитином. Кроме Env HERV-W, в плаценте найдены Env белки ERV-3, которые тоже имеют фузогенные свойства и способны объединять клетки, сливая их плазматические мембраны [369]. Некоторые белки Env подвергаются процессингу, о чем свидетельствует наличие белков SU и TM в плаценте человека [269]. Обнаружены представители подсемейства HERV-K(HML-2), которые экспрессируют полноценные белки Gag, Pol и Env [311, 315, 370, 371], а также дУТФазу [275, 276] и протеазу [372]. Описан белок HERV-K Corf, который является вспомогательным белком [277, 278, 280, 281] и может быть вовлечен в различные процессы, связанные с распространением и размножением ERV. Вполне вероятно, что белки ERV (или VLP) могут переноситься от матери к плоду во время беременности (например, подобное явление показано для экзогенного ретровируса - HTDV [373]).

К настоящему времени, за одним исключением [315], не описано ERV, потенциально кодирующих все полноразмерные ретровирусные белки. В то же время VLP встречаются в плаценте, тератокарциноме, ооцитах, фолликулярной жидкости и других тканях и клетках [52, 270]. Возможным источником этих частиц являются различные ERV, которые могут рекомбинировать между собой. Такие рекомбинанты нашли в клетках инфицированных MLV [270]. Рекомбинация между последовательностями LTR может усиливать промотор или расширять тканеспецифичность экспрессии [270]. При рекомбинации последовательностей env, могут образоваться такие варианты ретровирусов, которые способны заражать клетки через разные рецепторы и таким образом расширять тип своих хозяев. Кроме того, рекомбинация может происходить между эндогенными и экзогенными ретровирусами. Недавно описали новый высоко-патогенный вид MMTV, возникший в результате рекомбинации между эндогенным и экзогенным провирусами и вызывающий возникновение опухоли у 40%-80% инфицированных самок мыши [270]. Рекомбинация последовательностей ERV -нежелательный эффект, имеющий место в генной терапии, использующей ретровирусные векторы, а также при ксенотрансплантации, использующей органы свиней и обезьян [270, 374, 375]. Кроме того, ERV других животных (например, PERV свиней) способны заражать клетки человека, что приводит к активации иммунной системы и, впоследствии, отторжению ксеноплантированного органа [374-376]

Перенос ретровирусов от одного хозяина к другому может привести к образованию нового, высокопатогенного вируса. Подобное явление показано для экзогенных ретровирусов - предполагается, что HIV-1 и HIV-2 произошли в результате инфицирования клеток человека экзогенными ретровирусами обезьян - SIVcpz [377] и SIVsm [378], соответственно. Некоторые ERV могут эффективно упаковываться ретровирусными векторами и, следовательно, переноситься из одной клетки в другую, т.е. потенциально инфекционны [52, 217, 268, 269].

Образование белков, кодируемых ERV, особенно продуктов гена env, может играть роль в защите от инфицирования экзогенными ретровирусами посредством выработки иммунного ответа на сходные антигенные детерминанты ретровирусных белков [52, 217, 270]. Также белок Env способен занимать рецепторы, с которыми должны связываться экзогенные аналоги для проникновения в клетку. Выявленный в плаценте белок Env, где стероидные гормоны стимулируют экспрессию некоторых ретровирусных генов, в принципе может обеспечивать защиту плода [270, 345, 348, 367-369]. Сейчас исследуется возможное участие белковых продуктов гена gag эндогенных ретровирусов HERV-K в защите от заражения экзогенными ретровирусами. Одним из примеров является мышиный fv-1, кодирующий белок Fv-1 [379]. Этот белок способен связываться с геномом экзогенного ретровируса, препятствуя его репликации. С другой стороны, белки ERV могут содействовать распространению и размножению экзогенных ретровирусов, поскольку функции белков среди всех ретровирусов консервативны.

Возможно, белковые продукты ERV вовлечены в возникновение некоторых аутоиммунных заболеваний. Например, болезнь, возможно ассоциированная с наличием HERV в геноме человека - инсулин-зависимый диабет (Insulin-Dependent Diabetes Mellitus - IDDM). Это аутоиммунное заболевание, которое проявляется в T-лимфоцит-зависимом разрушении -клеток поджелудочной железы, продуцирующих инсулин [380, 381]. Предполагается, что в процесс патогенеза вовлечен экспрессирующийся этими клетками некий суперантиген (SuperAntiGen - SAG), и недавно нашли ERV человека, экспрессирующий суперантиген, который возможно участвует в IDDM - IDDMK1,2-22 [380, 381]. Показали, что он гомологичен HERV-K(HML-2) [381]. Возможно, что SAG данного ERV активирует презентирующие клетки, в результате чего последние выносят ретровирусный SAG в комплексе с MHC II на свою поверхность. Т-лимфоциты взаимодействуют с данными MHC II и начинают орган-специфическое разрушение ткани. Ещё одно доказательство того, что белок, кодируемый HERV-K(HML-2), а именно, продукт гена env, обладает свойствами SAG, приведено в работе [382]. Инфекция вирусом Эпштейн-Барр приводит к усилению экспрессии гена env, который выносится на поверхность и, проявляя свойства SAG, взаимодействует с Т-клеточным рецептором, вызывая патогенез тканей [382]. Кроме того, белок Env представителей другого семейства ERV, HERV-H, обладает иммуносупрессивными свойствами и в силу этого, возможно, в некоторых случаях обуславливает опухолеобразование [383]. Сейчас активно обсуждается участие ERV ещё в одном аутоиммунном заболевании - ревматоидном артрите [269, 384-386]. В синовиальной жидкости пациентов с данной болезнью обнаружили транскрипты HERV-W [384]. Кроме того, другая группа выявила в синовиальной жидкости РНК ERV-9 [386]. Возможно, какие-либо ERV содействуют развитию ревматоидного артрита по механизму, аналогичному IDDM.

В качестве примера ERV, ассоциированного с болезнями в других млекопитающих, можно привести одного представителя семейства IAP мыши. Данный элемент участвует в нарушении работы гена -глюкуронидазы (у человека это нарушение приводит к мукополисахаридозу типа VII (MPS VII)) [387]. IAP находится в интроне 8 и каким-то образом снижает активность гена - возможно, препятствуя транскрипции, или дестабилизирует его мРНК.

Множество ретроэлементов - различные HERV, LINE, Alu, MIR и др.,- находится в участках генома, кодирующих белки Главного Комплекса Гистосовместимости класса II (MHC II, Major Histocompatibility Complex class II). MHC состоит из консервативных полиморфных блоков, длина которых составляет 200-300 т.п.н. Их комбинации представляют собой гаплотипы локуса MHC. Одним из компонентов блоков является HERV-16 (Р5 или PERB3) [388-393]. Возможно, что этот HERV, а также другие ретроэлементы, участвовали в эволюции MHC. Они могли способствовать гомологичной рекомбинации, в результате которой получались различные дупликации, инсерции, делеции и другие перестройки сегмента MHC (способность ERV вызывать хромосомные перестройки обсуждается также в работе [394]).

Несмотря на то, что ERV способны приносить пользу клетке, в большинстве случаев организму не выгодна активность ERV, поскольку они могут интегрировать в важные для клетки гены и нарушать их структуру. По-видимому, инактивация ERV заключается в подавлении активности их LTR, например, с помощью метилирования [20, 395]. Предполагается, что ключевую роль в этом, как и в инактивации метилированных LINE, играет метил-CpG связывающий белок MeCP2 [124, 396].

В последнее время ERV часто используются в различных молекулярно-биологических экспериментах, например, как векторы, несущие определенную последовательность [397]. Недавно была создана система из ретровирусного вектора и бактериальной плазмиды, которую можно использовать для сайт-специфической интеграции нужной последовательности в геномную ДНК [398]. Другие исследователи разработали метод подсчета клеток в культуре на основе количества копий ERV-3 в этих клетках [399]. Кроме того, ERV могут быть использованы в молекулярной систематике. Например, недавно на основе анализа внедрений HERV-K и HERV-H в ортологичные геномные локусы построили филогенетическое древо приматов [400].

Приведённые в последнем разделе факты заставляют рассматривать эндогенные ретровирусы и их LTR как весьма важные факторы эволюции генома человека [20, 41, 401]. Как и в случае всех остальных мобильных элементов, вредные для организма внедрения ERV в геном элиминировались в процессе эволюции, а сохранялись лишь те, которые либо не влияли на жизнедеятельность организма, либо придавали ему селективные преимущества при естественном отборе.

Глава 1.8 Некоторые аспекты происхождения и эволюции ретроэлементов

Эволюция глазами автономных ретротранспозонов: от ретроинтронов - к ретровирусам.

Несмотря на большие различия в структуре и механизмах функционирования между разными группами автономных ретроэлементов, все они, по-видимому, представляют собой ветви одного филогенетического древа. Основные белковые домены, кодируемые ими, безусловно имеют общее происхождение, а не возникали многократно в ходе эволюции [44].

Какая же группа белков дала начало этому огромному семейству ревертаз и какие из существующих ныне элементов наиболее близки к первым представителем ретроидного типа? До сих пор из всего множества белков, закодированных в собственном эукариотическом геноме (исключая мобильные элементы), ревертазная активность была обнаружена только у теломеразы [402]. Автору не известны работы, в которых оценивалась бы степень родства ревертазного домена этого фермента с соответствующими доменами белков ретроэлементов. Интересно, что у дрозофилы функцию теломеразы выполняют два LINE-элемента (HeT и TART - см. Главу 1.5.), что послужило поводом для обсуждения их родства [96, 403]. Однако исключительность такого способа поддержания длины теломеры, а также сходство данных ретропозонов с другими LINE, не участвующих в формировании теломер, едва ли позволяет придавать этому примеру большое значение.

В работе [43] продемонстрирована общность происхождения обратной транскриптазы LINE-типа и РНК-репликазы (+)РНК-содержащих вирусов, однако это не снимает поставленного вопроса, так как РНК-зависимая РНК-полимераза также не является ферментом, свойственным собственному геному эукариот.

Второй вопрос - в какую сторону шла эволюция ретроэлементов: по пути усложнения (от LINE к ретровирусам) или утраты функций (т.е. наоборот)? Наличие общих черт у эукариотических LINE и прокариотических интронов группы II [404], а также филогенетическая близость ревертаз прокариотического типа именно к ревертазам LINE-элементов свидетельствует в пользy первого предположения, хотя нельзя безоговорочно отвергать и гипотезы деградации [44]. Среди LTR-содержащих элементов наиболее близки к LINE представители copia/Ty1-подгруппы, имеющие сходную доменную организацию гена pol. Неизвестно, однако, никаких ретроэлементов “переходного” строения, поэтому неясно, каким образом могло произойти такое резкое усложнение структуры и жизненного цикла. Возможно, продвинуться в данном вопросе позволит изучение транскрипции LINE-элементов, входящих в составы тандемов. Особенно многообещающим выглядит пример HeT-A с его 3'-концевым промотором (см. Главу 1.5.). В геноме дрозофилы этот ретропозон участвует в поддержании теломер, и его копии располагаются на концах хромосомы в виде тандемов «головой к хвосту» [405]. При таком типе организации 3'-концевой промотор приобретает смысл - с него может синтезироваться РНК-интермедиат 3'-прилежащей копии [82]. В результате имеет место ситуация, близкая к случаю элементов ретровирусного типа, где синтез начинается и заканчивается в одинаковых областях, лежащих на концах кодирующей области.

Не вызывает сомнений родство всех LTR-содержащих ретроэлементов. Что касается связи между экзогенными и эндогенными ретровирусами позвоночных, она была очевидна с самого начала: некоторые инфекционные вирусы могут встречаться в эндогенной форме [264], а классические эндогенные вирусы очень похожи на некоторые экзогенные (например, эндоретровирус человека HERV-K (HML-2) - на мышиный MMTV [406]). Вскоре после открытия ретротранспозонов Тёминым была высказана идея о происхождении ретровирусов из мобильных элементов эукариот [407]. Она неоднократно обсуждалась [408, 409] и в общем была принята большинством биологов. Сейчас кажется очевидным, что ретровирусы могли произойти из gypsy/Ty3-подобных ретротранспозонов, некоторые из которых фактически можно считать ретровирусами беспозвоночных [231, 246]. Приравнять друг к другу две эти группы не позволяет лишь недостаточная степень гомологии между ними по сравнению со степенью гомологии внутри групп. Как уже говорилось, gypsy/Ty3-ретротранспозоны в этом плане более близки к не содержащим LTR каулимовирусам растений, чем к ретровирусам позвоночных. Функционально же некоторые эндогенные ретровирусы гораздо меньше напоминают инфекционные агенты, чем тот же ретротранспозон дрозофилы gypsy. Интересно, что элементы, относимые к LTR-ретротранспозонам, присутствуют и в геноме позвоночных [261, 410], а следовательно, разную степень внутри- и межгрупповых гомологий нельзя объяснить филогенетической дистанцией между хозяевами.

Вышеупомянутое родство ревертаз LTR-содержащих ретроэлементов и каулимовирусов (а также, видимо, и гепаднавирусов [411]), не имеющиx LTR, не будет казаться неожиданным, если вспомнить, что LTR формируются на самом последнем этапе синтеза кДНК благодаря способности ревертазы ретровирус-подобных элементов к синтезу с вытеснением (см. Главу 1.7.). Очевидно, фермент каулимовирусов утратил такую способность.

Не совсем понятной остаётся связь между двумя подгруппами LTR-ретротранспозонов, отличающихся порядком доменов в pol и (по большей части) количеством ORF. Действительно, представители copia/Ty1-подгруппы филогенетически, видимо, настолько же далеки от gypsy/Ty3-подобных ретротранспозонов, как и от ретровирусов позвоночных [43]. Разница в доменной структуре и числе ORF может оказаться менее принципиальной в свете данных о высокой частоте рекомбинаций, свойственной ретровирусным геномам. Сходство же в общей схеме организации и, по-видимому, в механизмах функционирования у всех LTR-содержащих ретротранспозонов слишком велико, чтобы пытаться объяснить его конвергенцией независимо произошедших групп.

Следующим интересным аспектом эволюции автономных ретроэлементов является прогрессивное изменение их структуры с точки зрения способности эффективно заселять новые локусы генома хозяина. Для того, чтобы в процессе эволюции не кануть в небытие, мобильные элементы должны размножаться: ведь если увеличения количества копий не происходит, то вследствие хотя бы даже “фонового” мутагенеза данная группа неизбежно перейдёт в разряд “молекулярных ископаемых”. Тем более, что под действием естественного отбора активные транспозоны не селектируются, а, наоборот, как правило выбрасываются (случай с поддержанием теломер дрозофилы - редчайший, и потому ценнейший, пример обратного). Таким образом, перед желающими “выжить” мобильными элементами стоит сложная, но не невыполнимая задача: идя наперекор естественному отбору распространяться по геному, не приводя при этом к гибели организма-хозяина. Слишком медленно распространяться нельзя, слишком быстро - тоже. Принцип “золотой середины” выполняется повсюду, даже (а быть может, тем более) здесь. Как же различные группы ретроэлементов справляются с этой непростой задачей нахождения “своей” скорости?

Очевидно, что справляются они с ней во всех смыслах по-разному. Наиболее древние ретроэлементы, ретроинтроны, или интроны группы II, вообще практически не имеют никакой “свободы выбора”: их транскрипция полностью находится под контролем регуляторных элементов гена-хозяина, а интегрировать они могут лишь в строго определённую последовательность ДНК, причём довольно протяжённую, так что таких мест в геноме, куда мог бы внедриться ретроинтрон, совсем немного (cм. Главу 1.4.). Стоит ли удивляться, что ретроинтроны слабо распространены в геномах живых организмов? Скорее, то, что некоторые из них всё-таки дошли до наших дней, можно объяснить либо невероятным везением, либо тем, что существующие ныне ретроинтроны выполняют какие-то нужные функции для приютивших их организмов.

Произошедшие от ретроинтронов четыре древнейшие группы LINE (подробно описаны в Главе 1.5.) шагнули несколько дальше в достижении сформулированной выше цели, но не сильно. Они приобрели собственный внутренний промотор, что позволило им самим инициировать экспрессию своих генов. В то же время их интеграза осталась сайт-специфической, причём опознающей достаточно протяжённую последовательность, так что сколько либо значительно распространиться по геному для них всё равно не представилось возможным. Потому-то, видимо, и сохранились они скорее как молекулярные реликты, CRE - в ДНК некоторых трипаносоматид, NeSL-1 и R4 в нематодах, и R2 в членистоногих, подобно птице Додо с о. Маврикий. По-видимому, это не случайно, и сохранившиеся активные ретроэлементы перечисленных групп для чего-то нужны организмам-хозяевам.

Обретение более молодыми группами LINE относительно неспецифической AP-эндонуклеазы сразу подняло эффективность ретропозиции на совершенно новый уровень, и круг хозяев дошедших до нас представителей “молодых” групп LINE несравненно шире круга хозяев четырёх старейших групп; исключением, которое при внимательном рассмотрении лишь подтверждает правило, является группа R1, распространённая исключительно в членистоногих. АР-эндонуклеаза R1 вторично приобрела сайт-специфичность к определённым последовательностям в составе генов рРНК, чем лишила R1 будущего, хотя, возможно, R1 несут какую-то эволюционно закреплённую функцию в геномах членистоногих.

Появление LTR у ретротранспозонов (см. Главу 1.7.) позволило усложнить структуру мобильных элементов, возможно, сделало регуляцию экспрессии генов мобильного элемента более гибкой, но к качественно новым темпам “заселения” генома не привело. В действиях ретроэлементов, однако же, появились элементы взаимовыручки: дефектные по одной ORF, но имеющие другую ORF функциональной, они отныне могли комплементировать друг друга и продолжать, таким образом, ретропозицию. Однако высшее своё выражение комплементация имеет при экспрессии генов эндогенных ретровирусов, когда масса находящихся в геноме дефектных ERV работает “на коллектив”, поставляя свои белки на построение вирусных частиц мозаичной структуры. Кроме того, при инфекции ERV могут комплементировать дефектные по тому или иному гену экзогенные ретровирусы. Интересно, однако же, что в сравнении с молодыми LINE или с некоторыми LTR-ретротранспозонами, каждое из семейств ERV представлено в геноме лишь небольшим количеством копий. Наверное, это объясняется происхождением ERV от экзогенных ретровирусов, задачей которых ни в коей мере не является увеличение числа своих копий в геноме инфицированной клетки. Принимая во внимание всё выше сказанное, можно сделать вывод, что наиболее успешными с точки зрения стратегии выживания автономными ретроэлементами являются LINE “молодых” групп, а также некоторые LTR-ретротранспозоны.

Итак, мы проследили возможные эволюционные пути от древних прокариотических ретроинтронов и LINE, которые представлены в геномах многих представителей как высших, так и низших эукариот, через стадию не менее широко распространённых LTR-ретротранспозонов до относительно молодых групп каулимовирусов растений и ретровирусов позвоночных. Конечно, нельзя понимать эту схему буквально, но, думается, общее направление развития автономных ретроэлементов она отражает.

SINE: молекулярная мимикрия, или экспансия за чужой счёт.

В отличие от автономных ретроэлементов, характеризующихся общностью происхождения (по крайней мере, гена обратной транскриптазы), SINE являются гетерогенной группой, представители которой много раз появлялись независимо друг от друга по ходу эволюции (см. Главу 1.6.). Однако же всех SINE объединяет то, что они используют для собственного распространения по геному белковый аппарат LINE.

Многие SINE-элементы, имеющие в 5'-концевой области гомологию с тРНК, произошли путём внедрения (или рекомбинации) ()strong stop ДНК ретровирусов (см. Главу 1) или ретротранспозонов в 3'-концевые области LINE, что привело к их мобилизации. В работах [185, 412] была продемонстрирована высокая степень гомологии 3'-концевых доменов LINE и SINE, встречающихся в одном и том же геноме: PolIII/SINE и CR1-LINE черепах, HpaI и Rsg-1 рыб, Bov-tA и Bov-B быка и других. Очевидно, за ретропозиции данных семейств SINE ответственен ферментативный аппарат соответствующих LINE, то есть эти SINE являются как бы их молекулярными паразитами (или комменсалами), прилагающими усилия только для своей транскрипции (внутренний промотор полимеразы III достался им в наследство от тРНК из ()strong stop ДНК). В качестве примера можно привести и короткий ретропозон RIME трипаносоматид, который представляет собой слитые начало и конец LINE ingi этих же организмов [413]: из длинного элемента как бы выброшено всё содержимое, оставлены лишь 5'-концевая область, в которой, вероятно, находится внутренний промотор РНК-полимеразы II, и 3'-концевой домен, в котором, как известно, у LINE находится область узнавания ревертазы. Молекулярный паразитизм SINE на LINE предполагается и во всех остальных случаях (см. Главу 1.6.), но здесь он наиболее очевиден.

Глава 1.9 Функции ретроэлементов в клетке и их влияние на геном хозяина: факты и гипотезы

Вопрос о значении для клетки обратного потока генетической информации волновал учёных с момента его открытия. На долю ретроэлементов в некоторых геномах приходится до 30-40% всей генетической информации [54]. У человека около 28% тотальной ДНК представлено всего двумя семействами ретропозонов, L1 и Alu [4]. Сам факт, что в ходе эволюции происходит не уменьшение, а, наоборот, увеличение числи семейств и количества копий ретроэлементов, заставляет пересмотреть отношение к этому компоненту генома как к генетическому “балласту”, ”утилю” (англ. “junk” DNA), играющий в клетке пассивную роль [414], или занимающемуся исключительно наращиванием числа собственных копий (концепция “эгоистичной” ДНК - selfish DNA [415, 416]).

В пользу возможного использования ретроэлементов для выполнения каких-либо полезных клетке функций говорит также то, что экспрессия многих ретропозонов и ретротранспозонов чётко регулируется и зачастую тканеспецифична (см. [74] и обзор [417]). Место и время активной транскрипции ID- и Alu-подобных РНК (соответственно ВС1 крысы и ВС200 приматов) указывает на их возможную роль в созревании нейронов головного мозга в первые дни после рождения [418, 419]. Экспрессия некоторых SINE специфически усиливается при тепловом шоке [420], а облучение клеток рентгеновскими лучами повышает уровень транскрипции многтх ретротранспозонов, например 1731 из генома дрозофилы [421]. Существуют косвенные данные о необходимости экспрессии LINE для клеточной пролиферации [422]. Наконец, некоторые копии мобильных элементов не являются “эгоистичной” ДНК уже хотя бы потому, что входят в состав кодирующих областей клеточных генов. С точки зрения эволюционной генетики интересны также факты увеличения частоты ретропозиций в потомстве мух, подвергнутых некоторым типам стрессов, причём повышенная частота сохраняется в течение нескольких поколений [423].

Тем не менее, понятие о значении мобильных ретроэлементов связано в нашем восприятии прежде всего с ретровирусными инфекциями, инсерционным мутагенезом, индукцией хромосомных перестроек и изменением уровня экспрессии клеточных генов [424]. Особенно ярко мутагенность проявляется при так называемых транспозиционных взрывах, имеющих место в генетически нестабильных линиях и при гибридном дисгенезе (ГД), когда частота транспозиций увеличивается на 3-5 порядков. По меньшей мере две системы ГД у дрозофилы связаны с активацией подвижных ретроэлементов: I-R (LINE-элемент I) и MS-SS (ретротранспозон gypsy). Они приводят к репродуктивной изоляции разных природных линий мух и могут иметь особое значение с точки зрения популяционной генетики. Интересно, что в некоторых системах ГД наблюдается одновременная мобилизация самых разных ретроэлементов [425]. Неизвестно, однако, являются ли эти примеры случаем истинной кооперативности этих ретроэлементов или просто наложением нескольких отдельных систем ГД.

Меньше изучена регуляция хромосомных перестроек, к которым может приводить эктопическая рекомбинация по двум копиям элементов из разных локусов. На Тy-ретротранспозонах дрожжей было показано, что частота этих событий на удивление низка по сравнению с той, которую следовало бы ожидать исходя из количества копий и степени гомологии элементов внутри каждого семейства [426], причём искусственно введённые диспергированные элементы являются высокорекомбиногенными [там же]. Однако внесение двуцепочечного разрыва в последовательность Ty индуцировало рекомбинацию по двум LTR данной копии, что приводило к её вырезанию и залечиванию повреждения [427]. Согласно работе [257], большинство наблюдаемых хромосомных перестроек у дрожжей вызвано рекомбинацией по последовательностям Ty1.

Ещё более убедителен пример репарации двунитевых разрывов LINE-элементами, в том числе и в клетках млекопитающих [23, 428, 429]. Их механизм ретропозиции подразумевает использование 3'-конца одной из цепей ДНК в качестве затравки при обратной транскрипции (см. Главу 1). Обычно для его получения используется собственная эндонуклеаза LINE, однако может быть задействован двунитевой разрыв любого иного происхождения, при этом в месте “залеченного” разрыва появляется новая копия элемента [428-430]. Эти наблюдения тем более интересны, что в ответ на обработку клеток разнообразными ДНК-повреждающими агентами происходит драматическое увеличение транскрипции ретротранспозонов [431]. Возможно, в таких случаях организм прибегает к помощи LINE для залечивания образовавшихся двуцепочечных разрывов ДНК.