Микробиология и вирусология

Размещено на http://www.allbest.ru/

Государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Курский государственный медицинский университет»

Министерства здравоохранения Российской Федерации

Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

учебно-методическое пособие

для самоподготовки и самостоятельной

работы студентов лечебного факультета

по микробиологии, вирусологии

Курск - 2013



УДК 579(072)

Печатается по решению

ББК 52.6я73 редакционно-издательского

совета ГБОУ ВПО КГМУ

Минздрава России

Учебно-методическое пособие для самоподготовки и самостоятельной работы студентов лечебного факультета по микробиологии, вирусологии, иммунологии. - Курск: ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России, 2013. - 193 с.

Составитель: профессор П.В. Калуцкий

Рецензенты: д.м.н., профессор Л.И. Кафарская

д.м.н., профессор В.А. Романов

Пособие предназначено для руководства самостоятельной работой студента при подготовке к практическому занятию и при выполнении лабораторной работы на занятии. Содержит контрольные вопросы для проверки знаний студента, а также дополнительные материалы, не нашедшие отражения в имеющихся учебниках.

ISBN ББК 52.6я73

Калуцкий П.В., 2013

ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России, 2013



Цель и задачи дисциплины

Целью освоения дисциплины микробиологииии, вирусологии является освоение студентами теоретических основ и закономерностей взаимодействия микро- и макроорганизма, практических навыков по методам микробиологической диагностики, основным направлениям этиотропного лечения и профилактики инфекционных и оппортунистических болезней человека.

Задачами освоения дисциплины являются:

формирование у студентов общих представлений о строении и функционировании микробов как живых систем, их роли в экологии и способах деконтаминации, включая основы дезинфектологии и техники стерилизации;

изучение представлений о закономерностях взаимодействия организма человека с миром микробов, включая современные представления об иммунном ответе на инфекционные агенты (антигены);

изучение принципов и приёмов лабораторной диагностики инфекционных и оппортунистических инфекций у взрослого населения и подростков с использованием микробиологических, молекулярно-биологических и иммунологических методов;

обучение студентов методам проведения профилактических мероприятий по предупреждению бактериальных, грибковых, паразитарных и вирусных болезней;

обучение студентов основным направлениям этиотропного лечения инфекционных и оппортунистических болезней человека и организации работы с медикаментозными препаратами (антибактериальными, противовирусными, противогрибковыми), пробиотическими препаратами, препаратами для пассивной и активной иммунопрофилактики и терапии, бактериофагами и др.;

научить анализу научной литературы по современным проблемам микробиологии;

научить решению отдельных научно-исследовательских и научно-прикладных задач в микробиологии по диагностике, лечению, реабилитации и профилактике инфекционных и оппортунистических инфекций.

Место дисциплины в структуре основной образовательной программы (ООП)

Дисциплина «микробиология, вирусология» относится к математическому, естественнонаучному циклу дисциплин С.2.

Основные знания, необходимые для изучения дисциплины, формируются в цикле дисциплин: биология с общей генетикой; гистология, эмбриология и цитология; общая и биоорганическая химия; нормальная анатомия; нормальная физиология; биологическая химия.

Дисциплина является предшествующей для изучения дисциплин: инфекционные болезни; эпидемиология; фтизиатрия, клиническая иммунология, дерматовенерология, патофизиология, клиническая патофизиология; фармакология, акушерство и гинекология; факультетская терапия, профессиональные болезни; госпитальная терапия, эндокринология; педиатрия; общая хирургия, лучевая диагностика; факультетская хирургия; госпитальная хирургия, детская хирургия; урология; травматология и ортопедия; офтальмология; отоларингология; стоматология; онкология.

Требования к результатам освоения дисциплины

Проектируемые результаты освоения дисциплины.

Знать:

основные понятия и проблемы биосферы и экологии, феномен паразитизма и биоэкологические заболевания;

классификацию, морфологию и физиологию микроорганизмов и вирусов, их влияние на здоровье человека, методы микробиологической диагностики, применение основных антибактериальных, противовирусных и биологических препаратов;

функциональные системы организма человека, их регуляцию и саморегуляцию при воздействии с внешней средой в норме и патологии;

структурные и функциональные основы болезней и патологических процессов, причины, основные механизмы развития и исходов типовых патологических процессов, нарушений функций органов и систем.

Уметь:

пользоваться учебной, научной, научно-популярной литературой, сетью Интернет для профессиональной деятельности;

пользоваться физическим, химическим и биологическим оборудованием;

работать с увеличительной техникой (микроскопами, оптическими и простыми лупами); проводить микробиологическую и иммунологическую диагностику;

применять основные антибактериальные, противовирусные и биологические препараты;

анализировать вопросы общей патологии и современные теоретические концепции и направления в медицине;

обосновывать принципы патогенетической терапии наиболее распространённых заболеваний;

обосновать необходимость применения иммунокорригирующей терапии;

производить расчёты по результатам эксперимента, проводить элементарную статистическую обработку экспериментальных данных.

Владеть:

базовыми технологиями преобразования информации: текстовые, табличные редакторы, поиск в сети Интернет;

интерпретацией результатов лабораторных методов диагностики.

Процесс изучения дисциплины направлен на формирование следующих компетенций:

способность и готовность применять методы асептики и антисептики, использовать медицинский инструментарий, проводить санитарную обработку лечебных и диагностических помещений медицинских организаций (ПК-7);

способность и готовность использовать методы оценки природных и медико-социальных факторов среды в развитии болезней у взрослого населения и подростков, проводить их коррекцию, осуществлять профилактические мероприятия по предупреждению инфекционных, паразитарных и неинфекционных болезней, проводить санитарно-просветительную работу по гигиеническим вопросам (ПК-11);

способность и готовность назначать больным адекватное (терапевтическое и хирургическое) лечение в соответствии с выставленным диагнозом, осуществлять алгоритм выбора медикаментозной и немедикаментозной терапии больным с инфекционными и неинфекционными заболеваниями (ПК- 20);

способность и готовность изучать научно-медицинскую информацию, отечественный и зарубежный опыт по тематике исследования (ПК-31).

Методические указания к самостоятельной подготовке студента к практическому занятию

«Учебно-методическое пособие для самоподготовки и самостоятельной работы студентов лечебного факультета по микробиологии, вирусологии» предназначено для оказания методической помощи как в процессе самостоятельной подготовки к практическому занятию, итоговому занятию и экзамену, так и в процессе работы на самом занятии. В начале пособия имеется план практических занятий по всему курсу. План лекций и практических занятий на семестр вывешивается на стенде на кафедре. Для наиболее эффективного усвоения лекционного материала необходимо готовиться к лекции, для чего необходимо хотя бы один раз прочесть соответствующий предстоящей лекции материал по учебнику. Такое предварительное знакомство с темой облегчит процесс восприятия лекции и её конспектирование. При конспектировании лекции необходимо обратить особое внимание на последние данные медицинской науки и практики, которые не нашли отражение в учебнике.

Для подготовки к практическому занятию необходимо прежде всего прочитать материал по пособию: тема занятия, значение его в общемедицинской подготовке врача, цель самоподготовки (то есть что должен знать студент после самостоятельного изучения темы); исходный уровень знаний - что необходимо вспомнить (или повторить) из ранее пройденного; цель занятия, план изучения темы, навыки, которыми студент должен овладеть после изучения темы. Затем надо выучить материал по учебнику, затем по руководству к лабораторным занятиям, по конспекту лекций, изучить также дополнительный материал, если он имеется в пособии. Для более углублённого изучения предмета рекомендуется дополнительная литература по разделам. В процессе подготовки читайте текст, вдумываясь в смысл, не продвигайтесь дальше, если Вы не поняли прочитанного. Новые термины, латинские названия напишите несколько раз и повторите вслух. Материал, поддающийся классификации, изобразите в виде схемы на бумаге. В конце подготовки проверьте свои знания по контрольным вопросам, которые имеются в пособии по каждой теме. Вопросы предназначены для того, чтобы Вы лучше продумали и поняли выученное, потому что важно не только усвоить сумму отдельных фактов, но и осмыслить эти факты и связь между ними, например, для питательных сред - принцип их действия, для реакций иммунитета - механизм и принцип реакции, для лабораторной диагностики конкретного заболевания - особенности методов, связанных с биологией возбудителя, и реакцией на него организма. Выполните в рабочей тетради обязательные задания.

По темам частной микробиологии на кафедре в коридоре вывешены наглядные пособия - стенды. Учебные стенды есть также и в учебных лабораториях. Лечебно-профилактические и диагностические препараты в виде наборов ампул и флаконов имеются на кафедре и выдаются лаборантами для изучения. Если в процессе подготовки к занятию у Вас возникают вопросы, Вы можете проконсультироваться с преподавателем. Консультации проводятся в течение всего учебного года. Текущий контроль знаний студентов проводится на каждом практическом занятии с помощью тестового письменного и компьютерного методов, а также в ходе устного разбора. Итоговый контроль по разделам курса - рубежный (компьютерный и устное собеседование), контроль практических навыков на последнем занятии и окончательный - на экзамене (тесты на ЭВМ, устный опрос). При подготовке к итоговым занятиям Вы можете проконтролировать свои знания по вопросам к отдельным разделам курса, электронным тренажёрам, а при подготовке к экзаменам - по контрольным вопросам по всему курсу микробиологии, вирусологии, иммунологии, которые помещены в конце пособия. Главное, что определит Ваши успехи при изучении предмета - это последовательность, систематичность в работе. Вы хорошо и легко усвоите все последующие разделы только в том случае, если основательно изучили и, главное, поняли предыдущие разделы.

ЖЕЛАЕМ УСПЕХА!

План практических занятий по микробиологии,

ВИРУСОЛОГИИ

1. Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования.

2. Сложные методы окраски.

3. Структура бактериальной клетки.

4. Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий.

5. Итог по разделу «История микробиологии. Морфология микробов».

6. Физиология микробов. Питательные среды. Культивирование бактерий аэробов и анаэробов. Методы выделения чистых культур бактерий.

7. Выделение чистых культур бактерий (продолжение). Методы стерилизации.

8. Выделение чистых культур бактерий (окончание). Изучение ферментативных свойств бактерий. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха. Нормальная микрофлора организма человека.

9. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха (окончание). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Нормальная микрофлора организма человека.

10. Итог по разделу «Физиология микробов».

11. Химиотерапия и антибиотики. Бактериофагия.

12. Антибиотики (окончание). Генетика микробов, генная инженерия, биотехнология.

13. Инфекция. Экспериментальный метод исследования.

14. Иммунитет. Факторы врождённого иммунитета. Антигены.

15. Антитела. Реакции иммунитета: реакция нейтрализация токсинов антитоксинами, реакция преципитации, реакция агглютинации.

16. Реакция иммунного лизиса (иммунного бактериолиза, иммунного гемолиза). Реакция связывания комплемента. Реакции с мечеными компонентами: иммунофлюоресценция (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), иммуноблоттинг, радиоиммунный анализ (РИА), иммунная электронная микроскопия (ИЭМ).

17. Медицинские биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии инфекционных болезней.

18. Итог по разделу «Инфекция. Иммунологические основы диагностики лечения и профилактики заболеваний».

19. Общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

20. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов.

21. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, дизентерии, эшерихиозов. Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов.

22. Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.

23. Микробиологический диагноз холеры (окончание). Итог по разделу «Возбудители кишечных инфекций».

24. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками.

25. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками (продолжение), грамотрицательными палочковидными микроорганизмами и анаэробными микроорганизмами.

26. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии.

27. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, дифтерии (окончание). Микробиологическая диагностика коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза.

28. Итог по разделу «Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками, грамотрицательными палочковидными и анаэробными микроорганизмами. Микробиологическая диагностика дифтерии, коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза».

29. Микробиологический диагноз зоонозных инфекций - чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы.

30. Микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов.

31. Микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов.

32. Морфология и физиология вирусов. Методы культивирования и обнаружения вирусов. Возбудители гриппа.

33. Возбудители острых респираторных заболеваний (ОРЗ), герпетической инфекции.

34. Возбудители энтеровирусных (полиомелита, Коксаки, ЕСHО), нейровирусных (бешенства, вирусных энцефалитов) инфекций.

35. Возбудители вирусных гепатитов. Возбудители геморрагической лихорадки с почечным синдромом, лихорадки Марбург, лихорадки Эбола.

36. Возбудители ВИЧ-инфекции. Онкогенные вирусы. Возбудители медленных вирусных инфекций. Прионы.

37. Итог по практическим навыкам и умениям.



Раздел 1. История микробиологии. Морфология микробов

Темы практических занятий раздела «История микробиологии. Морфология микробов».

1. Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования.

2. Сложные методы окраски.

3. Структура бактериальной клетки.

4. Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий.

5. Итог по разделу «История микробиологии. Морфология микробов».

Содержание компетенций и планируемый пороговый уровень развития компетенций в результате изучения раздела «История микробиологии. Морфология микробов»

№	Код компетенции	Содержание компетенции (или её части)	В результате изучения дисциплины обучающиеся должны:
			Знать	Уметь	Владеть
	ПК-31	Способность и готовность изучать научно-медицинскую информацию, отечественный и зарубежный опыт по тематике исследования	методы сбора, хранения и обработки научно-медицинской информации	производить расчёты по результатам эксперимента, проводить элементарную статистическую обработку экспериментальных данных, анализировать отчёты	базовыми технологиями преобразования информации: текстовые, табличные редакторы, поиск в сети Интернет

Занятие 1. Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования

Микроорганизмы являются возбудителями инфекционных болезней, которые часто встречаются в практике врача. Для того чтобы правильно поставить диагноз инфекционного заболевания, необходимо хорошо знать морфологию микробов, их основные формы, уметь различать их под микроскопом. Каждый врач должен владеть методом микроскопии, для чего необходимо знать устройство микроскопа и правила работы с ним.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы студент должен знать:

- предмет и задачи микробиологии;

- основные этапы исторического развития микробиологии;

- положение микроорганизмов среди других живых существ, принципы их классификации, основные группы микроорганизмов; основные формы бактерий,

- принцип и правила микроскопии с иммерсионным объективом;

- усвоить принцип тёмнопольной, фазово-контрастной, люминесцентной и электронной микроскопии;

принципы организации и назначение бактериологической, вирусологической, серологической лабораторий,

оснащение лаборатории и рабочего места бактериолога,

правила работы на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии.

Исходный уровень знаний

Для усвоения материала темы необходимо знать:

- устройство оптического микроскопа, принцип его работы, разрешающую способность;

- преломление света, показатель преломления среды,

- устройство и принцип работы тёмнопольного и фазово-контрастного микроскопов;

- устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа;

- устройство и принцип работы электронного микроскопа;

- принципы разделения живых существ на эукариотов и прокариотов.

Цель занятия

Ознакомиться с принципами организации и оборудования бактериологической, вирусологической и серологической лабораторий.

Приобрести навыки соблюдения правил противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологической лаборатории.

Ознакомиться с основными типами микроскопии, их значением. Овладеть микроскопическим методом исследования.

Ознакомиться с основными формами бактерий.

Получить чёткое представление о положении микробов среди живых организмов и принципах их классификации.

Научится готовить микропрепараты бактерий и окрашивать их простым методом.

План изучения темы

1. Микробиология: определение предмета, отрасли микробиологии, методы исследования, задачи медицинской микробиологии, связь с другими науками, основные разделы.

2. Место бактерий среди других микроорганизмов, размеры, основные формы.

3. Методы изучения морфологии бактерий, простые методы окраски, основные красители.

4. Специальные методы микроскопии.

После изучения темы студент должен уметь

1. Готовить фиксированные препараты из культур микроорганизмов, растущих на плотных питательных средах.

2. Окрашивать препараты простыми методами.

3. Проводить микроскопию с иммерсионной системой микроскопа

4. Дифференцировать микроорганизмы по морфологическим, тинкториальным свойствам и интерпретировать полученные результаты.

ПРАВИЛА ДЛЯ СТУДЕНТОВ, РАБОТАЮЩИХ НА КАФЕДРЕ МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ, ИММУНОЛОГИИ

Работа на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и в бактериологической лаборатории требует строгого соблюдения специальных правил, так как исследования проводятся с использованием культур патогенных микроорганизмов и заразного материала от больных и экспериментальных животных. Соблюдение этих правил необходимо для обеспечения как личной безопасности, так и безопасности окружающих.

1. Студенты должны приходить на кафедру в халатах, шапочках, иметь сменную обувь. Категорически запрещается работать в учебных лабораториях без халатов и шапочек, выпускать из-под спецодежды волосы, воротнички, курить, принимать напитки и пищу, пользоваться мобильной связью.

2. Каждый студент имеет постоянное рабочее место в лаборатории. Из личных вещей студента на рабочем месте допускается наличие только рабочей тетради, в которой делаются записи и зарисовки. Ничего лишнего (в том числе учебников и других книг) на рабочем столе не должно быть.

3. С собой нужно иметь: тетрадь для ведения дневника работы, тетрадь для тестовых заданий, цветные карандаши. Не разрешается вести записи красными чернилами или пастой.

4. До начала работы необходимо проверить рабочее место, состояние микроскопа, о недостатках сообщить дежурным студентам и преподавателю.

5. Работать аккуратно, экономно расходовать материалы и реактивы, по окончании работы гасить спиртовку. Необходимо проявлять максимальное внимание ко всем этапам работы с культурами и заражёнными микробами животными. Во время проведения посевов и приготовления мазков не разговаривать и не ходить по лаборатории. Все пробирки и чашки с посевами должны быть промаркированы. В случае загрязнения заразным материалом поверхности стола и других предметов, кожи рук и лица - обработать дезинфицирующим раствором и немедленно сообщить о случившемся преподавателю. Использованные пипетки, предметные и покровные стекла, шпатели, ватные тампоны необходимо помещать в сосуды с дезинфицирующим раствором (пипетки - при полном погружении). Пинцеты, бактериальные петли, иглы после работы с исследуемым материалом необходимо прожигать в пламени горелки.

6. В конце занятия привести в порядок рабочее место. Все предметы на рабочем столе разместить в том порядке, в каком они были до работы. Отработанный материал (культуры, микробный материал и др.) поместить в бикс для обеззараживания путём автоклавирования. Микроскоп привести в порядок и поместить в шкаф. Вылить в специальную ёмкость воду из лотков, обработать при необходимости руки дезинфицирующим раствором и вымыть их с мылом.

ОБЯЗАННОСТИ ДЕЖУРНОГО

1. Дежурные получают от лаборанта всё необходимое для работы, проверяют, всё ли в порядке.

2. Устраняют все недостатки, возникающие в процессе работы.

3. Собирают у студентов посевы, ставят в термостат; использованные посевы сдают лаборанту для обеззараживания путём автоклавирования.

4. По окончании работы следят за тем, чтобы все рабочие места были приведены в порядок, микроскопы протерты и поставлены на место.

5. Сдают лабораторию лаборанту.

Дополнительный материал к занятию

Методы обеззараживания отработанного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды

Использованные в работе предметные стекла, пипетки, стеклянные шпателя и металлические инструменты немедленно после работы помещают в стеклянные банки с дезинфицирующим раствором (3% раствор хлорамина), которые должны находиться на рабочем столе.

Посуда, в которой выращивались микроорганизмы (чашки, пробирки, флаконы), складываются в биксы для обеззараживания путём автоклавирования.

Рабочее место по окончании работы подлежит уборке с применением дезинфицирующих средств. Используют более концентрированные растворы, чем для обработки рук, - 5% раствор хлорамина. Пинцетом берут кусочек ваты, смоченной дезинфицирующим раствором, и протирают поверхность стола на рабочем месте.

Мероприятия при возникновении аварии

Объём мероприятий по ликвидации аварии зависит от характера выполняемой работы, вида и свойств возбудителя, масштабов аварии:

- авария с разбрызгиванием патогенных биологических агентов (ПБА), т.е. с образованием аэрозоля (бой пробирок, флаконов или колб с жидкой культурой; бой чашек и пробирок с культурами на агаре с конденсатом; разбрызгивание бактериальной суспензии из пипетки или шприца; разбрызгивание тканевой жидкости при вскрытии трупов заражённых животных, а также другие аварии, ведущие к контаминации воздуха или окружающих предметов, например, авария при транспортировании ПБА в автоклавную и между подразделениями);

- авария без разбрызгивания ПБА (касание петлей с инфицированным материалом края чашки, пробирки, флакона, кристаллизатора, трещина на чашке Петри, пробирке, флаконе с биологическим материалом, падение на стол твёрдой частицы при обжигании петли после посева, касание поверхности посева на твёрдой питательной среде и т.п.);

- авария, связанная с нарушением целостности кожных покровов.

В подразделении, проводящем работу с ПБА, в специально отведённом месте хранят гидропульт (автомакс), комплекты рабочей (для переодевания пострадавших) и защитной (для сотрудников, ликвидирующих последствия аварии) одежды, аварийную аптечку.

В состав аварийной аптечки входит: спирт этиловый 70% (два флакона по 100 мл), 2 - 3 навески перманганата калия для приготовления 0,05% раствора (0,0125 г перманганата калия + 25 мл воды), стерильная дистиллированная вода, 5% настойка йода, ножницы с закруглёнными браншами, перевязочные средства (вата, бинты и пр.), жгут и нашатырный спирт.

Кроме вышеперечисленного в аптечке подразделений, проводящих вирусологические исследования, должны быть 1% раствор борной кислоты, интерферон или индуктор интерферона; в аптечке подразделения, проводящего микологические исследования - 1% раствор борной кислоты или навески для приготовления раствора (0,25 г борной кислоты + 25 мл воды).

Порядок действий при возникновении аварийной ситуации.

При аварии с разбрызгиванием ПБА:

- все находящиеся в помещении лица немедленно прекращают работу и, задержав дыхание, выходят из заразного помещения в предбокс, плотно закрывают дверь, включают аварийную сигнализацию и сообщают о случившемся руководителю подразделения;

- руки обрабатывают дезинфицирующим раствором или спиртом; если лицо не было защищено, то его обильно обрабатывают 700 этиловым спиртом;

- слизистые глаз, носа и рта обрабатывают препаратами из аварийной аптечки; рот и горло прополаскивают 700 этиловым спиртом, в нос закапывают раствор марганцовокислого калия 1:100000 или 1% раствор борной кислоты, а при аварии с вирусами затем закапывают интерферон или индуктор интерферона;

- защитную одежду снимают, погружают в дезинфицирующий раствор или помещают в бикс (бак) для автоклавирования;

- открытые части тела протирают 700 этиловым спиртом;

- в глаза (можно и в нос) закапывают растворы антибиотиков или других средств, к которым чувствителен возбудитель;

- принимают гигиенический душ;

- надевают чистую рабочую одежду.

Порядок проведения дезинфекционных мероприятий:

- сотрудники, участвующие в ликвидации аварии, должны быть одеты в хирургический халат, косынку, пластиковые бахилы;

- при проведении дезинфекции способом орошения в качестве СИЗ органов дыхания используются респираторы марки РУ-60 М или РПГ-68 с патроном, соответствующим применяемому дезинфектанту, или противогаз типа ГП-5;

- для обработки используют дезинфицирующий раствор, эффективный в отношении соответствующего инфекционного агента;

- дезинфекцию помещения проводят, разбрызгивая из гидропульта (автомакса) дезинфицирующий раствор от входной двери и далее, продвигаясь по обработанной территории и орошая перед собой все предметы (пол, стены, потолок) и воздушную среду;

- через 2 часа после первичной обработки собирают тампонами, смоченными дезинфицирующим раствором, осколки разбитой посуды, погружая их в ёмкость с дезинфицирующим раствором; лабораторную посуду с посевами, находившуюся в момент аварии на рабочих поверхностях, погружают в ёмкость с дезинфицирующим раствором или обтирают салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором, и помещают в ёмкость для автоклавирования;

- по окончании дезинфекции воздух и поверхности в помещении обеззараживают бактерицидными лампами по режимам согласно нормативным документам;

- сотрудник, проводивший дезинфекционную обработку, выходит в предбокс или коридор, снимает защитную одежду, погружая её в дезинфицирующий раствор;

- спустя два часа проводят уборку помещения, после чего работа может быть возобновлена.

Методы антисептической обработки рук лабораторных работников, контаминированных исследуемым материалом, культурами патогенных микробов

По окончании работы руки обрабатывают дезинфицирующим раствором. Используют ватные тампоны или марлевые салфетки, смоченные в 700 этиловом спирте (1% хлорамин, 3% раствор лизола). Последовательность обработки: тыл кисти, ладонная поверхность, межпальцевые пространства и ногтевые ложа, т.е. с учётом первоначальной обработки менее, а потом наиболее загрязнённых мест. Вначале обрабатывают левую, а потом правую кисть руки.

При загрязнении рук культурой патогенного микроба или патологическим материалом сразу же обрабатывают данный участок кожи, покрывая его на 3-5 минут ватой, смоченной в дезинфицирующем растворе.

После обработки рук дезинфицирующим раствором их моют водой с мылом.

Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов

Приготовление окрашенного препарата из культуры микроорганизмов включает: 1) приготовление мазка, 2) высушивание мазка, 3) фиксацию, 4) окраску.

Приготовление мазка. При приготовлении мазка из культуры микроорганизмов, выросшей на поверхности плотной питательной среды, на обезжиренное предметное стекло наносят петлёй небольшую каплю физиологического раствора, располагая её в центре круга, нарисованного с обратной стороны карандашом по стеклу. При работе спиртовка должна находиться прямо перед вами, на удобном для работы расстоянии. Предметное стекло должно находиться в чашке Петри или лотке: категорически запрещается готовить мазки на предметном стекле, лежащем на столе! В правую руку берут бактериологическую петлю, в левую - пробирку с культурой. Петлю стерилизуют, внося её в пламя горелки в вертикальном положении. После того как петля накалится докрасна, проводят конец петледержателя через пламя. После этого из пробирки вынимают пробку, удерживая её мизинцем правой руки. После обжигания на спиртовке края пробирки в неё вносят петлю, которую охлаждают, прикасаясь к стенкам пробирки. Затем петлей с поверхности среды снимают небольшое количество культуры. Не касаясь стенок пробирки, вынимают петлю и закрывают пробирку пробкой над спиртовкой. После этого пробирку с культурой помещают в штатив, а культуру на петле вносят в приготовленную заранее каплю физиологического раствора, хорошо размешивают и равномерно распределяют по стеклу в виде небольшого круга или овала 1-1,5 см в диаметре. По окончании приготовления мазка петлю вновь стерилизуют в пламени спиртовки.

Для приготовления мазка из бульонной культуры на предметное стекло наносят 1-2 петли исследуемого материала, стерилизуя петлю перед каждым погружением в бульонную культуру микроорганизма, как описано выше, и равномерно распределяют по стеклу (в этом случае не требуется предварительного нанесения на стекло физиологического раствора).

Высушивание мазка. Высушивание мазка производится на воздухе. Для ускорения высушивания предметное стекло с мазком, обращенным кверху, можно подержать в струе тёплого воздуха высоко над пламенем спиртовки, не внося препарат в пламя.

Фиксация мазка. Для этого используют физический и химический методы. Физический метод заключается в фиксации мазка над пламенем спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх (троекратно по 1 секунде). Эту операцию проводят достаточно быстро, стараясь не перегреть мазок, так как при перегревании могут произойти необратимые изменения в клетке. Химический метод фиксации является более мягким по сравнению с фиксацией на пламени. В качестве фиксаторов используют этанол, ацетон, смесь Никифорова (эквивалентное соотношение этанола и эфира), метанол, формалин. После фиксации мазок можно окрашивать.

Окраска мазка. Для окраски мазка следуют предписаниям для каждой методики окраски. При окраске простым способом на мазок наносят несколько капель раствора красителя так, чтобы весь мазок был покрыт им. Краситель оставляют на определённое время. Затем препарат промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой.

Правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы

Настроить освещение микроскопа, используя вогнутое зеркало и объектив х8. Первоначально освещение настраивают при боковом осмотре верхней линзы конденсора. После этого при наблюдении в окуляр, изменяя положение зеркала, настраивают равномерную освещённость поля зрения.

На приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами. Иммерсионное масло можно наносить только на сухой мазок.

При помощи револьверного устройства установить иммерсионный объектив с увеличением х90.

Осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла.

Установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта.

Провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь повреждение стекла или фронтальной линзы объектива (свободное расстояние иммерсионного объектива 0,1-1 мм).

По окончании работы с микроскопом необходимо вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьверное устройство на объектив с малым увеличением (х8).

Контрольные вопросы

Назовите самостоятельные научные дисциплины в микробиологии; основные разделы медицинской микробиологии, основные задачи медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии, основные методы, применяемые в медицинской микробиологии. Назовите отличительные признаки микроорганизмов как представителей царства прокариот. Какие размеры имеют бактерии? Какие различают основные формы бактерий? Как называются кокки, расположенные попарно, цепочкой, гроздьями? По четыре? Пакетами? Как называются палочки, образующие споры? Как называются извитые формы бактерий? Каким будет общее увеличение микроскопа: 1) окуляр х7, объектив х8; 2) окуляр х7, объектив х40;

3) окуляр х7, объектив х90? Каков предел разрешающей способности микроскопа с иммерсионным объективом? Какова роль иммерсионного масла? Каким свойством должно обладать иммерсионное масло для микроскопии? Нужно ли применять иммерсионное масло при микроскопии с объективом: х8, х40, х90? Этапы приготовления препарата-мазка. Для чего фиксируют мазки? Способы фиксации. Что такое простой способ окраски? Назовите красители, применяемые для простых способов окраски и их цвет.

Тёмнопольная микроскопия - на каком физическом принципе основана? Ход лучей света в микроскопе. Какие конденсоры применяются? Как выглядит поле зрения и изучаемые объекты, почему? Можно ли этим методом исследовать живые микробы? Как готовится препарат для исследования в тёмном поле? Фазово-контрастная микроскопия - принцип метода. Какие приборы и приспособления нужны для фазово-контрастной микроскопии? Преимущества данного метода.

Люминесцентная микроскопия - на каком физическом явлении основана? Виды люминесценций. Какой источник света используется? Как называются красители, применяемые для получения вторичной люминесценции? Можно ли исследовать этим методом живые микроорганизмы? Преимущества метода. Электронная микроскопия - что используется в электронном микроскопе вместо световых лучей? Чем объясняется высокая разрешающая способность электронного микроскопа: Какова длина световой волны; длина волны потока электронов? Чему равна предельная разрешающая способность любого микроскопа? Во сколько раз (примерно) больше разрешающая сила электронного микроскопа по сравнению со световым? Какой величины объекты можно увидеть в электронном микроскопе? Для чего применяется электронный микроскоп? Назовите методы микроскопии, позволяющие наблюдать живые микроорганизмы.

Работа студента на практическом занятии

1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.

2. Усвоение таксономического положения микробов. Начертите в тетради таблицу «Место микробов среди других живых существ».

3. Приготовление и окраска препаратов из бактериальных культур. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники приготовления и окраски препаратов. Приготовьте мазки-препараты из культур стафилококка и кишечной палочки; окрасьте простым способом - водным фуксином и метиленовым синим. Ознакомьтесь с наиболее употребительными красителями, применяемыми в микробиологической практике.

4. Микроскопирование и зарисовка окрашенных мазков-препаратов различных форм бактерий. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники микроскопии; самостоятельно промикроскопируйте и зарисуйте мазки-препараты различных форм бактерий: круглые (стафилококк, сарцина, стрептококк), палочковидные бактерии (стрептобацилла), извитые (вибрион).

5. Изучение методов тёмнопольной, фазово-контрастной и люминесцентной микроскопии. Повторите устно принципы микроскопии, ознакомьтесь с люминесцентной тёмнопольной и фазово-контрастной микроскопией.

Занятие 2. Сложные методы окраски

При микробиологической диагностике многих болезней приходится применять сложные методы окраски не только специалистам - микробиологам, но и лечащим врачам, в особенности в экстренных случаях. Для того чтобы правильно выбрать подходящий для каждого случая способ окраски и правильно оценить полученные результаты необходимо не только научиться окрашивать препараты, но и хорошо продумать и понять принципы сложных методов окраски. На практике наиболее часто применяют способы окраски по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы студент должен знать принцип и технику сложных методов окраски.

Исходный уровень знаний

Для усвоения материала темы необходимо вспомнить основные формы бактерий и этапы приготовления мазков-препаратов.

Цель занятия

1. Усвоить, что сложные методы окраски служат для дифференциации микробов между собой

2. Освоить метод окраски бактерий по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.

3. Найти различия в структуре и химическом составе грамположительных и грамотрицательных бактерий.

4. Ознакомиться с основными методами сложной окраски, применяемыми для выявления структурных элементов бактерий.

План изучения темы

1. Понятие о сложных методах окраски.

2. Принцип и техника окраски по Граму в модификации Синёва.

3. Принцип и техника окраски по Цилю-Нильсену.

4. Методы окраски: по Ожешко, по Бурри-Гинсу, по Нейссеру.

После изучения темы студент должен уметь

1. Готовить фиксированные препараты из культур микроорганизмов, растущих на плотных питательных средах.

2. Окрашивать препараты методами Грама (в модификации Синёва) и Циля-Нильсена.

3. Дифференцировать микроорганизмы по морфологическим, тинкториальным свойствам и интерпретировать полученные результаты.

Контрольные вопросы

Кто и когда впервые увидел и описал микроорганизмы? Назовите основные этапы развития микробиологии. Назовите фамилии учёных, с работами которых связано начало развития первых трёх этапов. Назовите фамилию первого микробиолога («охотника за микробами») в России. Назовите фамилию учёного, впервые разработавшего метод предохранительных прививок против оспы. Луи Пастер: назовите его основные открытия в области микробиологии; какой метод предложен им для предупреждения нагноений ран? Какие вакцины им получены? Роберт Кох: основные его открытия в области микробиологической техники и возбудителей болезни. И.И. Мечников: основные открытия в области иммунологии. Назовите фамилии выдающихся русских учёных-микробиологов и иммунологов: первооткрыватель вирусов; основатель первой в России школы микробиологов; учёный, впервые в России получивший пенициллин; иммунолог, автор вирусо-генетической теории происхождения злокачественных опухолей.

Для чего нужны сложные методы окраски? Назовите методы окраски, позволяющие: дифференцировать бактерии на две группы по структуре клеточной стенки; выявлять кислотоустойчивые микробы; выявлять споры; выявлять зёрна волютина; выявлять капсулы. Как производится окраска по Граму в модификации Синёва? Сущность окраски по Граму в модификации Синёва: в какой цвет окрашиваются грамположительные бактерии? Почему? В какой цвет окрашиваются грамотрицательные бактерии? Почему? От чего зависит различное отношение бактерий к окраске по Граму? Отношение бактерий к окраске по Граму в модификации Синёва: кокков, спорообразующих палочек, неспорообразующих палочек, извитых форм (перечислить исключения из правил). Техника окраски по Цилю-Нильсену. Принцип окраски: в какой цвет окрашиваются кислотоустойчивые бактерии, в какой - кислотоподатливые и почему? Какова основная особенность клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий?

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

Напишите в тетради этапы окраски по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.

Работа студента на практическом занятии

1. Освоение метода окраски по Граму в модификации Синёва. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники окраски по Граму. Поставьте опыт окраски по Граму.

Цель опыта: определить, имеет ли метод Грама преимущество перед простым методом и в чём оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение метода окраски по Граму.

Материал: стафилококки (грамположительные бактерии) и кишечные палочки (грамотрицательные бактерии).

Ход опыта: приготовить два одинаковых мазка из смеси стафилококков и кишечных палочек; окрасить один мазок водным фуксином, другой - по Граму в модификации Синёва. Микроскопировать.

Результат: два рисунка и описание их.

Вывод: (выводы содержат ответы на вопросы, поставленные в цели опыта).

Составьте схему окраски по Граму (поэтапно). Начертите таблицу «Отношение бактерий к окраске по Граму».

2. Освоение метода окраски по Цилю-Нильсену. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники окраски по Цилю-Нильсену. Поставьте опыт окраски по Цилю-Нильсену.

Цель опыта: определить, имеет ли метод Циля-Нильсена преимущества перед простым методом окраски и в чём оно состоит; в каких случаях целесообразно применение этого метода.

Материал: два одинаковых мазка из смеси туберкулёзной палочки (кислотоустойчивые бактерии) и кишечной палочки (кислотоподатливые бактерии).

Ход опыта: окрасить один мазок простым способом (метиленовым синим), другой - по Цилю-Нильсену. Микроскопировать.

Результат: два рисунка и описание их.

Вывод: (ответы, на вопросы, поставленные в цели опыта).

Изобразите принцип окраски по Цилю-Нильсену в виде схемы.

Занятие 3. Структура бактериальной клетки

Знание структуры бактериальной клетки важно для врача, так как особенности течения и эпидемиологии некоторых болезней связаны со структурой возбудителя. Например, наличие капсулы у чумного микроба и у возбудителя сибирской язвы способствует их быстрому распространению в организме; возбудитель ботулизма благодаря своей способности к спорообразованию не погибает при кипячении и поэтому сохраняется в пищевых продуктах. Кроме того, при идентификации, то есть при определении вида микроорганизма, обязательно исследуется его структура - наличие капсул, спор, жгутиков, включений. В некоторых случаях эти признаки приобретают большое значение для дифференциации сходных по многим свойствам, но разных видов бактерий. Например, отсутствие жгутиков для дифференциации дизентерийных палочек от брюшнотифозных, а также сибиреязвенных от сходных с ними непатогенных антракоидных палочек; наличие капсул для выявления пневмококов в мокроте, сибиреязвенных палочек в материале, взятом от больного; наличие включений (зёрен волютина) для дифтерийных бактерий.

Поэтому врачу любой специальности необходимо знать, какие бактерии имеют те или иные структурные элементы, какова биологическая роль этих элементов и как их можно выявить.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы студент должен знать структуру бактериальной клетки.

Исходный уровень знаний

Для усвоения материала темы необходимо вспомнить:

- принципы классификации микроорганизмов;

- основные размеры и формы бактерий;

- назначение сложных методов окраски.

Цель занятия

1. Отметить различия в строении и химическом составе прокариотов и эукариотов.

2. Усвоить, что сложные методы окраски служат для дифференциации микробов между собой.

3. Найти различия в структуре и химическом составе грамположительных и грамотрицательных бактерий.

4. Ознакомиться с основными методами сложной окраски, применяемыми для выявления структурных элементов бактерий.

План изучения темы

1. Постоянные структурные элементы бактериальной клетки.

2. Непостоянные структурные элементы бактериальной клетки.

3. Биологическая роль структурных элементов клетки.

4. Методы изучения структуры бактериальной клетки.

После изучения темы студент должен уметь

1. Выявлять структурные элементы бактериальной клетки.

2. Дифференцировать микроорганизмы в зависимости от наличия или отсутствия структурных элементов.

Контрольные вопросы

Укажите принципы систематики микроорганизмов. Что такое генетическая систематика? Последовательно (от низших к высшим) назовите основные таксономические единицы в систематике микроорганизмов. Дайте определения понятия: вид микроба, чистая культура, штамм, клон. Укажите основные признаки, по которым эукариоты отличаются от прокариотов. Укажите группы микроорганизмов, которые относятся к прокариотам, к эукариотам; назовите неклеточные формы. Как формируется название микроорганизма в соответствии с бинарной номенклатурой: что означает первое слово и как его пишут (с заглавной или строчной буквы); что означает второе слово и как его пишут? Какие термины применяются для обозначения отличий микроорганизмов в пределах одного вида? Какими терминами обозначаются отличия микроорганизмов в пределах одного вида по морфологическим признакам, по биологическим признакам, по антигенной структуре, по биохимической активности, по чувствительности к фагам, по свойствам патогенности, по биологическим свойствам? В каких единицах определяют размеры микроорганизмов и вирусов? Перечислите постоянные и непостоянные структурные элементы бактериальной клетки. Какие из структурных элементов зависят от условий существования бактерий? Клеточная стенка: её строение, биологическая роль. Какая основная химическая структура клеточной стенки характерна для всех бактерий? С помощью каких веществ можно разрушить клеточную стенку? Как называются бактерии, лишённые клеточной стенки полностью и частично? Что такое L-формы бактерий? Где располагается цитоплазматическая мембрана? Основные химические компоненты цитоплазматической мембраны, её строение. Биологическая роль - в каких процессах участвует? Нуклеоид бактерий - биологическая роль, химический состав; назовите отличия генома бактерий от генома эукариотов. Способы выявления нуклеоида бактерий. Внутриплазматические включения - биологическая роль. Какие патогенные бактерии имеют включения (название возбудителя и название вещества включений)? Способ окраски включений. Споры бактерий - биологическая роль. У каких морфологических форм бактерий споры встречаются чаще всего, очень редко, не встречаются? Процесс спорообразования: перечислите основные условия, способствующие образованию спор; время, необходимое для образования спор; может ли образоваться спора в кипящей воде? Какова устойчивость спор во внешней среде? Время, необходимое для превращения споры в вегетативную форму. Как могут располагаться споры в теле бактерий? Назовите виды бактерий с различным расположением спор. Латинские названия палочек, диаметр спор у которых меньше диаметра тела и больше диаметра тела. Перечислите спорообразующие палочки, которые вызывают заболевания у человека. Способы выявления спор. Капсула бактерий - постоянный или непостоянный структурный элемент? Биологическая роль капсулы у патогенных бактерий. Перечислите патогенные бактерии, образующие капсулу в организме. Перечислите капсульные бактерии. Способ выявления капсул в препарате. Жгутики бактерий - биологическая роль, химический состав. Как разделяются бактерии по числу и расположению жгутиков? Как можно увидеть жгутики бактерий? Как можно косвенным образом судить о наличии жгутиков у бактерий? Какими методами для этого пользуются (какие препараты готовят)? Можно ли без помощи микроскопа определить наличие жгутиков у бактерий? Ворсинки (пили, фимбрии) бактерий - где располагаются? Участвуют ли они в локомоторной функции? Название ворсинок первого типа, примерное их число у клетки, биологические функции. Название ворсинок второго типа, примерное число ворсинок у клетки, биологическая роль.

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

Напишите по-латыни названия видов патогенных микробов:

а) образующих споры;

б) образующих капсулу в организме, капсульных;

в) имеющих цитоплазматические включения.

Заполните таблицу «Структура бактериальной клетки».

Работа студента на практическом занятии

1. Изучение капсулы бактерий. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационный препарат из культуры Klebsiella pneumoniae, окрашенный по способу Бурри-Гинса; капсулы на рисунке укажите стрелкой.

2. Изучение спор бактерий. Промикроскопируйте и зарисуйте мазки из культуры бацилл (антракоидной палочки) и из культуры клостридий, окрашенные по способу Ожешко; споры на рисунке отметьте стрелкой.

3. Изучение включений бактерий. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационный мазок из культуры дифтерийной палочки, окрашенный по способу Нейссера; включения на рисунке отметьте стрелкой; объясните в дневнике причину окраски тела бактерий и включений в разные цвета.

4. Обнаружение наличия жгутиков у бактерий. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники приготовления и микроскопирования препаратов «раздавленной» и «висячей» капли; приготовьте и промикроскопируйте препараты «раздавленный» и «висячей» капли из культуры подвижных бактерий. Продемонстрируйте преподавателю технику их микроскопии. Посмотрите демонстрационные пробирки с полужидкой питательной средой, засеянные подвижными и неподвижными микробами; результаты зарисуйте и дайте объяснения в дневнике. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационные мазки из культуры монотрихов и перитрихов, укажите способ окраски и объясните, почему жгутики стали видны в световом микроскопе.

5. Изучение ультрамикроскопической структуры бактерий. Посмотрите таблицы и слайды с электронограммами бактерий.

Занятие 4. Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий

Среди перечисленных микробов имеются возбудители заболеваний, с которыми приходится сталкиваться врачу любой специальности: сифилис, лептоспироз, сыпной тиф, актиномикоз, грибковые поражения кожи и волос, кандидоз (нередко развивающийся как осложнение при лечении антибиотиками), микоплазменная пневмония, уретриты и многие другие. Врачу необходимо знать морфологию возбудителей, уметь определить их под микроскопом. Это не только необходимо для полноценной теоретической подготовки врача, но важно и в практическом отношении, так как с различиями в структуре микробов связаны и особенности течения болезни, их различия по чувствительности к антимикробным препаратам, от чего зависит выбор химиотерапевтического препарата для лечения. Так, например, к разным веществам чувствительны грибы и бактерии, микоплазмы и бактерии, актиномицеты и грибы, риккетсии и бактерии. Кроме того, необходимо знать названия основных патогенных представителей каждой группы микробов и уметь грамотно написать их латинские названия.

...