Микробиология и вирусология

4) устойчивость во внешней среде: отношение к температуре, высушиванию, длительность сохранения в воде, почве, воздухе, другие особенности;

5) ферментативные свойства: способность расщеплять углеводы, белки, наличие биоваров;

6) антигенные свойства: соматические (О-антигены), жгутиковые (Н), поверхностные антигены и их характеристика, деление на серовары;

7) свойства патогенности: ферменты патогенности, капсула, адгезины, экзо- и эндотоксины и др.

В дальнейшем при изучении отдельных групп возбудителей, нужно найти и выделить общие свойства для каждой группы, с тем чтобы при характеристике отдельных возбудителей добавить в эту общую схему особенности данного возбудителя. Например: все энтеробактерии, возбудители кишечных инфекций, являются палочками средних размеров, в мазке располагаются беспорядочно, перитрихи (за исключением шигелл), грамотрицательны, но отличаются по ферментативным и антигенным свойствам. Все возбудители клостридиальных анаэробных инфекций - крупные грамположительные палочки, спорообразующие, перитрихи (за исключением Clostridium perfringens), не образуют капсул (за исключением Clostridium perfringens), анаэробы. Они отличаются по расположению спор, морфологии глубинных колоний и, что наиболее важно, по антигенной структуре токсинов и их действию на организм. Составление таких схем, где обобщаются свойства целых групп возбудителей, облегчает усвоение их свойств и ускоряет процесс самоподготовки. Если вы усвоите эту общую схему, вам останется только прибавить к ней особенности, касающиеся возбудителей конкретных заболеваний. Следует отметить, что изложенные здесь рекомендации можно использовать при характеристике возбудителей бактериальных инфекций. Остальные группы микроорганизмов (грибы, риккетсии, вирусы, простейшие) имеют свои особенности, которые будут изложены в соответствующих разделах. Изучив характеристику возбудителя, приступайте к составлению схемы исследования с учётом всех необходимых направлений и методов исследования для постановки микробиологического диагноза. На практическом занятии вы получите материал от больного и направление из лечебного учреждения, где сообщаются сведения о больном и предполагаемый диагноз. Учитывая полученный материал и сведения из направления, составьте схему исследования этого конкретного материала и приступайте к её осуществлению. Данные из направления и характеристику материала перепишите в «Журнал микробиологических исследований», схема которого приведена ниже. Сюда же вы будете вносить все полученные по ходу исследования результаты по дням, так как в большинстве случаев исследование материала будет продолжаться в течение нескольких занятий. После завершения исследования обобщите и проанализируйте все полученные данные и в соответствующей графе сформулируйте окончательный результат. Если вы проводите исследование по сокращённой схеме - внесите дополнения в графу «Примечания». При необходимости попросите консультацию преподавателя.

Кроме характеристики возбудителя, схемы микробиологических исследований материалов от больных на практических занятиях будут обсуждаться вопросы эпидемиологии, лечения и специфической профилактики всех изучаемых инфекционных заболеваний. Это вам необходимо иметь в виду при самостоятельной подготовке к практическому занятию, а на самом занятии пересмотреть и охарактеризовать препараты для диагностики, лечения и профилактики обсуждаемых инфекционных заболеваний (химиотерапевтические препараты, антибиотики, диагностические сыворотки, вакцины, аллергены, лечебные и профилактические сыворотки и др.).

Вы овладеете так необходимым для врача материалом по частной микробиологии, если будете выполнять практическую работу сознательно, то есть предварительно подготовившись дома по всем имеющимся источникам (лекции, учебники и т.д.), не надеясь выучить всё в последний день перед итоговым занятием или экзаменом. Настоящие, прочные знания можно получить только при последовательном систематическом изучении материала, когда теоретическая подготовка подкрепляется практической работой на занятиях.

ЖЕЛАЕМ ВАМ УСПЕХОВ!

Раздел 5. Частная медицинская бактериология и микология

Темы практических занятий раздела «Частная медицинская бактериология и микология».

1. Общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

2. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов.

3. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, дизентерии, эшерихиозов. Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов.

4. Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.

5. Микробиологический диагноз холеры (окончание). Итог по разделу «Возбудители кишечных инфекций».

6. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками.

7. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками (продолжение), грамотрицательными палочковидными микроорганизмами и анаэробными микроорганизмами.

8. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии.

9. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, дифтерии (окончание). Микробиологическая диагностика коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза.

10. Итог по разделу «Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками, грамотрицательными палочковидными и анаэробными микроорганизмами. Микробиологическая диагностика дифтерии, коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза».

11. Микробиологический диагноз зоонозных инфекций - чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы.

12. Микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов.

13. Микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов.

Содержание компетенций и планируемый пороговый уровень развития компетенций в результате изучения раздела «Частная медицинская бактериология и микология».

№	Код компетенции	Содержание компетенции (или её части)	В результате изучения дисциплины обучающиеся должны:
			Знать	Уметь	Владеть
1.	ПК-11	Способность и готовность использовать методы оценки природных и медико-социальных факторов среды в развитии болезней у взрослого населения и подростков, осуществлять профилактические мероприятия по предупреждению инфекционных болезней	основные понятия и проблемы биосферы и экологии, феномен паразитизма и биоэкологические заболевания; функциональные системы организма человека, их регуляцию и саморегуляцию при воздействии с внешней средой в норме и патологии	работать с увеличительной техникой (микроскопами, оптическими и простыми лупами); проводить микробиологическую и иммунологическую диагностику	алгоритмом проведения профилактических мероприятий по предупреждению инфекционных болезней
2.	ПК-20	Способность и готовность осуществлять алгоритм выбора медикаментозной терапии больным с инфекционными заболеваниями	структурные и функциональные основы болезней и патологических процессов, причины, основные механизмы развития и исходов типовых патологических процессов, нарушений функций органов и систем	применять основные антибактериальные, противовирусные и биологические препараты; анализировать вопросы общей патологии и современные теоретические концепции и направления в медицине	принципы патогенетической терапии больных инфекционными заболеваниями
3.	ПК-31	Способность и готовность изучать научно-медицинскую информацию, отечественный и зарубежный опыт по тематике исследования	методы сбора, хранения и обработки научно-медицинской информации	производить расчёты по результатам эксперимента, проводить элементарную статистическую обработку экспериментальных данных, анализировать отчёты	базовыми технологиями преобразования информации: текстовые, табличные редакторы, поиск в сети Интернет

Занятие 19. Общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов

Кишечные инфекции занимают важное место в инфекционной патологии человека. Возбудители кишечных инфекций относятся к семействам энтеробактерий, иерсиний и вибрионов. Среди них есть патогенные и условно-патогенные представители. В семействе энтеробактерий важнейшими представителями являются бактерии из родов Escherichia, Salmonella и Shigella (патогенные виды). В последние годы в этиологии кишечных инфекций увеличивается роль условно-патогенных бактерий других родов энтеробактерий. Основным методом микробиологической диагностики кишечных инфекций является бактериологический метод. Выделение чистой культуры и идентификация возбудителя позволяет наиболее достоверно диагностировать кишечные инфекции, так как клиническое течение кишечных заболеваний не всегда позволяет поставить правильный диагноз.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы вы должны знать виды возбудителей кишечных инфекций, общую характеристику энтеробактерий. морфологию и физиологию возбудителей брюшного тифа и паратифов; уметь написать их название по-латыни, знать принципы микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов.

Исходный уровень знаний

Из курса общей микробиологии вспомнить методы изучения ферментативной активности бактерий и их значение для идентификации микроорганизмов, состав и назначение дифференциально-диагностических и элективных сред, методику постановки иммунологических реакций.

Цель занятия

1. Ознакомить студентов с классификацией бактерий семейства Enterobacteriaceae и выработать у них представление о роли этих бактерий в возникновении острых кишечных инфекций.

2. Усвоить диагностику брюшного тифа и паратифов, брюшнотифозного бактерионосительства у человека.

План изучения темы

1. Цели и задачи клинической микробиологии, применяемые методы исследования.

2. Правила забора и транспортировки материалов для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний.

3. Общая характеристика бактерий кишечной группы.

4. Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов.

5. Патогенез брюшного тифа.

6. Ранняя диагностика брюшного тифа.

7. Серологическая диагностика.

8. Диагностика брюшнотифозного носительства.

После изучения темы студент должен уметь

1. Поставить реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации для диагностики брюшного тифа и паратифов, учесть её результат и интерпретировать полученные данные.

2. Производить посев для выделения гемокультуры.

3. Производить посев испражнений для выявления брюшнотифозного бактерионосительства

Контрольные вопросы

Предмет и задачи частной (клинической) микробиологии. Характеристика методов исследования. Правила забора материалов для исследования от больных и бактерионосителей. Правила транспортировки материалов в лабораторию. Классификация семейства энтеробактерий. Общая характеристика бактерий кишечной группы. Эволюционные связи бактерий кишечной группы. Требовательность к питательным средам. Дифференциально-диагностические среды, применяемые для исследования при кишечных инфекциях: состав, назначение, характер изменений при росте различных представителей. Какие из бактерий кишечной группы подвижны и неподвижны? Род Salmonella: характеристика, классификация. Написать по-латыни названия возбудителей брюшного тифа и паратифов. Морфология, отношение к окраске по Граму, факторы патогенности возбудителей брюшного тифа и паратифов. По какому свойству отличаются возбудители брюшного тифа и паратифов от кишечной палочки при росте на средах Эндо, Плоскирева, Левина? Патогенез брюшного тифа. Обосновать методы диагностики брюшного тифа и паратифов в разные сроки заболевания. Методы ранней диагностики брюшного тифа. Что такое гемокультура? Методика выделения гемокультуры: материал для исследования, откуда его берут и в каком количестве. На какие среды производится посев, какой должен быть объём питательной среды? Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов: материал для исследования, что требуется обнаружить в этом материале. Методика постановки реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА). Какие антигены нужно взять и почему? Что представляют собой эритроцитарные диагностикумы? В какие сроки заболевания РНГА со специфическими антигенами становится положительной? Как оцениваются результаты РНГА? Перечислите методы исследования на брюшнотифозное бактерионосительство. Когда необходимо производить эти исследования? Что такое копрокультура? Что такое уринокультура?

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

Написать по-латыни названия родов семейства кишечных бактерий и названия возбудителей брюшного тифа и паратифов.

Работа студента на практическом занятии

1. Постановка реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации.

Цель: определить наличие антител и их титр к антигенам возбудителей брюшного тифа и паратифов. Каждый студент ставит реакцию с одним из 2-х диагностикумов - брюшного тифа и паратифа В. В лунках пластмассовых планшетов приготовьте последовательные двукратные разведения сыворотки больного (исходное разведение 1:50) от 1:100 до 1:1600 в объёме 0,5 мл. В последнюю (контрольную) лунку сыворотка не вносится. Затем в каждую лунку (включая контрольную) добавьте по 0,25 мл соответствующего эритроцитарного диагностикума. Планшеты поставьте в термостат на 2 часа. Сопроводительную записку перепишите в журнал. Через 2 часа проведите учёт результатов. Посмотрите планшеты РНГА, определите титр антител с каждым из диагностикумов и сделайте вывод: с каким из диагностикумов РНГА идёт до диагностического титра. Результат запишите в виде таблицы:

Пробирки	1	2	3	4	5	6	7	8	Контроль
Разведения сыворотки	1:10	1: 20	1: 40	1:80	1: 160	1: 320	1: 540	1: 1280
Диагностикум: брюшнотифозный
паратифозный В
Результат реакции

Положительный результат обозначьте знаком «+», отрицательный «-». В графе «Результат» укажите: с каким диагностикумом и до какого титра оказалась положительной РНГА.

2. Изучение морфологии возбудителей брюшного тифа и паратифов. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенные по Граму препараты из чистых культур возбудителей брюшного тифа и паратифов. Рисунки подпишите по-латыни.

3. Изучение ферментативных свойств возбудителей брюшного тифа и паратифов. Посмотрите таблицу «Ферментативные свойства бактерий кишечной группы» и демонстрационные «цветные» ряды. Найдите различия ферментативных свойств у разных видов и опишите их в дневнике.

4. Усвоение методов микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов. Разобрать устно, а затем написать в дневнике схему микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов в зависимости от сроков заболевания.

5. Ранняя диагностика. Посеять кровь больного на гемокультуру. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите её в журнал. Сделайте посев 10 мл крови из шприца во флакон со 100 мл среды Раппопорт с соблюдением правил асептики. Флакон с посевом поместите в термостат.

В графе «Ход исследования» отметьте 1-й день и опишите проделанную работу.

6. Для исследования на бактерионосительство посеять испражнения обследуемого на копрокультуру. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и перепишите её в журнал. Произведите посев испражнений на чашку со средой Левина петлёй штрихами для получения изолированных колоний. Чашки поставьте в термостат. Запишите проделанную работу в графе «Ход исследования».

Занятие 20. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов

Вы продолжаете изучение возбудителей семейства энтеробактерий. У представителей этого семейства есть общие свойства, и в то же время каждый вид возбудителя обладает особенными признаками, отличающими его от остальных. Точно так же микробиологическая диагностика вызываемых ими заболеваний и, в частности, ход исследования по дням во многом сходны, но имеют свои особенности. Поэтому рекомендуется учить материал не фрагментно, по «кусочкам», а каждый раз предварительно посмотреть и повторить пройденное. Тогда у вас сложится представление о всей группе возбудителей и вызываемых ими заболеваниях в целом и вы лучше и быстрее освоите особенности каждого возбудителя, не смешивая его с другими.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы Вы должны знать: латинские названия и характеристику возбудителей бактериальной дизентерии, эшерихиозов: классификацию последних по категориям, микробиологическую диагностику этих заболеваний, ответить на все контрольные вопросы.

Исходный уровень знаний

Антигенная структура бактериальных клеток, характеристика бактериальных антигенов, материал предыдущего занятия.

Цель занятия

1. Усвоить диагностику брюшного тифа и паратифов, брюшнотифозного бактерионосительства у человека.

2. Усвоить диагностику бактериальной дизентерии у человека.

План изучения темы

1. Ход исследования на гемокультуру (2-й день), копрокультуру

(2-й день).

2. Антигенная структура и классификация сальмонелл.

3. Характеристика и классификация шигелл.

4. Патогенез бактериальной дизентерии, материал для исследования, начало исследования.

Изучите новый материал по учебнику и конспекту лекций, начиная с общей характеристики энтеробактерий, а затем по руководству. Обратите внимание на таблицы ферментативной активности сальмонелл и шигелл, выделите особенности отдельных видов. Поскольку в основу видовой идентификации сальмонелл положена их антигенная структура, нужно запомнить антигены сальмонелл и последовательность их определения. Прочитайте в журнале записи предыдущего занятия и материал предстоящего занятия по пособию. Ответьте на контрольные вопросы, решите задачи.

После изучения темы студент должен уметь

1. Учесть и оценить результаты посева крови на среде Раппопорт или желчном бульоне.

2. Учесть и оценить результаты посева испражнений на среде Левина. Изучить морфо-тинкториальные свойства и проверить чистоту выделенной копрокультуры при диагностике брюшнотифозного бактерионосительства.

3. Учесть и оценить результаты РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом для диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.

4. Производить посев испражнений для выделения возбудителей бактериальной дизентерии.

5. Производить посев испражнений для выделения возбудителей кишечной коли-инфекции.

Контрольные вопросы

Антигенная структура сальмонелл, локализация антигенов в бактериальной клетке. Классификация сальмонелл по антигенной структуре (схема Кауфмана-Уайта). Какие антигены являются родоспецифическими и какие являются видоспецифическими? Состав и применение желчного бульона и среды Раппопорт. Чем отличается на среде Раппопорт рост брюшнотифозной палочки от паратифозных? Среды Гисса, селенитовые среды, их состав и применение. Состав среды Олькеницкого, методика посева на среду и оценка результатов посева. Методы исследования на брюшнотифозное бактерионосительство. Схема исследования (по дням) при выделении копрокультуры. Принцип и методика постановки реакции Vi-гемагглютинации. Методика взятия материала, схема исследования для выделения возбудителей из дуоденального содержимого, мочи. Характеристика микроорганизмов рода Shigella. Перечислить названия видов (по-латыни). Классификация шигелл. Антигенная структура и токсинообразование у шигелл. Питательные среды для выделения чистой культуры шигелл. Характеристика иммунитета при бактериальной дизентерии. С какой целью материал от больного дизентерией помещают в консервант?

ЗАДАЧА 1. Через 3 месяца после выздоровления от брюшного тифа реконвалесцента пригласили в инфекционный кабинет для исследования на бактерионосительство. Какие материалы нужно взять и какие методы исследования применить?

ЗАДАЧА 2. Какие будут результаты реакции Vi-гемагглютинации (положительные или отрицательные) через 3 месяца: после выздоровления от брюшного тифа с полным освобождением от возбудителей брюшного тифа; после прививки брюшнотифозной вакциной; у носителя брюшнотифозных палочек?

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

Напишите по-латыни названия видов шигелл, классификацию шигелл и возбудителей эшерихиозов.

Работа студента на практическом занятии

1. Продолжение исследования на гемокультуру. Отметьте изменения на среде Раппопорт: наличие роста, кислото- и газообразование. Приготовьте мазок со среды Раппопорт, окрасьте по Граму, промикроскопируйте. Сделайте пересев на чашку Петри со средой Эндо. Запишите в журнал изменения на среде Раппопорт, результаты микроскопии мазка и выполненную работу.

2. Продолжение исследования на копрокультуру. Изучите колонии, выросшие на среде Левина. Отберите подозрительную (бесцветную) колонию, приготовьте из неё мазок, окрасьте по Граму, промикроскопируйте. Остаток этой же колонии посейте на среду Олькеницкого. Наблюдения и проделанную работу запишите в журнал.

3. Изучение методов диагностики брюшнотифозного бактерионосительства. Запишите в тетради методы. Учтите результат демонстрационной реакции непрямой Vi-гемагглютинации. Ознакомьтесь с образцами эритроцитарных диагностикумов.

4. Изучение морфологии и ферментативных свойств возбудителей дизентерии. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенные по Граму мазки из чистых культур шигелл Флекснера и Зонне. Ознакомьтесь с ферментативными свойствами шигелл по «пестрым» рядам и таблицам.

5. Начало исследования испражнений больного бактериальной дизентерией. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите данные в журнал. Произведите посев испражнений на чашку Петри со средой Плоскирева. Запишите в журнал проделанную работу.

6. Начало исследования испражнений больного на кишечную коли-инфекцию. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите данные в журнал. Произведите посев испражнений на среду Эндо. Запишите в журнал проделанную работу.

Занятие 21. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, дизентерии, эшерихиозов. Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов

На данном занятии вам предстоит продолжить начатые ранее исследования и потребуется более чёткое знание методики исследований на данном этапе, а также знание признаков, на основании которых делаются заключения о видовой принадлежности бактерий. Кроме того, вам предстоит усвоить характеристику и микробиологическую диагностику пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов). Эти заболевания связаны с употреблением в пищу продуктов, в которых в результате размножения накопились живые возбудители и эндотоксины. Также на данном занятии вы изучите характеристику и особенности микробиологической диагностики внутрибольничных сальмонеллёзов.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы Вы должны усвоить заключительную часть исследований на брюшной тиф, паратифы и бактериальную дизентерию, а также условия, способствующие возникновению пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов, первые этапы микробиологической диагностики этих заболеваний и характеристику возбудителей.

Исходный уровень знаний

Материал предыдущих занятий по кишечной группе.

Цель занятия

1. Усвоить диагностику пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии у человека.

2. Усвоить диагностику кишечной коли-инфекции у человека.

План изучения темы

1. Идентификация выделенных возбудителей брюшного тифа и паратифов, бактериальной дизентерии, кишечной коли-инфекции.

2. Характеристика возбудителей пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов.

3. Механизм возникновения пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии.

После изучения темы студент должен уметь

1. Учесть и оценить результаты посева гемокультуры на среде Эндо.

2. Провести идентификацию исследуемой копрокультуры при диагностике брюшнотифозного бактерионосительства с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.

3. Провести идентификацию исследуемой копрокультуры при диагностике бактериальной дизентерии с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.

Дополнительный материал к занятию

Идентификация культур сальмонелл при помощи монорецепторных агглютинирующих сывороток

После изучения морфологии и ферментативной активности культуры, выделенной от больного, для окончательной идентификации необходимо изучение её антигенных свойств путём постановки реакции агглютинации с монорецепторными сальмонеллёзными сыворотками. Монорецепторной агглютинирующей сывороткой называется сыворотка, содержащая антитело (рецептор) по отношению к одному антигену. О-сыворотка, рецептор «4» содержит антитело к соматическому антигену сальмонелл 4; H-сыворотка «в» содержит антитело к жгутиковому антигену «в» (см. схему Кауфмана-Уайта). Для идентификации культуры сначала ставят реакцию агглютинации на стекле со смесью нескольких О-сывороток и при положительном результате агглютинации устанавливают принадлежность культуры к роду сальмонелл. После этого ставят реакцию агглютинации отдельно с каждой О-сывороткой, входившей в смесь, чтобы установить серологическую группу. Определив групповую принадлежность культуры, ставят реакцию агглютинации с видовыми Н-сыворотками и, таким образом, определяют вид выделенной культуры сальмонелл.

Контрольные вопросы

Как используется реакция агглютинации для определения вида микроба? Что такое монорецепторные сыворотки и как их получают? Как производится идентификация сальмонелл по антигенной структуре с помощью монорецепторных сывороток? Как и с какой целью проводят фаготипирование брюшнотифозных палочек? Характеристика Vi-антигена брюшнотифозных палочек. Дать определение понятий «пищевая токсикоинфекция» и «пищевая интоксикация». Перечислите виды сальмонелл, которые чаще всего являются причиной пищевых токсикоинфекций - сальмонеллёзных гастроэнтеритов. Условия, определяющие возможность возникновения пищевых токсикоинфекций. Схема микробиологического исследования при пищевой токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии: материалы для исследования, питательные среды, идентификация возбудителя, серологические исследования. Какие виды сальмонелл вызывают внутрибольничные инфекции? Какими свойствами обладают внутрибольничные штаммы сальмонелл? Особенности диагностики внутрибольничных сальмонеллёзов. Схемы исследования испражнений на обнаружение возбудителей бактериальной дизентерии. Принцип антигенной классификации кишечных палочек, антигены и их расположение в клетке. Категории диареегенных кишечных палочек. Характеристика представителей разных категорий. Серотипы кишечных палочек, наиболее часто вызывающие коли-инфекцию. Схема исследований на возбудителей коли-инфекции. Описать результаты по дням при выделении возбудителей коли-инфекции.

Работа студента на практическом занятии

1. Продолжение исследования на гемокультуру. Отберите изолированную лактозоотрицательную колонию на среде Эндо и пересейте её на среду Олькеницкого (демонстрация). Запишите в журнал проделанную работу.

2. Продолжение исследования на копрокультуру. Учтите результат посева на среду Олькеницкого: сбраживание лактозы, глюкозы, газообразование, сероводород. Поставьте реакцию агглютинации на стекле выросшей культуры с монорецепторными сыворотками. Сформулируйте ответ. Опишите результаты проделанной работы в графе «Ход исследования», а окончательный ответ - в графе «Результат». Изучите демонстрационный набор агглютинирующих сывороток.

3. По таблицам разберите схему исследования при пищевой токсикоинфекции сальмонеллёзной этиологии.

4. Продолжение исследования на бактериальную дизентерию. Изучите колонии, выросшие на среде Плоскирева, отберите изолированную лактозонегативную колонию и проведите реакцию агглютинации на стекле с сыворотками Флекснер и Зонне. Запишите в журнал проделанную работу, а в графе «Результат» - предварительный результат, в графе «Примечания» - что необходимо сделать для получения окончательного ответа.

5. Продолжение исследования на коли-инфекцию. Изучите колонии, выросшие на среде Эндо. Отберите изолированные лактозоположительные колонии, поставьте реакцию агглютинации на стекле с комплексной сывороткой материала из нескольких колоний до положительного результата (до 10 колоний). Колонию, давшую положительный результат, пересейте на скошенный агар. Запишите в журнал проделанную работу. Изучите демонстрационные препараты агглютинирующих сывороток для диагностики коли-инфекции.

5. Изучите ферментативные свойства энтеробактерий по демонстрационным микротест-системам для биохимической идентификации энтеробактерий.

Занятие 22. Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции

На предстоящем занятии вы закончите изучение микробиологической диагностики кишечных инфекций и после этого должны будете чётко представлять ход исследования (по дням) при каждой из этих инфекций. Следует ещё раз подчеркнуть, что для практического врача особенно важно знать методику забора материала для микробиологического исследования и биологические препараты для диагностики, профилактики и лечения инфекций. Поэтому на предстоящем занятии внимательно отнеситесь к изучению биологических препаратов, применяемых при кишечных инфекциях.

Но всё же, главная цель занятия - возбудители холеры - особо опасного инфекционного заболевания, которое может принимать характер обширных вспышек. Какую бы специальность вы себе не избрали, вы должны хорошо знать это заболевание, правила забора и пересылки материала для исследования, чтобы не пропустить первого случая, когда к вам обратится больной с соответствующими симптомами.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы Вы должны усвоить ход микробиологического исследования при кишечных инфекциях, знать биологические препараты для профилактики, диагностики и терапии кишечных инфекций, знать характеристику патогенных вибрионов, микробиологическую диагностику холеры и ответы на контрольные вопросы.

Исходный уровень знаний

Материалы предыдущих занятий. Из раздела «Морфология бактерий» - характеристика извитых форм микроорганизмов.

Цель занятия

1. Усвоить диагностику холеры.

2. Усвоить диагностику заболеваний, вызываемых парагемолитическими вибрионами.

3. Усвоить диагностику кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.

4. Изучить биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.

План изучения темы

1. Окончание микробиологической диагностики брюшного тифа, кишечной коли-инфекции. Обобщение результатов исследований, формулировка ответов.

2. Изучение биологических препаратов для диагностики специфической профилактики и терапии кишечных инфекций.

3. Характеристика патогенных вибрионов (холерных, парагемолитических), кампилобактеров, хеликобактеров.

4. Правила забора и транспортировки материалов для диагностики холеры. Первый день исследования на холеру.

5. Характеристика парагемолитических вибрионов, кампилобактеров и хеликобактеров. Схемы исследований заболеваний, вызываемых галофильными вибрионами, кампилобактерами и хеликобактерами.

Повторите схемы исследований по дням для диагностики кишечных инфекций, диагностику которых вы заканчиваете. Прочитайте материалы по биологическим препаратам. Повторите классификацию патогенных вибрионов, особенности микробиологической диагностики кампилобактериозов, хеликобактерной инфекции, особенности работы с материалом от больных холерой, правила взятия и доставки материалов для исследования на холеру.

После изучения темы студент должен уметь

1. Провести идентификацию исследуемой гемокультуры с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.

2. Провести идентификацию исследуемой копрокультуры при диагностике кишечной коли-инфекции с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.

3. Проводить исследования для выделения возбудителей холеры.

4. Выбирать биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.

Дополнительный материал к занятию

Порядок взятия и доставки материала для исследования на холеру

Взятие материала для диагностического исследования необходимо производить до начала лечения антибиотиками. Предпочтительнее забор нативного материала, однако при отсутствии такой возможности следует пользоваться средами-консервантами.

1. Пробы нативного материала (испражнения и рвотные массы) собирают в индивидуальное отмытое от дезинфицирующего раствора судно, на дно которого помещают меньший по размерам сосуд, удобный для обеззараживания, кипячения, или листы пергаментной бумаги, целлофана и др. Выделения в объёме 10-20 мл при помощи стерильных металлических картонных или деревянных ложек переносят в стерильную широкогорлую банку, плотно закрывают её стеклянной пробкой или корковой пробкой с пергаментной бумагой. При отсутствии банки образцы можно помещать в стерильные пробирки. В этом случае для переноса материала используют стерильные трубочки. Трубочку захватывают корнцангом, зачерпывают ею выделения, помещают в пробирку, которую затем закрывают непромокаемой пробкой.

2. В ряде случаев (у реконвалесцентов) исследуют желчь, полученную при дуоденальном зондировании.

3. От трупов лиц, умерших от заболевания, похожего на холеру, берут фрагменты верхней, нижней и средней частей тонкого кишечника длиной около 10 см. Фрагменты выделяют между двумя лигатурами, наложенными на оба конца изымаемого участка кишечника. Желчный пузырь извлекают целиком после перевязки протока.

При исследовании реконвалесцентов и здоровых лиц им предварительно дают слабительное (25-30 г сернокислой магнезии), чтобы собрать жидкие испражнения из верхней части кишечника. Пробы помещают в 1% пептонную воду. При массовом исследовании на носительство вибриона можно использовать метод группового посева, когда в один посев объединяют пробы от 5-10 человек. При положительном результате пробу проводят с каждым из обследованных.

Консерванты: 1% щелочная пептонная вода с рН 9,1, пептонная вода с теллуритом калия и др.

Исследованию подвергаются также пищевые продукты, почва, вода, смывы с различных объектов, мухи, бельё, загрязнённое выделениями больного, обитатели рек (рыбы, земноводные, раки и т.д.). Материал помещают в ведро и упаковывают в деревянный ящик. Ящик обвязывают, пломбируют и пересылают с нарочным.

Контрольные вопросы

Современная классификация патогенных вибрионов, заболевания, которые они вызывают. Характеристика холерных вибрионов: морфология, культуральные свойства, тинкториальные свойства, ферментативная активность, устойчивость во внешней среде. Антигенная структура, серологические типы, токсинообразование. Биохимические группы по Хайбергу. Неагглютинирующиеся вибрионы (НАГи). Возможные материалы для исследования на холеру. Правила забора и транспортировки материала при подозрении на холеру. Режим работы с материалом от больных и носителей холерных вибрионов. Ход исследования при диагностике холеры (по часам и дням). Ускоренная диагностика холеры. Исследование воды на наличие холерного вибриона. Дифференцировка между «классическим» вибрионом и вибрионом Эль-Тор. Препараты для диагностики, лечения (в том числе солевые растворы) и специфической профилактики холеры. Кампилобактеры: классификация (основные виды), морфология, отношение к окраске по Граму, особенности биологического окисления и культивирования. Источники инфекции. Заболевания, вызываемые кампилобактерами. Особенности забора и пересылки материалов от больных. Схема исследования для диагностики кампилобактериоза. Helicobacter pylori: морфология, культуральные свойства, роль в этиологии гастрита и язвенной болезни. Препараты для лечения. Характеристика парагемолитических вибрионов: виды, морфология, физиология, постоянное место обитания, условия заражения, отношение к высоким концентрациям хлористого натрия. Заболевания, вызываемые парагемолитическими вибрионами.

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

Напишите по-латыни названия возбудителей холеры, названия галофильных вибрионов, кампилобактеров (основные виды) и хеликобактеров.

Работа студента на практическом занятии

1. Окончание исследования на гемокультуру (4-й день, демонстрация). Учтите результаты на среде Олькеницкого. Поставьте реакцию агглютинации на стекле с монорецепторными сальмонеллёзными сыворотками, сформулируйте ответ. Устно перечислите признаки, по которым вы даете ответ. Запишите проделанную работу и результат в журнал.

2. Окончание исследования на коли-инфекцию (3-й день). Повторите устно ход исследования, поставьте реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры с типоспецифическими ОВ-коли сыворотками. Учтите результат демонстрационной реакции агглютинации с живой и убитой кипячением культурой. Сформулируйте результат исследования, сделайте записи в журнале.

3. Изучение морфологии и ферментативных свойств холерного вибриона. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенный по Граму мазок из чистой культуры холерного вибриона. Изучите ферментативные свойства холерного вибриона по демонстрационным посевам, запишите в дневник.

4. Начало исследования испражнений на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в журнал. Изготовьте мазок из испражнений, окрасьте водным фуксином, промикроскопируйте. Посейте испражнения в пробирку с 1% пептонной водой и на чашку Петри со щелочным агаром. Запишите в журнал проделанную работу.

5. Начало исследования воды на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в журнал. Произведите посев воды: к 450 мл исследуемой воды стерильно добавьте 50 мл 10% щелочного раствора пептона; запишите проделанную работу в журнал.

6. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок кампилобактера.

7. Разбор схемы микробиологической диагностики разных форм кампилобактериоза и хеликобактерной инфекции.

8. Изучение препаратов для диагностики, специфической профилактики и терапии кишечных инфекций. Просмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте препарат: что представляет собой (сыворотка диагностическая или лечебная, диагностикум, аллерген, вакцина), как приготовлен, что содержит (антиген, антитела), для чего применяется; если препарат диагностический - что выявляется с его помощью, если препарат лечебно-профилактический - какое действие оказывает на организм; дозируется ли препарат и в каких единицах.

Занятие 23. Микробиологический диагноз холеры (окончание) итог по разделу «возбудители кишечных инфекций»

На предстоящем занятии будет дана оценка Вашим знаниям по одному из основных разделов клинической микробиологии - по кишечным инфекциям. Само собой понятно, насколько важно для Вас ещё раз повторить и продумать материал этого раздела.

План изучения темы

Повторите каждую тему, то есть:

а) возбудители брюшного тифа, паратифов, сальмонеллёзов;

б) возбудители бактериальной дизентерии;

в) возбудители кишечной коли-инфекции;

г) возбудители холеры, кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.

Последовательно повторите материал по учебнику, по конспекту лекций, по «Руководству», по пособию, по своим записям в дневнике и в журнале. Ответьте на контрольные вопросы ко всем занятиям по разделу. Посмотрите биологические препараты, поупражняйтесь в разборе их.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения материала вы должны быть готовы ответить на все вопросы и выполнить практическую задачу.

Исходный уровень знаний

Материал предыдущих занятий.

Цель занятия

Систематизировать знания по возбудителям кишечных инфекций.

Продемонстрировать владение умениями, полученными при изучении возбудителей кишечных инфекций.

После изучения раздела студент должен уметь

1. Проводить исследования для диагностики брюшного тифа и паратифов.

2. Проводить исследования для диагностики бактериальной дизентерии.

3. Проводить исследования для диагностики кишечной коли-инфекции.

4. Проводить исследования для диагностики возбудителей холеры.

5. Выбирать биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.

Контрольные практические

задания по разделу «возбудители кишечных инфекций»

Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Эндо, и укажите последовательность дальнейшего исследования.

Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Плоскирева, и укажите последовательность дальнейшего исследования.

Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Левина, и укажите последовательность дальнейшего исследования.

Оцените результаты исследования ферментативной активности бактерий на среде Олькеницкого и укажите последовательность дальнейшего исследования.

Идентифицируйте культуру микроорганизмов по результатам определения биохимической активности на средах Гиса.

Дайте характеристику биологическим препаратам для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.

Контрольные вопросы по разделу (расшифровку вопросов смотрите в соответствующих занятиях (19-22))

Клиническая микробиология - определение понятия, цели и задач. Материалы для лабораторного исследования: чем определяется выбор материала; правила забора и транспортировки. Характеристика методов, применяемых в клинической микробиологии. Классификация семейства энтеробактерий. Общая характеристика бактерий кишечной группы. Род Salmonella: характеристика, классификация. Возбудители брюшного тифа и паратифов: характеристика, методы диагностики брюшного тифа и паратифов в разные сроки заболевания. Методы исследования на брюшнотифозное бактерионосительство. Определение понятий «пищевая токсикоинфекция» и «пищевая интоксикация». Виды сальмонелл, которые чаще всего являются причиной пищевых токсикоинфекций - сальмонеллёзных гастроэнтеритов. Схема микробиологического исследования при пищевой токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии. Виды сальмонелл, вызывающих внутрибольничные инфекции. Свойства внутрибольничных штаммов сальмонелл. Особенности диагностики внутрибольничных сальмонеллёзов. Характеристика микроорганизмов рода Shigella. Характеристика иммунитета при бактериальной дизентерии. Схемы исследования испражнений на обнаружение возбудителей бактериальной дизентерии. Характеристика кишечных палочек. Категории диареегенных кишечных палочек, характеристика представителей разных категорий. Схема исследований на возбудителей коли-инфекции. Современная классификация патогенных вибрионов; заболевания, которые они вызывают. Характеристика холерных вибрионов. Возможные материалы для исследования на холеру, правила забора и транспортировки материала при подозрении на холеру. Режим работы с материалом от больных и носителей холерных вибрионов. Ход исследования при диагностике холеры. Препараты для диагностики, лечения (в том числе солевые растворы) и специфической профилактики холеры. Характеристика кампилобактерий и вызываемых ими заболеваний. Схема исследования для диагностики кампилобактериоза. Helicobacter pylori: характеристика, роль в этиологии гастрита и язвенной болезни. Характеристика парагемолитических вибрионов. Заболевания, вызываемые парагемолитическими вибрионами.

Работа студента на практическом занятии

1. Окончание исследования испражнений на холерный вибрион. Повторите устно ход исследования. Изучите посевы на щелочной пептонной воде и на щелочном агаре, отметьте характер роста, приготовьте мазок, окрасьте водным фуксином, промикроскопируйте. Приготовьте «висячую» каплю и изучите подвижность культуры. Из колоний на щелочном агаре поставьте реакцию агглютинации с сыворотками: холерная «О», «Инаба», «Огава». По демонстрационным посевам зарегистрируйте результаты проб на чувствительность культуры и полимиксину, к бактериофагам «С» и «Эль-Тор». Все наблюдения запишите в графе «Ход исследования». Сформулируйте ответ, устно обоснуйте его, то есть перечислите признаки, на основании которых даётся ответ. Запишите предварительный ответ в графу «Результат».

2. Окончание исследования воды на холерный вибрион. Повторите устно ход исследования. Учтите результат посева воды и запишите в журнал.

Итог по разделу «Возбудители кишечных инфекций».

Занятие 24. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками

Заболевания, вызываемые гноеродными кокками, относятся к числу наиболее распространённых. После начала применения антибиотиков, в связи с развитием лекарственной устойчивости и формированием госпитальных штаммов значительно увеличилась частота стафилококковых заболеваний, клиническое течение их стало более тяжёлым, нередко со смертельным исходом. В настоящее время с заболеваниями стафилококковой этиологии приходится встречаться врачам различных специальностей, но особенно часто хирургам, акушерам-гинекологам, педиатрам и терапевтам. Другие представители гноеродных кокков (стрептококки, пневмококки) могут вызвать нагноительные процессы различной локализации и специфические инфекционные процессы (гонококки, менингококки). В большинстве случаев заболевания, вызываемые гноеродными кокками, развиваются остро, и поэтому очень важна их своевременная микробиологическая диагностика. Кроме того, выделение чистой культуры возбудителя и определение его лекарственной устойчивости поможет лечащему врачу в выборе лекарственного препарата для успешного лечения.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы Вы должны знать общую характеристику гноеродных кокков и их отдельных видов, морфологию, культуральные свойства, токсинообразование, факторы патогенности, усвоить принципы забора материала от больных и схемы микробиологической диагностики.

Исходный уровень знаний

Для усвоения материала темы необходимо знать вопросы из курса общей микробиологии: основные формы бактерий, питательные среды (специальные, элективные), факторы патогенности микроорганизмов, методику определения чувствительности к антибиотикам.

Цель занятия

1. Ознакомиться с возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний: стафилококками, стрептококками, гонококками, менингококками, их морфологией, культуральными свойствами и факторами патогенности.

2. Изучить принципы лабораторной диагностики стафилококковых и стрептококковых заболеваний, инфекций, вызванных нейссериями.

3. Ознакомиться с набором иммунобиологических препаратов для диагностики, лечения и профилактики заболеваний, вызванных стафилококками, стрептококками и нейссериями.

План изучения темы

1. Общая характеристика группы гноеродных кокков и отдельных видов.

2. Схемы микробиологических исследований при заболеваниях, вызываемых гноеродными кокками.

После изучения темы студент должен уметь

1. Дифференцировать стафилококки, стрептококки и нейссерии в микропрепаратах.

2. Оценить результаты микроскопии препаратов гноя из уретры, взятого от больного с острой гонореей.

3. Определять критерии патогенности стафилококков (реакция плазмокоагуляции, гемолиз на кровяном агаре, продукция лецитовителлазы), стрептококков (гемолиз на кровяном агаре).

4. Классифицировать биологические препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.

Контрольные вопросы

Стафилококки. Название видов по-латыни; какой вид чаще всего вызывает заболевания? Морфология, среды для культивирования, элективные среды, основные признаки для дифференцировки стафилококков от микрококков и для отличия разных видов стафилококков. Факторы патогенности стафилококков. Препараты, которые используются для лечения острых и хронических стафилококковых инфекций, для диагностики и профилактики. Роль стафилококков в возникновении внутрибольничных инфекций. Стрептококки. Форма, расположение клеток, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму, среды для культивирования, токсины, ферменты патогенности. Виды стрептококков по характеру гемолиза на кровяном агаре (написать по-латыни, русские названия и буквенное обозначение типов гемолиза). Другие виды стрептококков, способные вызывать заболевания у человека. Какой вид чаще всего вызывает заболевания? Классификация стрептококков по антигенной структуре. Группоспецифический антиген, его химическая природа, серогруппы, их обозначение. К какой группе относятся большинство патогенных стрептококков? Типоспецифические антигены: химическая природа, какой из них является фактором вирулентности, его действие в организме, сколько серотипов известно, как они обозначаются, с помощью какой реакции выявляются? Роль стрептококков в этиологии скарлатины, рожи, ревматизма. Стрептококки пневмонии: название по-латыни, морфология (форма, расположение, споры, жгутики, капсулы), окраска по Граму, среды для культивирования. Антигенная структура: локализация и химическая структура основных антигенов, серологические типы. Формы пневмококковой инфекции. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования, методы выделения чистой культуры на питательных средах и на животных; дифференцировка от других стрептококков, серотипирование. Препараты для лечения, диагностики и профилактики. Менингококки: морфология (форма, взаимное расположение, споры, жгутики, капсула), отношение к окраске по Граму. Среды для культивирования, способ биологического окисления, отношение к пониженной температуре. Факторы патогенности. Антигенная структура, по каким антигенам проводится деление на серогруппы и серовары? Как они обозначаются? Какие серогруппы чаще всего вызывают заболевания? Перечислите формы менингококковой инфекции. Локализация менингококка у носителей. Лабораторная диагностика: материалы для исследования при различных формах менингококковой инфекции, особенности забора и транспортировки их в лабораторию. Составить раздельно схемы лабораторной диагностики в зависимости от формы инфекции. Препараты для лечения и специфической профилактики. Гонококк: название по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму и другие способы окраски, отношение к температуре, среды для выращивания. Лабораторная диагностика острой гонореи: материалы для исследования, бактериоскопический метод (способы окраски, особенности микроскопической картины); бактериологический метод (среды для посева, идентификация возбудителя). Методы диагностики хронической гонореи. Препараты для диагностики и лечения.

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

Написать по-латыни названия видов стафилококков, стрептококков (по гемолитическому признаку), менингококков и гонококков.

Работа студентов на практическом занятии

1. Изучение морфологии стафилококков и стрептококков. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенные по Граму препараты: чистая культура стрептококка, стафилококка, стафилококк в гное, стрептококк в гное, стрептококк пневмонии в материале от животного. Названия возбудителей под рисунками напишите по-латыни.

...